ANALISIS N-TOTAL DENGAN CARA DESTILASI KJELDAHL (Laporan Praktikum Dasar-Dasar Pemisa an Ana!

itik"

Oleh Dynda Meuthia Tiffany 1113023017

PENDIDIKAN KI#IA $AK%LTAS KEG%R%AN DAN IL#% PENDIDIKAN %NI&ERSITAS LA#P%NG 'ANDAR LA#P%NG ()*+

Judul Percobaan Tan!!al Percobaan Te$%at Percobaan Na$a NPM (a)ultas Jurusan Pro!ra$ +tudi "elo$%o)

: Analisis N Total den!an cara Destilasi "#eldahl : 1 Dese$ber 2013 : &aboratoriu$ Pe$bela#aran "i$ia : Dynda Meuthia T'ffany : 1113023017 : "'P : P*M'PA : P*"i$ia : ', -.$%at/

0andarla$%un!1 1 Dese$ber 2013 Menyetu#ui Asisten

NPM

I,

PENDAH%L%AN

1*1 &atar 0ela)an! Metode "#eldahl $eru%a)an $etode yan! sederhana untu) %eneta%an nitro!en total %ada asa$ a$ino1 %rotein dan senya2a yan! $en!andun! nitro!en* +a$%el didestru)si den!an asa$ sulfat dan di)atalisis den!an )atalisator yan! sesuai sehin!!a a)an $en!hasil)an a$oniu$ sulfat* +etelah %e$bebasan den!an al)ali )uat1 a$onia yan! terbentu) disulin! ua% secara )uantitatif )e dala$ larutan %enyera% dan diteta%)an secara titrasi* Metode ini telah banya) $en!ala$i $odifi)asi* Metode ini coco) di!una)an secara se$i$i)ro1 sebab hanya $e$erlu)an #u$lah sa$%el dan %erea)si yan! sedi)it dan 2a)tu analisa yan! %ende)* Metode ini )uran! a)urat bila di%erlu)an %ada senya2a yan! $en!andun! ato$ nitro!en yan! teri)at secara lan!sun! )e o)si!en atau nitro!en* Analisa %rotein cara "#eldahl %ada dasarnya da%at diba!i $en#adi ti!a taha%an yaitu %roses destru)si1 %roses destilasi dan taha% titrasi* 0erdasar)an hal tersebut untu) lebih $e$aha$i $etode )#eldahl$a)a %ercobaan ini dila)u)an* 1*2 Tu#uan Percobaan Ada%un tu#uan dari %ercobaan ini a!ar $ahasis2a da%at $enentu)an )andun!an %rotein dala$ susu den!an cara se$i $i)ro "#eldahl*

II,TINJA%AN P%STAKA

Protein -asal )ata %rotos dari bahasa 3unani yan! berarti 4yan! %alin! uta$a5/ adalah senya2a or!ani) )o$%le)s berbobot $ole)ul tin!!i yan! $eru%a)an %oli$er dari $ono$er $ono$er asa$ a$ino yan! dihubun!)an satu sa$a lain den!an i)atan %e%tida* Protein ber%eran %entin! dala$ stru)tur dan fun!si se$ua sel $a)hlu) hidu% dan 6irus* "ebanya)an %rotein $eru%a)an en7i$ atau subunit en7i$* Jenis %rotein lain ber%eran dala$ fun!si stru)tural atau $e)anis1 se%erti $isalnya %rotein yan! $e$bentu) batan! dan sendi sitos)eleton* Protein terlibat dala$ siste$ )e)ebalan -i$un/ seba!ai antibodi1 siste$ )endali dala$ bentu) hor$on1 seba!ai )o$%onen %enyi$%anan -dala$ bi#i/ dan #u!a dala$ trans%ortasi hara* +eba!ai salah satu su$ber !i7i1 %rotein ber%eran seba!ai su$ber asa$ a$ino ba!i or!anis$e yan! tida) $a$%u $e$bentu) asa$ a$ino tersebut -heterotrof/* Protein $eru%a)an salah satu dari bio$ole)ul ra)sasa1 selain %olisa)arida1 li%id1 dan %olinu)leotida1 yan! $eru%a)an %enyusun uta$a $a)hlu) hidu%* +elain itu1 %rotein $eru%a)an salah satu $ole)ul yan! %alin! banya) diteliti dala$ bio)i$ia* Protein dite$u)an oleh J8ns Ja)ob 0er7elius %ada tahun 1939* 0iosintesis %rotein ala$i sa$a den!an e)s%resi !eneti)* "ode !eneti) yan! diba2a DNA ditrans)ri%si $en#adi :NA1 yan! ber%eran seba!ai ceta)an ba!i translasi yan! dila)u)an riboso$* +a$%ai taha% ini1 %rotein $asih 4$entah51 hanya tersusun dari asa$ a$ino %roteino!eni)* Melalui $e)anis$e %ascatranslasi1 terbentu)lah %rotein yan! $e$ili)i fun!si %enuh secara biolo!i* Protein $eru%a)an suatu 7at $a)anan yan! san!at %entin! ba!i tubuh )arena 7at ini berfun!si seba!ai su$ber ener!i dala$ tubuh serta seba!ai 7at %e$ban!un dn %en!atur* Protein adalah %oli$er dari asa$ a$ino yan! dihubun!)an den!an i)atan %e%tida* Mole)ul %rotein $en!andun! unsur u$sur ;1 <1 O1 N1 P1 +1 dan ter)adan! $en!andun! unsur lo!a$ se%erti besi dan te$ba!a -=inarno1 1>>2/* Protein $eru%a)an salah satu unsure $a)ro yan! terda%at %ada bahan %an!an selain le$a) dan )arbohidrat* (un!si uta$a %rotein dala$ tubuh adalah seba!ai 7at %e$bentu) #arin!an baru dan $e$%ertahan)an #arin!an yan! sudah ada a!ar tida) $udah rusa)* Protein sendiri $e$%unyai banya) se)ali fun!si di tubuh )ita* Pada dasarnya %rotein $enun#an! )eberadaan setia% sel tubuh1 %roses )e)ebalan tubuh* +etia% oran! de2asa harus sedi)itnya $en!onsu$si 1 ! %rotein %er )! berat tubuhnya* "ebutuhan a)an %rotein berta$bah %ada %ere$%uan yan! $en!andun! dan atlet atlet*

