ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

73

LAMPIRAN

Lampiran 1. Pembuatan Larutan Standard Mc. Farland 1

Bahan-bahan untuk membuat larutan standard Mc. Farland 1

Larutan 1 = BaCl 0,1 g + Akuades 10 ml

Larutan 2 = H2SO4 1%

Mc. Farland 1 = 0,1 ml Larutan 1 = 9,9 ml larutan 2

Campuran larutan tersebut kemudian divortek dan disimpan dalam kulkas

Perbandingan komposisi BaCl dan H2SO4 1 % dalam Mc. Farland adalah sebagai

berikut :

No. BaCl (g) H2SO4 1% (ml)

1. 0,1 9,9
2. 0,2 9,8
3. 0,3 9,7
4. 0,4 9,6
5. 0,5 9,5
6. 0,6 9,4
7. 0,7 9,3
8. 0,8 9,2
9. 0,9 9,1
10. 1,0 9,0

Sumber : Bonang dan Koeswardono (1982) dalam Sumargono (2005)

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
74

Lampiran 2. Penyetaraan Suspensi Bakteri Dengan Larutan Standard Mc. Farland

Nomor Larutan Mc. Farland Kepadatan Sel ( x108 sel/ml)

1 3
2 5
3 9
4 12
5 15
6 18
7 21
8 24
9 27
10 30

Sumber : Bonang dan Koeswardono (1982) dalam Sumargono (2005)

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
75

Lampiran 3. Skema prosedur kerja penelitian

Persiapan :

Pembuatan simplisia
Ekstraksi daun patikan kebo
= pengeringan dan direndam
3 x 24 jam dgn Etanol 96%
Penyiapan ekstrak daun
patikan kebo dgn berbagai
konsentrasi uji
Identifikasi bakteri Aeoromonas hydrophila
mikroskopis, isolasi makroskopis,
mikroskopis dan uji biokimia
Penyiapan suspensi bakteri Aeromonas
hydrophila yang setara dgn Mc Farland 1
(3 x 108), lalu mengalami pengenceran
sebesar (3 x 106)

Penyiapan ekstrak daun patikan kebo sebesar 2 gram ekstrak daun patikan kebo
tanpa penambahan DMSO

Penyiapan ekstrak daun patikan kebo kembali sebesar 2 gram ekstrak daun
patikan kebo + DMSO 10% sebanyak 10 ml = konsentrasi ekstrak daun patikan
kebo 20%, selanjutnya mengambil 2 ml dari konsentrasi ekstrak daun patikan
kebo 20% kemudian mengalami pengenceran berseri

Uji sensitifitas dengan metode dilusi konsentrasi 100%; 10 %; 5 %; 2,5 %;

1,25 %; 0,625 %; 0,312 %; 0,156 %; 0,078 %

Inkubasi 27-28º C selama 24 jam

Hasil MIC (larutan keruh/jernih) dan pengamatan spektrofotometer

Hasil MIC ditanam pada media TSA

Inkubasi 27-28º C selama 24 jam

Hasil MBC (ada/tidak ada pertumbuhan bakteri)

Analisa data

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
76

Lampiran 4. Skema kerja penentuan MIC dan MBC

2 ml suspensi bakteri A. hydrophila (3 x 106 CFU/ml)

(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11)
100% 10% 5% 2,5% 1,25% 0,625% 0,312% 0,156% 0,078% K (-) K(+)

Inkubasi pada suhu 27-28º C selama 24 jam

Penentuan MIC (larutan keruh/jernih) dan pengamatan pada spektrofotometer

Penanaman pada media TSA dengan cara streak

Inkubasi pada suhu 27-28º Cselama 24 jam

Penentuan MBC (ada / tidaknya Pertumbuhan koloni bakteri)

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
77

Lampiran 5. Bahan-bahan dan peralatan penelitian

Daun patikan kebo kering Ekstrak daun patikan kebo Etanol 96 %

Alkohol 96 % Akuades steril Kloramfenikol

Mac. Farland 1 Etanol 96 % dan DMSO 100 %

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
78

Lampiran 5. Lanjutan

Pompa vakum Vortex

Centrifuge Autoclave Timbangan analitik

Spektrofotometer Rotary vacum evaporator

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
79

Lampiran 6. Laporan hasil uji isolat bakteri A. hydrophila

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
80

Lampiran 7. Hasil pengamatan secara mikroskopis, makroskopis dan uji biokimia

bakteri A. hydrophila

Bakteri A. hydrophila secara mikroskopis pembesaran 1000 x dengan pewarnaan

Gram, bakteri berwarna merah, bersifat Gram negatif dan berbentuk batang.

Koloni A. hydrophila pada media TSA secara makroskopis, warna kloni putih
krem, tepi koloni rata, struktur dalam koloni transparan.

