Review

Biokonversi Limbah Kertas Menggunakan Kultur Gabungan Jamur yang Diisolasi dari Limbah
Lignoselulosa
Judul Asli: Bioconversion of Waste Paper by Co Culture of Fungi Isolated from Lignocellulosic Waste

Penulis: Rahna K. Rathnan, T. Balasaravanan, Steny Mary Anto, Ancy K. Tony, Anamika P dan Ambili M

Di-review oleh:
Ghiffary Rifqialdi (11217025)
Nunung Nurhayati (11217002)
Suryaningtyas Choirun Nisa’ (11217027)

Abstrak
Penelitian ini penulis menentukan hasil sakarifikasi maksimum dari limbah kertas dengan variasi suhu,
pH, konsentrasi substrat, dan waktu inkubasi. Pada proses inkubasi, peneliti menggunakan kultur jamur selulotik
Penicillium citrinum, Aspergillus oryzae dan Trichoderma viride untuk menghidrolisis komponen selulosa agar
diperoleh peningkatan degradasi selulosa. Urutan jamur yang menghasilkan hidrolisis substrat terbaik terjadi
pada P. citrinum, A.oryzae, dan T viride. Pada monokultur yang menggunakan kombinasi ketiga jamur tersebut
didapat peningkatan sakarifikasi tertinggi pada kertas kantor. Sakarifikasi maksimum diperoleh dengan rasio
campuran kultur organisme 2:2:2 yang diinokulasi pada konsentrasi yang sama pada suhu 30°C, pH 5,5, waktu
inkubasi 10 hari, dan konsentrasi substrat 5%.