"e)uran!an Protein bisa bera)ibat fatal: '''* ?"eronto)an ra$but -:a$but terdiri dari >7 100@ dari Protein "eratin/ ',* ?3an! %alin! buru) ada yan! disebut den!an "2asior)or1 %enya)it )e)uran!an %rotein* 0iasanya %ada ana) ana) )ecil yan! $enderitanya1 da%at dilihat dari yan! na$anya busun! la%ar1 yan! disebab)an oleh filtrasi air di dala$ %e$buluh darah sehin!!a $eni$bul)an ode$*+i$%to$ yan! lain da%at di)enali adalah: ',*1 hi%otonus ',*2 !an!!uan %ertu$buhan ',*3 hati le$a) ',*A ?"e)uran!an yan! terus $enerus $enyebab)an $aras$us dan ber)ibat )e$atian* "adar %rotein yan! ditentu)an berdasar)an cara "#eldahl disebut seba!ai )adar %rotein )asar -crude %rotein/ )arena teri)ut senya2aan N bu)an %rotein1 $isalnya urea1 asa$ nu)leat1 a$$onia1 nitrat1 nitrit1 asa$ a$ino1 a$ida1 %urin1 dan %iri$idin* Protein a)an $en!ala$i )e)eruhan terbesar %ada saat $enca%ai %< isoele)tris yaitu %< di$ana %rotein $e$ili)i $uatan %ositif dan ne!atif yan! sa$a1 %ada saat inilah %rotein berubah 2u#ud $en#adi %adatan dan )ehilan!an daya )elarutannya* Metode Kjeldahl Analisis %rotein dala$ bahan %an!an da%at dila)u)an den!an dua $etode yaitu $etode )uantitatif dan )ualitatif* "adar %rotein yan! ditentu)an berdasar)an cara "#eldahl disebut seba!ai )adar %rotein )asar -crude %rotein/ )arena teri)ut senya2aan N bu)an %rotein* Prinsi% )er#a dari $etode "#eldahl adalah %rotein dan )o$%onen or!anic dala$ sa$%el didestru)si den!an $en!!una)an asa$ sulfat dan )atalis* <asil destru)si dinetral)an den!an $en!!una)an larutan al)ali dan $elalui destilasi* Destilat dita$%un! dala$ larutan asa$ borat* +elan#utnya ion ion borat yan! terbentu) dititrasi den!an $en!!una)an larutan <;l* Metode "#eldahl $eru%a)an $etode yan! sederhana untu) %eneta%an nitro!en total %ada asa$ a$ino1 %rotein dan senya2a yan! $en!andun! nitro!en* +a$%el didestru)si den!an asa$ sulfat dan di)atalisis den!an )atalisator yan! sesuai sehin!!a a)an $en!hasil)an a$oniu$ sulfat* +etelah %e$bebasan den!an al)ali )uat1 a$onia yan! terbentu) disulin! ua% secara )uantitatif )e dala$ larutan %enyera% dan diteta%)an secara titrasi* Metode ini telah banya) $en!ala$i $odifi)asi* Metode ini coco) di!una)an secara se$i$i)ro1 sebab hanya $e$erlu)an #u$lah sa$%el dan %erea)si yan! sedi)it dan 2a)tu analisa yan! %ende)*

