UNIVERSITAS HASANUDDIN

Mikrobiologi Molekuler
PENGEMBANGAN EKSPLORASI
SENYAWA ANTI-DENGUE DARI
BAHAN ALAM DAN SEMI-SINTESIS
SERTA UJI BIOPROEKTIF,
SENSIVITAS DAN PELUANG
RESISTENSINYA

NURUL REZKY (P062192006)

PENDAHULUAN • Demam berdarah dengue (DBD) adalah penyakit yang disebabkan
oleh virus dengue (DENV 1-4) dan ditularkan oleh Aedes aegypti.
• Demam berdarah (DF) dan demam berdarah dengue (DBD) adalah
penyakit demam akut yang ditularkan oleh nyamuk. Saat ini,
mereka adalah penyakit yang ditularkan nyamuk paling cepat di
dunia. Sekitar 2,5 miliar orang, dua perlima populasi dunia, kini
berisiko terinfeksi dan 50 juta kasus DF dilaporkan di seluruh
dunia setiap tahun.
• Sampai saat ini tidak ada vaksin dengue atau antivirus yang
disetujui secara klinis untuk manusia, meskipun telah ada upaya
besar untuk mencapai tujuan ini.
• Organisasi Kesehatan Dunia (WHO) memperkirakan bahwa
kejadian global tahunan demam berdarah hampir 390 juta, jumlah
yang hampir tiga kali lebih tinggi dari jumlah kasus yang
diperkirakan oleh organisasi yang sama untuk tahun 2009

UNIVERSITAS HASANUDDIN
 • Penyakit ini memiliki empat serotipe virus (DENV 1-4), dan spektrumnya

MIKROBIOLOGI MOLEKULER
berkisar dari infeksi tanpa gejala hingga demam berdarah (DF), demam
berdarah dengue (DBD), dan sindrom syok dengue (DSS), dan dapat
menyebabkan kematian pasien
• Selama dekade terakhir, para peneliti telah mengalihkan perhatian mereka ke
alam, berusaha mengidentifikasi senyawa yang dapat digunakan sebagai
antivirus dengue.
• Beberapa pabrik di seluruh dunia menghadirkan aktivitas antivirus dengue
yang potensial. Baru-baru ini, Kadir dan rekan kerjanya meninjau enam puluh
sembilan penelitian dari tahun 1997 hingga 2012 terkait dengan tanaman
yang berpotensi menimbulkan aktivitas antidengue
• Menurut WHO, 80% populasi di beberapa negara Asia dan Afrika bergantung
pada pengobatan tradisional sebagai perawatan kesehatan utama mereka
karena kendala ekonomi dan geografis.

Referensi:
1. Kadir, S.L.A.; Yakoob, H.; Zulkifli, R.M. Potential anti-dengue medicinal plants: A review. J. Nat. Med. 2013, 67, 677–689.
2. World Health Organization. Traditional medicine. Available online: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/2003/fs134/en/ (accessed
on 16 mey 2020).
3. Betancur-Galvis, L.A.; Saez, J.; Granados, H.; Slazar, A.; Ossa, J.E. Antitumor and antiviral activity of Colombian medicinal plant extracts. Mem.
Inst. Oswaldo. Cruz 1999, 94, 531–535.
 VIRUS DANGUE (DENV)

Struktur dan Genome DENV

• Empat tipe virus dengue (DENV1-4) termasuk
dalam genus flavivirus dengan family
flaviviridae.
• setiap virus terdiri atas pita tunggal
ribonucleic acid (RNA)
• Genome virus mengkode tiga protein
struktural (capsid [C], pre-membrane
[preM/M], dan envelope [env]), serta tujuh
protein non-struktural yaitu (NS1, NS2A,
NS2B, NS3, NS4A, NS4B, dan NS5).

UNIVERSITAS HASANUDDIN
 Cladosiphon okamuranus Tokida
1. Polisakarida
• Fucoidans adalah kelompok polisakarida yang mengandung persentase besar kelompok ester
L-fucose dan sulfat. Senyawa ini terutama berasal dari rumput laut coklat, dan beberapa
bioaktivitas, termasuk antivirus
• Fucoidan adalah polisakarida yang diisolasi dari rumput laut alga coklat Cladosiphon
okamuranus.
• Strukturnya terdiri dari unit residu fucose dan asam glukuronat tersulfasi.
• Hasil penelitian menunjukkan bahwa polisakarida ini menghambat infeksi virus dengue tipe 2
(DENV-2)
• Uji biologis untuk mengevaluasi aktivitas antivirus dilakukan secara in vitro dengan uji
pembentukan fokus menggunakan sel BHK-21.
• Ketika virus diobati dengan 10 μg / mL fucoidan, infektivitas oleh virus dengue serotipe 2
berkurang 80% dibandingkan dengan yang ada dalam sel yang tidak diobati dan IC50 yang
ditentukan sesuai dengan 4,7 ug / mL.
• Studi lain yang melibatkan polisakarida tersulfasi menunjukkan bahwa ekstrak dan karagenan
yang berasal dari Meristiella gelidium adalah penghambat DENV-2 yang lebih efektif
dibandingkan dengan yang berasal dari G. griffithsiae. Evaluasi antivirus dilakukan secara in
vitro menggunakan sel Vero dan uji pengurangan plak virus. Dalam penyelidikan ini, tidak ada
deskripsi tentang mekanisme tindakan untuk DENV penghambatan dilaporkan .

