PENELITIAN
ORIGINAL
Diedit
oleh:
Matthew B. Lawrenz,
University of Louisville,
Amerika Serikat
Diperiksa oleh:
Carlos J. Orihuela,
University of Alabama di Birmingham,
Amerika Serikat
Marco Rinaldo Oggioni,
University of Leicester, UK
*Korespondensi:
Elsa N.Bou Ghanem
elsa.bou_ghanem@tufts.edu
Alexander Panda
alexander.panda@tufts.edu
†
penulis ini telah memberikan kontribusi
sama untuk pekerjaan ini.
diterima: 27 Februari 2017
diterima: 12 April 2017
Diterbitkan: 3 Mei 2017
Kutipan:
Bou Ghanem EN, Lee JN, Joma BH,
Meydani SN, Leong JM dan Panda A
(2017) The Alpha-tokoferol Bentuk
Vitamin E Meningkatkan Elastase
Kegiatan PMN Manusia dan
Kemampuan mereka untuk Membunuh
Streptococcus pneumoniae. Depan.
Sel. Menulari. Microbiol. 7: 161.
doi:10,3389 / fcimb.2017.00161
diterbitkan: 3 Mei 2017
doi: 10,3389 / fcimb.2017.00161
Alpha-tokoferol Bentuk Vitamin E
Meningkatkan Elastase Kegiatan PMN
manusia dan Kemampuan mereka
untuk Membunuh Streptococcus
pneumoniae
Elsa N. Bou Ghanem 1*, James N. Lee 1, Basma H. Joma 2, Simin N. Meydani 3
†. John M. Leong 1 † dan Alexander Panda 3*†
1
Departemen Biologi Molekuler dan Mikrobiologi di Tufts, University School of Medicine, Boston, MA, USA, 2 Program
Imunologi, Sackler Sekolah Pascasarjana Ilmu Biomedis, Tufts University, Boston, MA, USA, 3 Jean Mayer USDA Human
Nutrition Research Centre on Aging di Tufts University, Boston MA, USA
Meskipun ketersediaan vaksin, Streptococcus pneumoniae tetap menjadi penyebab utama
infeksi yang mengancam jiwa, seperti pneumonia, bakteremia dan meningitis. leukosit
polimorfonuklear (PMN) adalah penentu utama tentu saja penyakit, karena pertahanan tuan
rumah yang optimal membutuhkan respon PMN paru kuat awal untuk mengontrol jumlah
bakteri diikuti oleh modulasi respon ini kemudian di infeksi. Orang tua, yang
memanifestasikan penurunan umum dalam fungsi kekebalan tubuh dan tingkat basal yang
lebih tinggi dari peradangan, berada pada peningkatan risiko mengembangkan pneumonia
pneumokokus. Menggunakan model infeksi tikus berusia, kami sebelumnya menunjukkan
bahwa suplementasi lisan dengan bentuk alpha-tocopherol vitamin E (α-Toc) menurunkan
peradangan paru, sebagian oleh modulasi migrasi neutrofil di epitel paru-paru ke dalam
ruang alveolar, dan membalikkan penurunan terkait usia dalam perlawanan pneumonia
pneumokokus. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji pengaruhα-Toc pada
kemampuan neutrofil diisolasi dari muda (22-35 tahun) atau usia lanjut (65-69 tahun)
individu untuk bermigrasi di monolayers sel epitel dalam menanggapi S. pneumoniae dan
membunuh pneumokokus melengkapi-opsonized. Kami menemukan bahwa tingkat basal
migrasi transepitelial pneumokokus yang diinduksi oleh PMN dari donor muda atau tua
tidak bisa dibedakan, menunjukkan bahwa eksaserbasi terkait usia peradangan paru bukan
karena sifat intrinsik dari PMN individu lanjut usia tetapi lebih mungkin mencerminkan
lingkungan inflamasi paru-paru berusia. Konsisten dengan aktivitas anti-
inflamasi,αpengobatan -Toc berkurang migrasi PMN tanpa memandang usia donor. Tanpa
diduga, tidak seperti penelitian sebelumnya yang menunjukkan pembunuhan miskin bakteri
antibodi-opsonized, kami menemukan bahwa PMN donor lansia lebih efisien membunuh
pelengkap-opsonized bakteri ex vivo daripada rekan-rekan mereka yang lebih muda. Kami
juga menemukan bahwa aktivitas antimikroba yang tinggi di PMN dari donor yang lebih tua
berkorelasi dengan peningkatan aktivitas neutrofil elastase, protease serin yang diperlukan
untuk membunuh pneumokokus. Khususnya, inkubasi denganα-Toc peningkatan aktivitas
elastase PMN dari donor muda dan meningkatkan kemampuan mereka untuk membunuh
pneumokokus melengkapi-opsonized. Temuan ini menunjukkan bahwaα-Toc adalah
modulator ampuh respon PMN dan merupakan intervensi gizi potensial untuk memerangi
infeksi pneumokokus.
Kata kunci: E, penuaan, neutrofil, S. pneumoniae, infeksi, peradangan, protease serin vitamin
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 1 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
PENGANTAR
Meskipun ketersediaan vaksin dan antibiotik, Streptococcus
pneumoniae (pneumokokus) masih menyebabkan penyakit
pneumokokus invasif, termasuk pneumonia, meningitis dan
bakteremia (Chong dan Street, 2008), Terutama pada individu>
65 tahun (Plosker 2015). Di AS, rekening tua untuk 60% dari
rawat inap karena infeksi ini, sehingga perkiraan biaya langsung
dari $ 2,5 miliar per tahun (Wroe et al., 2012). Sebuah jenis sel
yang memainkan peran penting dalam pertahanan host terhadap
infeksi pneumoniae S. adalah neutrofil (polymorphonuclear
leukosit, atau PMN) (Garvy dan Harmsen, 1996; Bou Ghanem et
al., 2015). Studi dari laboratorium kami dan lain-lain telah
menunjukkan yang PMN diperlukan untuk mengontrol beban
bakteri di awal proses infeksi (Garvy dan Harmsen, 1996; Hahn
et al., 2011; Bou Ghanem et al., 2015), tapi kurang terkontrol
PMN masuknya ke dalam saluran udara paru-paru dapat
menyebabkan kerusakan jaringan dan mempromosikan
penyebaran infeksi (Bhowmick et al., 2013). Bahkan, kami
menemukan bahwa immunodepletion dari PMN 18 jam setelah
infeksi dipromosikan kelangsungan hidup tuan rumah dalam
model murine pneumonia pneumokokus (Bou Ghanem et al.,
2015). Temuan ini menunjukkan bahwa kelangsungan hidup
tuan memerlukan respon PMN segera diikuti oleh resolusi
kemudian dalam perjalanan infeksi paru-paru S. pneumoniae.
Kami sebelumnya menunjukkan bahwa dibandingkan
dengan tikus muda, tikus berusia dipamerkan perekrutan
PMN yang lebih besar ke dalam paru-paru berikut S.
pneumoniae tantangan (Bou Ghanem et al., 2014). Pada
manusia, angka PMN dasar meningkat pada paru-paru
relawan lanjut usia yang sehat (Pignatti et al., 2011), Dan
orang tua pasien S. pneumoniae yang terinfeksi
menunjukkan infiltrasi lebih tinggi dari neutrofil dalam
jaringan paru-paru dibandingkan dengan pasien yang lebih
muda (Menter et al., 2014). Potensi Peran meningkat beban
bakteri, perilaku PMN intrinsik, atau sinyal oleh lingkungan
paru di memperburuk masuknya PMN pada individu berusia
jelas. sitokin inflamasi, termasuk ampuh PMN
chemoatractant IL-8, yang ditinggikan (Meyer et al., 1996,
1998; Krone et al., 2014) di paru-paru dari orang tua. Namun,
respon kemotaktik dari PMN yang diisolasi dari donor tua
untuk dahak dari pasien S. pneumoniae tumpul dibandingkan
dengan PMN dari donor yang lebih muda (Sapey et al.,
2014).
E FFI efisien pembunuhan S. pneumoniae oleh PMN manusia
membutuhkan fagositosis (Standish dan Weiser, 2009). Kedua
komplemen dan antibodi dapat memediasi serapan
opsonophagocytic dan pembunuhan S. pneumoniae (Esposito et
al., 1990). Pneumokokus yang opsonized dengan kombinasi
kelinci komplemen dan antibodi dari sera dari donor muda
diimunisasi tewas kurang e FFI sien oleh PMN dari donor lansia
daripada rekan-rekan muda mereka, menunjukkan antibodi itu
dan / atau melengkapi dimediasi pembunuhan opsonophagocytic
oleh PMN berkurang dengan usia (Simell et al., 2011).
Penurunan terkait usia dalam pembunuhan antibodi-mediated
(Fulop et al., 1985) Mungkin terkait dengan penurunan tingkat
dan kapasitas opsonic antibodi terhadap pneumokokus (Taman
dan Nahm, 2011; Simell et al., 2011) Serta FcRIII (CD16)
ekspresi PMN (Butcher et al., 2001). Dengan tidak adanya
respon antibodi, individu mengandalkan pada komplemen untuk
opsonisasi (Standish dan Weiser, 2009;
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
Dalia et al., 2010), dan aktivitas komplemen serum dan PMN
melengkapi reseptor ekspresi tetap tidak berubah atau
meningkatkan atas penuaan (Bellavia et al., 1999; Simell et
al., 2011). Namun, e ff ect penuaan pada komplemen-
dimediasi opsonophagocytic pembunuhan masih belum
jelas.
Pneumokokus pembunuhan oleh PMN independen dari ledakan
oksidatif (Marriott et al., 2008; Standish dan Weiser, 2009) Tapi
tergantung pada serin protease cathepsin G (CG), neutrofil elastase
(NE) dan proteinase 3 (Standish dan Weiser, 2009; Hahn et al.,
2011). Enzim-enzim degradatif biasanya dikemas menjadi butiran
azurophilic selama perkembangan PMN dalam sumsum tulang
(Gullberg et al., 1997; Pham, 2006; Cowland dan Borregaard, 2016).
Mereka diduga akan dirilis pada fusi PMN granul dengan
fagolisosom setelah menelan mikroba (Pham 2006) Tetapi juga
dapat dilepaskan ke dalam ruang ekstraselular untuk membunuh
mikroba independen fagositosis (Pham, 2006; Standish dan Weiser,
2009). penghambatan enzim protease ini berkurang pembunuhan
intraseluler dari pneumokokus oleh PMN (Standish dan Weiser,
2009) Dan tikus kekurangan untuk neutrofil elastase dan / atau
cathepsin G menunjukkan peningkatan kerentanan terhadap infeksi
paru-paru pneumokokus (Hahn et al., 2011). Menariknya, sera dan
bronchoalveolar lavage dari donor> 65 tahun pameran berusia
peningkatan kadar neutrofil elastase dan aktivitas (Varga dkk., 1992;
Meyer et al., 1998; Paczek et al., 2009).
Tua berada pada peningkatan risiko kurangnya asupan
vitamin E (Panemangalore dan Lee, 1992; Ryan et al., 1992),
Anti-oksidan dengan fungsi immunoregulatory ampuh (Wu dan
Meydani, 2008). Beberapa bentuk alami dari vitamin E ada (Pae
et al., 2012), Dan suplemen diet alpha-tocopherol, bentuk yang
paling bioavailable, ditunjukkan untuk meningkatkan respon
imun adaptif (Meydani et al., 1997; Adolfsson et al., 2001; Marko
et al., 2007). Menggunakan model murine, kami sebelumnya
menunjukkan bahwa suplementasi dengan alpha-tocopherol
vitamin E (disebut di sini sebagai α-Toc) dibalik kerentanan
terkait usia infeksi pneumokokus setidaknya sebagian oleh
modulasi perekrutan paru dari PMN, menghasilkan kali lipat
1.000 beban paru bakteri yang lebih rendah dan pengendalian
infeksi (Bou Ghanem et al., 2014). a-Toc menghambat migrasi
PMN diisolasi dari donor muda di seluruh berbudaya monolayers
sel epitel dalam menanggapi infeksi S. pneumoniae, mengubah
ekspresi beberapa PMN dan molekul adhesi sel epitel yang
terlibat dalam migrasi (Bou Ghanem et al., 2014). E ff ect vitamin
E pada migrasi dan tanggapan antibakteri dari PMN, dan apakah
keampuhan e FFI di modulasi ini ers ff tanggapan di antara
muda vs donor tua, tetap belum diselidiki.
BAHAN DAN METODE
Donor
Semua prosedur dalam penelitian ini telah disetujui oleh Tufts
Medical Center Manusia Investigasi Review Board (IRB). Muda
(22-35 tahun) dan lanjut usia (65-69 tahun) relawan manusia
yang sehat direkrut melalui HNRCA Relawan Departemen
Pelayanan dan Departemen Biologi Molekuler dan Mikrobiologi,
Tufts University School of Medicine. Semua mata pelajaran
terdaftar ditandatangani
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 2 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
IRB disetujui bentuk persetujuan. Individu yang hamil,
minum obat atau melaporkan gejala indikasi infeksi dalam
sebelum 2 minggu dikeluarkan dari penelitian. Darah
diambil 08:00-10:00 dan studi subjek diminta untuk tidak
memiliki asupan makanan setelah tengah malam pada
hari imbang darah.
bakteri
Streptococcus pneumoniae TIGR4 regangan (serotipe 4),
◦
ditanam pada 37 C dengan 5% CO2di Todd-Hewitt kaldu
(BD Biosciences) ditambah dengan 0,5% ekstrak ragi dan
Oxyrase (Oxyrase) sampai fase pertengahan eksponensial.
◦ 5
Aliquots kemudian dibekukan pada -80 C di media
pertumbuhan dengan 25% (v / v) gliserol. Sebelum
digunakan, aliquot bakteri dicairkan di atas es, dicuci sekali
dan diencerkan dalam PBS untuk konsentrasi yang
diperlukan. titer bakteri dikonfirmasi oleh plating di piring
Tryptic Soy Agar dilengkapi dengan agar-agar 5% darah
domba (Timur Laut Laboratory Services).
Isolasi PMN Manusia
Seluruh darah diambil menggunakan asam sitrat /
dextrose sebagai anti-koagulan. PMN kemudian
dimurnikan menggunakan gelatin sedimentasi 2% seperti
yang dijelaskan sebelumnya (Bou Ghanem et al., 2014).
Metode ini memungkinkan untuk isolasi PMN aktif
dengan~90% kemurnian.
In vitro Vitamin E Pengobatan PMN
Sebuah solusi saham vitamin E (ADM) dari 30 mg / ml d-α-
tokoferol dalam etanol disiapkan. Untuk meningkatkan
serapan seluler (Marko et al., 2007) larutan stok diencerkan
dalam FBS ke konsentrasi akhir 2 mg / ml dan diinkubasi
◦ ditampilkan).
selama 30 menit pada 37 C dengan vortexing lembut pada
7
interval 10 menit. PMN (2 × 10 sel / ml) diinkubasi dengan
bentuk α-tokoferol vitamin E (α-Toc) pada konsentrasi akhir
dari 25 ug / ml atau dengan 0,06% etanol sebagai kontrol
kendaraan di HBSS kurang kalsium dan magnesium selama
1 jam, dicuci dan kemudian ditambahkan ke Transwells
untuk uji migrasi atau digunakan dalam uji opsonophagocytic
(rinci di bawah).
PMN Migrasi Assay di Sel Lung
Epitel
Transmigrasi assay dilakukan seperti yang dijelaskan
sebelumnya (Bou Ghanem et al., 2014). Secara singkat,
Manusia paru mucoepidermoid karsinoma yang berasal NCI-
H292 (H292) (ATCC) sel unggulan di terbalik Transwell
2 Semua analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Prism5
menyaring kolagen-dilapisi Transwell filter (0,33 cm , Corning
Life Sciences) dan kemudian dibiarkan tumbuh dan polarisasi
selama 1 minggu di RPMI 1640 media (ATCC) dengan 2 mM L-
glutamine, 10% FBS (Invitrogen) dan 100 U penisilin /
streptomisin. Pada hari uji migrasi, lapisan tunggal epitel dicuci
keluar dari media yang mengandung antibiotik dan
disetimbangkan di HBSS selama 30 menit. Sisi apikal
monolayers terinfeksi dengan S. pneumoniae pada multiplisitas
infeksi (MOI) dari 20 selama 2,5 jam. sumur yang tidak terinfeksi
diobati dengan HBSS. Para monolayers dicuci dan ditempatkan
ke dalam piring 24-baik. 600 ml HBSS ditambahkan ke bawah
6
(apikal) chamber dan 100 ml PMN (1 × 10 ) Ditambahkan ke
atas (basolateral)
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
ruang. PMN yang bertransmigrasi ke ruang apikal
dikumpulkan dan segaris di 10% Triton-X 100. neutrofil
Dimigrasikan yang kuantitatif menilai menggunakan
myeloperoxidase ELISA mengikuti uji mapan (McCormick et
al., 1995) Di mana pengenceran serial nomor yang dikenal
neutrofil digunakan untuk membangun kurva standar. Untuk
setiap donor rata-rata migrasi dari sumur rangkap tiga per
kondisi dinilai dan diplot.
Opsonophagocytic Membunuh Assay
Kemampuan PMN manusia untuk membunuh pneumokokus
dinilai ex vivo seperti yang dijelaskan sebelumnya (Dalia et al.,
2010) Dengan beberapa modifikasi. Secara singkat, 5 × 10
3
PMN diinkubasi dengan 1 × 10 bakteri tumbuh hingga
pertengahan fase log dan pra-opsonized dengan 10 ml kelinci
pelengkap (Pel-freez) di 200 reaksi ml di Hank bu ff er / 0.1%
◦
gelatin. Reaksi diinkubasi berputar selama 45 menit pada 37 C.
Persen pembunuhan dibandingkan dengan incubations tanpa
PMN ditentukan dengan plating pengenceran serial di piring agar
darah. Untuk setiap donor total enam ulangan dilakukan dan n =
3 yang berlapis untuk menghitung e FFI efisiensi membunuh dan
tiga lainnya digunakan untuk kuantifikasi protease serin
(dijelaskan di bawah). Untuk mengukur apakah penyerapan
bakteri dengan PMN menurun dengan usia, kami mengikuti uji
diterbitkan sebelumnya di mana bakteri pre-label dengan
isothiocyanate Fluorescein (FITC) pewarna dan fagositosis
dinilai oleh aliran cytometry Selain berikut tripan biru yang
memuaskan setiap sinyal ekstraseluler memungkinkan deteksi
bakteri diinternalisasi (Dalia et al., 2010). Kami melihat usia yang
tidak memiliki e ff ect persentase PMN yang FITC-positif, namun,
meskipun FITC-label bakteri tidak memiliki signifikan e ff ect
pada viabilitas bakteri langsung, hal itu mengganggu
kemampuan PMN untuk membunuh pneumokokus (data tidak
Cathepsin G dan neutrofil Elastase Tes
Untuk setiap donor, dikumpulkan PMN pelet dari tiga
6
reaksi opsonophagocytic (1,5 × 10 PMN) segaris dengan
300 ml dari Cathepsin G Activity Assay Kit (Abcam) lisis
bu ff er. tingkat PMN elastase (Abcam PMN Elastase
Manusia ELISA Kit) dan aktivitas (Abcam PMN Elastase
Fluorometric Activity Assay Kit) serta tingkat Cathepsin G
(Aviva Sistem Biologi CTSG Manusia ELISA Kit) dan
aktivitas (Abcam Cathepsin G Activity Assay Kit) dalam
sel pelet kemudian ditentukan petunjuk produsen berikut
ini.
statistika
untuk Macintosh (Grafik Pad). D'Agostino & Pearson uji
normalitas omnibus digunakan untuk menentukan apakah data
terdistribusi secara normal. Dipasangkan mahasiswa t-tes,
berpasangan siswa t-test atau uji Mann-Whitney digunakan
untuk perbandingan antara kelompok seperti yang ditunjukkan.
tes Pearson atau Spearman digunakan untuk menentukan
korelasi. Satu sampel t-test digunakan untuk mengukur apakah
α-Toc -indices berada di ff erent dari 1,0. Semua perbandingan
dengan p <0,05 dianggap signifikan di ff erent. poin individu
yang mewakili data dari donor tunggal
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 3 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
diplotkan. Garis dan kesalahan bar mewakili nilai-nilai
mean ± SEM.
HASIL
Penuaan tidak berdampak pada PMN
transepitelial Migrasi di Respon untuk
Infeksi pneumokokus
Sebelum studi menunjukkan bahwa penuaan dikaitkan
dengan peningkatan perekrutan PMN ke dalam paru-paru
setelah infeksi S. pneumoniae (Bou Ghanem et al, 2014.;
Menter et al., 2014). Untuk menguji apakah PMN dari
individu lansia memiliki kemampuan intrinsik ditingkatkan
untuk bermigrasi dalam menanggapi infeksi pneumokokus,
kami mengukur migrasi PMN di sel epitel paru-paru in vitro.
monolayers terpolarisasi H292 sel epitel manusia di
Transwell filter yang mock-terinfeksi atau apikal terinfeksi S.
pneumoniae TIGR4 pada MOI 20. PMN dari muda (22-35)
atau lanjut usia (65-69) relawan manusia yang sehat
kemudian ditambahkan ke sisi basolateral dan migrasi PMN
kumulatif diukur setelah 120 menit. Tidak ada migrasi
terdeteksi diamati dengan tidak adanya infeksi pada kedua
kelompok (data tidak ditampilkan). Seperti yang diamati
sebelumnya (Bou Ghanem et al., 2014), S. pneumoniae
Infeksi menimbulkan gerakan trans-epitel yang kuat dari
PMN dari semua donor muda, dengan beberapa variasi
dalam kemampuan PMN dari donor di ff erent untuk
5
bermigrasi (2,7 ± 1,9 × 10 ; Gambar 1A). Transepitelial
5 dalam menanggapi infeksi pneumokokus dari donor muda dan
migrasi oleh PMN diisolasi dari donor lansia (2,6 ± 1,4 × 10 ;
Gambar 1A) Tidak bisa dibedakan dari yang kontrol muda.
PMN migrasi di epitel dalam menanggapi chemoattractant
peptida N-formil-methionyl-leucyl-fenilalanin (fMLP) juga
dibedakan antara kelompok umur (Gambar 1B).
GAMBAR 1 | Penuaan tidak berdampak pada migrasi transepitelial PMN
dalam menanggapi infeksi pneumokokus.Jumlah PMN yang bermigrasi dari
basolateral ke sisi apikal sel epitel H292 terpolarisasi dalam menanggapi (A)
infeksi pneumokokus atau (B) fMLP diukur oleh MPO ELISA (lihat Bahan dan
Metode). Data dari 6 donor muda dan 8 donor lansia yang akan ditampilkan.
Untuk setiap donor rata-rata jumlah PMN bermigrasi dari tiga ulangan teknis
ditampilkan. Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam migrasi antara kelompok
umur dengan t-test berpasangan Student.
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
α-Toc Mengurangi Pneumococcus-Induced
Transepitelial Migrasi dari PMN dari
Kedua Young dan Donor Lansia
Kami sebelumnya menemukan bahwa vitamin E meringankan
respon inflamasi berbahaya selama infeksi pneumokokus tikus
berusia sebagian karena yang ect langsung e ff migrasi PMN
(Bou Ghanem et al., 2014). Untuk menguji e ff ect vitamin E
pada respon transmigrasi PMN dari individu lansia, PMN yang
pra-perawatan dengan 25 ug / ml bentuk α-tokoferol vitamin E
(α-Toc), konsentrasi yang ditemukan sebelumnya untuk
menumpulkan migrasi PMN dari donor muda dan dalam rentang
tingkat diukur dalam plasma manusia mengambil suplemen
harian 200 Unit Internasional vitamin E (Meydani et al., 1997). Ini
konsentrasi α-Toc tidak memiliki e ff ect di kedua PMN atau
viabilitas bakteri (data tidak ditampilkan) (Bou Ghanem et al.,
2014). pengobatan α-Toc secara signifikan mengurangi migrasi
PMN di 5 dari 8 donor tua dan 4 dari 6 donor muda diuji (p <0,05
dengan uji-t berpasangan). Untuk lebih teliti menganalisis
besarnya e ff ect dari α-Toc, untuk PMN dari setiap individu diuji
untuk transepitelial migrasi dengan adanya atau tidak adanya α-
Toc, kami menghitung “indeks migrasi α-Toc PMN,” yang
merupakan rasio migrasi di hadapan α-Toc migrasi dalam
ketiadaan (Gambar 2). Seperti yang diamati sebelumnya,
pengobatan α-Toc tidak memiliki e ff ect migrasi fMLP-diinduksi
dari PMN dari donor muda (Bou Ghanem et al., 2014), Dan di
sini kami menemukan bahwa α-Toc juga tidak punya e ff ect
pada migrasi PMN dari donor berusia, dengan indeks migrasi α-
Toc mendekati 1,0 (Gambar 2A). Sebaliknya, PMN migrasi
tua berkurang dengan pengobatan α-Toc (Gambar 2B), Dengan
α-Toc indeks migrasi rata-rata 0,66 dan 0,83, masing-masing.
Meskipun migrasi indeks α-Toc tidak signifikan di ff erent antara
kelompok umur (p = 0,39 yang diukur dengan tes t), pengobatan
α-Toc secara signifikan mengurangi migrasi rata-rata di PMN
diisolasi dari muda (p = 0,043), tetapi tidak tua (p = 0,249) donor
yang diukur dengan satu sample t-test. Akhirnya, walaupun
pengobatan α-Toc tumpul migrasi transepitelial PMN dalam
menanggapi infeksi pneumokokus di mayoritas individu, migrasi
PMN dari beberapa individu itu baik bukan ff tercermin atau
sedikit meningkat α-Toc (Gambar 2B), Konsisten dengan
temuan sebelumnya bahwa e ff ect vitamin E dapat bervariasi
antara individu (Belisle et al., 2010).
Penuaan Apakah Terkait dengan
Membunuh Lebih Efisien dari
Complement-Opsonized pneumococcus
oleh PMN
Tidak adanya tanggapan migrasi transepitelial usia-spesifik
meninggalkan membuka pertanyaan apakah intrinsik PMN
fungsi anti-radang paru menurun seiring dengan usia. Sepanjang
hidup mereka, mayoritas individu yang sebentar-sebentar
nasopharyngeally dijajah oleh strain S. pneumoniae (Simell et
al., 2012), Sebuah proses yang dapat menghasilkan respon
imun humoral (Ferreira et al., 2013). Oleh karena itu, daripada
opsonizing bakteri dengan (berpotensi antibodi yang
mengandung) sera donor, yang dapat mengacaukan interpretasi
kami, kami opsonized bakteri dengan pelengkap dimurnikan
sebelum inkubasi dengan PMN diisolasi dari donor muda dan
tua. Anehnya, PMN terisolasi dari orang tua
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 4 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
GAMBAR 2 | α-Toc mengurangi pnemococcus-diinduksi transepitelial migrasi
PMN dari kedua donor muda dan tua. PMN yang pra-diperlakukan denganα-
Toc atau kontrol kendaraan dan memungkinkan untuk bermigrasi melintasi sel-sel
epitel paru-paru terpolarisasi dalam menanggapi (A) fMLP atau infeksi
pneumokokus (B). Rata-rata jumlah PMN bermigrasi untuk setiap donor dihitung
dari tiga ulangan teknis per kondisi. Untuk setiap donorα-Toc Indeks migrasi PMN
(y-axis) dihitung dengan membagi jumlah rata-rata α-Toc pra-diperlakukan PMN
bertransmigrasi dengan jumlah rata-rata kendaraan kontrol diperlakukan PMN
bertransmigrasi. Data dari 6 donor muda dan 8 donor lansia yang akan ditampilkan.
t-test tidak berpasangan Siswa mengungkapkan tidak ada perbedaan yang
signifikan dalam efekα-Toc pada PMN migrasi antara kelompok umur. Satu
sampel t-test mengungkapkanαIndeks migrasi -Toc berbeda secara signifikan dari 1
hanya dalam donor muda (p< 0,05 dilambangkan dengan #).
donor membunuh bakteri pelengkap-opsonized signifikan
lebih e FFI sien daripada rekan-rekan mereka yang lebih
muda (Gambar 3A), Dan analisis aktivitas bacteriocidal
setelah stratifikasi oleh usia mengungkapkan korelasi
positif yang signifikan antara pembunuhan bakteri dan
usia (Gambar 3B).
Penuaan Apakah Terkait dengan
Peningkatan neutrofil Elastase
Kegiatan
Pembunuhan pneumokokus ditelan oleh PMN manusia ditunjukkan
sebelumnya menjadi tergantung pada protease serin, seperti
cathepsin G (CG) dan neutrofil elastase (NE) (Standish dan Weiser,
2009), Jadi kami membandingkan jumlah dan aktivitas protease ini di
S. PMN pneumoniae terinfeksi muda atau usia (lihat Bahan dan
Metode). Pertama, terlepas dari usia donor, kami mendeteksi jumlah
yang sangat rendah dan kegiatan dari kedua cathepsin G dan
neutrofil elastase dalam supernatan setelah infeksi pneumokokus
dari PMN (data tidak ditunjukkan), menunjukkan bahwa infeksi S.
pneumoniae tidak memicu eksositosis skala besar serin protease -
mengandung butiran dalam pengujian kami. Kedua, ELISA pelet sel
menunjukkan tidak ada terkait usia di ff selisih yang signifikan dalam
cathepsin
G jumlah (Gambar 4A); pengukuran aktivitas menunjukkan
bahwa PMN diisolasi dari donor tua memiliki rata-rata 3 kali lipat
aktivitas G cathepsin lebih tinggi dibandingkan dengan PMN
muda, tapi ini selisih di ff tidak bermakna secara statistik (p =
0,16;Gambar 4B). tingkat elastase neutrofil tidak signifikan di ff
er antara kelompok (Gambar 4C), Tapi PMN dari donor lansia
ditampilkan signifikan (p = 0,0158), 15 kali lipat lebih tinggi
tingkat aktivitas neutrofil elastase (Gambar 4D) Dibandingkan
dengan PMN muda. Akhirnya, F-test dari varians menunjukkan
secara signifikan (p <0,05) lebih individual-to-individu variasi
dalam tingkat aktivitas kedua cathepsin G dan neutrofil elastase
di PMN dari
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
GAMBAR 3 | Penuaan adalah terkait dengan pembunuhan lebih efisien dari
pneumokokus pelengkap-opsonized oleh PMN. (SEBUAH)Persentase
komplemen-opsonized S. pneumoniae TIGR4 tewas setelah inkubasi 45-min
dengan PMN diisolasi dari donor muda dan tua ditentukan dengan
membandingkan hidup CFU untuk kontrol tidak ada PMN. Ditampilkan adalah
rata-rata reaksi rangkap tiga dari 6 donor muda dan 8 donor tua dalam percobaan
yang sama. Signifikansi ditentukan dengan t-test berpasangan siswa. (B) Pearson
analisis korelasi mengungkapkan signifikan (p< 0,05) korelasi antara pembunuhan
bakteri PMN dan usia, dilambangkan dengan “*.”
donor tua dibandingkan dengan kontrol muda. Data ini
menunjukkan bahwa, di sebagian besar mata pelajaran,
penuaan disertai dengan peningkatan aktivitas protease
serin, yang dapat berkontribusi terhadap aktivitas anti-
mikroba intrinsik tinggi dari PMN dari donor lansia.
αMeningkatkan -Toc Serine Protease Aktivitas
dan
Bakteri Membunuh oleh PMN dari
Muda Donor
Kami berikutnya menguji e ff ect dari α-Toc pada protease serin
dan kegiatan bacteriocidal dari PMN yang diisolasi dari donor
muda dan tua berikut paparan S. pneumoniae ex vivo. Untuk
kedua kegiatan, kami menentukan indeks α-Toc masing, yaitu,
rasio aktivitas di hadapan α-Toc untuk aktivitas dalam ketiadaan.
Aktivitas dasar dari cathepsin G dan neutrofil elastase meningkat
pada PMN dari donor berusia dibandingkan dengan donor muda
(Gambar 4), Dan pengobatan α-Toc tidak meningkatkan
kegiatan ini di PMN dari donor berusia lebih jauh, sehingga α-
Toc indeks aktivitas 1,1 dan 0,96 untuk cathepsin G dan neutrofil
elastase, masing-masing (Gambar 5A). Indeks α-Toc
bacteriocidal PMN dari donor lansia juga adalah 1,0,
menunjukkan bahwa α-Toc tidak memiliki e ff ect pada
kemampuan PMN tersebut untuk membunuh pneumokokus
dalam pengujian kami (Gambar 5B). Sebaliknya, rata-rata α-Toc
aktivitas indeks untuk cathepsin G dan neutrofil elastase dari
PMN dari donor muda 1,85 dan 2,1, masing-masing. Kegiatan
indeks α-Toc ini tidak secara signifikan lebih tinggi dari 1,0 atau
dari indeks aktivitas PMN dari donor lansia. Indeks rata-rata α-
Toc bacteriocidal di donor muda, pada 2,0, adalah peningkatan
dan kedua secara signifikan lebih tinggi dari 1,0 (p = 0,027) dan
secara signifikan lebih tinggi dari donor lansia (p =
0,0054;Gambar 5B). Bahkan, sementara pengobatan α-Toc
secara signifikan (p <0,05) meningkatkan PMN membunuh
hanya 1 dari 8 donor lansia dengan uji-t berpasangan, PMN dari
4 dari 6 donor muda diuji menunjukkan peningkatan signifikan
bakterisida
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 5 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
GAMBAR 4 | Penuaan dikaitkan dengan peningkatan PMN aktivitas
neutrofil elastase.PMN dari donor muda atau tua diinkubasi selama 45 menit
dengan pelengkap-opsonized S. pneumoniae TIGR4. Tingkat (A, C) dan
aktivitas (B, D) dari cathepsin G atau neutrofil elastase di lysates PMN
ditentukan (lihat Bahan dan Metode). Data dari 5 muda dan 8 donor lansia yang
akan ditampilkan. Perbedaan signifikan ditentukan dengan uji Mann-Whitney
dan dilambangkan dengan “*.”
Kegiatan setelah terpapar a-Toc. Selanjutnya, analisis
statistik pada stratifikasi numerik oleh usia mengungkapkan
bahwa kemampuan α-Toc untuk meningkatkan aktivitas
neutrofil elastase dan pembunuhan bakteri baik berkorelasi
negatif dengan usia (Gambar 5C, D), Menunjukkan bahwa e
ff ect dari α-Toc pada fungsi PMN adalah usia tergantung.
Temuan ini menunjukkan bahwa α-Toc meningkatkan
kemampuan PMN dari donor muda untuk membunuh S.
pneumoniae, sebagian dengan meningkatkan aktivitas
protease serin anti-mikroba, di elastase neutrofil tertentu.
DISKUSI
Tidak jelas sampai sejauh mana perubahan usia didorong fungsi
PMN intrinsik, sebagai lawan perubahan PMN-independen
dalam lingkungan paru, berkontribusi respon inflamasi yang
diperburuk selama infeksi pneumokokus. Dibandingkan dengan
kontrol muda, paru-paru berusia dikaitkan dengan peningkatan
kadar sitokin proinflamasi dan reseptor adhesi permukaan epitel
baik pada awal dan pada infeksi pneumokokus (Shivshankar et
al., 1990; Meyer et al., 1996, 1998; Hinojosa et al., 2009).
Beberapa studi menunjukkan disregulasi terkait usia perilaku
PMN, karena kemotaksis dari PMN terhadap fMLP, IL-8 atau
sputum dari pasien dengan
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
pneumonia pneumokokus menjadi non-linear dan melambat
pada penuaan (MacGregor dan Shalit, 1990; Sapey et al., 2014).
Dalam penelitian ini, menggunakan jumlah yang relatif terbatas
donor manusia, kami tidak menemukan di ff selisih dalam
kemampuan PMN dari donor muda dan tua untuk bermigrasi di
monolayers sel epitel dalam menanggapi fMLP atau infeksi S.
pneumoniae. Hal ini menunjukkan bahwa peningkatan
peradangan paru yang berhubungan dengan penuaan bukan
karena sifat intrinsik dari PMN individu lanjut usia, tetapi lebih
mungkin mencerminkan lingkungan inflamasi dari paru-paru
berusia. Mengingat bahwa migrasi di epitel pernapasan
berbudaya dalam sistem eksperimental ini membutuhkan 12-
lipoxygenase, enzim penting untuk produksi eicosanoid PMN
chemoattractant hepoxilin A3 (Bhowmick et al., 2013), Studi ini
menunjukkan bahwa respon intrinsik PMN untuk hepoxilin A3
tidak berubah dengan usia.
Kami sebelumnya menemukan bahwa suplementasi oral
α-Toc meringankan respon inflamasi berbahaya selama
infeksi pneumokokus tikus berusia (Bou Ghanem et al.,
2014). a-Toc pengobatan PMN dari donor non-berusia
mengurangi transmigrasi di seluruh sel-sel epitel paru-paru
sebagai respon terhadap infeksi S. pneumoniae (Bou
Ghanem et al., 2014), Kemungkinan dengan mengurangi
ekspresi ligan / reseptor pada PMN, seperti CD18 / CD11b /
CD55 dan CD47 diperlukan untuk proses migrasi melintasi
penghalang epitel (Hurley dkk., 2008; Bou Ghanem et al.,
2014). Namun, kami sebelumnya tidak tes apakah
transmigrasi dari PMN dari donor berusia mungkin juga akan
berkurang dengan pengobatan α-Toc. Kami menemukan di
sini bahwa pengobatan α-Toc memiliki variabel, donor-
spesifik e ff ect pada PMN transmigrasi, konsisten dengan
penelitian sebelumnya yang menunjukkan tanggapan
beragam untuk α-Toc suplementasi lisan antara individu-
individu (Wu dan Meydani, 2008; Belisle et al., 2010). Selain
itu, pengobatan α-Toc menurun migrasi transepitelial rata-
rata PMN diisolasi dari donor muda dan tua untuk gelar
setara. Sebaliknya, suplemen vitamin E meningkatkan fungsi
+
sel kekebalan lainnya (CD4 T-sel dan makrofag) untuk
tingkat yang jauh lebih besar pada orang tua dari anak muda
(Adolfsson et al., 2001; Meydani et al., 2005; Marko et al.,
2007 2009).
Studi sebelumnya telah mengungkapkan penurunan terkait
usia dalam kemampuan PMN untuk membunuh beberapa
patogen (Wenisch et al., 2000), termasuk S. pneumoniae (Simell
et al., 2011), setelah opsonisasi dengan seluruh serum atau
dengan kombinasi komplemen dan antibodi spesifik. Optimal
pembunuhan bakteri oleh PMN ex vivo membutuhkan pelengkap
(Esposito et al., 1990) dan defisiensi komplemen dikaitkan
dengan berulang S. pneumoniae infeksi (Ram et al., 2010),
Menunjukkan pelengkap yang memainkan peran penting dalam
perlawanan tuan rumah untuk pneumococcus. Untuk menyelidiki
usia tergantung perbedaan-perbedaan di ff dalam pembunuhan
bakteri pelengkap-dimediasi oleh PMN, kami opsonized
pneumokokus dengan pelengkap daripada sera homolog,
menghindari variabel yang berpotensi mengacaukan antibodi
anti-pneumokokus yang mungkin telah dihasilkan oleh infeksi
pneumokokus sebelumnya (Ferreira et al., 2013). Kami
menemukan bahwa PMN dari donor tua lebih e FFI efisien
dalam membunuh pneumokokus pelengkap-opsonized dari PMN
dari donor muda, menunjukkan bahwa tidak semua jalur anti-
mikroba PMN menurun dengan usia. Hal ini konsisten dengan
temuan yang menunjukkan
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 6 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al. Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi

GAMBAR 5 | α-Toc meningkatkan pembunuhan bakteri oleh PMN dari donor muda. PMN yang pra-diperlakukan denganα-Toc atau kontrol kendaraan dan kemudian
diinkubasi selama 45 menit dengan pelengkap-opsonized S. pneumoniae TIGR4. (A) Kegiatan cathepsin G (panel kiri) dan neutrofil elastase (panel kanan) di lysates PMN
pellet ditentukan (lihat Bahan dan Metode). Tampil adalahαKegiatan indeks -Toc, yaitu rasio aktivitas α-Toc-disuguhi pengendalian-diperlakukan PMN, untuk semua donor.
Perbedaan signifikan ditentukan dengan uji Mann Whitney. (B) rata-rata pembunuhan bakteri The persen dibandingkan dengan kontrol tidak ada PMN dihitung dari sumur
rangkap tiga per kondisi (lihat Bahan dan Metode). Tampil adalahαindeks bacteriocidal -Toc, yaitu rasio membunuh oleh α-Toc-disuguhi pengendalian-diperlakukan PMN,
untuk semua donor. Data dari 5 donor muda dan 8 donor lansia yang akan ditampilkan. Perbedaan signifikan ditentukan dengan t-test tidak berpasangan Mahasiswa (p< 0,05
dilambangkan dengan **) dan satu sampel t-test mengungkapkan αIndeks bacteriocidal -Toc berbeda secara signifikan dari 1 hanya dalam donor muda (p<0,05 dilambangkan
dengan #). analisis korelasi (C) Spearman antaraα-Toc indeks aktivitas dan usia dan (D) Pearson analisis korelasi antara αIndeks bacteriocidal -Toc dan usia mengungkapkan
korelasi yang signifikan dilambangkan dengan “*.”

bahwa tingkat komponen komplemen dan melengkapi
reseptor CR1 dan CR3 tidak mengurangi dengan
penuaan (Bellavia et al., 1999; Simell et al., 2011).
Polimorfonuklear leukosit (PMN) protease serin yang diperlukan
untuk e FFI efisien PMN-dimediasi pneumokokus pembunuhan
(Standish dan Weiser, 2009), Dan aktivitas elastase neutrofil dalam
serum dan lavage bronchoalveolar meningkat dengan usia (Varga
dkk., 1992; Meyer et al., 1998; Paczek et al., 2009). Dengan
demikian, konsisten dengan pengamatan kami pembunuhan
disempurnakan S. pneumoniae oleh PMN dari individu berusia, kami
menemukan bahwa meskipun jumlah neutrofil elastase dan
cathepsin G dari PMN yang diisolasi dari donor muda atau tua tidak
bisa dibedakan, kegiatan rata-rata lebih tinggi pada PMN dari donor
lansia. Hasil ini menunjukkan penuaan yang mungkin terkait dengan
perubahan peraturan aktivitas protease, suatu proses yang
dipengaruhi oleh penyerapan dalam sel (Reeves et al., 2002; Pham
2006) dan penghambatan oleh proteoglikan (Baici et al.,
1980) atau spesifik inhibitor protease serin, seperti α1-anti-tripsin
dan sekresi leukosit protease inhibitor (SLP1;Pham, 2006).
perubahan usia didorong inhibitor ini sebagian besar tetap belum
dijelajahi (Kida dkk., 1992; Meyer et al., 1998). Selain peran
mereka dalam membunuh pneumokokus, protease serin dapat
memperburuk peradangan dan meningkatkan kerusakan paru-
paru (Sandhaus dan Turino, 2013), menunjukkan bahwa
kenaikan usia didorong dalam kegiatan mereka bisa
berkontribusi terhadap kerusakan paru-paru diperburuk yang
menyertai pneumonia bakteri pada orang tua.
Temuan kunci dari penelitian ini adalah bahwa pengobatan α-Toc
ex vivo mendorong kegiatan serin protease dari PMN dari donor
muda, serta kemampuan mereka untuk membunuh pneumokokus.
Karena neutrofil elastase dan cathepsin G disintesis dan dikemas
menjadi butiran azurophilic selama perkembangan PMN di awal
sumsum tulang (Gullberg et al., 1997; Pham, 2006; Cowland dan
Borregaard, 2016), kami ex vivo a-Toc pengobatan PMN diisolasi
dari darah tidak mungkin untuk memicu produksi

Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 7 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
protease serin. Sebaliknya, yang relatif singkat (1 jam) paparan
a-Toc dalam penelitian ini cenderung menginduksi perubahan
dalam peraturan aktivitas enzimatik. Khususnya, sedangkan α-
Toc meningkatkan ketahanan tikus berusia infeksi paru-paru
pneumokokus, kami temukan di sini bahwa pengobatan α-Toc
PMN dari donor manusia lanjut usia tidak meningkatkan PMN
protease atau kegiatan bacteriocidal. Hal ini dimungkinkan,
karena tingkat aktivitas bacteriocidal dan protease di PMN dari
donor lansia yang lebih tinggi dari PMN dari donor yang lebih
muda, rentang dinamis dari tes ini terlalu terbatas untuk
mendeteksi α-Toc-dimediasi meningkat. Selain itu, mengingat
ects e ff berpotensi pleomorfik suplementasi lisan minggu-
panjang dengan α-Toc, vitamin ini dapat meningkatkan beberapa
aspek dari fungsi PMN tidak diuji di ini uji in vitro. Apapun,
PERNYATAAN ETIKA
Penelitian ini dilakukan sesuai dengan rekomendasi dari
“Investigasi Review Board” dengan informed consent tertulis
dari semua mata pelajaran. Semua subjek memberikan
persetujuan tertulis sesuai dengan Deklarasi Helsinki.
protokol telah disetujui oleh “Tufts Medical Center Manusia
Investigasi Review Board.”
REFERENSI
Adolfsson, O., Huber, BT, dan Meydani, SN (2001). Vitamin E-
ditingkatkan IL-2 produksi pada tikus tua: sel T memori naif tapi tidak
menunjukkan peningkatan bersepeda pembelahan sel dan IL-2-
memproduksi kapasitas. J. Immunol. 167, 3809-3817. doi:10,4049 /
jimmunol.167.7.3809
Baici, A., Salgam, P., Fehr, K., dan Boni, A. (1980). Penghambatan
elastase manusia dari leukosit polimorfonuklear oleh polysulfate
glikosaminoglikan (Arteparon). Biochem. Pharmacol. 29, 1723-1727.
doi:10,1016 / 0006-2952 (80) 90.131-8
Belisle, SE, Hamer, DH, Leka, LS, Dallal, GE, Delgado-Lista, J., Fine, BC, et
al. (2010). IL-2 dan IL-10 gen polimorfisme berhubungan dengan infeksi
saluran pernapasan dan dapat memodulasi e ff ect vitamin E pada infeksi
saluran pernapasan bawah pada usia lanjut penghuni panti jompo. Saya. J.
Clin. Nutr. 92, 106-114. doi:10,3945 / ajcn.2010.29207
Bellavia, D., Frada, G., Di Franco, P., Feo, S., Franceschi, C., Sansoni,
P., et al. (1999). C4, BF, C3 distribusi alel dan aktivitas komplemen
pada orang berusia sehat dan centenarians. J. Gerontol. Sebuah Biol.
Sci. Med. Sci. 54, B150-B153. doi:10,1093 / gerona / 54.4.B150
Bhowmick, R., Tin Maung, NH, Hurley, BP, Ghanem, EB, Gronert, K.,
McCormick, BA, et al. (2013). penyakit sistemik selama infeksi paru-paru
akut Streptococcus pneumoniae membutuhkan peradangan 12-
lipoxygenase tergantung. J. Immunol. 191, 5115-5123. doi:10,4049 /
jimmunol.1300522
Bou Ghanem, EN, Clark, S., Du, X., Wu, D., Camilli, A., Leong, JM, et al. (2014).
Bentuk α-tokoferol vitamin e membalikkan kerentanan terkait usia infeksi paru-
paru Streptococcus pneumoniae oleh modulasi perekrutan neutrofil paru. J.
Immunol. 194, 1090-1099. doi:10,4049 / jimmunol.1402401
Bou Ghanem, EN, Clark, S., Roggensack, SE, McIver, SR, Alcaide, P., Haydon, PG,
et al. (2015). adenosin ekstraseluler melindungi terhadap infeksi paru-paru
streptococcus pneumoniae dengan mengatur perekrutan neutrofil paru. PLoS
Pathog. 11: e1005126. doi:10.1371 / journal.ppat.1005126
Butcher, SK, Chahal, H., Nayak, L., Sinclair, A., Henriquez, NV, Sapey, E., et al.
(2001). Penuaan di respon imun bawaan: mengurangi kapasitas fagositosis
neutrofil dan ekspresi CD16 pada manusia lanjut usia. J. Leukoc. Biol. 70, 881-
886.
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
KONTRIBUSI PENULIS
EB dirancang penelitian, melakukan penelitian,
menganalisis data dan menulis kertas. JNL dan BJ
melakukan penelitian. SM penelitian yang dirancang dan
disediakan reagen penting. AP dan JML dirancang
penelitian dan menulis kertas dan memiliki tanggung
jawab utama untuk konten final. Semua penulis membaca
dan menyetujui naskah akhir.
PENDANAAN
Karya ini sebagian didukung oleh National Institute on Aging
(NIA) dan Federasi Amerika untuk Aging Research (Afar)
(AP), ASPEN Rhoads Foundation (untuk EB) dan US
Department of Kontrak Pertanian 58-1950-4- 003 (SM). EB
adalah penerima ASPEN 2013 dan 2014 Abbott Nutrition
hibah. AP adalah penerima dari Paul B. Beeson Career
Development Award 2012 di Aging Penelitian yang didanai
oleh NIA (hibah # 5K08AG042825) dan jauh.
UCAPAN TERIMA KASIH
Kami ingin mengakui Dan Cox dan Joan Mecsas untuk
membantu diskusi statistik mereka dan Sara Roggensack
untuk membaca kritis dan diskusi naskah.
Chong, CP, dan Street, PR (2008). Pneumonia pada orang tua: review dari
epidemiologi, patogenesis, mikrobiologi, dan fitur klinis. Selatan. Med. J. 101,
1141-1145; kuis 32, 79. doi:10,1097 / SMJ.0b013e318181d5b5
Cowland, JB, dan Borregaard, N. (2016). Granulopoiesis dan butiran neutrofil
manusia. Immunol. Rev. 273, 11-28. doi:10,1111 / imr.12440
Dalia, AB, Standish, AJ, dan Weiser, JN (2010). Tiga exoglycosidases
permukaan dari Streptococcus pneumoniae, Nana, BgaA, dan StrH,
mempromosikan ketahanan terhadap pembunuhan opsonophagocytic
oleh neutrofil manusia. Menulari. Immun. 78, 2108-2116. doi:10,1128 /
IAI.01125-09
Esposito, AL, Clark, CA, dan Poirier, WJ (1990). Penilaian terhadap
faktor yang berkontribusi terhadap pembunuhan tipe 3 Streptococcus
pneumoniae oleh leukosit polimorfonuklear manusia in vitro. APMIS
98, 111-121. doi:10,1111 / j.1699-0463.1990.tb01009.x
Ferreira, DM, Neill, DR, Bangert, M., Gritzfeld, JF, Hijau, N., Wright, AK, et al. (2013).
infeksi pada manusia dikendalikan dan rechallenge dengan Streptococcus
pneumoniae mengungkapkan pelindung keampuhan e FFI pengangkutan pada
orang dewasa yang sehat. Saya. J. Respir. Crit. Peduli Med. 187, 855-864.
doi:10,1164 / rccm.201212-2277OC
Fulop, T. Jr, Foris, G., Worum, I., dan Leovey, A. (1985). perubahan usia
tergantung dari e fungsi ff ektor Fc gamma reseptor-mediated leukosit
polimorfonuklear manusia. Clin. Exp. Immunol. 61, 425-432.
Garvy, BA, dan Harmsen, AG (1996). Pentingnya neutrofil dalam
perlawanan terhadap pneumonia pneumokokus pada orang dewasa
dan tikus neonatal. Peradangan 20, 499-512. doi:10,1007 /
BF01487042
Gullberg, U., Andersson, E., Garwicz, D., Lindmark, A., dan Olsson, I.
(1997). Biosintesis, pengolahan dan pemilahan protein neutrofil:
wawasan pengembangan neutrofil granul. Eur. J. Haematol. 58, 137-
153. doi:10,1111 / j.1600-0609.1997.tb00940.x
Hahn, I., Klaus, A., Janze, AK, Steinwede, K., Ding, N., Bohling, J., et al.
(2011). Cathepsin G dan neutrofil elastase memainkan peran penting dan
tidak berlebihan dalam kekebalan paru-protektif terhadap Streptococcus
pneumoniae pada tikus. Menulari. Immun. 79, 4893-4901. doi:10,1128 /
IAI.05593-11
Hinojosa, E., Boyd, AR, dan Orihuela, CJ (2009). Umur-terkait peradangan dan
pulsa seperti disfungsi reseptor utama paru-paru untuk pneumonia
pneumokokus. J. Menginfeksi. Dis. 200, 546-554. doi:10,1086 / 600.870
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 8 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161
Bou Ghanem et al.
Hurley, BP, Sin, A., dan McCormick, BA (2008). molekul adhesi yang terlibat
dalam hepoxilin A3-dimediasi migrasi neutrofil transepitelial. Clin. Exp.
Immunol. 151, 297-305. doi:10,1111 / j.1365-2249.2007.03551.x
Kida, K., Mizuuchi, T., Takeyama, K., Hiratsuka, T., Jinno, S., Hosoda, K.,
et al. (1992). tingkat leukoprotease inhibitor sekresi serum untuk
mendiagnosa pneumonia pada orang tua. Saya. Rev. Respir. Dis.
146, 1426-1429. doi:10,1164 / ajrccm / 146.6.1426
krone, CL, van de Groep, K., Trzcinski, K., Sanders, EA, dan Bogaert, D.
(2014). Immunosenescence dan penyakit pneumokokus:
ketidakseimbangan dalam interaksi inang-patogen. Lancet Respir.
Med. 2, 141-153. doi:10,1016 / S2213-2600 (13) 70.165-6
MacGregor, RR, dan Shalit, M. (1990). Fungsi neutrofil tua dalam mata
pelajaran yang sehat. J. Gerontol. 45, M55-M60. doi:10,1093 / geronj /
45.2.M55
Marko, MG, Ahmed, T., Bunnell, SC, Wu, D., Chung, H., Huber, BT, et al.
(2007). penurunan terkait usia dalam e ff efektif pembentukan sinaps
+
kekebalan CD4 Sel T terbalik dengan suplementasi vitamin E. J.
Immunol. 178, 1443-1449. doi:10,4049 / jimmunol.178.3.1443
Marko, MG, Pang, HJ, Ren, Z., Azzi, A., Huber, BT, Bunnell, SC, et al.
(2009). Vitamin E membalikkan gangguan linker untuk aktivasi T
aktivasi sel diSel T dari usia C57BL / 6 tikus. J. Nutr. 139, 1192-1197.
doi: 10,3945 / jn.108. 103.416
Marriott, HM, Jackson, LE, Wilkinson, TS, Simpson, AJ, Mitchell, TJ, Buttle,
DJ, et al. (2008). spesies oksigen reaktif mengatur neutrofil perekrutan dan
kelangsungan hidup di pneumonia pneumokokus. Saya. J. Respir. Crit.
Peduli Med. 177, 887-895. doi:10,1164 / rccm.200707-990OC
McCormick, BA, Hofman, PM, Kim, J., Carnes, DK, Miller, SI, dan Madara, JL
(1995). Permukaan lampiran Salmonella typhimurium ke epitel usus telah
mencatat matriks subepitel dengan gradien kemotaktik untuk neutrofil. J. Sel Biol.
131 (6 Pt 1), 1599-1608. doi:10,1083 / jcb.131.6.1599
Menter, T., Giefing-Kroell, C., Grubeck-Loebenstein, B., dan Tzankov, A.