;ara "#eldahl di!una)an untu) $en!analisis )adar %rotein )asar dala$ bahan $a)anan secara tida) lan!sun!1 )arena yan! dianalisis den!an cara ini adalah )adar nitro!ennya* Den!an $en!ali)an hasil analisis tersebut den!an an!)a )on6ersi B12C1 di%eroleh nilai %rotein dala$ bahan $a)anan itu* Dntu) beras1 )edelai1 dan !andu$ an!)a )on6ersi berturut turut seba!ai beri)ut: C1>C1 C1711 dan C193* An!)a B12C berasal dari an!)a )on6ersi seru$ albu$in yan! biasanya $en!andun! 1B@ nitro!en* Prinsi% cara analisis "#eldahl adalah seba!ai beri)ut: $ula $ula bahan didestru)si den!an asa$ sulfat %e)at $en!!una)an )atalis seleniu$ o)si)lorida atau butiran En* A$onia yan! ter#adi dita$%un! dan dititrasi den!an bantuan indi)ator* ;ara "#eldahl %ada u$u$nya da%at dibeda)an atas dua cara1 yaitu cara $a)ro dan se$i$a)ro* ;ara $a)ro "#eldahl di!una)an untu) contoh yan! su)ar diho$o!enisasi dan besar contoh 1 3 !1 sedan! se$i$i)ro "#eldahl dirancan! untu) contoh u)uran )ecil yaitu )uran! dari 300 $! dari bahan yan! ho$o!en* ;ara analisis tersebut a)an berhasil bai) den!an asu$si nitro!en dala$ bentu) i)atan N N dan N O dala$ sa$%el tida) terda%at dala$ #u$lah yan! besar* "e)uran!an cara analisis ini ialah bah2a %urina1 %iri$idina1 6ita$in 6ita$in1 asa$ a$ino besar1 )reatina1 dan )reatinina i)ut teranalisis dan teru)ur seba!ai nitro!en %rotein* =alau%un de$i)ian1 cara ini )ini $asih di!una)an dan dian!!a% cu)u% teliti untu) %en!u)uran )adar %rotein dala$ bahan $a)anan* Analisa %rotein cara "#eldahl %ada dasarnya da%at diba!i $en#adi ti!a taha%an yaitu %roses destru)si1 %roses destilasi dan taha% titrasi* 1. Tahap destruksi Pada taha%an ini sa$%el di%anas)an dala$ asa$ sulfat %e)at sehin!!a ter#adi destru)si $en#adi unsur unsurnya* .le$en )arbon1 hidro!en tero)sidasi $en#adi ;O1 ;O2 dan <2O* +edan!)an nitro!ennya -N/ a)an berubah $en#adi -N<A/2+OA* Dntu) $e$%erce%at %roses destru)si serin! dita$bah)an )atalisator beru%a ca$%uran Na2+OA dan <!O -20:1/* Funnin! $en!an#ur)an $en!!una)an "2+OA atau ;u+OA* Den!an %ena$bahan )atalisator tersebut tit) didih asa$ sulfat a)an di%ertin!!i sehin!!a destru)si ber#alan lebih ce%at* +elain )atalisator yan! telah disebut)an tadi1 )adan! )adan! #u!a diberi)an +eleniu$* +eleniu$ da%at $e$%erce%at %roses o)sidasi )arena 7at tersebut selain $enai))an titi) didih #u!a $udah $en!ada)an %erubahan dari 6alensi tin!!i )e 6alensi rendah atau sebali)nya* 2. Tahap destilasi Pada taha% destilasi1 a$$oniu$ sulfat di%ecah $en#adi a$$onia -N<3/ den!an %ena$bahan NaO< sa$%ai al)alis dan di%anas)an* A!ar su%aya sela$a destilasi tida) ter#adi su%erheatin! atau%un %e$erci)an cairan atau ti$bulnya !ele$bun! !as yan! besar $a)a da%at dita$bah)an lo!a$ 7in) -En/* A$$onia yan! dibebas)an selan#utnya a)an ditan!)a% oleh asa$ )hlorida atau asa$ borat A @ dala$ #u$lah yan! berlebihan* A!ar su%aya )onta) antara asa$ dan a$$onia lebih bai) $a)a diusaha)an u#un! tabun! destilasi tercelu% sedala$ $un!)in

