PENENTUAN KADAR

DENGAN METODE
SPEKTROFOTOMETRI
KELOMPOK 5 :

1. RIKE ADLIANA (D1B122814)

2. NURUL FAUZIAH LATIF (D1B122258)
3. MUHAMMAD AKIB TAQWIN (D1B122209)
4. SITINURHALIZAH (D1B122238)
5. ANDI AMATULLAH ANNISA (D1B122375)

PRODI S1 FARMASI
UNIVERSITAS MEGAREZKY
2022
Pengertian
 Spektrofotometri merupakan salah satu metode
dalam kimia analisis yang digunakan untuk
menentukan komposisi suatu sampel secara
kuantitatif yang didasarkan pada interaksi antara
materi dengan cahaya.
 Sementara spektrofotometer merupakar alat yang
digunakan pada metode spektrofotometri yaitu
alat ukur intensitas cahaya pada panjang
gelombang tertentu yang melewati sebuah materi.
KOMPONEN
SPEKTROFOTOMETER
 Spektrometer : menghasilkan sinar dari spektrum
dengan panjang gelombang tertentu
 Fotometer : alat pengukur intensitas cahaya yang
ditransmisikan atau yang diabsorpsi.
Prinsip kerja
 Metode pengukuran menggunakan prinsip spektrofotometri adalah
berdasarkan absorpsi cahaya pada panjang gelombang tertentu
melalui suatu larutan yang mengandung kontaminan yang akan
ditentukan konsentrasinya. Proses ini disebut "absorpsi
spektrofotometri",
 Prinsip kerja dari metode ini adalah jumlah cahaya yang diabsorpsi
oleh larutan sebanding dengan konsentrasi kontaminan dalam
larutan. Prinsip ini dijabarkan dalam Hukum Beer-Lambert, yang
menghubungkan antara absorbansi cahaya dengan konsentrasi pada
suatu bahan yang mengabsorspi.
 Prinsipini dijebarkan dalam hukum “Lambert
Beer” berdasarkan persamaan berikut :
Selain menggunakan persamaan Lambert-Beer untuk
menentukan konsentrasi dari sampel larutan atau cuplikan, ada
cara lain yang paling sering digunakan yaitu dengan
menggunakan kurva baku atau persamaan regresi
Y =Ax+b,
dimana Y adalah absorbansi, X adalah konsentrasi, a = slope
sedangkan b = intersep.
Jika menggunakan persamaan regresi maka harus ada kurva
baku yang dibuat dalam beberapa seri konsentrasi dari bahan
murni yang diukur pada panjang gelombang maksimum
tertentu kemudian sampel dipreparasi tertentu dan
diperlakukan sama dengan baku untuk mendapatkan
konsentrasi sampel.
Jenis-jenis spektrofotometri

1 Spektrofot
ometri uv-
2 Spektrofoto
3 Spektrofotom
etri Serapan
metri IR Atom
vis
 SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

 Spektrofotometri UV-Vis adalah salah satu metode analisis yang melibatkan

sumber radiasi elektromagnetik dekat dengan rentang panjang gelombang
200-400 nm serta sinar tampak dengan rentang panjang gelombang 400-800
nm.
 Penggunaan Spektrofotometri uv-vis dalam analisis farmasi adalah untuk :
1. analisis kualitatif : parameter spektrum yang digunakan
adalah panjang maksimal dan nilai absorptivitasnya
2. analisis kuantitatif : yaitu untuk menentukan kadar dalam
suatu sampel monokomponen maupun multikomponen
sediaan farmasi. Parameter yang dilihat adalah nilai
serapan dan absorbansinya
 Kriteria sampel
 Sampel yang mengandung gugus kromofor atau auksokrom
 Larutan sampel harus jernih
 Sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan
dengan panjang gelombang tunggal (monokromatis)
 Penyerapan sinar oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi
oleh molekul yang lain yang ada bersama dalam satu larutan
 Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet)
yang sama
 Penyerapan tidak menghasilkan pemancaran sinar pendafluor. Artinya larutan
yang diukur harus benar-benar jernih agar tidak terjadi hamburan cahaya oleh
partikel-partikel koloid atau suspensi yang ada di dalam larutan.
 Konsentrasi analit rendah. Karena apabila konsentrasi tinggi akan menggangu
kelinearan grafik absorbansi versus konsntrasi.
 SPEKTROFOTOMETRI INFRAMERAH
FUNGSI
Spektrofotometri inframerah
digunakan untuk identifikasi
gugus-gugus fungsi utama pada
sampel tertentu. Informasi yang
diperoleh berupa bilangan
gelombang yang dibutuhkan
untuk suatu vibrasi dari ikatan
molekul. Metode ini mengukur
interaksi molekul dengan radiasi
elektromagnetik yang berada
pada daerah panjang gelombang
0,75 – 1.000 μm
KRITERIA SAMPEL
 Supaya molekul menyerap
radiasi infra merah, maka
molekul tersebut harus
mempunyaigambaran
spesi7k, yakni momen
dipole molekul harus
berubah selama vibrasi.
ini merupakan aturan
seleksi spektroskopi infra
merah
Jenis-jenis spektrofotometri

