14.

Metode depirogenasi
a. Menurut Pharmaceutical Dosage Form Parenteral Medication Vol.2 (Nema, 2010; 179182)
1) Depirogenasi dengan membuang endotoksin
- Destilasi
Menghilangkan pelarut, seperti air dari endotoksin dan bahan tidak murni
lainnya

dan

ini

sangat

efektif.

Hal

ini

dimungkinkan

untuk

menenggelamkan/menghilangkan beban endotoksin atau "Beban pyro" yang

-

terlalu tinggi.
Osmosis Balik
Dalam depyrogenation air dengan reverse osmosis (RO), air dipaksa melalui
pori-pori yang sangat kecil dalam membran melawan gradien osmotik; air
melewati membran, tetapi endotoksin tidak. Berat molekul potong (MWCO)
untuk membran RO umumnya tidak ditentukan karena untuk ultrafilter. Namun,
sebagai membran RO umumnya satu yang akan menghilangkan garam dan
sebagai berat molekul natrium klorida adalah 58,44, pengecualian ukuran

membran RO jelas kurang dari 100 Da.

Ultrafiltrasi
Ultrafiltrasi adalah proses yang efektif yang mengandalkan larutan atau molekul
menjadi depyrogenation yang secara signifikan lebih kecil dari endotoksin.
Sebuah membran dinilai untuk mempertahankan molekul (atau agregasi
daripadanya) dari 100.000 Da umumnya akan menghapus endotoksin dari
larutan air karena LPS yang diagregasikan. Namun, jika kondisi fisikokimia
larutan menyebabkan LPS untuk menguraikan, sebuah ultrafilter MWCO rendah
diperlukan. Sebuah membran dengan 10.000 Da MWCO dapat diharapkan untuk

menghilangkan endotoksin dari kebanyakan larutan.

Resin penukar ion
Resin penukar anion akan menghapus endotoksin bermuatan negatif.
Penggunaan teknologi ini untuk menghilangkan endotoksin dan memurnikan
enzim. Secara umum dengan karbon aktif, resin pertukaran ion yang paling
cocok untuk pemrosesan batch. Kecuali hati-hati dibersihkan, resin penukar
anion dapat menjadi terkontaminasi oleh bakteri dan mungkin memberikan
kontribusi endotoksin ke sistem daripada menghapusnya. Hal ini berlaku dalam

sistem air serta aplikasi lainnya.

Karbon teraktivasi

Karbon aktif mengikat dan menghilangkan molekul organik, termasuk

endotoksin, dan dapat efektif dalam depyrogenasi larutan. Karbon aktif dapat
didepirogenasi oleh panas kering sebelum digunakan untuk depyrogenasi. Hal
ini dapat ditambahkan ke dalam larutan yang akan didepirogenasi atau larutan
ini bisa melewati kolom atau tabung yang mengandung karbon aktif. Seperti
halnya untuk resin pertukaran ion, itu lebih cocok untuk proses batch tapi mudah
menjadi pengotor dan dapat menjadi sumber endotoksin jika dalam sistem untuk
periode yang diperpanjang. Efektivitas karbon aktif dilaporkan meningkat bila
dikombinasikan dengan autoklaf 1210C selama 90 menit. Karbon aktif dapat
dihilangkan dengan mengendapkan, filtrasi, atau sentrifugasi, atau dengan
kombinasi pendekatan ini. untuk produk suntik atau komponennya, perawatan
-

harus dilakukan untuk menjamin penghapusan partikel.

Mengisi media yang dimodifikasi
Media filter bermuatan positif dapat menghapus endotoksin dari larutan air dan
garam, meskipun mungkin tidak efektif untuk larutan protein. Secara historis
asbes digunakan dalam aplikasi ini, tapi ini sekarang secara khusus dilarang
untuk obat-obatan di revisi GMP untuk obat-obatan yang berlaku efektif pada
tanggal 8 Desember 2008. Filter dengan potensi zeta positif (yaitu, muatan

positif), biasanya nilon, sekarang digunakan.

Perangkat afinitas
Perangkat dengan afinitas khusus untuk endotoksin yang tersedia untuk
menghilangkan endotoksin. Ini termasuk Polymyxin B di sepharosa atau kolom
kromatografi agarosa, perangkat afinitas heparin, dan histamin sepharosa. Ini
mungkin tidak efektif di dalam larutan protein tertentu, dan mungkin perlu untuk
menyesuaikan konsentrasi garam dan pH untuk mendapatkan selektif maksimal
mengikat endotoksin.

