BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN
3.1

Bahan dan Fungsi

Adapun bahan yang digunakan dalam percobaan adalah :
1. Kristal violet
Fungsi: sebagai zat warna utama.
2. Larutan iodin
Fungsi: untuk semakin merekatkan zat warna pada bakteri.
3. Safranin
Fungsi: untuk mewarnai kembali sel yang kehilangan warna.
4. Aseton-alkohol
Fungsi: untuk melunturkan warna utama.
5. Fermentasi santan kelapa pasar sukaramai
Fungsi: sebagai sampel yang akan diwarnai mikrobanya.
6. VCO 8 minggu
Fungsi: sebagai sampel yang akan diwarnai mikrobanya.

3.2

Alat dan Fungsi

Adapun peralatan yang digunakan dalam percobaan adalah :
1. Kawat inokulasi
Fungsi: untuk mengambil mikroba dari media cair.
2. Pipet tetes
Fungsi: untuk mengambil bahan pewarna saat pewarnaan.
3. Kaca objek
Fungsi: tempat meletakkan mikroba untuk pengamatan di mikroskop.
4. Mikroskop
Fungsi: untuk mengamati morfologi bakteri.
5. Lilin
Fungsi: sumber api untuk proses fiksasi dan mensterilkan kawat inokulasi.
6. Penjepit tabung
Fungsi: untuk menjepit kaca benda saat proses pencucian.

3.3

Prosedur Percobaan Pewarnaan Gram

Adapun prosedur dari percobaan Pewarnaan Gram adalah sebagai berikut:
1. Preparat diambil dari santan kelapa sampel I dengan kawat inokulasi yang
telah disterilkan dengan lilin.

2. Bakteri digoreskan ke kaca objek lalu dibiarkan kering di udara terbuka

kemudian difiksasi.
3. Diamati di bawah mikroskop.
4. Digambarkan hasil yang didapat.
5. Preparat dibasahi dengan kristal violet lalu didiamkan 30-60 detik kemudian
dimiringkan untuk membuang cairan berlebih lalu dicuci dengan air.
6. Kemudian dibasahi dengan iodin lalu didiamkan 30-60 detik kemudian
dimiringkan untuk membuang cairan berlebih.
7. Lalu dicuci dengan air dan dilanjutkan dengan alkohol-aseton lalu
didiamkan 30-60 detik kemudian dicuci dengan air.
8. Kemudian preparat dicuci dengan pewarna lengkap safranin dan dibiarkan
selama 30-60 detik.
9. Preparat dimiringkan untuk membuang larutan sisa dan dicuci dengan air.
10. Preparat dikeringkan dengan tissue lalu diamati dengan mikroskop dan
hasilnya digambarkan.
11. Ulangi prosedur untuk preparat fermentasi santan kelapa sampel kedua.

3.4

Flowchart Percobaan Pewarnaan Gram

Mulai

Preparat diambil dengan kawat inokulasi yang tela

Bakteri diambil lalu digoreskan ke kaca objek lalu dibiarkan keri

Diamati di bawah mikroskop dan digam

Preparat dibasahi dengan kristal violet dan dibiark

Preparat dimiringkan lalu dicuci de

Preparat dibasahi dengan iodin dan dibiarkan

Preparat dimiringkan lalu dicuci de

Preparat dibasahi dengan alkoholaseton dan dibia

Preparat dimiringkan lalu dicuci dengan air

Preparat dibasahi dengan safranin dan dibiarkan selama 30 60 detik

Preparat dimiringkan lalu dicuci dengan air

Preparat dikeringkan
Preparat diamati dengan mikroskop

Ya

Apakah preparat berwarna ungu?

Tidak

Gram negatif

Gram positif

Hasil pengamatan digambar

Apakah ada sampel lain?

Ya

Tidak
Selesai

Gambar 3.1 Flowchart Pewarnaan Gram