KEMAMPUAN ENZIM GLUKOAMILASE DARI Aspergillus niger dan

Aspergillus oryzae DALAM MEMPRODUKSI GLUKOSA

POTENTIAL OF GLUCOAMYLASE ENZYME FROM Aspergillus niger and

Aspergillus aryzae TO PRODUKCE GLIUCOSE

Oleh:

Muhammad Danial

ABSTRAK

Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh glukoamilase dari Aspergillus niger dan
Aspergillus oryzae yang mampu merombak pati menjadi glukosa. Kapang Aspergillus niger
dan Aspergillus oryazae hasil peremajaan dengan menumbuhkannya pada media ampas tahu
disuspensikan dengan larutan buffer fosfat untuk setiap tabung agar miring. Proses hidrolisis
pati oleh glukoamilase dilakukan pada pH 4.8 dan suhu 400C. kadar glukosa yang dihasilkan
sebagai hasil aktivitas glukoamilase dalam mengkonversi substar pati kentang dan jagung
menjadi glukosa diuji dengan metode somogy-Nelson pada  520. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa: 1 jumlah glukosa yang dihasilkan oleh glukoamilase dari Aspergillus
niger dalam memecah pati kentang dan jagung besar 0.1360µg dan 0.2115µg. 2. Jumlah
glukosa yang dihasilkan oleh glukoamilase dari Aspergillus oryzae dalam memecah pati
kentang dan jagung sebesar 0.1256µg dan 0.2037µg.

Kata kunci: Glukoamilase Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Glukosa

ABSTRACT

The aims of research are to Obtain glucoamylase from Aspergillus niger and
Aspergillus orzae hat to able to produce glucose. Aspergillus niger and Aspergillus oryzae
that produced with its grow of tahu waste media is suspended with buffer phosphate solution
for each agar miring tube. Each of treatment are treated of tapioca and corn starch.
Hydrolysis process pf starch is carried out of pH 4.8 and temperature 40 0C . Glucose
concentration that is produced as prduct of glucoamylase activity converting substrate (potato
and corn starch) is tested with Somogy-Nelson method of  520 nm. The result of research
indicated that: 1. Concentration of glucose that produced byf glucoaylase from Apspergillus
niger degratated potato and corn starch are 0.1360µg and 0.2115µg. 2. Concentration of
glucose that produced by glucoamylase from Aspergillus orizae degradated potato and
cornstarch Activity of glucoamilase from Aspergillus oryzae degradated potato and
cornstarch are 1,1256µg and 0.2037µg.

Key Words:Glucoamylase, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Glucose