Kata kunci: kertas limbah, sakarifikasi, kultur campuran, optimisasi

Pendahuluan material selulosa dapat dikonversi menjadi produk

Perkiraan jumlah konsumsi kayu di dunia komersial penting, seperti asam sitrat, etanol,
mencapai sekitar 3,5 miliar ton/tahun dan semakin metana, sirup glukosa, dan protein-protein bersel
meningkat hingga 65% sejak tahun 1960. Kayu dan satu (Louime dan Uckermann, 2008).
produk lignoselulosa lainnya tersusun dari selulosa, Selulosa merupakan polimer glukosa
hemiselulosa, dan lignin. Kayu pada tumbuhan penyusun komponen kertas dengan monomer
angiospermae biasanya mengandung 42-50% glukosa yang dihubungkan dengan ikatan β-1,4-
selulosa, 25-30% hemiselulosa, 20-25% lignin, dan glikosidik. Biokonversi, terutama hidrolisis
5-8% kandungan lainnya (Kumar dkk., 2008). enzimatik dari material selulosa menjadi gula
Kertas merupakan produk dari kayu dan sederhana telah menjadi subjek penelitian yang
limbah organik yang banyak dibuang setiap intensif (Ahmadi dkk., 2010).
tahunnya. Penyusun utama kertas yaitu selulosa, Selulase, kelompok dari enzim hidrolisis
polimer glukosa yang terikat oleh ikatan 1,4- yang menghidrolisis ikatan β-glikosidik dari
glikosida (Ja’afaru dan Fagade, 2007). Biomassa selulosa dan terkait dengan xylooligosakarida,
selulosa merupakan molekul organik yang sangat merupakan enzim kunci dari fungsi potensial untuk
berlimpah di bumi (Fan dkk., 1987). Semua limbah sakarifikasi industri. Selulase umumnya terdapat
pada jamur dan bakteri (Chinedu dkk., 2010).
Diantara jamur selulosa, genus Trichoderma sp.,
Aspergillus sp., dan Penicillium sp. merupakan
produser selulase terkemuka.
Kebutuhan untuk penyediaan bahan bakar
alternatif terus meningkat seiring dengan
berkurangnya sumber bahan bakar fosil yang cepat.
Bahan bakar cair dapat diperoleh dari fermentasi
biomassa lignoselulotik. Penggunaan teknologi
yang lebih terjangkau seperti Solid-Stated
Fermentation (SSF) juga dapat menekan angka
pengeluaran produksi. SSF dilakukan dalam
preparasi enzim yang lebih terkonsentrasi sehingga
dapat diaplikasikan untuk konversi biomassa
(Mekala dkk., 2008). Berikut diagram
perbandingan proses Solid-Stated Fermentation
dengan proses fermentasi lainnya :
Gambar 1 Diagram Perbandingan Proses
Fermentasi
Dalam penelitian ini, peneliti menguji
potensi relatif sakarifikasi substrat limbah kertas
menggunakan mikroba A. oryzae, P. citrinum, dan
T. viride yang diisolasi dari material limbah
turunan berbeda. Selulosa kristalin digunakan
sebagai pembandingan untuk menilai dampak dari
berbagai limbah kertas pada sakarifikasi dan
produksi selulase oleh monokultur dan campuran
jamur selulotik P. citrinum, T. viride, dan A. oryzae
yang digunakan untuk meningkatkan degradasi dari
selulosa yang ada pada kertas saring, kertas koran,
kertas kantor, dan selulosa mikrokristalin.
Material dan Metode
Material Selulotik
Kertas saring (Whatman no 1), kertas koran,
kertas kantor digunakan sebagai substrat untuk
sakarifikasi dan produksi enzim selulase. Material
dipotong menjadi potongan kecil. Penggilingan
diselesaikan dengan Mixer Grinder. Kertas giling
digunakan sebagai substrat mikroba.
Tegangan pada Mikroba
Jamur P. citrinum NASC-3, A. oryzae
NASC-2, dan T. viride NASC-6 diisolasi dari
peluruhan limbah lignoselulosa dan diidentifikasi
berdasarkan morfologi, koloni, dan karakteristik
molekuler. Semua kultur dipelihara pada Potato
Dextrose Agar (PDA) yang miring dan disimpan
pada 4°C dan disubkultur sekali sebulan.
Sakarifikasi Limbah Kertas
Biodegradasi limbah kertas dipelajari dalam
keadaan solid dalam labu Erlenmeyer 250 ml
menggunakan jamur selulotik yang diisolasi dari
sumber alam. Lima gram limbah kertas yang
mengandung kelembapan 60% diambil dalam labu
Erlenmeyer (250 mL) yang disumbat dengan kapas
dan diautoklaf pada 121°C selama 15 menit. Satu
ml dari kultur yang mengandung 2.7 x 10 7 spora/ml
dari tujuh hari kultur jamur digunakan sebagai
inokulum untuk percobaan monokultur. Untuk
penelitian ko-kultur, larutan penyangga spora
diambil 1:1:1 dengan 2:2:2 sebagai rasio inokula.
Labu berbentuk kerucut diinkubasi pada 28 ± 2 °C
selama 30 hari di ruangan kultur. Labu terpisah
diperlakukan untuk mempelajari perubahan
komposisi dari limbah kertas. Pada tiap 5 hari
interval penelitian, semua isi labu disaring dan
dianalisis untuk mengukur aktifitas selulase, isi
protein, dan jumlah gula tereduksi.
Penentuan Aktifitas Selulase, Jumlah Reduksi
Gula, dan Konsentrasi Protein
 Pereduksian gula ditentukan dengan metode
DNS (Miller dkk., 1960) menggunakan glukosa
sebagai standar. Untuk protein, BSA (fraksi V,
Sigma) digunakan sebagai standar (Lowry dkk.,
1951).
Penentuan Konsentrasi Selulase:
Aktifitas selulase dilakukan
penentuan konsentrasinya dengan menggunakan
Karboksimetil selulosa (CMC) sebagai substrat.
Campuran reaksi mengandung 1 ml dari 1.0%
(w/v) CMC dalam larutan penyangga natrium
asetat 0.1M, pH 5.0, dan 0.5ml supernatan kultur
sel bebas. Campuran diinkubasi pada 50°C selama
30 hingga 60 menit. Gula reduksi yang dilepaskan
enzim diukur sebagai ekuivalen
menggunakan reagen asam dinitrosalisilat.
Campuran yang baru diinkubasi kembali selama 5
menit dalam tempat dengan air panas untuk
mengembangkan warna dan didinginkan dengan
cepat. Campuran reaksi dicairkan dengan tepat dan
diukur terhadap reagen blank pada 540 nm dalam
spektrofotometer UV-VIS. Konsentrasi glukosa
yang dihasilkan oleh enzim ditentukan dengan
membandingkan terhadap kurva strandar yang
identic dengan konsentrasi glukosa yang telah
diketahui (Mekala dkk., 2008). Satuan unit aktifitas
didefinisikan sebagai jumlah enzim
dibutuhkan untuk melepaskan 1µmol glukosa per
menit selama kondisi penentuan kualitas.
Penentuan Konsentrasi Protein:
Kandungan protein dari preparat enzim
mentah ditentukan dengan metode Lowry dkk.,
(1951) menggunakan serum albumin bovin (BSA)
sebagai standar.
Optimasi Sakarifikasi Kertas (Optimasi Produksi
Selulase)
Untuk menemukan suhu, pH,
inkubasi, dan konsentrasi substrat yang sesuai
untuk sakarifikasi kertas dengan tegangan mono
maupun campuran jamur yang dikultivasi,
divariasikan suhu dari 20°C-60°C, rentang pH 3-
6.5, rentang waktu inkubasi 2-30 hari, dan
konsentrasi substrat 1%-10% dengan menjaga
semua parameter lain tetap konstan selama 10 hari.
Menurut Mekala (2008), variasi variabel
melalui dalam proses produksi selulase menggunakan SSF
seperti suhu, waktu inkubasi dan konsentrasi
didefinisikan sebagai parameter penting yang
mempengaruhi produksi selulase. Variabel-variabel
ini dioptimasi untuk meningkatkan perolehan
selulase menggunakan desain percobaan kontak
permukaan Box-Behnken. Variabel yang terpilih
untuk dioptimasi, suhu, waktu inkubasi dan
glukosa konsentrasi, dinyatakan dalam kode masing-masing
sebagai X1, X2, dan X3. Respons terhadap variabel-
variabel dalam produksi selulase dapat dinyatakan
dalam model matematika polinomial orde 2 sebagai
berikut (Persamaan 1).
Dimana, Y adalah pengukuran respons (perolehan
selulase); βi, βii, dan βij merupakan koefisien regresi
serta X1-X3 tidak lain parameter yang diamati.
Untuk tiga variabel sistem, model persamaannya
yang menjadi seperti di bawah ini (Persamaan 2).
Y = β0 + β1X1 + β2X2 + β3X3 + β11X12 + β22X22 +
β33X32 + β12X1X2 + β13X1X3 + β23X2X3 …. (2)
Analisis regresi dan estimasi koefisien regresi
dilakukan menggunakan perangkat lunak Design
Expert ® (Statease Corp, USA). Ditentukan
pengaruh parameter individu dan kuadratik serta
dampak interaksi dalam produksi selulase
Analisis statistik
Variansi analisis (ANOVA) pada semua
waktu
data menggunakan paket statistik SAS (1985).
Nilai rata-rata dibandingkan dengan uji perbedaan
kecil yang signifikan (LSD) pada 5% tingkat monokultur jamur maupun campuran pada media
ketepatan. yang mengandung limbah kertas sebagai sumber
karbon. Sakarifikasi meningkat seiring
Hasil dan Pembahasan meningkatnya waktu inkubasi dan mencapai
Tabel 1, 2, dan 3 menggambarkan maksimum setelah 15 hari inkubasi untuk
sakarifikasi dari semua material kertas dan CMC monokultur sedangkan 10 hari untuk kultur
oleh P. citrinum, A. oryzae, dan T. viride maupun campuran. Lebih lanjut, seiring meningkatnya
campurannya. Kertas kantoran menunjukkan waktu inkubasi terjadi penurunan tingkat
kerentanan hidrolisis tertinggi, diikuti oleh kertas sakarifikasi. Oleh karena itu, waktu inkubasi 15
koran, kertas saring, dan CMC. Kertas kantor juga hari untuk monokultur dan 10 hari untuk kultur
memperlihatkan kerentanan tertinggi terhadap campuran ditemukan waktu optimal untuk
hidrolisis oleh selulase dari A. oryzae. Reduksi gula sakarifikasi. Optimasi terhadap waktu penting
tertinggi dilepaskan dari kertas kantor oleh P. sekali pada sakarifikasi oleh jamur (Kuhad &
citrinum diikuti oleh kertas koran, kertas saring, Singh, 1993). Penurunan sakarifikasi pada kultur
dan CMC. Akan tetapi, reduksi gula tertinggi yang mono ataupun campuran setelah 10 sampai 15 hari
diproduksi oleh A. oryzae adalah dari kertas koran waktu inkubasi mungkin disebabkan oleh
diikuti oleh kertas kantor, kertas saring, dan CMC. berkurangnya nutrisi dan akumulasi dari produk
Untuk meningkatkan tingkat sakarifikasi sampingan lainnya atau penahanan katabolik enzim
jamur, kultur dicampur dan diinkubasi dengan selulase karena dikeluarkannya glukosa.
semua material selulotik (Gambar 1). Campuran Gambar 2 menunjukan sakarifikasi
kultur dengan perbandingan 2:2:2 menghasilkan meningkat sejalan dengan peningkatan suhu,
hasil sakarifikasi tertinggi terhadap semua substrat. maksimum pada 30°C dengan mereduksi
Hasil tersebut cenderung sama dengan selulase dari konsentrasi gula untuk monokultur 1.5-2.5 ±2
P. funiculosum dan Trichoderma reesei pada mg/ml dan 4.5 ± 2 mg/ml untuk kultur campuran.
material selulosa yang diamati (Van Wyk, 1998). Seiring meningkatnya suhu, terjadi pengurangan
Laju sakarifikasi dapat ditingkatan oleh tingkat sakarifikasi. Hal ini mungkin terjadi karena
mengoptimasi kondisi pertumbuhan mikroba. fakta bahwa semakin meningkatnya suhu
Selama pertumbuhan mikroorganisme dalam media denaturasi sakarifikasi enzim selulase utama
yang mengandung limbah kertas, mereka (Solomon, B.O.1999). Suhu tinggi mungkin juga
memanfaatkan selulosa pada kertas sebagai sumber menghambat pertumbuhan mikroba (Mekala
karbon. Organisme tersebut memproduksi dan DKK., 2008) menunjukkan produksi selulase dan
mengeluarkan enzim selulase untuk degradasi sakarifikasi mencapai maksimum dalam labu
selulosa dan melepaskan glukosa. Proses inkubasi pada 33°C dan menurun dengan suhu
sakarifikasi kertas dapat ditingkatkan dengan tinggi.
mengoptimasi kondisi, seperti suhu, pH, waktu Gambar 3 menunjukkan di pH 4.5 sangat
inkubasi, dan konsentrasi substrat. Media sedikit sakarifikasi kertas 1 sampai 2.4 mg/ml oleh
sakarifikasi disiapkan dan kultur diinokulasi pada monokultur maupun campuran. Terjadi
rasio 2:2:2. peningkatan sakarifikasi seiring meningkatnya pH
Gambar 1 menunjukkan dampak waktu dan maksimum pada pH 5.5. Kemudian setelah pH
inkubasi pada sakarifikasi limbah kertas oleh 5.5 terjadi penurunan tingkat sakarifikasi. Hal ini
mungkin terjadi karena fakta bahwa selulase
merupakan protein asam dan sangat berdampak
pada pH netral (Chandra dkk., 2009).
Gambar 4 menunjukan sakarifikasi tertinggi
secara monokultur diperoleh pada konsentrasi
substrat 3% sedangkan 5% pada kultur campuran.
Hal ini terjadi karena kultur campuran mengandung
semua enzim kompleks dari enzim selulase. Oleh
Tabel 3 Produksi protein selama sakarifikasi
karena itu, enzim tersebut dapat mengkonversikan limbah kertas yang berbeda dan Karboksimetil
konsentrasi tinggi dari kertas menjadi gula. selulosa dengan monokultur dan kultur campuran
dari jamur selulotik

