Halaman 1

Artikel asli
Asosiasi Epistatik CD14 dan NOTCH2
Polimorfisme Genetik dengan Atresia Biliaris
dalam Populasi Cina Selatan
Zefeng Lin, 1 , 2 Xiaoli Xie, 1 , 2 Huiting
Lin, 1 , 2 Ming Fu, 1 Liang Su, 1 Yanlu
Tong, 1 Hongjiao Chen, 1 Hezhen Wang, 1
Jinglu Zhao, 1 Huimin Xia, 1 Yan Zhang, 1 dan
Ruizhong Zhang 1
1 Departemen Bedah Pediatrik, Institut Pediatri
Guangzhou, Pusat Kesehatan Wanita dan Anak
Guangzhou, Universitas Kedokteran Guangzhou,
Guangzhou,
510623 Guangdong, Cina
Atresia bilier (BA) adalah penyebab paling umum
dari hati stadium akhir
penyakit pada bayi dengan prognosis buruk dan
mortalitas tinggi. Itu
etiologi BA masih belum diketahui, tetapi faktor
genetiknya
dianggap sebagai pemain penting di BA. Kami
menyelidiki
asosiasi dua varian yang diatur dalam CD14
(rs2569190) dan NOTCH2 (rs835576) dengan
kerentanan BA,
menggunakan kohort kasus-kontrol terbesar,
dengan total 506 pasien BA
dan 1.473 kontrol sehat pada penduduk Cina
Selatan.
Signi fi cant interaksi epistatik antara dua varian
dalam
sampel kami diamati (p = 8.1E À 03; OR = 2.78;
95% CI:
1.32 - 5.88). Ekspresi CD14 dan NOTCH2 di BA
kelompok secara konsisten lebih rendah dari pada
kontrol (CC)
kelompok (0,31 ± 0,02 versus 1,00 ± 0,14; p <0,001),
yang mungkin
terkait dengan kerentanan genetik dari gen yang
menunggu
validasi lebih lanjut.
]PENGANTAR
Atresia bilier (BA) adalah penyebab paling umum dari
hati stadium akhir
penyakit pada bayi dengan prognosis buruk dan
mortalitas tinggi. 1,2 The
Insiden BA di Eropa dan Amerika Serikat adalah
tentang
1: 15,000–19,000 kelahiran hidup, sedangkan kejadian
Asia jauh
lebih tinggi, mulai dari 1: 5.000 hingga 1: 8.000
kelahiran hidup di China. 3–6
Etiologi BA masih belum diketahui, tetapi faktor
genetik baru-baru ini
telah dianggap memiliki peran penting dalam
BA. 4,7 Recur-
sewa kasus keluarga didukung kecenderungan genetik
yang lebih tinggi dari BA. 8
Para peneliti telah mengidentifikasi sejumlah gen yang
terkait dengan
BA, seperti faktor penghambatan migrasi
( MIF ), 9 CD14 , 10 inter-
molekul adhesi seluler-1 ( ICAM-
1 ), 11 CFC1 , 12 dan ITGB2
( CD18 ). 13
CD14 adalah reseptor LPS
glycosylphosphatidylinositol-berlabuh itu
pertama kali dilaporkan sebagai penanda diferensiasi
yang diekspresikan di permukaan
makrofag, neutrofil, dan sel-sel garis keturunan myeloid
lainnya.
14–17 The
T / T homozigot pada posisi 159 (rs2569190)
untuk promotor CD14
polimorfisme terkait dengan pengembangan BA
menggunakan 90 kasus dan
143 kontrol dalam populasi Taiwan. 10 Studi terbaru
telah menemukan itu
hepatosit dapat menghasilkan sejumlah besar CD14 di
hati akut
cedera. 18 Namun, peran CD14 pada hepatosit tetap
tidak
jelas dalam BA.

Jalur pensinyalan Notch memainkan peran kunci dalam

pengembangan
sistem empedu. NOTCH2 , sebagai reseptor pada jalur
pemberian sinyal ini,
telah menunjukkan bahwa hepatosit terdiferensiasi
menjadi hepato-
ledakan dan selanjutnya berdiferensiasi menjadi sel
epitel biliaris (KBG)
ketika saluran empedu terluka, yang terutama diatur
oleh Notch
jalur pensinyalan. 19 NOTCH2 dapat menjaga fungsi
normal dari
saluran empedu intrahepatik (IHBD) pada periode
perinatal dan postnatal,
dan ekspresi rendah dari reseptor ini menyebabkan
kelainan
IHBD. 20 mutasi NOTCH2 menyebabkan sindrom
Alagille, yang di-
biliaris cacat perkembangan biliaris yang ditandai oleh
ikterus neonatorum, gangguan diferensiasi IHBD, dan
kronis
kolestasis. 21 CD14 dan notch signaling
receptor NOTCH2 dapat
co-express dalam hepatosit BA, tetapi interaksi antara
keduanya
dua gen dan dampaknya masing-masing pada
diferensiasi saluran empedu
proses masih belum diketahui, dan hubungan
antara CD14 dan
NOTCH2 dalam BA belum dilaporkan.
Untuk mengeksplorasi asosiasi CD14 (rs2569190)
dan NOTCH2
(rs835576) di BA, kami melakukan studi kasus kontrol
untuk memverifikasi ef
fects dan interaksinya dalam sampel Cina independen.
