Kemungkinan Potensiasi Pengaruh Antidepresan dari Venlafaxine oleh Rekombinan Tikus Leptin dalam Model kronis Tikus Stres

ringan Abstrak: Penelitian ini dirancang untuk menyelidiki kemungkinan perubahan dalam tes renang paksa (FST), prefrontal glutamat kortikal dan asam gamma amino butirat-(GABA) isi dengan leptin dan / atau venlafaxine di stres ringan kronis (CMS) yang diinduksi pada tikus albino anhedonia laki-laki. Mereka dibagi menjadi 5 kelompok: kelompok pertama tidak terkena CMS, kelompok kedua menerima garam normal dengan paparan CMS, kelompok ketiga menerima leptin 1 mg / kg / hari intraperitoneal (ip) selama 3 minggu setelah diinduksi CMS anhedonia itu assesed dengan uji konsumsi sukrosa, keempat kelompok menerima venlafaxine 8 mg / kg / hari selama 3 minggu ip setelah protokol CMS, dan kelompok kelima menerima baik obat selama 3 minggu. Leptin dan / atau venlafaxine memulihkan perubahan dalam uji konsumsi sukrosa, perilaku penilaian dengan uji renang paksa (FST) serta isi GABA dan glutamat prefrontal korteks dalam kontrol menekankan kelompok. Selanjutnya, kombinasi dari kedua pengobatan tampaknya lebih mujarab ketimbang venlafaxine sendirian di parameter ini. Sebagai kesimpulan, hasil ini menunjukkan peran antidepresan potensial leptin dan menguntungkan terapi interaksi dengan venlafaxine dengan mempengaruhi tingkat GABA dan glutamat dalam korteks prefrontal. Tindakan ini bisa membuat leptin obat yang berpotensi berharga untuk pengobatan depresi. Kata kunci: stres ringan kronis [CMS], korteks prefrontal, leptin, venlafaxine, tes renang paksa, tikus albino. PENDAHULUAN Depresi adalah gangguan mental yang paling umum dengan tingkat prevalensi sekitar 20% dari populasi di seluruh dunia. Hal ini sering dikaitkan dengan perubahan spidol neurokimia [1]. Hiperaktivitas hipotalamus-hipofisis-adrenal (HPA) adalah salah satu kelainan biologis kunci pada 30-50% subyek depresi [2]. Kelainan pada glutamat dan gamma-aminobutyric acid (GABA) transmisi sinyal telah didalilkan untuk memainkan peran dalam depresi [3]. Antidepresan mengerahkan efek terapi mereka melalui meningkatkan monoamina corticolimbic [4-5]. Keterbatasan kemanjuran antidepresan, onset tertunda tindakan, dan efek samping yang tidak diinginkan menyebabkan upaya berkelanjutan untuk mengidentifikasi agen terapeutik ditingkatkan. Leptin, antiobesitas hormon, adalah hormon yang dikeluarkan dari adipocytes dan memasuki otak oleh saturabletransportasi mekanisme. Dengan mengikat reseptor dalam hipotalamus, bertindak sebagai adipositas umpan balik negatif sinyal [6]. Beberapa penelitian menyarankan bahwa leptin mungkin novel antidepresan [7], namun lebih penyelidikan lebih lanjut dibutuhkan untuk mengkonfirmasi leptin kemanjuran antidepresan dan kemungkinan interaksi dengan obat antidepresan dan untuk mengidentifikasi kemungkinan nya mekanisme. Stres kronis dianggap sebagai predisposisi faktor dalam timbulnya depresi pada manusia. Tikus terkena stres kronis tak terduga menunjukkan penurunan plasma leptin independen tubuh perubahan berat badan [8]. Pengobatan leptin berkurang baik