dala$ asa$* Dntu) $en!etahui asa$ dala$ )eadaan berlebihan $a)a diberi indi)ator $isalnya 0;F G M: atau PP* 3. Tahap titrasi A%abila %ena$%un! destilat di!una)an asa$ )hlorida $a)a sisa asa$ )horida yan! berea)si den!an a$$onia dititrasi den!an NaO< standar -011 N/* A)hir titrasi ditandai den!an te%at %erubahan 2arna larutan $en#adi $erah $uda dan tida) hilan! sela$a 30 deti) bila $en!!una)an indi)ator PP* @N H I N* NaO< I 1A1009 I 100@ A%abila %ena$%un! destilasi di!una)an asa$ borat $a)a banya)nya asa$ borat yan! berea)si den!an a$$onia da%at di)etahui den!an titrasi $en!!una)an asa$ )hlorida 011 N den!an indi)ator -0;F G M:/* A)hir titrasi ditandai den!an %erubahan 2arna larutan dari biru $en#adi $erah $uda* @N H I N*<;l I 1A1009 I 100 @ +etelah di%eroleh @N1 selan#utnya dihitun! )adar %roteinnya den!an $en!ali)an suatu fa)tor* 0esarnya fa)tor %er)alian N $en#adi %rotein ini ter!antun! %ada %ersentase N yan! $enyusun %rotein dala$ suatu bahan* Metode Lowry Ada bebera%a $etode yan! biasa di!una)an dala$ ran!)a %enentuan )onsentrasi %reotein1 yaitu $etode 0iuret1 &o2ry1 dan lain seba!ainya* Masin! $asin! $etode $e$%unyai )e)uran!an dan )elebihan* Pe$ilihan $etode yan! terbai) dan te%at untu) suatu %en!u)uran ber!antun! %ada bebera%a fa)tor se%erti $isalnya1 banya)nya $aterial atau sa$%el yan! tersedia1 2a)tu yan! tersedia untu) $ela)u)an %en!u)uran1 alat s%e)trofoto$etri yan! tersedia -,'+ atau D,/* :ea!en %endete)si !u!us !u!us fenoli) se%erti rea!en folin dan ciocalteu telah di!una)an dala$ %enentuan )onsentrasi %rotein oleh &o2ry -1>C1/ yan! )e$udian di)enal den!an $etode &o2ry* Dala$ bentu) yan! %alin! sederhana rea!en folin ciocalteu a%at $endete)si residu tirosin -dala$ %rotein/ )arena )andun!an fenoli) dala$ residu tersebut $a$%u $eredu)si fosfotun!sat dan fosfo$olibdat1 yan! $eru%a)an )onstituen uta$a rea!en folin ciocalteu1 $en#adi tun!sten dan $olibdenu$ yan! ber2arna biru* <asil redu)si ini $enun#u))an %unca) absorbsi yan! lebar %ada daerah $erah* +ensitifitas dari $etode folin ciocalteu ini $en!ala$i %erbai)an yan! cu)u% si!nifi)an a%abila di!abun! den!an ion ion ;u* &arutan &o2ry ada dua $aca$ yaitu larutan A yan! terdiri dari fosfotun!stat fosfo$olibdad -1:1/ dan larutan &o2ry 0 yan! terdiri dari Na carbonat 2@ dala$ NaO< 011 N1 )u%ri sulfat dan Na " tartat 2@* ;ara %enentuannya se%erti beri)ut: 1 $l larutan %rotein dita$bah C $l &o2ry 01 di!o#on! dan dibiar)an sela$a 10

$enit* "e$udian dita$bah 01C $l &o2ry A di!o#on! dan dibiar)an 20 $enit* +elan#utnya dia$ati OD nya* Dala$ $etode ini terlibat 2 rea)si* A2alnya1 )o$%le)s ;u-''/ %rotein a)an terbentu) seba!ai$ana $etode biuret1 yan! dala$ suasana al)alis ;u-''/ a)an teredu)si $en#adi ;u-'/* 'on ;uG )e$udian a)an $eredu)si rea!en (olin ;iocalteu1 )o$%le)s %hos%ho$olibdat %hos%hotun!stat -%hos%ho$olybdotun!state/1 $en!hasil)an hetero%oly $olybdenu$ blue a)ibat rea)si o)sidasi !u!us aro$ati) -rantai sa$%in! asa$ a$ino/ ter)atalis ;u1 yan! $e$beri)an 2arna biru intensif yan! da%at didete)si secara )olori$etri* Metode &o2ry $en!)o$binasi)an %erea)si biuret den!an %erea)si lain -(olin ;iocalteau%henol/ yan! berea)si den!an residu tyrosine dan try%to%han dala$ %rotein* :ea)si ini $en!hasil)an 2arna )ebiruan yan! bisa dibaca di antara C00 J 7C0 n$1 ter!antun! sensiti6itas yan! dibutuh)an* A)an $uncul %unca) )ecil di se)itar C00 n$ yan! da%at di!una)an untu) $enentu)an %rotein den!an )onsentrasi tin!!i dan sebuah %unca) besar dise)itar 7C0 n$ yan! da%at di!una)an untu) $enentu)an )adar %rotein den!an )onsentrasi rendah* 0era2al dari %e$anfaatan alat s%e)trofoto$eter yaitu untu) $en!u)ur #u$lah %enyera%an 7at suatu senya2a* Penyera%an cahaya %ada senya2a larutan tersebut1 dala$ s%e)trofoto$etri da%at di!una)an seba!ai dasar atau %edo$an dala$ %enentuan )onsentrasi larutan atau senya2a secara )uantitatif* Dala$ %rati)u$ ini %en!!unaan "MnOA bertu#uan untu) $e$udah)an dala$ %en!enalan dan latihan a2al s%e)trofoto$etri* "e)uatan 2arna biru teruta$a ber!antun! %ada )andun!an residu try%to%han dan tyrosine nya* "euntun!an $etode &o2ry adalah lebih sensitif -100 )ali/ dari%ada $etode 0iuret 0ebera%a 7at yan! bisa $en!!an!!u %eneta%an )adar %rotein den!an $etode &o2ry ini1 diantaranya buffer1 asa$ nu)let1 !ula atau )arbohidrat1 deter#en1 !liserol1 Tricine1 .DTA1 Tris1 senya2a senya2a )aliu$1 sulfhidril1 disulfida1 fenolat1 asa$ urat1 !uanin1 Kanthine1 $a!nesiu$1 dan )alsiu$* 'nterferensi a!en a!en ini da%at di$ini$al)an den!an $en!hilan!)an interferens tersebut* +an!at dian#ur)an untu) $en!!una)an blan)o untu) $en!)ore)si absorbansi* 'nterferensi yan! disebab)an oleh deter#en1 su)rosa dan .DTA da%at dieli$inasi den!an %ena$bahan +D+ atau $ela)u)an %re%arasi sa$%el den!an %en!enda%an %rotein*