HASIL
Asosiasi CD14 dan NOTCH2 dengan BA di Cina
Selatan
Populasi
CD14 (rs2569190) dan NOTCH2 (rs835576) dipilih
pada 506
Kasus BA dan 1.473 kontrol pada populasi Cina
Selatan. (Lihat
Bahan dan Metode untuk kriteria pemilihan rinci.)
Hasilnya
Diterima 3 Agustus 2018; diterima 8 Oktober 2018;
https://doi.org/10.1016/j.omtn.2018.10.006 .
2 Penulis ini memberikan kontribusi yang sama untuk
pekerjaan.
Korespondensi: Yan Zhang, Departemen Bedah Anak,
Guangzhou
Institute of Pediatrics, Guangzhou Women and
Children's Medical Centre,
Guangzhou Medical University, 9 Jinsui Road,
Guangzhou, 510623 Guangdong,
Cina.
E-mail: yannizy@gmail.com
Korespondensi: Ruizhong Zhang, Departemen Bedah
Anak, Guangzhou
Institute of Pediatrics, Guangzhou Women and
Children's Medical Centre,
Guangzhou Medical University, 9 Jinsui Road,
Guangzhou, 510623 Guangdong,
Cina.
E-mail: cowboy2006@163.com
590
Terapi Molekul: Asam Nukleat Vol. 13 Desember 2018
© 2018 Penulis (s).
Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC
BY-NC-ND ( http://creativecommons.org/licenses/by-
nc-nd/4.0/ ).
 Halaman 2
menunjukkan bahwa asosiasi terbatas dari kedua SNP
diamati dengan BA
( Tabel 1 ). SNP rs2569190 dalam CD14 menunjukkan
bahwa frekuensi
alel minor (G) hampir sama antara kelompok kontrol
(41,75%) dan pasien BA (41,99%), memberikan rasio
odds (OR) dari
1.01 (95% interval keyakinan [CI]: 0.87–1.17, p =
0.89). Sebuah peraturan
SNP, rs835576, yang terletak di 3
0
UTR NOTCH2 , tunjukkan
frekuensi yang sedikit berbeda antara kontrol yang
sehat (C: 2,4%)
dan pasien BA (C: 3,1%), dengan OR 1,30 (95% CI:
0,84-2,01,
p = 0,23), meskipun gagal menjadi signifikan secara
statistik.
Epistasis Genetik antara CD14 dan NOTCH2
Terkait dengan Risiko Pengembangan BA
Hasilnya menunjukkan efek yang kuat dari interaksi
epistatik -
tween dua varian dalam sampel kami (p = 8.1EÀ03; OR
= 2,78; 95%
CI: 1.32–5.88) ( Tabel 2 ). Berpasangan dengan dimensi
multifaktor reduksi-
tion (MDR) analisis diadopsi untuk cross-memvalidasi
interist epistatik
aksi antara dua varian ini.
Hasil validasi silang
konsistensi (CVC) dan akurasi seimbang diperoleh dari
Analisis MDR dari model dua lokus ( Tabel
3 ). Kombinasi
kelompok berisiko rendah dan tinggi diklasifikasikan
dalam model ( Gambar 1 ).
Sel-sel gelap berbayang menunjukkan risiko tinggi BA
dengan genotipe
kombinasi (GG: TT). Sesuai dengan hasil yang
diperoleh oleh lo-
regresi gistik dari PLINK, epistatik sinergistik yang
signifikan
interaksi (p = 0,0026) diamati, memberikan OR 1,44
(95%
CI: 1.14-1.84) untuk model ini.
Efek cis dari eQTL dari Dua Pasangan SNP yang
Berinteraksi dengan CD14
dan NOTCH2
Ekspresi hubungan kuantitatif lokus (eQTL) antara
SNPs dan gen yang diatur secara potensial diperiksa
secara seksama. Kita sebagai-
menguduskan kedua kandidat SNP ini dalam Ekspresi
Genotip-Jaringan
(GTEx) proyek yang mengandung genome-wide-based,
tissue-specific, regu
varian eQTL laten ( http://gtexportal.org ). Genotipe
SNP
rs2569190 dan SNP rs835576 berkorelasi dengan
ekspresi
CD14 dalam fibroblast dan NOTCH2 di hati, masing-
masing ( Tabel 4 ).
Hasilnya juga lebih lanjut menunjukkan bahwa G, alel
minor dari
SNP rs2569190, berkorelasi dengan rendahnya
ekspresi CD14 dalam fibro-
ledakan. C, alel minor SNP rs835576, berkorelasi
dengan yang lebih rendah
ekspresi NOTCH2 dalam hati. Untuk mengkonfirmasi
lebih lanjut
tingkat ekspresi dua gen ini pada pasien BA, PCR real-
time
Hasil penelitian menunjukkan bahwa tingkat
ekspresi CD14 dalam kelompok BA
(n = 28) secara signifikan lebih rendah (0,31 ± 0,02 vs
1,00 ± 0,14,
p <0,001) dibandingkan dengan kelompok kista
choledochal (CC) (n = 20);
dan ekspresi NOTCH2 dalam BA juga menurun (0,59 ±
0,07 versus 1,00 ± 0,19, p = 0,0262) ( Gambar 2 ). Hasil
ini telah terjadi
lebih lanjut diverifikasi oleh western blot, yang
menunjukkan bahwa gen terkait
ekspresi protein CD14 menurun secara signifikan
(209,9 ±
12,66 berbanding 546,3 ± 112,3, p = 0,0408) dan
tingkat ekspresi
dari NOTCH2 juga jelas menurun (101,1 ± 58,55 vs
425,1 ±
72,89, p = 0,0257) dalam BA ( Gambar 3 ).