dopamin rilis dan tyrosine hydroxylase konsentrasi dalam nucleus accumbens dari ob / ob tikus 9]. Temuan ini sugestif bahwa leptin meningkatkan aktivitas dopamin mesolimbic. Namun, studi tambahan diperlukan untuk memperjelas peran yang tepat leptin pada neurotransmitter lainnya. Teori Monoaminergic gangguan mood memiliki menghasilkan berbagai wawasan patofisiologi selama waktu yang lama [3]. Sementara itu, kemungkinan keterlibatan sistem GABAergic, di patofisiologi dan pengobatan gangguan mood, merupakan target penting yang sedang berjalan studi psikiatri [10]. GABA adalah disintesis dalam satu langkah dari prekursor glutamat oleh dekarboksilase asam glutamat. GABA adalah dimetabolisme oleh transaminasi berturut-turut dan oksidasi untuk menghasilkan semialdehyde suksinat dan suksinat asam, masing-masing. Sebagai bagian dari transaminasi yang reaksi, sistem daur ulang terbentuk di mana - Asam ketoglutarat diubah menjadi prekursor GABA glutamat oleh transaminase asam GABA-glutamat [11]. Landasan hipotesis GABA di bipolar gangguan adalah bahwa GABA memberikan tindakan penghambatan untuk kedua norepinefrin [TL] dan sistem dopamin [12]. Meskipun neurotransmitter diungkapkan secara luas memiliki telah berpikir untuk memberikan suatu efek penghambatan tonik di norepinefrin [NE] sistem, data terakhir yang disarankan bahwa GABA mungkin sebenarnya memfasilitasi NE kegiatan [13]. di sana adalah bukti tinggi untuk pasien depresi memiliki tingkat yang lebih rendah dari GABA dalam plasma darah mereka. rendah ini kadar plasma dianggap mencerminkan tingkat otak yang lebih rendah [14]. Oleh karena itu, Penelitian ini dirancang untuk menilai efek antidepresan mungkin leptin dan / atau venlafaxine dan jika hal itu berkaitan dengan perubahan konsentrasi glutamat dan GABA di korteks frontal sebagai daerah kognisi. 2. BAHAN DAN METODE 2.1. hewan Enam puluh tikus albino jantan memiliki berat 180-200 g, yang dibeli dari Pusat Penelitian Nasional di Mesir. Tikus-tikus yang tinggal di kandang di bawah standar kondisi eksperimental: suhu kamar 24 1 C dan 12-h siklus terang-gelap (lampu menyala di 08:00). Makanan dan air keran yang tersedia secara bebas. Tikus diizinkan memiliki tujuh hari aklimatisasi sebelum eksperimen. Setelah aklimatisasi, tikus secara acak dibagi menjadi 5 kelompok [n = 12 di setiap tikus]. 2.2. bahan Tikus rekombinan leptin [kimia Sigma Co], Venlafaxine HCl (Wyeth-Ayerst) yang dibeli sebagai bubuk dan dilarutkan dalam air garam. Dosis: leptin dan venlafaxine hidroklorida yang diberikan setiap hari intraperitoneal (ip) sebagai 1 mg / kg [6] dan 8 mg / kg [14], masing-masing. Gamma aminobutyric acid (GABA), L-glutamat dan Norvaline standar (Sigma kimia Co, USA), etanol, (HPLC grade, Merck, Jerman), trietilamina (Merck, Jerman), phenylisothiocyanate (PITC, Sigma bahan kimia Co, USA), asam klorida (32%, Merck, Jerman), asetonitril (Merck, Jerman), asetat glasial Asam (Sigma kimia Co, UA), natrium asetat anhidrat (Merck, Jerman). 2.3. metode

2.3.1. Prosedur kronis Stres Ringan (CMS): Tiga Minggu Penerapan Prosedur Stresor Hal ini dilakukan sesuai dengan metode Willner et al. dan Solberg et al. [15 - 16]. Tikus dalam stres kelompok sasaran stres yang berbeda selama 3 minggu tanpa pengobatan dalam kelompok (2,3,4,5) untuk menginduksi anhedonia pada tikus yang mensimulasikan depresi manusia, kemudian kelompok (3,4,5) terus mengekspos ke CMS Model dengan pengobatan baik dengan venlafaxine, leptin atau keduanya. CMS Model melibatkan paparan diuji albino tikus sampai 16-h kekurangan air (botol air yang dihapus dari kandang selama ini), 5 min.ekor