&,

#ETODOLOGI PERCO'AAN

,*1Alat dan 0ahan Alat yan! di!una)an dala$ %ercobaan ini yaitu : &abu ta)ar 100 $l1 labu )#eldahl1 buret %yreK1 labu destilasi1 )a)i tida1 )a2at )asa1 bunsen dan batu didih* 0ahan yan! di!una)an dala$ %ercobaan ini yaitu : 10 $l %rotein susu1 aLuades1 <2+OA1 ;u+OA1 larutan NaO< Na2+2O31 butiran 7in)1 ind)ator $etil $erahM$etil biru dan <;l* ,*2Prosedur Percobaan 1* A$bil 10 $l susu atau larutan %rotein dan $e$asu))an )e dala$ labu ta)ar 100 $l serta $en!encer)an den!an aLuades sa$%ai tanda batas* 2* A$bil 10 $l dari larutan dan $e$asu))an )e dala$ labu )#eldahl C00$l dan $ena$bah)an 10 $l <2+OA->3 93@ bebas N/* Mena$bah)an C !ra$ ;u+OA* 3* Didih)an sa$%ai #ernih dan lan#ut)an %endidihan 30 enit la!i* +etelah din!in $encuci dindin! labu )#eldahl den!an aLuades dan $endidih)an la!i sela$a 30 $enit* A* +etelah din!in $ena$bah)an 1A0 $l aLuades dan 3C $l larutan NaO< Na2+2O3 -lihat %e$buatan rea!ensia/ dan bebera%a butiran 7in) atau batu didih* C* Mela)u)an destilasi N destilasi dita$%un! dala$ erlen$eyer 100 $l yan! berisi2C$l larutan #enuh asa$ borat dan bebera%a tetes indi)ator $erahM$etil biru-lihat %e$buatan rea!ensia/* B* Titrasi larutan yan! di%eroleh den!an 01002 N <;l

7* <itun! total N atau @ %rotein dala$ sa$%el

&I,

HASIL PENGA#ATAN DAN PE#'AHASAN

-,*, HASIL PENGA#ATAN a* <;l 011 N - blan)o H 012 $l / Sampe! Te%un! "edelai 0iscuit 0ayi +usu 0ubu) Te%un! 0eras .sampe! C1 C11A C012 C112 & HC! 112 C17 A1C 01B & HC! 1119 11> B19 A Ka/ar N ( 0" 217C 1A1>> 111>> 110> Ka/ar N ( 0" B1C1B 01>9C 31C92 2113A Ka/ar Protein ( 0" 1C1B9 9C1AA 7B1CA B1C1 Ka/ar Protein ( 0" 3712 C1B1AC 2219C 121B>73

b* <;l 012 N - blan)o H 011 $l / Sampe! .sampe! Te%un! "edelai 0iscuit 0ayi +usu 0ubu) Te%un! 0eras O -,( PE#'AHASAN C013 C112 C21A C112

Protein $eru%a)an salah satu unsure $a)ro yan! terda%at %ada bahan %an!an selain le$a) dan )arbohidrat* Protein $eru%a)an su$ber asa$ a$ino yan! $en!andun! unsure unsure ;1 <1 O dan N dala$ i)atan )i$ianya* Mole)ul %rotein #u!a $en!andun! fosfor1 beleran! dan ada bebera%a #enis %rotein yan! $en!andun! te$ba!a - =inarno1 1>9A /* Protein san!at $udah $en!ala$i %erubahan fisis $au%un a)ti6itas biolo!is yan! disebab)an oleh )andun!an %rotein beru%a %oli%e%tida den!an 0M - berat $ole)ul / yan! bera!a$* (un!si uta$a %rotein dala$ tubuh adalah seba!ai 7at %e$bentu) #arin!an baru dan $e$%ertahan)an #arin!an yan! sudah ada a!ar tida) $udah rusa)* Protein da%at #u!a di!una)an seba!ai bahan ba)ar a%abila )e%erluan ener!i tubuh