DISKUSI
Dalam penelitian ini, kami menyelidiki asosiasi CD14
(rs2569190) dan NOTCH2 (rs835576) dengan
BA. Kami menemukan ini
dua SNP memiliki interaksi genetik untuk
meningkatkan risiko pada BA, dan
kedua SNPs menunjukkan peran -regulatory cis dalam
ekspresi gen. Hasil ini
menyarankan agar CD14 (rs2569190) dapat berinteraksi
dengan NOTCH2
(rs835576) dan, bersama - sama, merendahkan ekspresi
dari
NOTCH2 . Ekspresi CD14 dan NOTCH2 secara
signifikan
menurun pada pasien BA, yang dapat dikaitkan dengan
susunan genetik
locus ceptibility dari dua gen ini.
Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa homozigot
T / T pada posisi 159
polimorfisme CD14 promotor dikaitkan dengan
mengembangkan- yang
dari BA di 90 pasien BA (A alel: 61,7%, alel G: 38,3%)
dan
143 kontrol yang sehat (A: 52,1%, G: 47,9%),
memberikan OR 1,09
(95% CI: 1,01-2,16, p = 0,043) pada populasi Taiwan
selatan. 10
Namun, dalam penelitian kami, frekuensi alel minor (G)
adalah
hampir sama antara 1.473 kontrol sehat (41,75%) dan
506
Pasien BA (41,99%), memberikan OR 1,01 (95% CI:
0,87-1,17,
p = 0,89). Frekuensi alel sedikit berbeda antara
dua studi. Memeriksa data 1000G dari populasi Asia
Timur
(EAS), frekuensi alel minor (G) ditemukan 42,76%,
menunjukkan frekuensi alel yang mirip dengan orang
Cina Selatan
populasi. Perbedaan antara penduduk Cina Selatan
dan orang Taiwan yang dilaporkan sebelumnya dapat
disebabkan
Tabel 1. Asosiasi Dua SNPs Terletak di CD14 dan
NOTCH2 dengan Atresia Biliaris
SNP
Gene
Fungsi
CHR
BP
A1 / A2
F_A
F_U
p
ATAU
CI, 0,95
p_adj
rs835576
NOTCH2
3 0 UTR
1
119912963
C/T
0,03
0,02
0,23
1,30
0,84-2,01
0,59
rs2569190
CD14
intronic
5
140633331
G/A
0,42
0,42
0,89
1.01
0,87-1,17
0,57
Fungsi mengacu pada peran fungsi SNP dalam
gen. CHR, kromosom; BP, pasangan basa di mana SNP
berada;A1 / A2, alel minor / alel utama; F_A, alel minor
(T)
frekuensi pada pasien BA; F_U, frekuensi minor alel
(T); ATAU, rasio odds; CI: interval kepercayaan;p
<0,05 dianggap signifikan secara statistik; p_adj, nilai p
disesuaikan berdasarkan jenis kelamin.
Tabel 2. Regresi Logistik Menampilkan Efek Interaktif
Dua Peraturan SNPs Terletak di CD14 dan NOTCH2
SNP 1
Gen 1
SNP 2
Gene 2
ATAU
CI, 0,95
Nilai p
rs2569190
CD14
rs835576
NOTCH2
2,78
1,32-5,88
8.1EÀ03
Nilai p menunjukkan signifikansi berdasarkan model
genetik yang berbeda. ATAU, rasio odds; CI, interval
kepercayaan;p <0,05 dianggap signifikan secara
statistik.
www.moleculartherapy.org
Terapi Molekul: Asam Nukleat Vol. 13 Desember 2018
591
 Halaman 3
batas ukuran sampel atau stratifikasi subpopulasi
potensial.
Oleh karena itu, dalam subyek kami, kami
memperbesar ukuran sampel untuk mendapatkan
bukti yang cukup meyakinkan. Studi lain melaporkan
bahwa
tingkat CD14 yang larut dalam plasma dapat berfungsi
sebagai penanda biologis dan
secara signifikan berkurang pada pasien dengan T / T
dan T / C geno-
jenis ketika penyakit berkembang menjadi sirosis hati,
sementara di sana
tidak ada perubahan signifikan pada pasien dengan
genotipe C / C. 10
Temuan ini didukung oleh penelitian Ming-Huei
Chou, 22 yang
menunjukkan
bahwa CD14 mRNA hati dan CD14 terlarutkan
tingkat plasma pasien dengan BA tahap awal cukup
lebih tinggi dibandingkan dengan BA tahap
akhir. Selain itu, Ahmed et al. 23
juga menunjukkan bahwa ekspresi CD14 dalam BA
memiliki waktu yang terkait
berubah dengan overekspresi pada tahap awal dan
penurunan expres-
sion di tahap akhir. Namun, mungkin ada beberapa
batasan potensial
itasi dalam studi-studi sebelumnya. Pertama, ukuran
sampel yang kecil mungkin
telah mengurangi kekuatan statistik penelitian. Kedua,
individu-
perbedaan ual gen kerentanan genetik dapat
menyebabkan variabel
derajat fibrosis hati dan prognosis bedah pada pasien
BA.