suspensi (hewan diadakan terbalik dengan mereka ekor dengan penjepit logam), satu sampai dua jam menahan diri (hewan ditempatkan dalam ml kerucut tabung 50 dengan bernapas lubang), 30-45 menit. dipasangkan perumahan (mouse ditempatkan di kandang mouse lain stres kelompok, setiap minggu mouse kandang rumah itu bergantian), kotor kandang: 100 ml (16-18 C) air dituangkan ke dalam kandang dan berenang secara paksa 5menit dalam dingin air (16-18 C). Setiap minggu, stres yang disajikan dalam urutan yang berbeda dan diberikan pada yang berbeda kali dalam sehari. 2.3.2. Sukrosa Konsumsi Uji Perkembangan anhedonia pada tikus diuji dengan uji konsumsi sukrosa. Pengujian dilakukan sekali setiap minggu setelah stres. Enam jam setelah lampu, hewan diberi sebotol 2% sukrosa untuk 1-h periode (karena studi percontohan mengungkapkan bahwa tikus dikonsumsi lebih banyak air selama periode aktif mereka, dengan demikian, meningkatkan kesempatan untuk melihat perbedaan dalam Konsumsi sukrosa). Setelah 1 jam, botol ini adalah dihapus dan total konsumsi sukrosa adalah dihitung. Menekankan hewan ketika mereka menjadi anhedonic mengkonsumsi kurang sukrosa dibandingkan dengan kelompok kontrol. Data awal menunjukkan bahwa tikus kontrol lebih suka solusi sukrosa 2% lebih teratur air tawar (studi percontohan). 2.3.3. Kelompok Eksperimental Tikus Kelompok 1 Control: tidak terkena CMS Model atau untuk pengobatan, hanya ip injeksi saline selama Periode terapi kelompok perlakuan. Setelah paparan selama 3 minggu stres, tikus dibagi menjadi 5 kelompok (setiap kelompok = 12 tikus) dengan harian pemberian garam atau obat-obatan selama 3 minggu sebagai berikut: Kelompok 2 terkena CMS + ip injeksi saline selama periode terapi kelompok perlakuan yaitu stres, kelompok saline yang diobati Kelompok 3 CMS + leptin 1 mg / kg / hari selama 3 ip minggu selama paparan CMS Model Kelompok 4 CMS + venlafaxine 8 mg / kg ip untuk lain

3 minggu selama paparan CMS Model Kelompok 5 CMS + leptin 1 mg / kg ip + venlafaxine 8 mg / kg ip selama 3 minggu selama paparan CMS model 2.3.4. Kolam Uji Paksa (FST) Pada akhir penelitian, FST dilakukan untuk menilai imobilitas sesuai dengan metode Detke et al. [17]. Hal itu dilakukan dengan menempatkan tikus ke individu silinder kaca (46 cm, 20 cm diameter) mengandung 23-25 C air 30 cm, sehingga tikus tidak bisa menghidupi diri sendiri dengan menyentuh bagian bawah dengan cakar mereka. Dua sesi renang pelatihan dilakukan awalnya satu sesi (15 menit) dari pretest diikuti 24 jam kemudian oleh sesi kedua (5 menit) tes. Setelah setiap berenang sesi, tikus telah dihapus dari silinder, dikeringkan dengan handuk kertas dan kembali ke mereka kandang rumah. Seorang pengamat tunggal, yang buta terhadap kondisi perawatan, melakukan semua perilaku mencetak gol.Imobilitas ini didefinisikan sebagai mengambang di air tanpa berjuang, dan hanya melakukan gerakan-gerakan yang diperlukan untuk menjaga kepala di atas air. Untuk masing-masing tikus, yang waktu imobilitas dihitung dalam hitungan detik selama periode dari 5 menit. 