PENDAHULUAN
Salah satu cara mengatasinya
adalah memanfaatkan mikroorganisme
sebagai penghasik enzim dan
memanfaatkan limbah hasil pengelolahan
pangan misalnya limbah ampas tahu
sebagai media tumbuh mikroorganisme
penghasil enzim. Media ini menggantikan
media sintetik yang harganya cukup
mahal.
Ampas tahu adalah limbah yang
dihasilkan dari industry pengelolahan
kedelai menjadi tahu. Ampas tahu berasal
dari bubur kacang kedelai yang telah
masak, karena itu nutrisi yang terdapat di
dalam ampas tahu masih cukup tinggi.
Ampas tahu mengandung karbohidrat,
protein, lemak, dan mineral tinggi
(Chitra kusuma, L.P.A.S, 1996). Oleh
karena itu ampas tahu masih mengandung
sumber nutrisi yang baik untuk
pertumbuhan mikroorganisme.
Penggunaan mikroorganisme
sebagai mesin hayati penghasil enzim,
memiliki banyak keuntungan, selain
mudah diproduksi, juga mempunyai
kecepatan tumbuh yang tinggi serta mudah
dikontrol pertumbuhannya (Hardjo, 1989).
Kapang Aspergillus niger
merupakan mikroorganisme yang dapat
tumbuh dengan cepat dan telah digunakan
secara komersial dalam polusi asam sitra,
asam glukonat, dan beberapa enzim seperti
amylase dan praktinase
(Broekhuijsen, 1993); sedang kapang
Aspergillus oryzae dikenal sebagai kapang
yang banyak menghasilkan bermacam-
macam enzim, diantaranya α-amilase,
α-glaktosidase, glutaminase, proteinase,
dan β-glukosidase (Yano, 1988).
Glukoamilase merupakan enzim
karbohidrase yang mengkatilasis
pemecahan ikatan α((1-4) glikosidik pada
polisakarida pati menjadi glukosa.
Menurut Kulp (1975) potensi hidroltik dari
suatu enzim dapat bervariasi, hal ini sangat
dipengaruhi oleh sumber, substrat dan
nutrisi enzim itu. Produksi enzim-enzim
termasuk enzim karbohidrase sangat
dipengaruhi oleh komposisi nutrisi
terutama protein dan mineral pada media
tumbuh mikroorganisme. Menurut Peppler
(1973), pemberian nutrient ke dalam
media fermentasi dapat menyokong dan
meransang pertumbuhan mikroorganisme
dan demikian memproduksi enzim
potensial. Bahkan dengan pemberian
nutrient bernitrogen mempunyai fungsi
fisologis bagi mikroorganisme. Danial dkk
(1998) dan melaporkan bahwa pemberian
nutrient bernitrogen pada media dedak
padat sebagai media tumbuh Aspergillus
niger dan Aspergillus oryzae mampu
menghasilkan glukoamilase dengan tingkat
produksi 78.31% lebih tinggi dari control
(tanpa pemberian nutrient bernitrogen).
Oleh karena itu, untuk memperoleh enzim
glukoamilase degan biaya murah dan
diharapkan memiliki potensi hidrolitik
tinggi dalam mengatalisis pemecahan
senyawa berkarbohidrat tinggi menjadi
glukosa, meka dalam penelitian digunakan
limbah ampas tahu sebagai media tumbuh
Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae.
Teknologi fermentasi yang dilakukan
adalah menumbuhkan kedua Aspergillus
tersebut dalam media ampas tahu semi
yang padat yang diberi nutrient pepton
(suatu senyawa organik yang mengandung
nitrogen). Permsalahan dalam penelitian
ini adalah :
Apakah glukoamilase yang
diperoleh dari Aspergillus niger dan
Aspergillus oryzae memilikii potensi
hidrolik tinggi dalam mengatalisis
pemecahan bahan berpolisakarida padi
menjadi glukosa ?
Untuk menjawab permasalahan