Oleh karena itu, jaringan hati pasien BA harus dalam
aksentuasi yang ketat.
menari dengan kriteria pewarnaan patologis klinis untuk
menentukan
derajat dan tahap fibrosis hati (termasuk dini dan lanjut
tahapan), daripada hanya menilai pada saat operasi
Kasai
atau transplantasi hati.
Dalam percobaan kami, ekspresi CD14 secara
signifikan
menurun pada pasien BA, mirip dengan temuan dalam
penelitian yang tercatat,
tetapi kami gagal mereplikasi varian yang dilaporkan
sebelumnya pada CD14
di kohor kami. Kami menyarankan bahwa efek epistatik
genetik
varian yang dilaporkan sebelumnya ini dengan SNP
pada NOTCH2 mungkin meningkat
risiko terhadap penyakit dengan menggunakan studi
kasus kontrol. The Notch
jalur pensinyalan memainkan peran kunci dalam
pengembangan dan differen-
tiasi sel punca hepatik menjadi KBG untuk membentuk
sistem biliaris. 24,25 Mutasi di Jagged1 (Jag1)
dan NOTCH2 hasil
di Alagille syndrome (AGS) pada manusia, yang
ditandai oleh
displasia empedu dan kolestasis, 26,27 dan temuan
serupa adalah
diamati pada tikus, 28 menyarankan konservasi
fungsional. Di awal
ous belajar, kami juga menemukan bahwa ekspresi yang
lebih rendah dari NOTCH2 bisa
menyebabkan malformasi IHBD di perinatal dan
postnatal pe-
riods. 20 Namun, mekanisme khusus untuk menurunkan
regulasi
Ekspresi NOTCH2 dalam BA tidak jelas.
Peraturan SNP rs835576 terletak di 3
0
UTR NOTCH2 adalah
sebelumnya diidentifikasi untuk memvalidasi
kerentanan dengan BA. Namun,
kami menemukan alel minor yang berbeda antara
kontrol yang sehat (C: 2,4%)
dan pasien BA (C: 3,1%) dengan OR 1,30 (95% CI:
0,84-2,01,
p = 0,23), yang kami amati serupa dengan frekuensi alel
SNP untuk Han Cina di Beijing (HCB; C: 2,3%) yang
mencerminkan
keandalan data. The NOTCH2 (rs835576) SNP
menunjukkan terbatas evi-
dence asosiasi dengan BA, yang mungkin karena relatif
frekuensi alel minor langka untuk SNP dan batas
ukuran sampel
kohort replikasi. Mungkin juga kedua gen ini juga
berhubungan dengan penyakit subphenotypes tertentu
tetapi tidak dengan keseluruhan susept-
kecakapan. Analisis sampel pasien kami tidak
menunjukkan signifikan
perbedaan untuk lokus ini dengan subphenotypes,
meskipun ini bisa
disebabkan oleh ukuran sampel yang dikurangi untuk
setiap subkelompok berdasarkan tertentu
fenotip.
Hepatosit mendiferensiasi menjadi hepatoblas dan lebih
jauh berbeda-
tiate ke KBG ketika saluran empedu terluka, yang
terutama regu
lated oleh jalur signaling Notch. Eksperimen kami
menemukan itu
kedua SNP ini memiliki interaksi yang pasti dalam
sebuah haplotype untuk mempengaruhi
menimbulkan risiko BA. Hasil ini menunjukkan
bahwa CD14 (rs2569190) mungkin
berinteraksi dengan NOTCH2 (rs835576) dan, bersama-
sama, menurunkan regulasi
Ekspresi gen NOTCH2 . Penelitian kami sebelumnya
menunjukkan bahwa
pematangan KBG dan ekspresi Notch dapat memainkan
peran dalam
patogenesis BA, serta peningkatan tingkat belum
matang
KBG pada pasien dengan BA. Namun, empedu belum
matang baru terbentuk
saluran atau duktus tidak memiliki fungsi transportasi
empedu, dan empedu mungkin menuduh
mulat untuk membentuk sumbat empedu.Bersama-
sama, hasil ini menunjukkan bahwa CD14
(rs2569190) dapat berinteraksi
dengan NOTCH2 (rs835576) dan, bersama-sama,
meregulasi ekspresi gen NOTCH2 , yang dapat
menghasilkan
belum matang dan tidak berfungsinya KBG. PCR real-
time dan barat
hasil blot menunjukkan bahwa
ekspresi CD14 dan NOTCH2 adalah
secara signifikan lebih rendah pada pasien BA
dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Ini lebih lanjut mengisyaratkan bahwa lokus kerentanan
genetik dari keduanya
gen dikaitkan dengan risiko BA. Meskipun lokasi
CD14 dan NOTCH2 dalam hati BA berbeda, mungkin
terkait
untuk hepatoblas dibedakan menjadi KBK atau
hepatosit di Notch
jalur pensinyalan. Hasil ini mirip dengan hasil
sebelumnya
tes epistasis menggunakan PLINK.
