PENDAHULUAN

Tanaman mensintesis sejumlah besar senyawa organik yang secara tradisional

diklasifikasikan sebagai metabolit primer dan sekunder. Metabolit primer adalah senyawa
yang memiliki peran penting yang terkait dengan fotosintesis, respirasi, dan pertumbuhan dan
perkembangan. Misalnya: pitosterol, lipid asil, nukleotida, asam amino dan asam organik.
Banyak hasil fitokimia lainnya yang terakumulasi dalam konsentrasi yang sangat tinggi
menjadi beberapa spesies, yang disebut sebagai metabolit sekunder. Ini secara struktural
beragam dan banyak yang didistribusikan di antara sejumlah spesies yang sangat terbatas di
dalam kerajaan tumbuhan dan dapat menjadi diagnostik dalam studi kemotaksonomik. Meski
diabaikan lama, mereka memiliki fungsi yang menarik perhatian dalam tanaman sekarang
karena beberapa fungsi tampaknya memiliki peran penting dalam melindungi tanaman dari
herbivora dan infeksi mikroba, sebagai atraktan bagi penyerbuk dan hewan penyebar benih,
sebagai agen alelopati, pelindung UV dan molekul sinyal di pembentukan nitrogen serta
memperbaiki nodul-nodula akar dalam legum. Metabolisme sekunder juga memiliki fungsi
yang menarik karena penggunaannya sebagai zat warna, serat, lem, minyak, lilin, agen
pembilas, obat-obatan dan parfum, dan sebagai sumber potensial obat alami baru, antibiotik,
insektisida dan herbisida (Croteau et al. 2000; Dewick 2002).
Metabolit sekunder dalam beberapa tahun terakhir berperan sebagai konstituen diet
pelindung, dimana telah menjadi bidang penelitian nutrisi manusia yang semakin penting.
Berbeda dengan vitamin secara tradisional mereka tidak penting untuk kesejahteraan jangka
pendek, tetapi ada peningkatan bahwa konsumsi dalam jangka panjang yang sederhana dapat
memiliki dampak yang menguntungkan pada kanker dan banyak penyakit kronis, termasuk
penyakit kardiovaskular dan diabetes tipe II, yang terjadi pada populasi Barat dengan
frekuensi yang meningkat.
Berdasarkan asal biosintesis mereka, tanaman metabolit sekunder dapat dibagi
menjadi tiga kelompok besar: (i) flavonoid dan senyawa fenolik dan polifenol, (ii) terpenoid
dan (iii) alkaloid yang mengandung nitrogen dan senyawa yang mengandung sulfur

1. Klasifikasi senyawa fenolik

Fenolat ditandai dengan memiliki satu cincin aromatik dengan satu atau lebih
hidroksil kelompok terlampir. Lebih dari 8000 struktur fenolik telah dilaporkan dan mereka
tersebar luas di seluruh kerajaan tumbuhan (Strack 1997). Fenolat tersusun dari struktur yang
sederhana, berat molekul rendah, senyawa beraroma tunggal, beraroma besar, dan kompleks
tanin dan turunan polifenol. Mereka dapat diklasifikasikan berdasarkan jumlah dan
pengaturannya atom karbonnya (Tabel 1.1) dan umumnya ditemukan terkonjugasi dengan
gula dan asam organik. Fenolat dapat diklasifikasikan menjadi dua kelompok: flavonoid dan
nonflavonoid.
A. Flavonoid
Flavonoid adalah senyawa polifenol yang terdiri dari lima belas karbon, dengan dua
aromatik cincin yang dihubungkan oleh tiga karbon (Gambar 1.1).