tida) da%at ter%enuhi oleh )arbohidrat dan le$a)* Protein #u!a ber%eran dala$ %en!aturan %roses dala$ tubuh - secara lan!sun! $au%un tida) lan!sun! /* Den!an cara $en!atur 7at 7at %en!atur %roses dala$ tubuh1 %rotein da%at $en!atur )esei$ban!an cairan dala$ #arn!an dan %e$buluh darah1 yaitu den!an cara $eni$bul)an te)anan os$oti) )oloid* Te)anan os$otic tersebut da%at $enari) cairan #arin!an )edala$ %e$buluh darah* +elain itu1 sifat a$foter %rotein yan! da%at berea)si den!an asa$ dan basa1 da%at $en!atur )esei$ban!an asa$ basa dala$ tubuh* Protein da%at $en!ala$i %erubahan %erubahan yan! disebab)an oleh bebera%a hal seba!ai beri)ut: 1* 2* Da%at terdenaturasi yan! disebab)an oleh %erla)uan %e$anasan* Pada u$u$nya %rotein a)an terdenaturasi )arena adanya )ondisi e)stri$* Da%at ter)oa!ulasi atau $e$bentu) enda%an yan! disebab)an oleh adanya %erla)uan %en!asa$an* 3* Da%at $en!ala$i de)o$%osisi atau %e$ecahan oleh en7i$ en7i$ %roteoliti)* A* Da%at berea)si den!an !ula redu)si* :ea)si tersebut a)an $eni$bul)an terbentu)nya 2arna co)elat* Analisis %rotein dala$ bahan %an!an da%at dila)u)an den!an dua $etode yaitu $etode )uantitatif dan )ualitatif* Analisis %rotein secara )ualitatif adalah analisis yan! bertu#uan untu) $en!etahui ada atau tida)nya %rotein dala$ suatu bahan %an!an* Analisis )ualitatif da%at dila)u)an den!an rea)si Panto%rotein1 rea)si <o%)ins ;ole1 rea)si Millon1 rea)si Nitro%rusida dan rea)si +a)a!uchi* +edan!)an analisis %rotein secara )uantitatif adalah analisis yan! bertu#uan untu) $en!etahui )adar %rotein dala$ suatu bahan %an!an* Analisi )uantitatif %rotein da%at dila)u)an den!an $etode "#eldahl1 $etode titrasi for$ol1 $etode &o2ry1 $etode s%e)trofoto$etri 6isible -0iuret/ dan $etode s%e)trofoto$etri D,* Pada %ra)ti)u$ )ali ini a)an dila)u)an %enentuan )adar %rotein dala$ bahan %an!an den!an $en!!una)an $etode "#eldahl* Analisis %rotein ini da%at $enentu)an tin!)at )ualitas %rotein a%abila di%andan! dari sudut !i7i serta $enelaah %rotein yan! $eru%a)an salah satu bahan )i$ia secara bio)i$ia1 fisiolo!is1 reolo!is dan en7i$atis*

Prinsi% )er#a dari $etode "#eldahl adalah %rotein dan )o$%onen or!anic dala$ sa$%el didestru)si den!an $en!!una)an asa$ sulfat dan )atalis* <asil destru)si dinetral)an den!an $en!!una)an larutan al)ali dan $elalui destilasi* Destilat dita$%un! dala$ larutan asa$ borat* +elan#utnya ion ion borat yan! terbentu) dititrasi den!an $en!!una)an larutan <;l* Pada %ra)ti)u$ ini1 sa$%el yan! di!una)an adalah te%un! beras1 susu bubu)1 biscuit dan te%un! )edelai* &an!)ah %erta$a yan! harus dila)u)an oleh %ra)ti)an adalah $e$asu))an sa$%el sebanya) 010C !ra$ )edala$ labu )#eldahl* "e$udian )edala$ labu1 dita$bah)an 010A !ra$ <!O1 01> !ra$ " 2+OA* Pena$bahan "2+OA berfun!si seba!ai )atalisator yan! da%at $enin!)at)an titi) didih* 1 !ra$ "2+OA da%at $enin!)at)an titi) didih hin!!a 30 ; -+udar$ad#i d))*1 1>>B/* Penin!)atan titi) didih a)an $en!efe)tif)an rea)si antara asa$ sulfat den!an sa$%el - destru)si ber#alan efe)tif /* <al tersebut disebab)an oleh la$anya 2a)tu yan! dibutuh)an oleh asa$ sulfat untu) $en!ua% - se$a)in tin!!i titi) didih1 $a)a 2a)tu yan! dibutuh)an asa$ sulfat untu) $en!ua% a)an se$a)in la$a /* +etelah itu1 dita$bah)an la!i <2+OA sebanya) A $l dala$ ruan! asa$ yan! )e$udian dilan#ut)an den!an $endestru)si sa$%el sela$a A #a$ hin!!a 2arnanya berubah $en#adi hi#au benin!* Destru)si sa$%el bertu#uan untu) $e$%erce%at rea)si dan hidrolisis %rotein $en#adi unsure ;1 <1 O1 N1 + dan P* <!O G <2+OA Q <!+OA G <2 <!2+OA G 2 <2+OA Q 2 <!+OA G 2 <2O G +O2 Proses destru)si a)an $en!hasil)an )arbondio)sida - ;O 2 /1 air - <2O / dan a$$oniu$ sulfat -- N<A/2+OA/* -;<ON/ G On G <2+OA R ;O2 G <2O G -N<A/2+OA +a$%el yan! sudah didestru)si1 a)an didin!in)an yan! )e$udian a)an dilan#ut)an den!an %roses destilasi* +ebelu$nya1 sa$%el dita$bah)an den!an a)uades a!ar enda%an da%at larut* Destilasi $eru%a)an suatu %roses $e$isah)an cairan $au%un larutan yan! berdasar)an %ada %erbedaan titi) didih* Tu#uan dari %roses destilasi adalah $e$isah)an 7at yan! a)an dianalisa den!an cara $e$ecah a$$oniu$ sulfat $en#adi a$$onia - N<3 /* Pe$ecahan tersebut $elibat)an