Namun, beberapa batasan harus dicatat dalam penelitian
kami.BA adalah kompleks
sifat yang dihasilkan dari faktor lingkungan dan
genetik. Mengepung-
faktor mental dan variasi genetik langka yang terkait
dengan BA belum
belum diidentifikasi, yang membatasi penyelidikan
lebih lanjut dari gene-
interaksi lingkungan. Kekuatan Epistasis dari penelitian
ini adalah
diperiksa melalui Epistasis Power Calculator ( https: //
gump.
qimr.edu.au/general/manuelF/epistasis/epipower4i.html
); berdasarkan
ukuran sampel saat ini dengan tingkat kejadian 1 per
10.000 bayi,
meskipun ukuran sampel saat ini cukup besar (0,98
untuk kasus-saja
belajar, 0,97 untuk studi kasus-kontrol), replikasi lebih
lanjut dalam indes
kohor independen masih diperlukan. Studi replikasi dari
yang lain
kohor dengan ukuran sampel yang lebih besar didorong
untuk mengonfirmasi asso-
hubungan Juga, lokasi yang berbeda
dari CD14 dan NOTCH2 di hati BA
Tabel 3. Validasi MDR Menampilkan Efek Interaktif
dari Dua SNP
SNP 1
Gen 1
SNP 2
Gene 2
Akurasi yang seimbang
ATAU
CI, 0,95
Nilai p
rs2569190
CD14
rs835576
NOTCH2
0,53
1,44
1.14–1.84
2.6EÀ03
Nilai p menunjukkan signifikansi berdasarkan model
genetik yang berbeda. ATAU, rasio odds; CI, interval
kepercayaan;p <0,05 dianggap signifikan secara
statistik.
Terapi Molekul: Asam Nukleat
592
Terapi Molekul: Asam Nukleat Vol. 13 Desember 2018
 Halaman 4
mungkin terkait dengan jalur sinyal Notch dan
diferensiasi
dan proliferasi hepatoblas, tetapi hubungan itu tidak
jelas.
Tanpa eksperimen fungsional, sulit untuk menentukan
kedua SNP ini secara kausal terkait dengan BA. Karena
itu, sel dan hewan
eksperimen model diperlukan untuk mengeksplorasi
fungsi genetik lebih jauh
pasangan yang berinteraksi terkait seperti yang
dilaporkan dalam penelitian sebelumnya. 29–31
Sebagai kesimpulan, hasil penelitian kami dalam
populasi Cina diverifikasi
bahwa CD14 (rs2569190) dapat berinteraksi
dengan NOTCH2 (rs835576) dan,
bersama-sama, downregulate NOTCH2 (rs835576)
ekspresi, yang kembali
sults di immature dan malfunction dari KBG di BA.
Gambar 1. CC dan GG Mengatur Ekspresi Rendah
Gen Teregulasi, yang Terkait dengan
Atresia bilier
(A dan B) sampel Fibroblast dari alel minor C dari
rs2569190 dan G dari rs835576 menunjukkan relatif
lebih rendah
ekspresi (A) CD14 dan (B) NOTCH2, masing-
masing. (C)
CC dan GG menunjukkan efek epistatik genetik yang
diuji
oleh MDR.
Tabel 4. Efek eQTL dari Dua SNP dalam CD14 dan
NOTCH2 dengan Biliary
Atresia
SNP
Gene
Nilai Pola Regulasi p
Tisu
rs2569190 CD14
cis
6.40EÀ07 mengubah fibroblas
0,79
hati
rs835576
NOTCH2 cis
4.90EÀ06 hati
Nilai p menunjukkan signifikansi berdasarkan model
genetik yang berbeda.
MATERIAL DAN METODE
Subyek Studi
Kami mendaftarkan 506 kasus BA dan 1.473 kontrol
dalam studi kasus-kontrol berbasis rumah sakit ini
sebagai
kami jelaskan sebelumnya. 32
Kandidat
SNP dipilih berdasarkan kriteria berikut:
SNPs rs2569190 dan rs835578 dipilih oleh
peran regulasi yang potensial sesuai dengan
Database portal GTEX ( https://gtexportal.org/
rumah/ ). Selanjutnya, SNP rs2569190 adalah
terletak di wilayah promotor CD14 dan
menunjukkan bukti sugestif yang terkait dengan
BA. 10
Semua subjek direkrut di
Wanita Guangzhou dan Kedokteran Anak-Anak
Pusat, dan kasus BA dikonfirmasi oleh
diagnosis klinis dan patologi. 1.473 sehat
anak-anak dipilih secara acak sebagai kontrol
yang telah menerima pemeriksaan fisik rutin
tion di rumah sakit yang sama dan dicocokkan dengan
kasus
pada usia dan jenis kelamin. Kriteria eksklusi dari
kontrol adalah sebagai berikut: jenis lain dari hati
meringankan atau penyakit autoimun atau anak-anak
yang
menerima transplantasi hati. Sebagai tambahan,
jaringan hati dari 28 pasien BA dan 20 pasien CC
kongenital
(semua kurang dari 1 tahun) dipilih untuk PCR real-
time lebih lanjut
dan deteksi blot barat dan perbandingan. Penelitian ini
adalah
disetujui oleh Institutional Review Board of the
Guangzhou
Pusat Medis Perempuan dan Anak, dan program
percobaan
sangat ketat menurut etika kedokteran. Semua peserta
telah menandatangani
Penjelasan dan persetujuan.
Analisis Polimorfisme
DNA genomik total diisolasi dari jaringan dan darah
perifer
sampel menggunakan TIANamp Blood DNA Kit
(TianGen Biotech,
Beijing, Cina) sesuai dengan protokol pabrikan. SNP
(rs2569190, G / A; dan rs835576, C / T) berhasil
merancang kita-
ing Sistem Emas MassARRAY iPLEX
(Sequenom). Bahkan,
5% sampel dipilih secara acak untuk tes ulang, dan
sults adalah 100% sesuai.
QPCR Real-Time
Tingkat ekspresi mRNA
dari CD14 dan NOTCH2 dilakukan
oleh PCR real-time menggunakan SYBR Green
Supermix (Bio-Rad, 172-
5124, Hercules, CA, USA). Data dikumpulkan dan
secara kuantitatif
www.moleculartherapy.org
Terapi Molekul: Asam Nukleat Vol. 13 Desember 2018
593
 Halaman 5
dianalisis pada Quant Studio 6 Flex System (Applied
Biosystems, Fos-
ter City, CA, USA). Gen b-aktin digunakan sebagai
endogen
trol untuk menormalkan untuk perbedaan total RNA
dalam setiap sampel. Itu
primer digunakan seperti yang tercantum dalam Tabel
S1 .
Analisis Western Blot
Sampel protein dari ekstrak hati pasien dilarutkan pada
8% SDS -
HALAMAN gel dan ditransfer ke polyvinylidene
fluoride (PVDF)
membran. Membran diblokir dengan 5% BSA dan incu
bated dengan CD14 (Abcam, ab106285, Cambridge,
UK) dan NOTCH2
(GeneTex, GTX101593, Irvine, CA, USA) antibodi
pada 4
C over-
malam. Setelah tiga kali pencucian, membran
diinkubasi dengan detik.
antibodi ondary pada suhu kamar selama 1 jam. Setelah
tiga lagi
mencuci, membran diinkubasi dengan ECL Western
Blotting
Substrat selama 8 menit, dan kemudian pita protein
divisualisasikan
Film X-ray.
Gambar 3. Ekspresi CD14 dan NOTCH2 di Western
Blot
Jaringan hati lisat yang immunoblotted dengan anti-
CD14 dan anti-NOTCH2 anti-
mayat. b-aktin terpilih sebagai parameter dari indikator
yang sesuai (A).
Setiap kelompok termasuk 3 sampel; * P <0,05, tes t
tidak berpasangan (B). BA, atresia bilier;
CC, kista choledochal.
Gambar 2. Ekspresi Kuantitatif dari CD14 dan
NOTCH2 di Hati
Setiap kelompok mRNA hati terdeteksi oleh PCR real-
time.
Ekspresi total CD14 dan NOTCH2 dalam biliary
atresia (BA; n = 28) secara signifikan lebih rendah dari
pada di
choledochal cyst (CC; n = 20). * p <0,05; ** p <0,01.
Analisis statistik
Distribusi frekuensi alel termasuk vari-
semut untuk pasien BA, dan kontrolnya
dibandingkan dengan c 2 tes. p <0,05 dianggap
menjadi signifikan secara statistik. OR dan 95% CI
yang sesuai adalah
dihitung dari model regresi logistik. Interaksi epistatik
menjadi-
tween CD14 (rs2569190) dan NOTCH2 (rs835576)
diperiksa
menggunakan PLINK 33 (berdasarkan analisis regresi
logistik) pada 506 kasus
dan 1.473 kontrol. Interaksi genetik pesanan yang lebih
tinggi terdeteksi
dan ditandai dengan reduksi dimensi multifactional
pairwise
(MDR).
INFORMASI SUPLEMEN
Informasi Tambahan mencakup satu tabel dan dapat
ditemukan dengan
artikel ini online
di https://doi.org/10.1016/j.omtn.2018.10.006 .
KONTRIBUSI PENULIS
ZL, HL, YZ, dan RZ merancang dan melakukan
penelitian dan menulis
naskahnya. MF, LS, YT, XX, HC, HW, dan JZ
dikumpulkan
sampel dan informasi. ZL, XX, dan YZ berpartisipasi
menganalisis data.RZ dan HX mengkoordinasikan
penelitian ini secara keseluruhan
waktu. Semua penulis meninjau naskah akhir.
KONFLIK KEPENTINGAN
Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan
keuangan yang bersaing.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini disetujui oleh Dewan Review
Kelembagaan
Guangzhou Women and Children's Medical
Centre. Semua data
terlibat dalam penelitian dapat diberikan berdasarkan
permintaan.Penelitian ini adalah
didukung oleh National Science Foundation Alam Cina
(hibah no. 81770510, 81771629, dan 81671498) dan
Sains
dan Proyek Perencanaan Teknologi Provinsi
Guangdong 2017
(hibah no. 2017A020214017).Para penulis ingin
mengucapkan terima kasih kepada
Departemen Patologi dan Biobank, Wanita Guangzhou
dan
Pusat Medis Anak, untuk menyediakan sampel klinis.
 REFERENSI
1. Hartley, JL, Davenport, M., dan Kelly, DA
(2009). Atresia bilier. Lancet374 ,
1704–1713 .
