Ikan seribu dengan ukuran 2,0 2,5 cm sebanyak 40 ekor Air suling 4 liter
Tiga buah bejana 1 liter diisi dengan larutan saponin dalam air sebanyak 500 ml Buat seduhan simplisia 10 % b/v dan hasil seduhan dimasukan kedalam bejana hingga konsentrasi dalam larutan 0,01 % ; 0,1 % ; 1 % Kedalam masing-masing bejana dimasukan 10 ikan seribu Amati jumlah ikan yang mati setelah 6, 12 dan 24 jam dan hitung LD 50 nya Dalam pustaka asli, konsentrasi yang digunakan adalah pengenceran 250 dan 500 kali dan yang dicatat adalah waktu kematian ikan. Percobaan ini mencoba menentukan LD50 dan menentukan waktu yang tepat untuk percobaan toksisitas terhadap ikan