2.3.5. Penentuan Glutamat dan GABA Konsentrasi dalam homogenat dari prefrontal Korteks Tikus Diuji dengan Kinerja Tinggi Kromatografi Cair Setelah tes perilaku, tikus dikorbankan oleh pemenggalan kepala. Seluruh jaringan otak telah dihapus dengan cepat pada es-piring. Jaringan dicuci dengan saline dingin. Korteks prefrontal dari masing-masing tikus adalah homogen dan sampel disentrifugasi dalam pendinginan (4 C) centrifuge pada 15.000 rpm selama 10 menit. Supernatan disedot dan dipindahkan ke Eppendorf tabung. Pelet itu disimpan pada -70 C sampai diuji untuk kandungan protein total yang sesuai dengan metode Bradford [18]. Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dengan pra-kolom fenil-iso-thio-cyanate (PITC) derivatisasi digunakan untuk penentuan glutamat dan kadar GABA di homogenat dari prefrontal korteks otak tikus dari kelompok yang berbeda menurut metode Gunawan dkk. [19]. Masing-masing sampel diderivatisasi dengan pengeringan 100 l dari disedot supernatan dalam centrivap kondisi vakum. Residu dilarutkan dalam 20 l etanol-watertriethylamine (02:02:01) dan diuapkan sampai kering di bawah vakum. 30 l etanol-air-triethylaminephenylisothiocyanate [PITC] (7:1:1:1) ditambahkan ke residu dan dibiarkan bereaksi selama 20 menit pada ruang suhu untuk membentuk turunan PITC dari amino asam. Reagen Kelebihan kemudian diuapkan di bawah vakum. Fase gerak HPLC terdiri dari pelarut A & B [pelarut A: 0,1 M penyangga natrium asetat (PH = 5,8); pelarut B: asetonitril: air (60:40, v: v)]. A campuran 80% pelarut A dan 20% pelarut B adalah disesuaikan "isokratik" HPLC perpisahan. Laju alir ditetapkan pada 0,6 ml / menit. Sampel disuntikkan adalah 20 l. Puncak terdeteksi pada panjang gelombang 254 nm.Kurva standar untuk glutamat atau GABA dan Norvaline diplotkan menggunakan Norvaline 2 nmol/20 l sebagai internal standar. Rasio daerah puncak masing-masing konsentrasi setiap standar ke daerah puncak baku internal ditentukan dan masuk terhadap konsentrasi standar secara sederhana Prosedur regresi.

2.4. Analisis Data Data yang diperoleh disajikan sebagai rata-rata SEM [Standar kesalahan berarti] dan dievaluasi dengan menggunakan satu arah ANOVA, dilanjutkan dengan penentuan pos Tukey hoc, menggunakan GraphPad Prism versi 3.00 untuk Windows 97 (Grafik Pad Software, San Diego, CA, U.S.A.). 2.5. Etika Semua prosedur telah sesuai dengan Nasional Institut Panduan Kesehatan untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium, serta pedoman dari Kesejahteraan Hewan Act. 3. HASIL 3.1. Pengaruh Leptin dan / atau venlafaxine pada Sukrosa Konsumsi di CMS-induced anhedonia di Tikus Gambar 1 menunjukkan pembalikan anhedonia setelah 3 minggu administrasi ip leptin dan / atau venlafaxine pada tikus albino jantan terus menerus terpapar Protokol CMS. Konsumsi sukrosa dalam mL kelompok yang berbeda dihitung. Dibandingkan dengan kontrol non menekankan kelompok, kontrol menekankan kelompok itu terkait dengan (p <0,01) penurunan yang signifikan dalam Konsumsi sukrosa oleh 84,33%. Penurunan ini terbalik di leptin, venlafaxine dan keduadiperlakukan untuk menjadi -35,34%, -10,64% dan 13,25% masing-masing sebagai dibandingkan dengan tingkat kelompok kontrol. Venlafaxine dan leptin secara statistik lebih efektif (p <0,01) dibandingkan salah satu obat saja. 3.2. Pengaruh Leptin dan / atau Venlafaxine pada Kolam Uji Paksa (FST) Pengurangan waktu imobilitas (dalam FST) adalah diamati setelah pengobatan tikus menderita CMS dengan baik leptin dan / atau venlafaxine (lihat Tabel 1). Kombinasi kedua obat disebabkan statistik penurunan yang signifikan dalam waktu lebih dari imobilitas masing-masing saja (Tabel 1).