2. Sundaram, SS, Mack, CL, Feldman, AG, dan Sokol,
RJ (2017). Atresia bilier: di-
dications dan waktu transplantasi hati dan optimalisasi
perawatan pretransplant.
Transplasi Hati. 23 , 96–109 .
3. Sanchez-Valle, A., Kassira, N., Varela, VC, Radu,
SC, Paidas, C., dan Kirby, RS
(2017). Atresia bilier: epidemiologi, genetika,
pembaruan klinis, dan kesehatan masyarakat
perspektif. Adv. Pediatr. 64 , 285–305 .
Terapi Molekul: Asam Nukleat
594
Terapi Molekul: Asam Nukleat Vol. 13 Desember 2018

Halaman 6
4. Ke, J., Zeng, S., Mao, J., Wang, J., Lou, J., Li, J.,
Chen, X., Liu, C., Huang, LM, Wang,
B., dan Liu, L. (2016). Varian genetik umum gen GPC1
mengurangi risiko biliaris
atresia pada populasi Cina. J. Pediatr. Surg. 51 , 1661–
1664 .
5. Chiu, CY, Chen, PH, Chan, CF, Chang, MH, dan
Wu, TC; Bangku Bayi Taiwan
Kelompok Belajar Kartu Warna (2013). Atresia bilier
pada bayi prematur di Taiwan: a
survei nasional. J. Pediatr 163 , 100–103.e1 .
6. Lakshminarayanan, B., dan Davenport, M.
(2016). Atresia bilier: komprehensif
ulasan. J. Autoimmun. 73 , 1–9 .
7. Garcia-Barceló, MM, Yeung, MY, Miao, XP, Tang,
CS, Cheng, G., Jadi, MT,
Ngan, ES, Lui, VC, Chen, Y., Liu, XL,
dkk. (2010). Studi asosiasi genome
mengidentifikasi lokus kerentanan untuk atresia bilier
pada 10q24.2. Bersenandung. Mol. Genet. 19 ,
2917-229 .
8. Mezina, A., dan Karpen, SJ (2015). Kontribusi
genetik dan pengubah empedu
atresia. Menggali. Dis. 33 , 408–414 .
9. Arikan, C., Berdeli, A., Ozgenc, F., Tumgor, G.,
Yagci, RV, dan Aydogdu, S. (2006).
Hubungan positif dari faktor penghambatan migrasi
makrofag gen-173G / C poli-
morfisme dengan atresia biliaris. J.
Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 42 , 77–82 .
10. Shih, HH, Lin, TM, Chuang, JH, Eng, HL, Juo, SH,
Huang, FC, Chen, CL, dan
Chen, HL (2005). Promoter polimorfisme gen reseptor
endotoksin CD14 adalah
terkait dengan atresia biliaris dan kolestasis neonatal
idiopatik. Pediatri 116 ,
437–441 .
11. Arikan, C., Berdeli, A., Kilic, M., Tumgor, G.,
Yagci, RV, dan Aydogdu, S. (2008).
Polimorfisme gen ICAM-1 berhubungan dengan atresia
biliaris. Menggali. Dis.
Sci. 53 , 2000–2004 .
12. Davit-Spraul, A., Baussan, C., Hermeziu, B.,
Bernard, O., dan Jacquemin, E. (2008).
Keterlibatan gen CFC1 pada atresia biliaris dengan
sindrom polysplenia. J. Pediatr.
Gastroenterol. Nutr. 46 , 111–112 .
13. Zhao, R., Song, Z., Dong, R., Li, H., Shen, C., dan
Zheng, S. (2013). Polimorfisme dari
Gen ITGB2 3 0 -UTR + 145C / A dikaitkan dengan
atresia bilier. Pencernaan 88 , 65-71 .
14. Leicester, KL, Olynyk, JK, Brunt, EM, Britton, RS,
dan Bacon, BR (2006).
Temuan diferensial untuk CD14-positif monosit hati /
makrofag di primer
biliary cirrhosis, hepatitis C kronis dan steatohepatitis
non-alkohol. Hati Int. 26 ,
559–565 .
15. Lin, YF, Lee, HM, Leu, SJ, dan Tsai, YH
(2007). Esensi dari PKCalpha dan
Translokasi PKCbetaI untuk CD14 + diferensiasi
monosit terhadap makrofag
dan sel dendritik, masing-masing. J.
Cell. Biochem. 102 , 429–441 .
16. Nicu, EA, van der Velden, U., Everts, V., dan Loos,
BG (2008). Ekspresi dari
FcgammaR dan mCD14 pada neutrofil dan monosit
polimorfonuklear mungkin
tentukan infeksi periodontal. Clin. Exp. Immunol. 154 ,
177–186 .
17. Zhao, Z., Fleming, R., McCloud, B., dan Klempner,
MS (2007). CD14 memediasi lintas
berbicara antara sel mononuklear dan fibroblas untuk
meningkatkan regulasi matriks metallo-
proteinase 9 oleh Borrelia
burgdorferi . Menulari. Immun. 75 , 3062–3069 .
18. Bas, S., Gauthier, BR, Spenato, U., Stingelin, S.,
dan Gabay, C. (2004). CD14 adalah sebuah
protein fase akut. J. Immunol. 172 , 4470–4479 .
19. Tchorz, JS, Kinter, J., Müller, M., Tornillo, L.,
Heim, MH, dan Bettler, B. (2009).
