AMPLIFIKASI DNA

Persiapan PCR Mix

• Ke dalam mikro tube dimasukkan PCR master
mix (enzim Taq, buffer, MgCl2).
• Selanjutnya dimasukkan primer (DNA sintetis)
• Dimasukkan ekstrak DNA
• Aquabidest steril
Proses Amplifikasi
Alur Amplifikasi
Elektroforesis
Elektroforesis
• Proses running produk PCR pada gel
elektroforesis menggunakan arus listrik
Alat & bahan untuk elektroforesis
• Gel elektroforesis
• Comb
• Loading buffer
• Kertas parafilm
• Microwave
• Larutan Ethidium bromida
• Larutan TBE (Tris Borate EDTA)>>>>buffer elfor
• Elektroforesis chamber
• Power supply
Pembuatan gel elfor
• Disiapkan alat pencetak gel, disetting lalu
dipasang comb
• Bubuk agarose dimasukkan sebanyak 2%,
dilarutkan dengan larutan TBE 40 ml
• Larutan agarose dipanaskan dlm microwave
selama 1 menit
• Diteteskan larutan ETBR 1 tetes/50-100 ul
• Dituang kedalam alat cetak gel
• Ditunggu selama 30 menit
Proses Elektroforesis
• Elfor chamber disiapkan
• Kedalam elfor chamber dimasukkan gel elfor dan
ditambah larutan TBE hingga menutupi permukaan gel
• Diatas meja kerja ditempel kertas parafilm
• Diatas kertas parafilm diteteskan larutan loading buffer
• Diambil produk PCR dengan mikropipet, dicampur dg
loading buffer
• Dimasukkan kedalam lubang gel elfor
• Elfor chamber ditutup dan disambungkan dg power
supply untuk memulai proses running
• Proses running selama 45 menit
Visualisasi hasil elfor
• Gel elektroforesis diamati pada alat visualisasi
manual berupa sinar UV
• Visualisasi otomatis menggunakan alat Gel
Doc
• Visualisasi merupakan proses akhir PCR
dengan hasil terbentuknya pita DNA pada gel
elektroforesis
Hasil Visualisasi DNA PCR