Ekspresi sitokin dalam humor

aqueous dari pasien keratitis

jamur
RETNO SETYA KEMALA
2019.04.20.166
Latar Belakang

Infeksi kornea adalah salah satu penyakit mata utama yang mempengaruhi
kesehatan masyarakat di seluruh dunia.
Kejadiannya meningkat dan kesulitan terapi dapat menyababkan gangguan
pengelihatan hingga kebutaan. Kejadian keratitis jamur lebih tinggi. Laki-laki dan
populasi paruh baya (41-50 tahun) lebih mungkin terkena keratitis jamur. Jamur
patogen utama adalah spesies Fusarium (73,3%), diikuti oleh spesies Aspergillus
(12,1%) .
Di temukan bahwa beberapa pasien keratitis jamur mengalami eksudasi hypopyon
dan fibrin di ruang anterior (Bilik mata depan) , tetapi endotel kornea mereka jelas.
Telah dikemukakan bahwa sitokin dalam aqueous humor memainkan peran penting
dalam patogenesis keratitis jamur.
Metode

Pasien
• Informed concent
• Sepuluh pasien keratitis jamur yang didiagnosis secara klinis dan delapan pasien
dengan keratoconus atau distrofi kornea yang telah menjalani keratoplasti
penetrasi di Rumah Sakit Tongren Beijing dari Juni hingga November 2014 direkrut
untuk penelitian ini.
• didiagnosis sebagai keratitis jamur ketika kultur jamur dan / atau pewarnaan
kerokan pada spesimen positif. Pasien yang tidak menanggapi terapi awal
dengan obat antijamur topikal dan sistemik direkrut.
• Sejarah klinis dan demografis yang terperinci diambil dan pemeriksaan
biomikroskopi slit-lamp dilakukan untuk semua pasien. Ukuran, kedalaman, dan
margin ulkus dicatat, bersama dengan adanya lesi satelit dan ketinggian
hypopyon. Adanya kecacatan pada epitel dan pigmentasi pada permukaan
juga dicatat.
 spesimen dan kerokan kultur kornea diambil dari dasar dan tepi ulkus secara aseptik
dengan cotton swab berujung steril dan ditempatkan dalam media transportasi.
Sebelum Spesimen yang dikerok dilakukan inokulasi dalam media agar dekstrosa Sabouraud
operasi untuk kultur jamur. Semua kerokan kornea juga dikirim untuk pewarnaan Gram rutin
dan kultur bakteri dalam nutrient broth.

• Sekitar 100 μl hingga 300 μl humor aqueous : dikeluarkan dari ruang anterior
Lancet (BMD) tanpa kontak dengan struktur intraokular .
parasentesis • disentrifugasi selama 10 menit pada 2000 putaran per menit (rpm) untuk
digunakan memisahkan sel dari cairan.
untuk • Supernatan 50 μl yang dicadangkan dipindahkan ke dalam tabung microfuge steril
menembus dan disimpan pada suhu -80 ° C sampai uji sitokin, dan supernatan yang tersisa
kornea di digunakan untuk kultur bakteri dan jamur.
daerah perifer • Pelet sel diresuspensi dalam 200 μl salin buffer fosfat dan diendapkan ke objek
avaskular lebih glass. Setelah airdrying, sel-sel diwarnai dengan Giemsa dan diperiksa dengan
dari 1 mm mikroskop optik. Sel-sel dihitung dan secara morfologis diklasifikasikan menjadi
leukosit polimorfonuklear (PMN), limfosit, dan monosit.
 KULTUR MIKROBIOLOGIS

• Humor aqueous dan kornea dari semua pasien diinokulasi pada media kultur pada suhu 28 °
C dengan kelembaban 40% selama 8-10 hari.
• Media kultur mengandung agar Sabouraud dan potato glucose agar. Jamur diidentifikasi
sesuai dengan karakteristik koloni yang tumbuh, hifa, dan spora.