%eran NaO< B0@ yan! dita$bah)an )edala$ sa$%el sebanya) 10 $l* Pena$bahan NaO< bertu#uan untu) $e$%erce%at %ele%asan a$$onia den!an cara $enci%ta)an suasana basa - rea)si tida) da%at berlan!sun! dala$ )ondisi asa$ /* - N<A/2+OA G 2NaO< R 2N<3 G Na2+OA G 2<2O

N<3 dihasil)an dala$ destilat beru%a !as* Fas N< 3 tersebut ditan!)a% oleh asa$ borat* Asa$ borat yan! dita$bah)an )edala$ destilat sebanya) 1C $l yan! )e$udian dilan#ut)an den!an %ena$bahan 2 tetes indicator $etal $erah biru* AN<3 G 2<30O3 R 2-N<A/20O3 G<2 +etelah %ena$bahan indicator1 dila)u)an u#i la)$us terhada% sa$%el yan! )e$udian dila#ut)an den!an titrasi <;l hin!!a 2arnanya berubah $en#adi biru* Pada %ra)ti)u$ )ali ini1 nor$alitas <;l yan! di!una)an adalah 011 N dan 012 N* +etelah $ela)u)an titrasi1 da%at di)etahui )adar %roteinnya yan! tertuan! dala$ bentu) %ersen )adar nitro!en* 0eri)ut adalah ru$us )adar nitro!en : @ "adar Nitro!en H K 100@

Di$ana : Ar Nitro!en 0e <;l H 1A1007 H1

+elan#utnya1 dari %ersen )adar nitro!en da%at di)etahui )adar %roteinnya den!an $en!!una)an %ersa$aan seba!ai beri)ut: @ "adar Protein H @ "adar Nitro!en K () 0eri)ut adalah hasil %erhitun!an )adar %rotein yan! dida%at dari %ra)ti)u$: a* <;l 011 N Sampe! Te%un! "edelai 0iscuit 0ayi +usu 0ubu) Te%un! 0eras .sampe! C1 C11A C012 C112 & HC! 112 C17 A1C 01B Ka/ar N ( 0" 217C 1A1>> 111>> 110>

b* <;l 012 N Sampe! .sampe! & HC! Ka/ar N ( 0" Te%un! C013 1119 B1C1B "edelai 0iscuit 0ayi C112 11> 01>9C +usu 0ubu) C21A B19 31C92 Te%un! 0eras C112 A 2113A A%abila data tersebut dia%li)asi)an )edala$ ru$us %erhitun!an1 $a)a dida%at)an )adar %roteinnya seba!ai beri)ut: Sampe! HC! )1* N HC! )1( N Te%un! 1C1B9 3712 "edelai 0iscuit 0ayi 9C1AA C1B1AC +usu 0ubu) 7B1CA 2219C Te%un! 0eras B1C1 121B>73 Pen!!unaan nor$alitas asa$ )lorida yan! berbeda bertu#uan untu) $e$bandin!)an nor$alitas $ana yan! $en!hasil)an )adar %rotein yan! sesuai den!an literature* A%abila $e$bandin!)an antara )edua )adar %rotein tersebut1 dida%at)an hasil yan! rentan! %erbedaannya san!at #auh* Menurut literature1 )adar %rotein dala$ susu bubu) adalah 2C1> @ sedan!)an $enurut hasil %ra)ti)u$ adalah 7B1CA @ dan 2219C @* <asil analisa )adar %rotein $en!!una)an asa$ )lorida 012 N $e$beri)an hasil yan! sedi)it $ende)ati )adar literature* 0esarnya )adar %rotein %ada susu bubu) - <;l 011 N / )e$un!)inan disebab)an oleh i)ut teranalisisnya )o$%onen )o$%onen lain se%erti %urina1 %iri$idina1 asa$ a$ino besar1 )reatina dan 6ita$in 6ita$in seba!ai nitro!en %rotein* "adar %rotein %ada biscuit bayi $enurut literature adalah 2B103 @* +edan!)an $enurut hasil %ra)ti)u$ adalah 9C1AA@ dan C1B1AC@* A%abila $e$bandin!)an )eti!anya1 dida%at)an bah2a hasil %ra)ti)u$ berbeda #auh nilainya dibandin!)an den!an literature* "e$un!)inan %erbedaan tersebut disebab)an oleh )ele$ahan $etode "#eldahl yan! $e$ili)i )etelitian rendah* "adar %rotein %ada te%un! beras $enurut literature adalah 7@* +edan!)an $enurut hasil %ra)ti)u$ adalah B1C1@ dan 121B>73@* A%abila $e$bandin!)an )adar %rotein literature den!an hasil %ra)ti)u$1 dida%at)an bah2a )adar %rotein yan! $ende)ati adalah %en!!unaan analisa )adar %rotein $en!!una)an asa$