ini digunakan pendekatan dan konsep
teknologi fermentasi yaitu penumbuhan
kultur Aspergillus niger dan Aspergillus
oryzae.dalam media ampas tahu. Setelah
itu dilakukan pemanen kultur Aspergillus
niger dan Aspergillus oryzae yang
kemudian diekstraksi enzim glukoamilase
dari kultur tersebut. Selanjutnya, ekstrak
(berupa filtar) yang diperoleh diuji potensi
hirolitik atau aktivitasnya dengan
menggunakan uji Somogy-Nelso
(Suhartono, 1989).
Penelitian ini bertujuan untuk :
1. Memperoleh glukoamilase dari
Aspergillus niger dan
Aspergillus oryzae yang
ditumbuhkan pada media ampas
tahu.
2. Memperoleh glukoamilase yang
memiliki kemampuan tinggi
dalam mengkatalisis pemecahan
pat menjadi glukosa.
METODE
1. Tahap Awal
Tahap awal dilakukan untuk
mendapatkan inokulum atau kapang murni
Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae
yang berumur muda. Kapang tersebut
ditumbuhkan dalam media padat agar
miring (Media Potato Dextrose Agar).
Kapang tersebut selanjutnya diremajakan
kembali dalam media ampas tahu dalam
jumlah besar. Dengan demikian dapat
diperoleh filtrate kultur atau ekstrak enzim
kasar dalam jumlah besar pula.
Cara mendapatkan inokulum atau
kapang murni yaitu masing-masing kapang
yang akan digunakan, diperbanyak dan
diremajakan dengan menginokulasikannya
kedalam media padat agar miring
kemudian diinkubasi pada suhu kamar
selama 4 hari.
Kapang hasil peremajaan
disuspensikan dengan larutan buffer fosfat
sebanyak 10 ml untuk setiap tabung agar
miring. Larutan spora yang diperoleh
dimasukkan dalam media fermentasi semi
padat (media ampas tahu yang diberi
larutan mineral) yang telah disterilkan
dengan konsentrasi 4 persen. Media
fermentasi semi padat dibuat dengan cara
mencampurkan ampas tahu dengan larutan
peptone dengan perbandingan 1 : 5
kemudian disterilkan pada suhu 1210C
selama 15 menit. Pada akhir mas inkubasi,
kapang tersebut dipanen dengan cara
menambahkan tween 80 lima tetes dan air
sebanyak sepuluh kali berat substrat dan
selanjutnya disaring dan disentrifus.
Dengan demikian diperoleh filtrate kultur
atau filtrate enzim kasar.
2. Tahap Lanjutan
Tahap lanjutan dilakukan untuk
a. Mempelajari dan mengevaluasi ekstrak
enzim yang diperolah dari penelitian
pendahuluan, meliputi :
1). Kadar glukosa bebas dari masing-
masing filtrat dan substrat pati sebagai
factor koreksi.
2). Kadar glukosa sebagai hasil kerja
enzim glukoamilase dari masing-
masing filtrat kultur.
b. Kadar glukosa yang dihasilkan sebagai
hasil aktivitas glukoamilase dalam
mengkonversi kedua substrat tersebut
 diuji dengan metode Somogy-Nelson
pada 520. Nilai serapan yang diperoleh,
diplot dalam karya standar atau HASIL
memasukkan nilai serapan tersebut ke Setelah dilakukan uji aktivitas
persamaan regresi yang dibuat glukoamilase yang diperoleh terhadap
sebelumnya untuk menentukan kadar substrat pati, maka diperoleh hasil sebagai
glukosa. Proses hidrolisis dilakukan berikut (Tabel 1):
0
pada Ph 4.8 dan suhu 40 C.
Tabel 1. Kadar glukosa yang dihasilkan sebagai hasil kerja enzim glukoamilase (µg
glukosa/mlf filtrate enzim) dari Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae yang
ditumbuhkan pada media ampas tahu.