• Selain itu, spesimen humor aqueous dan kornea diinokulasi pada broth pada suhu 37 ° C
dengan kelembaban 40% selama 10-14 hari untuk identifikasi bakteri.

 Pengukuran Sitokin dengan Sistem Array Protein Cair

Kadar sitokin termasuk interleukin (IL) -1β, IL-6, IL-8, IL-10, interferon-γ (IFN-γ), dan tumor necrosis
factor-α (TNF-α) dalam humor aqueous diukur menggunakan sistem susunan protein cair
Luminex100 ™ (MiraiBio, CA, US).
Analisis statistik

• menggunakan SPSS
• Tingkat setiap sitokin dibandingkan
dengan data dan dilaporkan sebagai
median dengan tingkat minimum dan
maksimum yang diperoleh untuk masing-
masing kelompok. Hasilnya
dipresentasikan sebagai konsentrasi rata-
rata geometrik dan rentang sampel yang
dapat dideteksi (Tabel 2). Tingkat sitokin
dibandingkan antara dua kelompok
dengan uji median dua sampel
nonparametrik. Nilai p <0,05 dianggap
signifikan.
HASIL
Kohort Pasien

 Usia : 49. 30 ± 17,02 tahun (berkisar antara 15 hingga 72 tahun).

 Tiga pasien (30%) : perempuan dan tujuh pasien (70%) : laki-laki.

 Lima mata (50%) memiliki riwayat benda asing dari kayu atau cedera
tanaman.

 Selain terapi antijamur, empat mata (40%) telah diobati dengan terapi
kombinasi kortikosteroid topikal atau kortikosteroid-antibiotik dan tiga mata
(30%) telah diobati dengan antibiotik topikal saja.

 Pasien kontrol dengan keratoconus (87,5%) atau distrofi kornea (12,5%)

menerima keratoplasti penetrasi untuk restorasi visual. Usia rata-rata
mereka adalah 24,88 ± 12,12 tahun (berkisar antara 11 hingga 50 tahun).
Dua pasien (25%) adalah perempuan dan enam pasien (75%) adalah laki-
laki. (Tabel 1).
 HASIL
Karakterisasi Keratitis Jamur
Waktu perkembangan penyakit berkisar
antara 7 hingga 30 hari, dengan rata-rata
15,89 ± 10,72 hari. Cacat epitel dan
pigmentasi pada permukaan, ditandai
sebagai ulkus kering dan berpigmen
dengan margin tidak teratur dan berbulu,
lesi satelit, reaksi air fibrinoid, dan
pembentukan hipopion, terdapat pada
mata yang terinfeksi pada pasien keratitis
jamur.
Pemeriksaan sitopatologis
Populasi sel PMN adalah tipe sel infiltrasi
dominan dalam sampel humor aqueous
yang dikumpulkan dari mata yang
terinfeksi dari pasien keratitis jamur.
Persentase rendah limfosit dan monosit
juga diamati. Persentase sel infiltrasi ini
ditunjukkan pada Tabel 2. Perbedaan
dalam pola sel infiltrasi antara keratitis
jamur dan kontrol secara statistik signifikan
(p <0,001 untuk setiap populasi).
 HASIL
Microbial Investigation
• Tingkat infeksi jamur positif pada pasien
keratitis adalah 50% dengan pewarnaan
smear dan 100% oleh kultur kornea.
• Pada kasus positif kultur jamur kornea,
strain Fusarium spp. : enam kasus (60%),
galur Aspergillus spp. Dan dua kasus
(20%), dan strain Apospory spp.
• kultur humor aqueous dari kedua
keratitis jamur dan kelompok kontrol juga
menunjukkan presentasi negatif baik
jamur atau bakteri.
Profil Sitokin
 Level protein sitokin IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ,
dan TNF-α diukur dengan Liquid Protein Array
System.
 Dalam sampel aqueous humor dari kelompok
keratitis jamur, kadar IL-1β, IL-6, IL-8, dan IFN-
found ditemukan meningkat secara signifikan,
dibandingkan dengan kelompok kontrol (P =
0,012 untuk IL-1β , P <0,001 untuk IL-6, P <0,001
untuk IL-8, dan P = 0,001 untuk IFN-γ).
 Meskipun tingkat IL-10 dan TNF-α juga
meningkat, mereka tidak menunjukkan
perbedaan yang signifikan secara statistik
DISKUSI
• Kultur humor aqueous dari sepuluh
pasien keratitis jamur menunjukkan
negatif pada infeksi jamur dan bakteri

