METODE BLOTTING

KELOMPOK 2
ANNISA DEWI LESTARI
KHAIRIL ANWAR
NINA CAHYA SAPUTRI
RIRIN YUNI ASFITA
WINDI DWI ELVIRA
BLOTTING
Suatu teknik memindahkan bagian protein yang telah dipisahkan
RNA dan DNA dari gel kelembaran tipis atau matriks membran
agar bagian dari protein tersebut mengalami imobilitas.

Macam-macam metode blotting

Southern Western Northern

Blotting Blotting Blotting
(DNA) (RNA) (PROTEIN)
KEUNTUNGAN TEKNIK BLOT
 Akses yang lebih besar kepada molekul yang telah
terikat ke permukaan lembaran dibandingkan
kepada molekul yang masih berada di dalam gel
atau matriks.
 Lebih sedikit reagen yang dibutuhkan.
 Waktu untuk melakukan staining dna destaining,
inkubasi, mencuci, dll dapat lebih singkat.
 Pola yang terbentuk dapat dikeringkan dan
disimpan berbulan-bulan sebelum dianalisis.
 Dapat dibuat banyak replika pola tersebut untuk
memungkinkan banyak metode analisis yang
dipakai
MATRIKS DALAM METODE BLOT

 Nitroselulosa (NC)
 Kertas Diazobenzyloxymethyl (DBM)

 Kertas Iazophenylthioeter (DPT)

SOUTHERN BLOTTING

 Metode southern blotting salah satu teknik

sentral dalam biologi molekuler. Metode untuk
menyelidiki keberadaan sekuens DNA tertentu
dalam sampel DNA.
 Metode ini ditemukan oleh E.M.Southern pada
tahun 1975
KEUNTUNGAN
 Akses yang lebih besar kepada molekul yang telah
terikat ke permukaan lembaran di bandingkan
kepada molekul yang masih berada di dalam gel
atau matriks
 Lebih sedikit reagen yang dibutuhkan
 Waktu untuk melakukan staining DNA, destaining,
inkubasi, mencuci, dll menjadi lebih singkat
 Pola yang terbentuk dapat di keringkan dan
disimpan berbulan-bulan sebelum di analisis
 Dapat dibuat banyak replika pola tersebut untuk
memungkinkan banyak metode analisis yang di
pakai
NORTHERN BLOTTING

 Metode ini digunakan untuk mempelajari pola

ekspresi dan jenis tertentu molekul RNA
sebagai perbandingan relatif antara sampel
yang berbeda dari RNA. Metode ini pada
dasarnya kombinasi dari denaturasi RNA
elektroforesir gel dan sebuah Blot.
KEUNTUNGAN DAN KERUGIAN NORTHERN BLOTTING

Keuntungan Kerugian
 Northern Blotting sebagai metoda yang
dapat digunakan untuk penelitian Sering radioaktifitas
sampai kemajuan masa yang akan
datang digunakan. Metoda baru
 Sering digunakan sebagai suatu pendeteksian tidak perlu
analisis yang hasilnya valid
 merupakan suatu protokol serbaguna radioaktif
dapat lanjutan dari banyak jenis
analisis (PCR) termasuk: non- Keseluruhan proses
radiolabeled dan radiolabeled, pada Northern Blotting perlu
kondisi in vitro menjelaskan RNA dan
oligonucleotides banyak waktu.
 Urutan dengan homology parsial, tidak
sama dengan PCR atau lain metoda
sehingga dapat digunakan sebagai
hibridisasi pemeriksaan (yaitu urutan
dari jenis berbeda untuk homology
analisa, atau bahkan fragmen genomic
juga dapat digunakan).
PROTOKOL NORTHERN BLOTTING
 RNA pengasingan
 'Gel' agar-agar electrophoresis RNA untuk separasi

 Memindahkan ke selaput (nilon pada umumnya bermuatan

positif sebagai RNA adalah bermuatan negatif)
 Cross-Linking RNA ke selaput (yang pada umumnya dengan UV-
CROSSLINKING atau alat kimia)
 Hybridisasi dan Pendeteksian
WESTERN BLOTTING

 Metode ini dikemukakan untuk pertama

kalinya oleh W.Neal Burnette. Western
merupakan suatu teknik untuk mendeteksi
protein spesifik pada sampel jaringan yang
homogenat ataupun dari suatu ekstrasi
berdasarkan kemampuan protein tersebut
berikatan dengan antibodi.
VIDEO

 VID-20190406-WA0003.mp4
TERIMA KASIH