)lorida 011 N* 0esarnya nilai )adar %rotein larutan asa$ )lorida 012 disebab)an oleh adanya )o$%onen )o$%onen lain yan! i)ut teranalisis seba!ai nitro!en %rotein* "adar %rotein %ada te%un! )edelai $enurut literature adalah 3C1>@* +edan!)an $enurut hasil %ra)ti)u$ adalah 1C1B9@ dan 3712@* <asil analisa )adar %rotein $en!!una)an asa$ )lorida 012 N $e$beri)an hasil yan! sedi)it $ende)ati )adar literature* 0esarnya )adar %rotein %ada susu bubu) - <;l 011 N / )e$un!)inan disebab)an oleh i)ut teranalisisnya )o$%onen )o$%onen lain seba!ai nitro!en %rotein*

&II,

KESI#P%LAN

Ada%un )esi$%ulan yan! di %eroleh dari %ercobaan ini yaitu : 1* Prinsi% Metode )#edahl yaitu %rotein dan )o$%onen or!ani) dala$ sa$%el a)an didestru)si dan hasil destru)si a)an dinetral)an $elalui %roses destilasi* 2* Analisa %rotein cara "#eldahl %ada dasarnya da%at diba!i $en#adi ti!a taha%an yaitu %roses destru)si1 %roses destilasi dan taha% titrasi* 3* Pada taha% destru)si1 seleniu$ da%at diberi)an untu) $e$%erce%at %roses o)sidasi )arena 7at tersebut selain $enai))an titi) didih #u!a $udah $en!ada)an %erubahan dari 6alensi tin!!i )e 6alensi rendah atau sebali)nya* A* "andun!an nitro!en )e$udian da%at dihitun! seba!ai beri)ut: @N H $l NaO< blan)o J $l NaO< sa$%el I N* NaO< I 1A1009 I 100@ Fra$ bahan K 1000 C* 0esarnya fa)tor %er)alian N $en#adi %rotein ini ter!antun! %ada %ersentase N yan! $enyusun %rotein dala$ suatu bahan*

DA$TAR P%STAKA

Anoni$1 2012* Isi Kandungan Gizi Bakso-Komposisi Bahan Makanan. htt%:MM222*or!anisasi*or!M1>70M01Misi )andun!an !i7i ba)so )o$%osisi nutrisi bahan $a)anan*ht$l -online/* Dia)ses %ada tan!!al 30 O)tober 2013 "urnia2an1 Fi!ih* 2013* Protein Analysis Kjeldahl Metodh* htt%:MMche$istryinor!anic*blo!s%ot*co$M2013M03MProtein "#eldahl*ht$l -online/* Dia)ses %ada tan!!al 31 O)tober 2013 =ahyudi1 '$a$* 2013* Laporan Praktikum Analisa Kadar Protein. htt%:MM2ahyudi>3*blo!s%ot*co$M2013M0CMla%oran %ra)ti)u$ analisa )adar %rotein*ht$l -online/* Dia)ses %ada tan!!al 31 O)tober 2013 Anony$* 2013* Protein* htt%:MMid*2i)i%edia*or!M2i)iMProtein -diunduh %ada tan!!al 2 No6e$ber 2013 %)l 09*29 ='0/ +ari1 'ndah* 2013* Penentuan Kadar Protein se ara Lowry. htt%:MMindh%sari*blo!s%ot*co$M2013M0BM%enentuan )adar %rotein secara lo2ry*ht$l -diunduh %ada tan!!al 2 No6e$ber 2013 %)l 0>*07 ='0/ :iani* 2013* Penentuan Kadar Protein dengan Metode Kjeldahl. htt%:MMrianitusaya*blo!s%ot*co$M2012M10M%rotein $etode )#eldahl*ht$l -diunduh %ada tan!!al 2 No6e$ber %)l 0>*33 ='0/