• Sel-sel infiltrasi utama dalam humor

aqueous adalah leukosit PMN.
• Peningkatan IL-1β dan IL-6 adalah sinyal
Berdasarkan percobaan , leukosit PMN
inflamasi spesifik untuk keratohelcosis dan
dalam humor aqueous dianggap
keratitis. IL-1β, IL-6, dan IL-8 secara signifikan
sebagai dasar seluler utama keratitis
meningkat pada air mata pasien keratitis
jamur.
bakteri, bersama dengan akumulasi sel
dendritik.
• profil sitokin intraokular dalam
• ekspresi sitokin terkait erat dengan reaksi
kaitannya dengan keratitis jamur.
inflamasi dan imunologis mata.
Selama stadium menengah keatas
dari infeksi jamur, tingkat IL-1β, IL-6, IL-
8, dan IFN-in dalam humor aqueous
meningkat secara signifikan
dibandingkan dengan kontrol non-
keratitis
• IL-1β adalah sitokin proinflamasi dan mediator inflamasi penting. Dalam reaksi inflamasi, itu dapat
menginduksi sintesis sitokin lain, aktivasi limfosit T, dan migrasi monosit, makrofag, dan sel
Langerhans.
• tingkat IL-1β yang tinggi diamati dalam sampel humor aqueous yang dikumpulkan dari pasien
keratitis jamur.
• Sangat mungkin bahwa peningkatan level IL-1β menyebabkan infiltrasi leukosit yang parah dan
kerusakan sawar darah. IL-6 adalah mediator potensial peradangan intraokular, dan beberapa
bukti menunjukkan bahwa ia memainkan peran multifungsi yang penting dalam infeksi dan
peradangan kornea.
• Selain itu, dapat mengaktifkan produksi antibodi dan protein fibrous, menginduksi produksi protein
pada peradangan akut, dan berfungsi sebagai aktivator faktor makrofag dan kemotaksis untuk
limfosit T . IL-6 juga dapat diinduksi oleh sitokin lain seperti IL-1β, TNF-α, dan IFN-γ dan dilepaskan
oleh sel epitel pigmen retina, sel endotel kornea, makrofag, iris, dan sel epitel badan ciliary
 Kadar IL-10 dan TNF-α dalam humor aqueous pasien keratitis jamur rata-rata lebih tinggi
daripada kontrol, tetapi tanpa perbedaan statistik. IL-10 adalah sitokin anti-inflamasi.

 Sitokin dan sel-sel inflamasi menginfiltrasi profil dalam humor aqueous pada keratitis yang
disebabkan oleh yang lain ke dalam lokasi inflamasi, sehingga meningkatkan permeabilitas
pembuluh darah dan mengaktifkan sitokin (seperti IL-1β dan TNF-α) yang akan dirilis.

 Oleh karena itu,sitokin dalam aqueous humor memainkan peran penting dalam patogenesis
keratitis jamur, penggunaan strategi intervensi dalam sitokin terkait (seperti memblokir sitokin
yang berikatan dengan reseptor, atau ikatan kompetitif dengan reseptor yang menggunakan
analog sitokin yang tidak aktif dan memblokir fungsinya setelah mengikat) untuk mencapai
tujuan terapeutik perlu diselidiki lebih lanjut.
Kesimpulan

Penelitian saat ini menunjukkan bahwa konsentrasi tinggi IL-1β, IL-6, IL-8,
dan IFN-γ dalam humor aqueous dikaitkan dengan keratitis jamur, dan
leukosit PMN infiltrasi terlibat dalam respon inflamasi ini.
Terimakasih … 