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
81

Lampiran 7. Lanjutan

TSIA (+) LIA (+) MIO (+)

Urease (+) Citrat (+) MR (+)

VP (+) O/F (Fermentatif) Ornitin (-) ; Gelatin (-)

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
82

Lampiran 7. Lanjutan

Keterangan :
 Arabinosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Glukosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Laktosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Sukrosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Maltosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Manitol : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
 Inositol : (-), tetap berwarna merah

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
83

Lampiran 8. Tabel nilai OD uji MIC

 Tabel data sebelum inkubasi

Nilai OD Uji MIC

Konsentrasi Ulangan Total Rata-rata
I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0
10% 1,894 1,921 1,875 5,69 1,896
5% 1,670 1,783 1,682 5,135 1,711
2,5% 0,811 0,787 0,723 2,321 0,773
1,25% 0,514 0,544 0,471 1,535 0,511
0,625% 0,246 0,231 0,216 0,693 0,231
0,312% 0,093 0,087 0,161 0,341 0,113
0,156% 0,062 0,059 0,058 0,179 0,059
0,078% 0,042 0,049 0,052 0,143 0,047
Kontrol + 0,029 0,031 0,032 0,092 0,030
Kontrol - 0,021 0,023 0,018 0,062 0,020

 Tabel data setelah inkubasi 24 jam

Nilai OD Uji MIC

Konsentrasi Ulangan Total Rata-rata
I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0
10% 1,285 1,379 1,332 3,99 1,332
5% 1,302 1.255 1,304 3,86 1,287
2,5% 0,522 0,588 0,423 1,53 0,511
1,25% 0,286 0,377 0,173 0,83 0,278
0,625% 0,095 0,086 0,094 0,275 0,091
0,312% 0,044 0,027 0,031 0,102 0,034
0,156% 0,017 0,012 0,017 0,046 0,015
0,078% 0,016 0,017 0,023 0,056 0,018
Kontrol + 0,016 0,014 0,018 0,048 0,016
Kontrol - 0,017 0,020 0,016 0,053 0,017

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
84

Lampiran 8. Lanjutan

 Tabel data selisih antara sebelum dan setelah inkubasi 24 jam rata-rata nilai
OD uji MIC

Selisih Nilai OD Uji MIC

Konsentrasi Total Rata-rata
Ulangan I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0
10% 0,609 0,542 0,543 1,694 0,564
5% 0,368 0,528 0,378 1,274 0,424
2,5% 0,289 0,199 0,3 0,788 0,262
1,25% 0,228 0,167 0,298 0,693 0,231
0,625% 0,151 0,145 0,122 0,418 0,139
0,312% 0,049 0,06 0,13 0,239 0,079
0,156% 0,045 0,047 0,041 0,133 0,044
0,078% 0,026 0,032 0,029 0,087 0,029
Kontrol + 0,01 0,017 0,014 0,041 0,013
Kontrol - 0,004 0,003 0,002 0,009 0,003

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
85

Lampiran 9. Hasil analisis varian (ANAVA) OD uji MIC (SPSS 16 for Windows)
Oneway

Oneway
Descriptives
95% Confidence
Interval for Mean
Std. Std. Lower Upper
N Mean Deviation Error Bound Bound Minimum Maximum
0 3 .00300 .001000 .000577 .00052 .00548 .002 .004
0.01 3 .01367 .003512 .002028 .00494 .02239 .010 .017
0.078 3 .02900 .003000 .001732 .02155 .03645 .026 .032
0.156 3 .04433 .003055 .001764 .03674 .05192 .041 .047
0.312 3 .07967 .043936 .025366 .02948 .18881 .049 .130
0.625 3 .13933 .015308 .008838 .10131 .17736 .122 .151
1.25 3 .23100 .065552 .037846 .06816 .39384 .167 .298
2.5 3 .26267 .055411 .031991 .12502 .40031 .199 .300
5 3 .42467 .089629 .051747 .20202 .64732 .368 .528
10 3 .56467 .038397 .022169 .46928 .66005 .542 .609
Total 3
.17920 .188065 .034336 .10898 .24942 .002 .609
0

Test of Homogeneity of Variances

OD
Levene
Statistic df1 df2 Sig.
5.520 9 20 .001

ANOVA
OD
Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .988 9 .110 57.535 .000
Within Groups .038 20 .002
Total 1.026 29

F. hit > F. tab 0,05 maka terdapat perbedaan yang signifikan (P < 0,05) berarti
10 macam perlakuan tersebut memberikan perbedaan yang signifikan terhadap
pertumbuhan A. hydrophila.

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
86

Lampiran 9. Lanjutan

Post Hoc Homogeneous

OD
Duncan
Subset for alpha = 0.05
konsentrasi N 1 2 3 4 5
0 3 .00300
0.01 3 .01367
0.078 3 .02900
0.156 3 .04433
0.312 3 .07967 .07967
0.625 3 .13933
1.25 3 .23100
2.5 3 .26267
5 3 .42467
10 3 .56467
Sig. .066 .110 .385 1.000 1.000

Kesimpulan :

 Hasil terbaik pada perlakuan 10 % yang berbeda nyata dengan perlakuan

5 % dan perlakuan lainnya.

 Hasil terendah pada perlakuan kontrol positif yang tidak berbeda nyata
dengan perlakuan 0,156 % dan 0,078 %.

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI

 ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
87

Lampiran 10. Hasil uji MBC

Ulangan I

Ulangan II

Ulangan III

SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI