resistensi multidrug sekarang muncul di seluruh dunia dan pada tingkat yang mengkhawatirkan di

antara berbagai spesies bakteri, menyebabkan

baik masyarakat diperoleh dan infeksi nosokomial (13). Itu

baris terakhir dari terapi, carbapenems, sekarang sering diperlukan untuk

mengobati infeksi nosokomial, dan meningkatkan ketahanan terhadap kelas ini

ß-laktam meninggalkan kita dengan hampir tidak ada obat yang efektif untuk infeksi

karena Gram-negatif bakteri (13). Namun, Ketahanan carbapenem Enterobacteriaceae dan

Pseudomonas spp. telah semakin ditemukan (5, 8). Dengan demikian, deteksi produsen
carbapenemase

di laboratorium klinik sekarang sangat penting untuk penentuan skema terapi yang tepat dan
pelaksanaan langkah pengendalian infeksi (7, 9). Baru-baru ini, NP Carba

Tes telah dikembangkan untuk identifikasi awal carbapenemases di Enterobacteriaceae (10). Teknik
ini, berdasarkan pada

deteksi hidrolisis pada cincin B-laktam dari carbapenem, imipenem,yang cepat, sensitif, dan spesifik
(10). Berbagai carbapenemases di Enterobacteriaceae (8) dan Pseudomonas spp. (3, 5)

telah dilaporkan. Mereka dikelompokkan ke dalam tiga kelas menurut

identitas asam amino mereka.

Mereka termasuk Ambler kelas A (kebanyakan KPC), kelas B (Metallo-ß-laktamase [MBLs] dari
VIM,IMP, dan jenis NDM), dan kelas D (kebanyakan Oxa-48). Amblerkelas A ß-laktamase yang
setidaknya sebagian dihambat oleh ß-laktamaseinhibitor seperti asam klavulanat dan Tazobactam,
sedangkan MBLsdihambat oleh chelators kation divalen seperti EDTA (2, 6, 7, 9).dalam tes
komplementer vitro berdasarkan pada inhibisi

aktivitas carbapenemase memerlukan tambahan 24- 48-h

kulture step (2, 6) dan tidak memiliki sensitivitas tinggi dan spesifisitas, terutama ketika mekanisme
tambahan perlawanan yang terjadi atau ketika isolat menunjukkan hanya resistance terhadap
carbapenem tingkat rendah (11).Selain itu, di samping itu, deteksi dari produsen Oxa-48 adalah sejak
tidak ada inhibitor kimia yang tersedia (s) untuk carbapenemases (4). Oleh karena itu, kami telah
mengembangkan tes Carba NPVersi II untuk secara cepat mengidentifikasi jenis carbapenemase
yang dihasilkan di Enterobacteriaceae dan P. Aeruginosa.

Sebuah panel carbapenemase-memproduksi Enterobacteriaceae (n 97) dan P. aeruginosa (n 21)

strain dilibatkan dalam penelitian tersebut.Jenis carbapenemase adalah sebagai berikut: KPC (n 20),
UKM (n 20), SME

(n

2), VIM (n

20), IMP (n

20), NDM (n
20), IMI (n

1), SPM (n 1), AIM (n 3), GIM (n 6), OXA-48 (n 20) (Oxa-181 merupakan turunan dari Oxa-48). Di
Selain itu, salah satu freundii Citrobacter isolat coproducing yang carbapenemases NDM-1, VIM-4,
dan Oxa-181 (12) ini dimasukkan.Strain non-carbapenemase penghasil Enterobacteriaceae(N 40, 6
yang tahan terhadap carbapenems) dan P. aeruginosa (n50, setengah yang tahan terhadap
carbapenems) digunakan sebagai kontrol (1,10). Semua strain sebelumnya telah ditandai untuk
kadar ß-laktamase dan mekanisme resistensi carbapenemase ditingkat molekuler.

The Carba NP tes II adalah sebagai berikut. Dua inokulasi yang dikalibrasi

loop (10? l) dari strain yang diuji langsung pulih dari agar Mueller-Hinton (Becton-Dickinson, Le-Pont-
de-Chaix, Prancis)

yang disuspensi kembali dalam 200 l Tris-HCl buffer lisis (B-PER II bakteri ekstraksi protein reagen;?
Thermo Scientific [Pierce],

Rockford, IL) (20 mM), dikenakan prosedur vortex selama 1 menit,

dan selanjutnya diinkubasi pada suhu kamar selama 30 menit. Suspensi bakteri ini disentrifugasi
pada 10.000 g pada suhu kamar selama 5 menit. Tiga puluh mikroliter supernatan, sesuai dengan
suspensi bakteri enzimatik, dicampur dalam

microwell dengan 100 l dari (i) solusi fenol merah diencerkan mengandung 0,1 mM ZnSO4 (Merck
Millipore, Guyancourt, Prancis), (ii)

diencerkan larutan fenol merah mengandung 0,1 mM ZnSO4 dan 3

mg / ml imipenem monohydrate (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin Fallavier, Prancis), (iii) diencerkan

larutan fenol merah mengandung 0,1 mM ZnSO4, 3 mg / ml imipenem monohydrate, dan 4

mg / ml Tazobactam garam natrium (Sigma-Aldrich), dan (iv) solusi fenol merah diencerkan
mengandung 3 mg / ml imipenem

monohydrate dan 0,003 M EDTA