Mencuci / membilas
Mencuci atau membilas dapat digunakan untuk menghilangkan endotoksin dari
partikel padat yang tidak dapat depyrogenation oleh panas kering. Ini mungkin
bilas API panas atau mungkin melibatkan penggunaan bahan kimia yang diikuti
dengan membilasnya. Bahan kimia untuk membantu proses ini termasuk

surfaktan, NaOH (biasanya di kisaran 0,05-0,5 M), atau bahan pembersih

komersial.
2) Depirogenasi dengan dekstruksi kimia endotoksin
- Hidrolisis Asam
Hidrolisis asam ringan pada hubungan glikosidik antara lipid A dan bagian
struktur gula. Lipid A bebas maka agregat dan relatif nonpyrogenic sampai itu
dilarutkan. Hidrolisis lebih lanjut dari lipid A dengan asam dapat benar-benar
mengurangi pirogenitas tersebut. Perawatan asam dilaporkan termasuk 0,12 M
HCl selama 30 menit diikuti dengan pembilasan yang luas ; 0,05 M HCl selama
-

30 menit di 1000C ; 1% asam asetat glasial selama 2 sampai 3 jam pada 1000C.
Hidrolisis basa
Perawatan dengan larutan alkali yang digunakan dalam pembersihan dan
perawatan untuk mengurangi kontaminasi endotoksin, terutama peralatan seperti
tank dan tabung. Mekanisme depyrogenation adalah dengan saponifikasi asam
lemak dari lipid A. Sodium hidroksida umumnya digunakan pada konsentrasi
antara 0,05 dan 0,5 M. Selain perusakan endotoksin dengan hidrolisis, pada pH
tinggi afinitas permukaan endotoksin berkurang dan solubilisasinya meningkat,
yang memungkinkan untuk dibilas. Dalam banyak kasus, terutama jika suhu
yang tinggi tidak digunakan, ini mungkin sama pentingnya dengan kehancuran.
Natrium hidroksida memerlukan sejumlah besar air (biasanya WFI atau air
lainnya konsentrasi endotoksin rendah) untuk membilas (tapi mudah untuk
menentukan kapan residu telah dihapus dengan memantau pH air). Berkumur
dengan volume berlebihan air akan membantu depyrogenation. KOH juga efektif
dan lebih mudah dihilangkan dengan pembilasan. Tingkat depyrogenation
dengan hidrolisis alkali meningkat bahkan pemanasan yang tinggi. Sebagai
contoh, pengobatan dengan 0,25 M NaOH pada 560C selama 1 jam telah terbukti
efektif. Depyrogenation sebesar 0,1 M NaOH juga dilaporkan meningkat dengan

adanya 95% etanol atau 80% dimetilsulfoksida.

Oksidasi
Hidrogen peroksida telah terbukti menjadi agen efektif untuk depyrogenation di
konsentrasi tinggi pada suhu yang tinggi (27% pada 100 0C). Ini menunjukkan
beberapa efektivitas sebesar 2,7% dan 370C, dan telah menyarankan bahwa
mungkin lebih efektif pada pH yang lebih tinggi. Ozon telah digunakan untuk
menghasilkan air konsentrasi endotoksin rendah, dan efektivitas dilaporkan

meningkat dengan adanya sinar ultraviolet. Sodium hipoklorit (pemutih), agen

oksidasi yang umum digunakan dalam sanitasi dan pembersihan, umumnya tidak
diakui sebagai efektif dalam depyrogenation. ETO adalah agen pengoksidasi
lain. Hal ini banyak digunakan untuk mensterilkan bahan, terutama peralatan
medis. ETO telah dilaporkan untuk menonaktifkan endotoksin tetapi tidak cukup
efektif untuk mencapai pengurangan yang signifikan.
3) Depirogenasi dengan dekstruksi fisika endotoksin
- Radiasi
Dosis sterilisasi dari radiasi (radiasi ) tidak efisien untuk mengurangi secara
signifikan konsentrasi endotoksin. Dosis yang tinggi akan menghancurkan
-

endotoksin tetapi mungkin dapat mempengaruhi bahan, terutama plastic.

Panas lembab
Autoklaf umumnya tidak dianggap sebagai cara yang efektif untuk
depyrogenation, tetapi memiliki beberapa efek. Siklus panjang, terutama pada
suhu tinggi dan tekanan, akan merusak endotoksin, misalnya, 5 jam pada 20 psi
dan pH 8,2, atau 2 jam pada pH 3,8. Pada 15 p.s.i. (tekanan biasanya digunakan
dalam otoklaf), penurunan yang signifikan dalam konsentrasi endotoksin telah
dilaporkan setelah tiga jam. Sebagaimana dinyatakan di atas, kombinasi autoklaf
dan karbon aktif telah ditemukan efektif. Perusakan endotoksin oleh autoklaf
dengan adanya surfaktan nonionik serta beberapa tingkat depyrogenation dengan
autoklaf sendiri.

Panas kering
Panas kering adalah metode yang paling efektif dan sering digunakan untuk
depyrogenasi banyak partikel. Asalkan partikel dapat mentolerir paparan panas,
itu adalah metode pilihan. Hal ini banyak digunakan untuk kaca dan stainless
steel dan juga dapat digunakan untuk Teflon. Silikon (seperti tabung) dapat
didepirogenasi oleh panas kering, tapi pada suhu 2500C membuat tabung rapuh
dan rentan terhadap retak dan kerusakan. Suhu lebih dari 180 0C efektif
menghancurkan endotoksin dengan waktu diperlukan menurun karena suhu
meningkat. USP menyatakan "Umumnya digunakan pengaturan waktu dan suhu
30 menit pada 2500C".

Nema, S., John D.L., 2010, Pharmaceutical Dosage Form Parenteral Medication Vol.2, Informa
Healthcare, USA.