Notch2 signaling mempromosikan spesifikasi spesi sel
epitel bilier dan tubulogenesis
selama perkembangan saluran empedu pada
tikus. Hepatologi 50 , 871–879 .
20. Zhang, RZ, Yu, JK, Peng, J., Wang, FH, Liu, HY,
Lui, VC, Nicholls, JM, Tam,
PK, Lamb, JR, Chen, Y., dan Xia, HM (2016). Peran
CD56-mengekspresikan dewasa
sel epitel empedu pada atresia bilier. Dunia J.
Gastroenterol. 22 , 2545-2557.
21. McDaniell, R., Warthen, DM, Sanchez-Lara, PA,
Pai, A., Krantz, ID, Piccoli, DA,
dan Spinner, NB (2006). Mutasi NOTCH2
menyebabkan sindrom Alagille, heteroge
gangguan yang tidak beraturan dari jalur sinyal
takik. Saya. J. Hum. Genet.79 , 169–173 .
22. Chou, MH, Chuang, JH, Eng, HL, Chen, CM,
Wang, CH, Chen, CL, dan Lin,
TM (2010). Endotoksin dan CD14 dalam
perkembangan atresia biliaris. J. Transl. Med.
8 , 138 .
23. Ahmed, AF, Nio, M., Ohtani, H., Nagura, H., dan
Ohi, R. (2001). In situ CD14
ekspresi atresia bilier: perbandingan antara tahap awal
dan akhir. J. Pediatr.
Surg. 36 , 240–243 .
24. Boulter, L., Govaere, O., Bird, TG, Radulescu, S.,
Ramachandran, P., Pellicoro, A.,
Ridgway, RA, Seo, SS, Spee, B., Van Rooijen, N.,
dkk. (2012). Makrofag diturunkan
Wnt menentang sinyal Notch untuk menentukan takdir
sel progenitor hati di hati kronis
penyakit. Nat. Med. 18 , 572–579 .
25. Morell, CM, dan Strazzabosco, M. (2014). Notch
signaling dan operasi terapeutik baru
tions dalam penyakit hati. J. Hepatol. 60 , 885–890 .
26. Li, L., Krantz, ID, Deng, Y., Genin, A., Banta, AB,
Collins, CC, Qi, M., Trask, BJ,
Kuo, WL, Cochran, J., dkk. (1997). Sindrom Alagille
disebabkan oleh mutasi pada hu-
man Jagged1, yang mengkodekan ligan untuk
Notch1. Nat. Genet. 16 , 243–251 .
27. Oda, T., Elkahloun, AG, Pike, BL, Okajima, K.,
Krantz, ID, Genin, A., Piccoli,
DA, Meltzer, PS, Spinner, NB, Collins, FS, dan
Chandrasekharappa, SC
(1997). Mutasi pada gen Jagged1 manusia bertanggung
jawab untuk sindrom Alagille.
Nat. Genet. 16 , 235–242 .
28. McCright, B., Lozier, J., dan Gridley, T.
(2002). Model tikus dari sindrom Alagille:
Notch2 sebagai pengubah
genetik haploinsufisiensi Jag1 . Pembangunan129 ,
1075–
1082 .
29. Chang, J., Tian, J., Yang, Y., Zhong, R., Li, J., Zhai,
K., Ke, J., Lou, J., Chen, W., Zhu, B .,
et al. (2018). Varian missense langka di asosiasi
TCF7L2 dengan risiko kanker kolorektal
dengan berinteraksi dengan varian peraturan yang
diidentifikasi GWAS di penambah MYC.
Res kanker. 78 , 5164–5172 .
30. Li, J., Chang, J., Tian, J., Ke, J., Zhu, Y., Yang, Y.,
Gong, Y., Zou, D., Peng, X., Yang, N .,
et al. (2018). Varian langka P507L di TPP1 menyela
interaksi TPP1-TIN2, mempengaruhi
ences telomere panjang, dan memberikan risiko kanker
kolorektal pada populasi Cina.
Kanker Epidemiol. Biomarker Prev. 27 , 1029–1035 .
31. Zou, D., Lou, J., Ke, J., Mei, S., Li, J., Gong, Y.,
Yang, Y., Zhu, Y., Tian, J., Chang, J .,
et al. (2018). Ekspresi integratif kuantitatif berdasarkan
analisis locus berbasis colo-
kanker rektal mengidentifikasi polimorfisme fungsional
yang mengatur ekspresi SLC22A5.
Eur. J. Kanker 93 , 1–9 .
32. Liu, F., Zeng, J., Zhu, D., Zhang, R., Xu, X., Wang,
M., Zhang, Y., Xia, H., dan Feng, Z.
(2018). Asosiasi polimorfisme pada gen VEGFA 3 0 -
UTR + 936T / C dengan sus-
ceptibility to biliary atresia pada populasi Han Cina
Selatan. J. Clin.Laboratorium. Anal.
32 , e22342 .
33. Purcell, S., Neale, B., Todd-Brown, K., Thomas, L.,
Ferreira, MA, Bender, D., Maller,
J., Sklar, P., de Bakker, PI, Daly, MJ, dan Sham, PC
(2007). PLINK: satu set alat untuk
asosiasi genom utuh dan analisis hubungan berbasis
populasi. Saya. J. Hum.
Genet. 81 , 559–575 .