Referensi:
4. Hidari, K.I.P.J.; Abe, T.; Suzuki, T. Carbohydrate-related inhibitors of dengue virus entry. Viruses 2013, 5, 605–618.
5. Fitton, J.H. Therapies from fucoidan; multifunctional marine polymers. Mar. Drugs 2011, 9, 1731–1760.
 Scutellaria baicalensis
2. Flavonoid
• Scutellaria baicalensis adalah ramuan obat tradisional Tiongkok milik keluarga
Lamiaceae. Dari akar spesies ini, baicalein (33) biasanya diekstraksi [52].
• Para peneliti melakukan uji in vitro menggunakan sel Vero FFURA untuk
menilai aktivitas antivirus terhadap DENV-2.

• Flavonoid ini menghambat replikasi serotipe DENV-2 dalam sel Vero yang
menampilkan IC50 6,46 μg / mL dan indeks selektivitas dari 17.8 ketika
ditambahkan setelah adsorpsi ke sel. IC50 terhadap DENV-2 adalah 5,39 μg /
mL dan indeks selektivitas meningkat menjadi 21,3 ketika sel-sel Vero dirawat
sebelum infeksi virus dan terus menerus hingga 4 hari setelah infeksi.

• Zat 33 ditampilkan langsung virucidal (IC50 of 1,55 ug / mL) serta efek anti-
adsorpsi (IC50 dari 7,14 ug / mL) terhadap DENV-2. Hasil menyarankan bahwa
mekanisme yang mungkin untuk aktivitas ekstraseluler dan intraseluler
baicalein (33) terhadap DENV-2 dapat dikaitkan dengan kemampuannya untuk
mengikat dan / atau untuk menonaktifkan protein struktural dan / atau non-
struktural yang penting dari DENV-2 [ 52].
Referensi:
6. Zandi, K.; Teoh, B.T.; Sam, S.S.; Wong, P.F.; Mustafa, M.R.; AbuBakar, S. Novel antiviral activity of baicalein agains dengue virus. BMC Complement. Altern. Med. 2012, 12, 1–9.
 Castanospermum australe
3. Alkaloid dan senyawa yang terkait

Dilakukan eksperimen in vitro dan in vivo untuk memastikan apakah

alkaloid ini dapat menghambat semua serotipe virus dengue.

Percobaan in vitro yang digunakan untuk menyelidiki aktivitas antivirus

menggunakan sel BHK-21 dalam uji pengurangan plak dan diverifikasi
dengan western blotting, ELISA dan fluorogenic RT-PCR. Eksperimen in
vivo juga dilakukan dengan tikus (berusia 28 hingga 31 hari).

Alkaloid 38 menghambat semua infeksi serotipe virus dengue secara in

vitro dan virus dengue serotipe 2 in vivo. Ditemukan bahwa
penghambatan terjadi pada tingkat sekresi dan infektivitas partikel virus.
Selain itu, castanospermine (38) mencegah kematian dalam model tikus
dari infeksi virus dengue, dengan dosis 10, 50, dan 250 mg / kg berat
badan per hari sangat efektif dalam meningkatkan kelangsungan hidup

Referensi:
7. Whitby, K.; Pierson, T.C.; Geiss, B.; Lane, K.; Engle, M.; Zhou, Y.; Doms, R.W.; Diamond, M.S.
Castanospermine, a potent inhibitor of dengue virus infection in vitro and in vivo. J. Virol. 2005,
79, 8698–8706.
 4. Terpenoid

Senyawa yang diisolasi menunjukkan aktivitas melawan DENV-

Arrabidaea pulchra
2. Sitotoksitas ditentukan secara in vitro terhadap sel LLCMK2
dan Vero dengan uji kolorimetri MTT.

Pengujian yang sama dilakukan dengan Human Herpesvirus-1

(HSV-1), Vaccinia Virus Western Reserve (VACV-WR) dan virus
Murine Encephalomyocarditis (EMCV). Penghambatan HSV-1
dan VACV-WR lebih rendah dari DENV-2, dan tidak ada
penghambatan yang diamati untuk EMCV.

Investigasi lebih lanjut diperlukan untuk memahami

mekanisme aktivitas antivirus, terutama untuk senyawa 45
yang menunjukkan toksisitas terendah pada sel LLCMK2 dan
hanya aktif terhadap DENV-2. Tes lebih lanjut juga diperlukan
untuk menyelidiki aktivitas dan target virucidal dalam siklus
replikasi virus [59].