Tabel 1 Total gula reduksi yang dihasilkan dari

limbah kertas dan Karboksimetil selulosa pada
rasio campuran optimal dari P. citrinum, A. oryzae Gambar 2 Dampak waktu inkubasi pada
dan T. viride untuk perlakuan monokultur sakarifikasi limbah kertas oleh Trichoderma viride,
Asergillus oryzae, Penicillium citrinum dan kultur
OP-Kertas Kantor, NP-Koran, FP-Kertas saring,
CMC-Karboksimetil Selulosa, Mixed culture 1- campuran
1:1:1rasio dari tiga kultur, Mixed culture 2-2:2:2
rasio dari kultur

Gambar 3 Dampak suhu pada sakarifikasi limbah

Tabel 2 Produksi enzim selulase selama kertas oleh Trichoderma viride, Asergillus oryzae,
sakarifikasi limbah kertas yang berbeda dan Penicillium citrinum dan kultur campuran
Karboksimetil selulosa dengan monokultur dan
kultur campuran dari jamur selulotik
 Daftar Pustaka
Ahmadi, A.R., Ghoorchian, H., Hajihosaini,
R. and Khanifar, J. 2010. Determination of
the amount of protein and amino acids
extracted from the microbial protein (SCP)
of lignocellulosic wastes. Pakistan Journal
of Biological Sciences, 13, 355-361.
Chandra, M., A. Karala, P.K. Sharma and

Gambar 4 Dampak pH pada sakarifikasi limbah R.S. Sangwan. 2009. Cellulase production

kertas oleh Trichoderma viride, Asergillus oryzae, by sixTrichoderma spp., fermented on

Penicillium citrinum dan kultur campuran medicinal plant processings. J. Ind.

Microbiol. Biotechnol, 36, 605-9.
Chinedu, S.N., Eni, A.O., Adeniyi A.I. and
Ayangbemi, J.A. 2010. Assessment of
growth and cellulase production of wild-
type microfungi isolated from Ota, Nigeria.
Asian Journal of Plant Science, 9, 118-125.
F. T. Fan, M. M. Gharpuray and Y. N.
Lee. 1987. Cellulose Hydrolysis Berlin,
Germany: Springer-Verlag 1987, 3, 1-68.

Gambar 5 Dampak konsentrasi substrat pada Kuhad, R.C. and A. Singh. 1993.

sakarifikasi limbah kertas oleh Trichoderma viride, Enhanced production of cellulases by

Asergillus oryzae, Penicillium citrinum dan kultur Penicillium citrinum in solid state

campuran fermentation of cellulosic residue. World J.

Microbiol. Biotechnol., 9,100-101.

Kesimpulan Kumar, R., S. Singh and O.V. Singh. 2008.

Dari data di atas, peneliti menyimpulkan Bioconversion of lignocellulosic biomass:

bahwa sakarifikasi pada kertas terjadi dengan baik Biochemical and molecular perspectives. J.

menggunakan jamur A. oryzae, T.viride dan Ind. Microbiol. Biotechnol., 35: 377-391.

P.citrinum. Maksimum sakarifikasi diperoleh Ja afaru, M.I. and Fagade, O.E. 2007.

dengan kultur campuran jamur dalam rasio 2:2:2 Cellulase production and enzymatic

dan suhu 30°C, pH 5.5, waktu inkubasi 10 hari dan hydrolysis of some selected local

konsentrasi substrat 5%. Dari semua substrat, lignocellulosic substrates by a strain of

kertas kantor ditemukan menjadi pereduksi gula Aspergillus niger. Research Journal of

terbaik dalam sakarifikasi. Produksi reduksi gula Biological Sciences, 2, 13-16.

dari kertas dapat digunakan di masa depan untuk Louime, C., Uckelmann, H. 2008. Cellulosic

memproduksi etanol dsb. Penelitian ini mungkin ethanol: securing the planet future energy

berguna dalam konversi dan pemanfaatan biomassa needs. Int. J. Mol. Sci., 9:

terbarukan dan pengurangan polusi lingkungan. 838 841.

Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, N.J., and
Randall, R.J. 1951. Protein measurements
with the folin phenol reagent. J. Biol.
Chem., 193: 265 215.
Mekala, N.K., Singhania, R.R., Sukumaran, and
R.K., Pandey. 2008. Cellulose production
under solid-state fermentation
Trichoderma ressei
RUT C30: Statistical optimization of
process parameters. Appl. Biochem.
Biotechnol., 151: 122 31.
Miller,G.L., Blum, R., Glennon, W.E., and Burton,
A.L. 1960. Measurements
carboxymethylcellulase activity.
Anal. Biochem., 2: 127 132.
Solomon, B.O., Amigun, B., Betiku, E.,
Ojumu, T.V., and Layokun, S.K. 1999.
Optimization of cellulase production by
Aspergillus flavus Linn Isolate NSPR101
by Grown on Bagasse. JNSCHE, 16: 61 68
Van Wyk, J.P.H. 1998. Saccharification of
paper products by cellulase from
Penicillium funiculosum and Trichoderma
reesei. Biomass Bioenergy, In press.
of