(2014). Karakterisasi infiltrat inflamasi pada Streptococcus
pneumoniae pneumonia pada pasien muda dan tua. Pathobiology 81,
160-167. doi:10,1159 / 000.360.165
Meydani, SN, Han, SN, dan Wu, D. (2005). Vitamin E dan respon imun
dalam usia: mekanisme molekuler dan implikasi klinis. Immunol. Rev.
205, 269-284. doi:10,1111 / j.0105-2896.2005.00274.x
Meydani, SN, Meydani, M., Blumberg, JB, Leka, LS, siber, G., Loszewski, R.,
et al. (1997). Vitamin E suplemen dan in vivo respon imun pada mata
pelajaran lansia yang sehat. Sebuah uji coba terkontrol secara acak. JAMA
277, 1380-1386. doi:10,1001 / jama.1997.03540410058031
Meyer, KC, Ershler, W., Rosenthal, NS, Lu, XG, dan Peterson, K. (1996).
disregulasi imun dalam paru-paru manusia penuaan. Saya. J. Respir.
Crit. Peduli Med. 153, 1072-1079. doi:10,1164 / ajrccm.153.3.8630547
Meyer, KC, Rosenthal, NS, Soergel, P., dan Peterson, K. (1998). Neutrofil dan
peradangan ringan di tampaknya normal penuaan paru-paru manusia. Mech.
Penuaan Dev. 104, 169-181. doi:10,1016 / S0047-6374 (98) 00.065-7
Paczek, L., Michalska, W., dan Bartlomiejczyk, I. (2009). aktivitas enzim
proteolitik sebagai akibat dari penuaan. Penuaan Clin. Exp. Res. 21,
9-13. doi:10,1007 / BF03324892
Pae, M., Meydani, SN, dan Wu, D. (2012). Peran gizi dalam
meningkatkan imunitas dalam penuaan. Penuaan Dis. 3, 91-129.
Panemangalore, M., dan Lee, CJ (1992). Evaluasi indeks retinol dan
alpha-tocopherol status dalam hidup bebas tua. J. Gerontol. 47, B98-
104. doi:10,1093 / geronj / 47.3.B98
Park, S., dan Nahm, MH (2011). orang dewasa yang lebih tua memiliki
kapasitas rendah untuk opsonize pneumokokus karena respon antibodi IgM
rendah untuk vaksinasi pneumokokus. Menulari. Immun. 79, 314-320.
doi:10,1128 / IAI.00768-10
Pham, CT (2006) .Neutrophilserineproteases: specificregulators
dari
peradangan. Nat. Rev. Immunol. 6, 541-550. doi:10.1038 / nri1841
Penuaan dan Vitamin E Alter PMN Fungsi
Pignatti, P., Ragnoli, B., Radaeli, A., Moscato, G., dan Malerba, M. (2011).
Umur-terkait peningkatan neutrofil saluran napas di mata pelajaran yang
tidak merokok sehat yang lebih tua. Peremajaan Res. 14, 365-370.
doi:10,1089 / rej.2010.1150
Plosker, GL (2015). 13-Valent vaksin konjugasi pneumokokus: review-nya
menggunakan pada orang dewasa. Obat 75, 1535-1546. doi:10,1007 /
s40265-015-0449-z
Ram, S., Lewis, LA, dan Beras, PA (2010). Infeksi orang dengan kekurangan
komplemen dan pasien yang telah menjalani splenektomi. Clin. Microbiol.
Wahyu 23, 740-780. doi:10,1128 / CMR.00048-09
Reeves, EP, Lu, H., Jacobs, HL, Messina, CG, Bolsover, S., Gabella, G., et al.
(2002). Membunuh aktivitas neutrofil dimediasi melalui aktivasi protease
+
oleh K aliran. Nature 416, 291-297. doi:10.1038 / 416291a
Ryan, AS, Craig, LD, dan Finn, SC (1992). asupan gizi dan pola diet dari
Amerika yang lebih tua: studi nasional. J. Gerontol. 47, M145-M150.
doi:10,1093 / geronj / 47.5.M145
Sandhaus, RA, dan Turino, G. (2013). Neutrofil elastase-dimediasi penyakit
paru-paru. PPOK 10 (Suppl. 1), 60-63. doi:10,3109 /
15412555.2013.764403
Sapey, E., Greenwood, H., Walton, G., Mann, E., Cinta, A., Aaronson, N., et al.
(2014). Phosphoinositide 3-kinase penghambatan mengembalikan akurasi
neutrofil pada orang tua: menuju perawatan yang ditargetkan untuk
immunosenescence. Darah 123, 239-248. doi:10,1182 / darah 2013-08-
519520
Shivshankar, P., Boyd, AR, Le Saux, CJ, Yeh, IT, dan Orihuela, CJ (1990). penuaan
selular meningkatkan ekspresi ligan bakteri di paru-paru dan berkorelasi positif
dengan peningkatan kerentanan terhadap pneumonia pneumokokus. Penuaan
sel 10, 798-806. doi:10,1111 / j.1474-9726.2011.00720.x
Simell, B., Auranen, K., Kayhty, H., Goldblatt, D., Dagan, R., O'Brien, KL, et al.
(2012). Link mendasar antara kereta pneumokokus dan penyakit. Ahli Rev.
Vaksin 11, 841-855. doi:10,1586 / erv.12.53
Simell, B., Vuorela, A., Ekstrom, N., Palmu, A., Reunanen, A., Meri, S., et al.
(2011). Aging mengurangi fungsi antibodi anti-pneumokokus dan
pembunuhan Streptococcus pneumoniae oleh fagositosis neutrofil. Vaksin
29, 1929-1934. doi:10,1016 / j.vaccine.2010.12.121
Standish, AJ, dan Weiser, JN (2009). neutrofil manusia membunuh
Streptococcus pneumoniae melalui protease serin. J. Immunol. 183,
2602-2609. doi:10,4049 / jimmunol.0900688
Varga, Z., Saulnier, J., Hauck, M., Wallach, JM, dan Fulop, T. Jr (1992).
variasi usia tergantung dari aktivitas PMNL elastase manusia sebagai
fungsi dari pH, kekuatan ion dan konsentrasi kalsium. Lengkungan.
Gerontol. Geriatr. 14, 273-281. doi:10,1016 / 0167-4943 (92) 90.027-2
Wenisch, C., Patruta, S., Daxbock, F., Krause, R., dan Horl, W. (2000). E
ff ect usia pada fungsi neutrofil manusia. J. Leukoc. Biol. 67, 40-45.
Wroe, PC, Finkelstein, JA, Ray, GT, Linder, JA, Johnson, KM, Rifas-
Shiman, S., et al. (2012). Penuaan penduduk dan beban masa depan
pneumonia pneumokokus di Amerika Serikat. J. Menginfeksi. Dis. 205,
1589-1592. doi:10,1093 / infdis / jis240
Wu, D., dan Meydani, SN (2008). perubahan terkait usia di respon imun
dan inflamasi: dampak intervensi vitamin E. J. Leukoc. Biol. 84, 900-
914. doi:10,1189 / jlb.0108023
Benturan Pernyataan Tujuan: Para penulis menyatakan bahwa
penelitian ini dilakukan dalam tidak adanya hubungan komersial atau
finansial yang dapat ditafsirkan sebagai potensi konflik kepentingan.
Copyright © 2017 Bou Ghanem, Lee, Joma, Meydani, Leong dan Panda. Ini
adalah sebuah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah
ketentuanCreative Commons Atribusi Lisensi (CC BY). Penggunaan, distribusi
atau reproduksi di forum lain diperbolehkan, asalkan penulis asli (s) atau
pemberi lisensi dikreditkan dan bahwa publikasi asli dalam jurnal ini dikutip,
sesuai dengan praktek akademik diterima. Tidak ada penggunaan, distribusi
atau reproduksi diperbolehkan yang tidak mematuhi persyaratan ini.
Frontiers di Seluler dan Infeksi Mikrobiologi | www.frontiersin.org 9 Mei 2017 | Volume 7 | Pasal 161