Mereka adalah fenolik yang paling banyak ditemukan di seluruh kerajaan tumbuhan
(Harborne 1993). Fenolik hadir dalam konsentrasi tinggi di epidermis daun dan kulit buah
dan miliki peran penting serta bervariasi sebagai metabolit sekunder. Pada tumbuhan,
flavonoid terlibat dalam berbagai proses seperti perlindungan UV, pigmentasi, stimulasi
nitrogen memperbaiki nodul dan resistensi penyakit (Koes et al. 1994; Pierpoint 2000).
Flavonoid memiliki subkelas utama yaitu flavon, flavonol, flavan-3-ols, isoflavon,
flavanon dan anthocyanidins (Gambar 1.1). Kelompok flavonoid lainnya, yang secara
kuantitatif dalam perbandingan komponen-komponen minor adalah dihydroflavonol, flavan-
3,4-diol, kaumarin, khalkon, dihydrochalcones dan aurones (Gambar 1.2). Flavonoid dasar
kerangka dapat memiliki banyak substituen. Kelompok hidroksil biasanya terdapat di 4 , 5
dan 7 posisi. Flavonoid yang ada secara alami sebagai glikosida merupakan gula yang sangat
umum. Sedangkan kedua gula dan gugus hidroksil meningkatkan kelarutan flavonoid
didalam air serta substituen lain, seperti gugus metil dan unit isopentil, buat flavonoid
lipofilik.

1. Flavonol
Flavonol bisa dibilang yang paling luas dari flavonoid, yang tersebar di seluruh
kerajaan tumbuhan dengan pengecualian jamur dan ganggang. Distribusi dan struktural
variasi flavonol bersifat ekstensif dan didokumentasikan dengan baik. Flavonol seperti
myricetin, quercetin, isorhamnetin dan kaempferol (Gambar 1.3) paling sering ditemukan
sebagai O-glikosida. Konjugasi terjadi paling sering padaposisi cincin C ke 3 tetapi
pergantian juga bisa terjadi pada 5, 7, 4’ , 3’ dan 5’ posisi cincin karbon. Meskipun jumlah
aglikon terbatas, ada banyak konjugasi flavonol yaitu 200 konjugasi gula kaempferol sendiri
(Strack dan Wray 1992). Informasi tentang tingkat flavonol ditemukan pada buah-buahan,
sayuran dan minuman yang biasa dikonsumsi (Hertog et al. 1992, 1993).
2. Flavon
Flavon memiliki hubungan struktural yang sangat erat dengan flavonol (Gambar
1.1). Meskipun Flavon, seperti luteolin dan apigenin, memiliki substitusi cincin A dan C,
mereka kekurangan oksigenasi pada C3 (Gambar 1.4). Berbagai substitusi juga
dimungkinkan dengan flavon, termasuk hidroksilasi, metilasi, O dan C alkilasi, dan
glikosilasi. Kebanyakan flavon terjadi sebagai 7-O-glikosida. Tidak seperti flavonol, flavon
tidak didistribusikan secara luas dengan kejadian secara signifikan seperti seledri, peterseli
dan beberapa herbal. Sebagai tambahan, flavon teretimetoksilasi, seperti nobiletin dan
tangeretin, telah ditemukan di spesies jeruk. Flavon di millet telah dikaitkan dengan goitre di
Afrika barat (Gaitan et al. 1989).
3. flavan-3-ols
Flavan-3-ols adalah subkelas flavonoid yang paling kompleks mulai dari yang
sederhana monomer (+) catechin dan isomer (-) epikatekin, pada oligomerik dan polimerik
proanthocyanidins (Gambar 1.5), yang juga dikenal sebagai tanin kental. Tidak seperti
flavon, flavonol, isoflavon dan anthocyanidin, yang merupakan molekul planar, flavan-3-ols,
proanthocyanidins dan flavanon memiliki elemen C3 jenuh dalam heterosiklik cincin C, dan
dengan demikian tidak planar. Dua pusat kiral di C2 dan C3 dari flavan-3-ols menghasilkan
empat isomer untuk setiap tingkat hidroksilasi cincin B, dua di antaranya, (+) - katekin dan (-
) - epikatekin, tersebar luas di alam sedangkan (-) - katekin dan (+) - epicatechin relatif jarang
(Clifford 1986). Oligomerik dan polimerik proanthocyanidins memiliki pusat kiral tambahan
di C4; flavanon hanya memiliki satu pusat kiral C2. Meskipun sulit untuk memvisualisasikan,
perbedaan chirality memiliki efek yang signifikan pada struktur 3-D dari molekul seperti
yang diilustrasikan pada Gambar 1.6 untuk gallat gallocatechin (epi).
Proanthocyanidins tipe-B terbentuk dari (+) - catechin dan (-) - epicatechin dengan
kopling oksidatif terjadi antara C-4 dari heterocycle dan C-6 atau C-8 posisi unit yang
berdekatan untuk menciptakan oligomer atau polimer (Gambar 1.5). Tipe A
proanthocyanidins memiliki ikatan eter tambahan antara C-2 dan C-7. Proanthocyanidins
dapat terjadi sebagai polimer hingga 50 unit. Selain membentuk struktur yang besar dan
kompleks seperti itu, flavan-3-ols dihidroksilasi untuk membentuk geocoinechin dan juga
menjalani esterifikasi dengan asam galat (Gambar 1.5).
 Proanthocyanidins yang terdiri secara eksklusif dari unit katekin disebut
procyanidins, dan ini adalah jenis proanthocyanidins yang paling melimpah pada tumbuhan.
Proanthocyanidins yang kurang umum mengandung (epi) afzelechin (Gambar 1.7) dan (epi)
gallocatechin (Gambar 1.5) disebut propelargonidins dan prodelphinidins (Balentine et al.
1997).
Anggur merah mengandung procyanidins oligomer dan prodelphinidins yang
berasal dari biji anggur hitam (Auger et al. 2004) sedangkan coklat dalah sumber
procyanidins yang berasal dari biji kakao panggang (Theobroma cacao) (Gu et al. 2004). Teh
hijau (Camellia sinensis) mengandung tingkat flavan-3-ols yang tinggi, prinsipal (-) -
epigallocatechin, (-) - epigallocatechin gallate dan (-) - epicatechin gallate (Gambar 1.5).
Tingkat katekin menurun selama fermentasi daun teh, dan komponen utama dalam teh hitam
adalah thearubigins dengan berat molekul tinggi dan jumlah yang lebih kecil dari flavon
(Gambar 1.5) (Del Rio et al. 2004).