Referensi:
8. Brandã o, G.C.; Kroon, E.G.; Souza, D.E.R.; Filho, J.D.S.; Oliveira, A.B. Chemistry and antiviral activity
of Arrabidaea pulchra (Bignoniaceae). Molecules 2013, 18, 9919–9932.
 5. Polycyclic Quinones

Lingkungan laut telah dieksplorasi untuk kepentingan

Gymnocrinus richeri
identifikasi arahan baru untuk keperluan farmasi termasuk
antivirus. Gymnochrome Polycyclic D (46) dan
isogymnochrome D (47) diisolasi dari fosil crinoid hidup
Gymnocrinus richeri.

Penilaian efeknya pada virus DENV-1 (strain Hawai / 1944)

dilakukan secara in vitro menggunakan sel PS babi dalam uji
pengurangan plak.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa mereka menampilkan

aktivitas antivirus. Aktivitas ini ditentukan oleh pengurangan
fokus (RF) yang dibentuk oleh DENV-1 dibandingkan dengan
kontrol. Jadi, untuk senyawa 46 dan 47, RF50 yang ditentukan
lebih kecil dari 1 μg / mL. Mekanisme dimana senyawa dapat
menghambat virus tidak dilaporkan.

Referensi:
9. Laille, M.; Gerald, F.; Debitus, C. In vitro antiviral activity on dengue virus of marine natural
products. Cell. Mol. Life Sci. 1998, 54, 167–170.
 Squalus acanthias
• Squalamine (56) pertama kali ditemukan dalam
jaringan hiu spiny dogfish (Squalus acanthias)
dan kemudian diidentifikasi dalam sel darah
putih yang (Petromyzon marinus).

• Efek in vitro squalamine (56) pada infeksi virus

dengue sel endotel manusia (HMEC-1) dievaluasi
dengan uji plak. Pada konsentrasi 40 μg / mL,
infeksi dengue dihambat oleh 60%. Infeksi benar-
benar ditekan pada 100 μg / mL. Mekanisme aksi
yang diusulkan melibatkan kapasitas squalamine
(56) untuk menetralisir muatan permukaan
elektrostatik negatif dari membran intraseluler
dengan cara yang membuat sel kurang efektif
dalam mendukung replikasi virus [66].

Referensi:
10. Zasloff, M.; Adams, A.P.; Beckerman, B.; Campbell, A.; Han, Z.; Luijten, E.; Meza, I.; Julander, J.; Mishra, A.; Qu, W.; et al. Squalamine as a broad-spectrum systemic antiviral
agent with therapeutic potential. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2011, 108, 15978–15983.
 1. Live Attenuated Vaccine (LAV) 2. Vaksin Chimera
• Robert et al melakukan konstruksi virus
• Universitas Mahidol di Thailand dan chimera dengan substitusi protein prM/env
Formulasi vaksin Walter Reed Research Army dari masing-masing tipe DENV pada gen
homolog yellow fever virus (YFV) strain 17 D
di Amerika
yang telah • sel ginjal anjing, monyet, dan fetal. (ChimeriVax- DEN) serta LAV DENV2.
• Guirakhoo et al melakukan konstruksi
• Avantis Pasteur , Glaxo Smith Kline
dikembangkan • Respons antibodi penetralisir
ChimerVax-DEN melalui elektroporasi sel
vero dengan transkripsi RNA yang disiapkan
tetravalen juga telah dicapai pada dari cDNA virus. Studi pre- klinis
63% subjek dalam dua dosis menunjukkan kandidat vaksin itu mampu
penggunaan. bereplikasi, stabil secara genetik dan tidak
bersifat neurovirulen terhadap sel vero.

3. Vaksin DNA DENV 4. Vaksin DENV Terinaktivasi

• Kochel et al.
• kloning gen env dan preM pada • Walter Reed Army Institute of
ekspresi vektor eukariot plasmid Research (WRAIR), USA
yang berbeda kemudian • DV-2 dimurnikan dengan sukrosa
diinokulasikan intradermal tikus. dan diinaktivasi dengan 0.05 %
Hasilnya, terdapat pembentukan formalin pada suhu 220C.
antibodi anti-dengue pada 60%
Mikrobiologi Molekuler
tikus eksperimen.
 Kesimpulan

Selama beberapa tahun terakhir, eksplorasi kumpulan produk alami telah menghasilkan
berbagai senyawa yang memiliki aktivitas terhadap serotipe virus dengue. Dapat dikatakan,
bahwa hanya sebagian kecil dari cadangan luas senyawa yang tersedia dari alam telah
dieksplorasi dengan tujuan untuk menemukan antivirus yang efektif terhadap demam berdarah.
Dari alam, mungkin saja senyawa antivirus dengue yang efektif dengan toksisitas rendah bagi
manusia pasti akan ditemukan. Selain itu, struktur senyawa alami dapat berfungsi sebagai
prototipe yang dapat dioptimalkan oleh kampanye sintetis untuk menemukan bahan yang lebih
aktif terhadap virus dengue.

Mikrobiologi Molekuler
 Mikrobiologi Molekuler

TERIMAKASIH