DIAGNOSIS

LABORATORIUM

AIN AN D WI LESTAR I PO.71.3.203.17.1.003

3 TAHAP
DIAGNOSIS LABORATORIUM
VIROLOGI

Virus

Pemeriksaan
mikroskpik dan Isolasi Tes serologi
pewarnaan
MIKROSKOPIK DAN PEWARNAAN VIROLOGI

Penyakit virus yang dapat dideteksi

dengan baik melalui pemeriksaan
mikroskopik langsung terhadap apusan
atau lesi, meliputi infeksi rabies dan
herpes simpleks serta infeksi kulit
varisela-zoster. Pewarnaan antigen
virus dengan imunofluoresens terhadap
apusan otak dan impresi kornea dari
hewan liar dan dari kulit bagian
belakang leher manusia merupakan
metode pilihan untuk menegakan
Virus Herpes Simplex diagnosis rabies secara rutin.
MIKROSKOP ELEKTRON VIROLOGI

Keuntungan Kerugian

Langsung
Diagnosis Memerlukan
dapat melihat Biaya mahal
cepat latihan khusus
morfologi virus
MIKROSKOP BIASA VIROLOGI

Keuntungan Kerugian

Belum Belum Bila hasil Memerlukan Sulit

Cepat membedakan
semua semua negatif, belum latihan
elementary pewarnaan tentu diganosa khusus virus yang
bodies (e.b) diketahui negatif mempunyai
dan inclusion
inclusion bodies (i.b)
bodies yang sama
ditemukan
ISOLASI DAN KULTUR VIRUS VIROLOGI

Media kultur Media kultur Sentrifugasi gradien kepadatan

Plak virus hewan dalam Plak fag di halaman sel Pemisahan partikel virus
kultur sel bakteri dalam gradien kepadatan
ISOLASI DAN KULTUR VIRUS VIROLOGI

Mikroskop fluoresensi Mikroskop confocal

Sel-sel yang terinfeksi virus terdeteksi Endosom (berlabel merah) mengandung
menggunakan antibodi spesifik-virus yang protein virus (berlabel hijau) dalam sel
dilabeli dengan pewarna fluoresen yang terinfeksi
TEKNIK PEMERIKSAAN
DENGAN MENGGUNAKAN SEM DAN ELEKTROFORES
VIROLOGI

Mikroskop elektron
Partikel virus bernoda negatif Gambar direkonstruksi dari cryo-electron
microscopy
TEKNIK PEMERIKSAAN
DENGAN MENGGUNAKAN SEM DAN ELEKTROFORES
VIROLOGI

Teknik elektroforesis Microarray

Deteksi protein virus dengan Analisis asam nukleat virus oleh Analisis transkripsi virus
elektroforesis gel natrium elektroforesis gel agarosa
dodesil sulfat poliakrilamida
PERSIAPAN INOKULA VIROLOGI

Agen bakterisidal Metode mekanis

Penyaringan Sentrifugasi differensial

2 CARA ISOLASI DAN KULTUR VIRUS VIROLOGI

Kultivasi dalam Kultur Sel Kultur Shell Vial

Teknik kultur sel mulai digantikan oleh metode deteksi Metode ini memungkinkan virus
antigen dan uji amflifikasi asam nukleat. Akan tetapi, teknik dalam spesimen klinis dideteksi
ini masih berguna dan dikerjakan diberbagai laboratorium dengan cepat. Metode ini telah
virologi klinis dan laboratorium kesehatan masyarakat. diadaptasi untuk beberapa virus,
Ketika virus berkembang biak pada kultur sel mereka termasuk sitomelovirus dan
menghasilkan efek biologis (misal perubahan sitopatik, virus varisela-zoster.
interferensi virus, produksi hemaglutinin) yang
memungkinkan identifikasi agen.
KULTIVASI DALAM KULTUR SEL VIROLOGI

Monolayer sel ginjal kera normal Kultur sel ginjal kera yang tidak Kultur sel ginjal kera yang tidak
tanpa pewarna dalam kultur terwarnai menunjukan tahapan awal diwarnai menunjukan efek sitopatik
(120X) efek sitopatik yang khas untuk infeksi enterovorius lebih lanjut (efek
enterovirus (120X) efek sitopatik (+1) sitopatik 3+ hingga 4+) (120X).
TES SEROLOGI VIROLOGI

Deteksi
antigen

Mengukur
Pemeriksaan
Amplifikasi & Hibridisasi respons imun
mikroskop
deteksi asam nukleat terhadap
elektron imun
infeksi virus
• Asam Nukleat tersedia berbagai
macam pemeriksaan komersial
untuk mendeteksi asam nukleat
virus atau untuk mengamplifikasi
dan mendeteksinya.
• Prosedur-prosedur ini dengan
cepat menjadi standar virologi
diagnostik, menggantikan kultur
virus dan teknik deteksi antigen
yang sejak lama telah
dipergunakan.
• Metode ini mencakup PCR, PCR
transkriptas balik, dan metode lain
yang tepat.

AMPLIFIKASI &
DETEKSI
• Hibridisasi asam nukleat untuk
mendeteksi virus sangat sensitif
dan spesifik.
• Spesimen ditotolkan di atas
membran nitroselulosa, kemudian
asam nukleat virus yang ada di
dalam sampel akan terikat; asam
nukleat kemudian didenaturasi
dengan alkali in situ, dihibridisasi
dengan fragmen asam nukleat
virus yang dilabel, dan produk
hibridisasi pun dideteksi.

HIBRIDASI ASAM
NUKLEAT
 • Kuantifikasi DNA virus hepatitis B
(HBV) DNA dengan PCR real-
time. Bila ada 108 salinan DNA
HBV.
• Dalam sampel, fluoresensi mulai
meningkat pada jumlah siklus
awal. Kenaikan dimulai secara
progresif nantisiklus dengan
penurunan jumlah salinan DNA
HBV.

MENGUKUR RESPON IMUN

TERHADAP INFEKSI VIRUS
 • Virus yang tidak terdeteksi melalui
teknik konvensional dapat diamati
melalui pemeriksaan mikroskop
elektron imun (IEM).
• Kompleks antigen-antibodi atau
agregat yang terbentuk di antara
partikel virus dalam suspensi
disebabkan adanya antibodi di
dalam antiserum yang
ditambahkan, dan ini terdeteksi
lebih cepat serta lebih pasti
daripada partikel virus itu sendiri.

PEMERIKSAAN MIKROSKOP
ELEKTRON IMUN
TERIMA KASIH
Any Questions?

VIROLOGI (T)
IBU RAFIKA, S.Si.,M.Kes.