4. Anthocyanidins
Anthocyanidins merupakan turunan terkonjugasi mereka, anthocyanin tersebar luas
di seluruh kerajaan tumbuhan, terutama pada buah dan jaringan bunga di mana memiliki
warna yang khas yaitu warna merah, biru dan ungu. Selain itu mereka juga ditemukan dalam
daun, batang, biji dan jaringan akar. Mereka terlibat dalam perlindungan tanaman melawan
cahaya yang berlebihan oleh sel-sel mesofil daun shading dan juga memiliki peran penting
untuk menarik serangga penyerbuk.
Antosianidin yang paling umum adalah pelargonidin, sianidin, delphinidin,
peonidin, petunidin dan malvidin (Gambar 1.8). Dalam jaringan tanaman, senyawa ini selalu
ditemukan sebagai konjugat gula yang dikenal sebagai anthocyanin. Anthocyanin juga
terkonjugasi dengan hidroksisinnamat dan asam organik seperti asam malat dan asetat.
Meskipun konjugasi dapat terjadi pada karbon 3, 5, 7, 3’ dan 5’ , itu paling sering terjadi pada
C3 (Gambar 1.9).
5. Flavanones
Flavanon dicirikan oleh tidak adanya ∆2,3 ikatan rangkap dan kehadiran dari pusat
kiral di C2 (Gambar 1.1). Di sebagian besar flavanon alami, cincin C dilekatkan pada cincin
B pada C2 di α-konfigurasi.