Substrat Pati Kadar glukosa (µg)

Filtrat Aapergillus Niger Filtrat Aspergillus oryzae
Kentang 0.1329 0.1248
0.1372 0.1227
0.1313 0.1227
0.1410 0.1248
0.1372 0.1329
Rata-rata 0.1360 0.1256
Jagung 0.2092 0.2156
0.2091 0.1978
0.2178 0.2156
0.2092 0.1938
0.2140 0.1913

Rata-rata 0.2115 0.2037

Berdasarkan hasil penelitian
diperoleh sebagaimana dituangkan dalam
tabel 1 diperolah bahwa jumlag glukosa
yang dihasilkan oleh glukoamilase dari
Aspergillus niger (0.1360 dan 0.2115µg)
lebih tinggi dari pada jumlah glukosa yang
dihasilkan oleh glukoamilase dari
Aspergillus oryzae (0.1256 dan 0.2037µg).
Hal ini disebabkan glukoamilase
dari Aspergillus niger memiliki
kemampuan menghidrolisis pati kentang
dan jagung lebih sempurna dibanding
Aspergillus oryzae. Dalam suhartono
(1989) dan futatsugi Aspergillus termasuk
Aspergillus niger dan Aspergillus oryzae
menghasilkan kompleks glukoamilase
lebih tinggi dari spesies lainnya.
Komponen yang paling banyak yang
dihasilkan adalah glukoamilase I.
glukoamilase I merupakan suatu enzim
yang aktif mengkatalisis pemecahan rantai
cabang atau ikatan α (1-6) pada pati
menjadi monomer D-glukosa. Dengan
adanya glukoamilase dalam jumlah banyak
terutama glukoamilase dalam jumlah
banyak terutama glukoamilase I, maka
enzim ini semakin aktif dalam
mengkatalisasi ikatan α (1-6) pada pati
menjadi D-glukosa. Disamping itu enzim
glukoamilase laiinya yakni glukoamilase II
juga aktif mengatalisis rantai lurus atau
ikatan α (1-4) pada pati menjadi
D-glukosa.
 Dari nilai-nilai potensi hidrolit
glukoamilase di atas sesuai dengan hasil
studi sebelumnya yang antara lain
dilaporkan oleh peppler (1973) yang
mengatakan bahwa penambahan bahan –
bahan nutrien (larutan mineral) ke dalam
media fermentasi dapat menyokong dan
meransang pertumbuhan mikroorganisme
dan demikian memproduksi enzim yang
potensial. Bahkan dengan penambahan
nutrient bernitrogen mempunyai fungsi
fisiologis bagi mikroorganisme.
Ampas tahu megandung zat gizi
atau nutrisi tinggi yang dapat menunjang
pertumbuhan mikroorganisme khususnya
kapang Aspergillus niger dan Aspergillus
oryzae. Kecukupan zat gizi yang
terkandung dalam ampas tahu membuat
limbah ini menjadi salah satu media
alternative di dalam menumbuhkan
mikroorganisme khususnya
mikroorganisme penghasil enzim
glukoamilase. Dengan demikian
penggunaan media ampas tahu menjadi
salah satu bentuk solusi dalam mengatasi
kesulitan kesulitan dalam penyediaan
media pertumbuhan mikroorganisme,
ampas tahu juga mudah diperoleh, cukup
banyak tersedia, harganya murah dan
jumlah produksinya cukup tinggi.
KESIMPULAN
1. Telah diperoleh enzim
glukoamilase kasar dari Aspergillus
niger dan Aspergillus oryzae yang
ditumbuhkan pada media ampas
tahu.
2. Jumlah glukosa yang dihasilkan
oleh glukoamilase dari Aspergillus
niger adalah 0.1360 dan 0.2115µg
dan jumlah glukosa yang
dihasilkan oleh glukoamilase dari
Aspergillus oryzae adalah 0.1256
dan 0.2037µg.
3. Jumlah glukosa yang dihasilkan
oleh glukoamilase dari Aspergillus
niger lebih tinggi dari Aspergillus
oryzae.
DAFTAR PUSTAKA
Broekhujsen, M.P. I.E. Mettern, R.
Conteras dan J.R. Kinghorn. 1993.
Secretion of Heterlogous Protein
by Aspergillus niger j. Biotech,
31 : 135-145
Chitra Kusuma, LPAS, 1996. Kajian Awal
Kemampuan Produksi
Glukoamilase Empat Spesies
Rhizopus dalam koji Dedak Padi
dan Ampas Tahu Skripsi ITB
Bandung.
Denial, M., Sudding, Muharram, 1998.
Pengaruh Penambahan Nutrien
Bernitrogen Terhadap Produksi
Glukoamilase dari Aspergillus..
Laporan penelitian UNM
Makassar.
Fogarty, W. M. 1983. Microbical Enzymes
and Biotechnology. App.
Scie.Pub.London and New York.
Frazier, W.C. and Westhoff, D.C. 1978.
Food Microbiology. McGraw-Hill
Book Co. New York.
Hardjo, S., N.S., Indrasti dan T. Bantacut,
1989. Biokonversi : Pemanfaatan
Limbah Industry Pertanian. PAU
IPB Bogor.
Peppler, J.H. 1973. Yeast Technological.
The AVI Publ.Co.Inc.,Westport
Connecticut.
Kulp, K. 1975. Carbohidrases. Academic
press, New York.
Yano, T.M. dan Ito, K.T., 1998.
Purification and Properties of
Glutaminase from Aspergillus
oryzae. J.Ferment.Technol. 6(2):
137-142.

Muchtadi, D., N.S. Palupi, dan M. Yunus dan Danial, 2002. Uji Potensi
Astawan. 1992. Enzim dalam Biodegradasi Enzim Selulase dari
Industri Pangan PAU IPB., Bogor. Kultur Aspergillus niger dan
Aspergillus oryzae. Laporan
Suhartono, M.T.1989. Enzim dan Penelitian UNM Makassar.
Bioteknologi, PAU-IPB Bogor.

LAMPIRAN

Penentuan Kadar Glukosa (Suhartono, 1989).

0.1 ml filtrate kultur

Ditambahkan 0.5 ml larutan pati 1.0%, 0,4 ml

Buffer fosfat Ph 4.8 0.1 M
Diinkubasi pada 400C, 30 Menit
Ditambahkan 1 ml pereaksi A

Campuran Enzim-Substrat-Produk

Diambil 1 ml contoh
Ditambahkan 1 ml pereaksi D
Dipanaskan dalam air mendidih, 20 menit
Dibandingkan pada air mengalir, 5 menit
Ditambahkan 1 ml pereaksi C
Dikocok sampai tidak terbentuk gelembung udara
Didiamkan : 20 menit, suhu kamar
Diencerkan menjadi 25 ml

Produk (Glukosa)
Dibaca Absorbansinya pada  520 nm
 

Diambil ml contoh
Ditambahkan 1 ml pereaksi D
Dipanaskan dalam air mendidih, 20 menit
Didinginkan pada air mengalir, 5 menit
Ditambahkan 1 ml pereaksi C
Dikocok sampai tidak terbentuk gelembung udara
Didiamkan : 20 menit, suhu kamar
Diencerkan menjadi 25 ml

Dibaca Absorbansinya pada