SPEKTROFOTOMETRI SERAPAN ATOM

 Spektrofotometri serapan atom adalah suatu
metode analisis yang didasarkan pada proses
penyerapan energi radiasi oleh atom-atom
yang berada pada tingkat energi dasar (ground
state).
 Metode ini digunakan untuk menganalisis
kadar logam
Prosedur analisa kuantitatif spektro
uv-vis meliputi:
1. Penyiapan sampel (sample handling)
a. Pelarut
b. Kadar sampel
2. Pemilihan panjang gelombang
3. Pengukuran resapan, dan pembuatan kurva standar
(kurva Kalibrasi)
4. Perhitungan kadar
a. Analisa zat tunggal
b. Analisa campuran (multikomponen)
Hal-hal penting dalam pengukuran spektrofotometri UV-
Visibel

Terutama untuk senyawa yang semula tidak berwarna dan akan diukur dengan
spektrofotometer Visibel dilakukan derivatisasi

Waktu operasional (operating time) untuk mengetahui waktu pengukuran

yang stabil

Pemilihan panjang gelombang maksimum (λ max)

Pembuatan kurva baku sebaiknya sering diperiksa ulang

Pembacaan absorbansi sampel/cuplikan sebaiknya dalam rentang 0,2 – 0,8.

Contoh perhitungan kadar sediaan monokomponen
dengan metode spektrofotometri UV-VIS
 TABEL ANOVA
x y x2 y2 xy

3 0.2863 9 0.081968 0.8589

5 0.4624 25 0.213814 2.312

7 0.679 49 0.461041 4.753

9 0.8419 81 0.708796 7.5771

11 1.0004 121 1.0008 11.0044

13 1.2093 169 1.462406 15.7209

Σx = 48 Σy= 4.4793 Σx2= 454 Σy2=3.928825 Σxy= 42.2263

1) Mencari nilai Slop (b)

slop (b) = 0,11396

2) Mencari nilai intersep (a)

intersep (a) = -0,19823

3) Mencari nilai R2

R = 1,0254
R = 1,051448

4) Persamaan regresi

y = bx + a y = nilai serapan sampel

y = 0,11396x - 0,19823
X
X=
X = 56,9886 ppm (mg/L)
Contoh perhitungan kadar sediaan multikomponen
dengan metode spektrofotometri UV-VIS

 Pertama dihitung nilai slop (a), intersep (b), dan r2

masing-masing komponen (caranya sama seperti
pada perhitungan monokomponen)
 Selanjutnya dibuat persamaan regresi masing-
masing komponen
 Lalu dihitung kadarnya menggunakan persamaan
untuk multikomponen
 Pertanyaan diskusi
1. Penanya : Iga ayu lestari klp 1
Kan biasa dalam pengujian nitrit dengan menggunakan metode
spektrofotometri bagaimana cara kerjanya dan apa dampak terhadap
kesehatan jika nitrit dalam air melebihi batas
Jawaban :
Pengkonsumsian Air Sumur dengan kadar
nitrat tinggi, akan menimbulkan beberapa
gangguan kesehatan seperti gondok,
methemoglobinemia, dan sebagainya. Nitrat yang
masuk kedalam tubuh, 6% akan direduksi
menjadi nitrit yang bersifat karsinogenik.
 pertanyaan
2. Penanya : Kasmawati Dg. Mia kel.5F
Faktor apa saja yang sering menyebabkan kesalahan dalam
menggunakan spektrofotometer dalam mengukur konsentrasi suatu
analit
Jawaban :
Faktor-faktor yang sering menyebabkan kesalahan dalam menggunakan
spektrofotometer dalam mengukur konsentrasi suatu analit:
1.Adanya serapan oleh pelarut. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan
blangko, yaitu larutan yang berisi selain komponen yang akan dianalisis
termasuk zat pembentuk warna.
2.Serapan oleh kuvet. Kuvet yang ada biasanya dari bahan gelas atau
kuarsa, namun kuvet dari kuarsa memiliki kualitas yang lebih baik.
3.Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi
sangat rendah atau sangat tinggi, hal ini dapat diatur dengan pengaturan
konsentrasi, sesuai dengan kisaran sensitivitas dari alat yang digunakan
(melalui pengenceran atau pemekatan).