Flavanon struktur sangat reaktif dan telah terhidroksilasi, glikosilasi dan reaksi O-metilasi.
Flavanon adalah komponen yang hadir dalam konsentrasi tinggi khususnya pada buah jeruk.
Glikosida flavanon paling umum adalah hesperetin-7-O-rutinoside (hesperidin) yang
ditemukan pada kulit jeruk. Flavanon rutinosides tidak berasa. Sebaliknya, konjugat
neohesperidoside flavanone seperti hesperetin-7-O-neohesperidoside (neohesperidin) dari
jeruk pahit (Citrus aurantium) dan naringenin-7-O-neohesperidoside (naringin) (Gambar
1.10) dari kulit buah anggur (Citrus paradisi) memiliki rasa yang sangat pahit. Neohesperidin
dihidrokalcone terkait adalah pemanis yang diizinkan untuk digunakan dalam bir non-
alkohol.
6. Iso flavon
Isoflavones ditandai dengan memiliki cincin B yang menempel pada C3 daripada
Posisi C2 (Gambar 1.1). Mereka ditemukan pada tanaman polong, dengan konsentrasi
tertinggi terjadi pada kacang kedelai (Glycine max) (Departemen Pertanian AS, Agricultural
Research Service, 2002). Isoflavon - genistein dan daidzein – dan coumestan - coumestrol
(Gambar 1.11) - fromlucerne dan cengkeh (Trifolium spp) memiliki aktivitas estrogen yang
cukup untuk mempengaruhi reproduksi hewan penggembala seperti sapi dan domba dan
disebut phytoestrogen. Struktur isoflavonoid ini mirip sedemikian rupa sehingga mereka
tampak meniru hormon steroid estradiol (Gambar 1.11) yang menghambat ovulasi. Oleh
karena itu, konsumsi legum kuda oleh hewan harus harus dibatasi atau varietas penghasil
isoflavonoid rendah harus dipilih.
 Konsumsi makanan dari genistein dan daidzein dari produk kedelai diperkirakan
akan berkurang terken kanker prostat dan payudara pada manusia. Namun, mekanisme yang
terlibat berbeda. Pertumbuhan sel kanker prostat diinduksi dan bergantung pada androgen
testosteron (Gambar 1.11), produksi yang ditekan oleh estradiol. Kapan estradiol alami tidak
cukup, isoflavon dapat menurunkan kadar androgen dan, sebagai konsekuensinya,
menghambat pertumbuhan tumor. Kanker payudara bergantung pada pasokan estrogen untuk
pertumbuhan terutama pada tahap awal. Isoflones bersaing dengan estrogen alami, membatasi
ketersediaan mereka sehingga menekan pertumbuhan sel kanker.
 BIOSINTESIS
Biosintesis flavonoid, stilbenes, hidroksisinnamat dan asam fenolik melibatkan
jaringan rute yang kompleks terutama berdasarkan pada shikimate, phenylpropanoid dan jalur
flavonoid (Gambar 1.15–1.17).
B. BIOSINTESIS FLAVONOID
Jalur menuju pembentukan flavonoid
C6–C3–C6 struktur flavonoid adalah produk dari dua jalur biosintesis yang terpisah
(Gambar 1.16). cincin B aromatik merupakan unit fenilpropanoid yang disintesis dari p-
coumaroyl-CoA. Enam karbon cincin A berasal dari kondensasi tiga unit asetat melalui jalur
asam malonat (Gambar 1.17). Penggabungan kedua bagian ini melibatkan kondensasi
bertahap dari p-coumaroyl-CoA dengan tiga malonyl Residu CoA, masing-masing
menyumbangkan dua atom karbon, dalam reaksi yang dikatalisis oleh chalcone sintase
(CHS). Produk dari reaksi ini adalah naringenin-chalcone. Dalam produksi isoflavon, seperti
daidzein, itu berasal dari isoliquiritigenin yang tidak seperti naringenin-chalcone, yang mana
tidak memiliki 2 –hidroksil grup (Dixon 2004). Pembentukan isoliquiritigenin dikatalisis oleh
chalcone reductase, enzim NADPH dependent yang mungkin berinteraksi dengan CHS
(Welle dan Grisebach 1988) (Gambar 1.16).
Langkah berikutnya dalam jalur biosintesis flavonoid adalah konversi stereospesifik
pada naringenin-chalcone menjadi naringenin oleh chalcone isomerase (CHI). Dalam kacang
polong, CHI juga mengkatalisis konversi isoliquiritigenin menjadi liquiritigenin (Forkmann
dan Heller 1999). Isomerisasi naringenin-chalcone ke naringenin sangat cepat dibandingkan
dengan isomerisasi isoliquiritigenin ke liquiritigenin karena ikatan hidrogen intramolekul
dalam molekul substrat. Enzim CHI yang diisolasi dari tanaman non-polong tidak mampu
untuk mengkatalisasi konversi isoliquiritigenin menjadi liquiritigenin. Sebagai akibatnya,
CHI diklasifikasikan menjadi dua kelompok. Tipe I CHI, yang ditemukan di kedua legum
dan nonlegumes, isomerisasi hanya 2 '-hydroxychalcones sedangkan Tipe II CHI, yang
eksklusif untuk legum, menerima keduanya 2 '-deoxy dan 2 ' -hydroxy chalcones sebagai
substrat (Shimada et al.2003).
Naringenin merupakan intermediate sentral sejak dari titik ini dan seterusnya
biosintesis flavonoid jalur menyimpang menjadi beberapa cabang samping yang masing-
masing menghasilkan produksi dari berbagai kelas flavonoid termasuk isoflavon, flavanon,
flavon, flavonol, flavan-3-ols dan anthocyanin (Gambar 1.16).
a. Biosintesis isoflonoid
Isoflavonoid ditemukan terutama pada tanaman polongan dan sebagian besar enzim
yang terlibat dalam biosintesis mereka telah diidentifikasi (Jung et al. 2003). Enzim
cytochrome P450 mikrosomal isoflavone synthase (IFS) mengkatalisis langkah pertama yaitu
mengubah naringenin dan isoliquiritigenin ke isoflavon genistein dan daidzein (Dixon dan
Ferreira 2002) (Gambar 1.16). Lebih lanjut metabolisme isoflavon, ditandai dengan daidzein,
menghasilkan 4 –Omethylation dikatalisis oleh isoflavon-O-methyltransferase menghasilkan
formononetin dan 7-metilasi untuk menghasilkan isoformononetin (Gambar 1.18).
Formononetin, pada gilirannya, mengalami serangkaian reaksi termasuk hidroksilasi, reduksi
dan dehidrasi untuk terbentuk medicarpin phytoalexin. Enzim yang terlibat dalam reaksi
ketiga ini adalah isoflavon reduktase, vestotone reductase dan dihydro-4 ' -metoksi-
isoflavonol dehidratase(López-Meyer dan Paiva 2002). Langkah-langkah lain yang kurang
dicirikan dengan baik akan menghasilkan konversi yang menghasilkan berbagai isoflavonoid
termasuk coumestans, rotenoids dan pterocarpins (Gambar 1.18).
b. Biosintesis flavon
Flavone synthase adalah enzim yang bertanggung jawab untuk oksidasi flavanon ke
flavon. Itu konversi naringenin menjadi apigenin, diilustrasikan pada Gambar 1.16
melibatkan ∆2,3 ikatan ganda dan reaksi ini membutuhkan NADPH dan oksigen.

c. Pembentukan intermediet dalam biosintesis flavonol, flavan-3-ols, anthocyanin

dan proanthocyanidins
Sebagai hasil hidroksilasi pada C3, yang dikatalisis oleh flavanon 3-hidroksilase,
flavanon dikonversi menjadi dihidroflavonol seperti yang digambarkan dengan konversi
naringenin menjadi dihydrokaempferol (Gambar 1.16). Langkah-langkah berikut adalah titik
jalur dan melibatkan flavonol sintase, yang mengkatalisis pengenalan ∆23 ikatan ganda untuk
mengubah dihydrokaempferol menjadi flavonol kaempferol, dan flavonol 3 -hidroksilase,
yang bertanggung jawab untuk sintesis dihydroquercetin (Gambar 1.16). Dihydroflavonol
reduktase kemudian mengubah dihidroflonol menjadi leucoanthocyanidins, diilustrasikan
pada Gambar 1.16 dengan sintesis leucocyanidin dari dihydroquercetin. Leucoanthocyanidins
adalah intermediet dalam pembentukan proanthocyanidins flavan-3-ols dan anthocyanidins.
Enzim leucocyanidin 4-reductase bertanggung jawab untuk konversi leucocyanidin ke flavan-
3-ol (+) - catechin, sedangkan leukosianidin deoxygenase mengkatalisis sintesis dari cyanidin
yang mengubah reduktase anthocyanidin menjadi (-) - epicatechin.