JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60 ISSN 2303-1077

IDENTIFIKASI METABOLIT SEKUNDER EKSTRAK LANDAK LAUT (Diadema

setosum) DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI Escherichia coli
dan Staphylococcus aureus

Mentari Risnauli Siahaan1*, Andi Hairil Alimuddin1, Harlia1

1
Program Studi Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura
Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak
*email: mentari12111992@gmail.com

ABSTRAK
Landak laut adalah kelompok hewan Echinodermata yang sering dijumpai di daerah perairan
laut Kalimantan Barat terutama di Pulau Lemukutan. Informasi tentang hasil penelitian landak
laut masih sangat sedikit. Penelitian yang dilakukan bertujuan untuk menentukan golongan
senyawa,aktivitas antibakteri ekstrak etanol serta hasil partisi dari landak laut (Diadema
setosum) terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Pengujian sampel
terdiri dari beberapa tahapan yaitu ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi menggunakan
pelarut 96%, partisi, uji fitokimia dan diteruskan dengan pengujian aktivitas antibakteri
menggunakan metode difusi agar dengan cara sumuran. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
dalam ekstrak etanoldari sampel uji terdapat senyawa triterpenoid, alkaloid, fenol dan saponin.
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol, fraksi kloroform, fraksi etil asetat dan fraksi etanol
memiliki kemampuan aktivitas antibakteri dengan hasil uji berupa fraksi etil asetat memiliki
aktivitas antibakteri yang terbaik dengan diameter zona bening sebesar 12,02 mg/ml pada
konsentrasi 100 mg/ml terhadap bakteri S.aureus. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetat
dan ekstrak etanol memiliki kemampuan aktivitas antibakteri terhadap E. coli. fraksi etil asetat
merupakan fraksi yang memiliki aktivitas antibakteri yang terbaik dengan diameter zona bening
sebesar 11,02 mg/ml pada konsentrasi 100 mg/ml.

Kata kunci : antibakteri, Diadema setosum, Escherichia coli dan Staphylococcus aureus

PENDAHULUAN diperkirakan mengandung senyawa

metabolit sekunder yang berpotensi
Infeksi merupakan salah satu
sebagai antibakteri alami yang dapat
masalah dalam bidang kesehatan,
digunakan. Menurut Aprilia, dkk (2012)
khususnya dalam bidang ilmu kedokteran.
cangkang landak laut memiliki kandungan
Beberapa bakteri yang paling sering
senyawa aktif yang bersifat toksik,
menimbulkan infeksi adalah Staphylococus
diperkirakan racun yang ada dalam landak
aureus dan Escherichia coli. Bakteri S.
laut tersebut dapat juga digunakan sebagai
aureus merupakan bakteri normal pada kulit
antibakteri.
dan selaput lendir pada manusia. S. aureus
Landak laut adalah kelompok hewan
dapat menjadi penyebab infeksi baik pada
yang sering dijumpai di daerah laut, landak
manusia, maupun pada hewan. sedangkan
laut dapat ditemukan mulai perairan laut
E. coli adalah kuman yang banyak
tropis hingga laut di daerah kutub. Menurut
ditemukan di usus besar manusia sebagai
Aprilia dkk, (2012) landak laut adalah suatu
bakteri normal. Sifatnya unik karena dapat
binatang laut yang 95% tubuhnya terdiri dari
menyebabkan infeksi yang sering terjadi
duri-duri yang bisa digerakkan yang muncul
pada usus misalnya diare pada anak
dari badannya. Organisme yang tergolong
(Jawetz et al., 1996).
dalam kelas Echinodea ini dapat
Sampai saat ini penanggulangan
dimanfaatkan sebagai sumber pangan
penyakit yang disebabkan oleh bakteri
bergizi pada beberapa negara dan berguna
masih mengandalkan berbagai antibiotik.
dalam ekologi (Kimball, 1983; Lang &
Hal ini menimbulkan kekuatiran akan
Schroeter,1976).
munculnya strain bakteri baru yang resisten
terhadap antibiotik. Landak laut

53
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60
Meskipun Indonesia merupakan
salah satu eksportir landak laut,
pemanfaatan landak laut sebagai produk
obat dan makanan kesehatan belum
banyak dilakukan. Hal ini disebabkan masih
terbatasnya informasi potensi senyawa aktif
yang terdapat pada landak laut asal
perairan Indonesia. Informasi tentang hasil
penelitian yang telah dipublikasikan
mengenai landak laut berkisar pada
aktivitas sitotoksik.
Penelitian ini akan menelusuri
informasi kelompok senyawa metabolit
sekunder yang terdapat dalam ekstrak
etanol dan hasil partisi dari landak laut
(Diadema setosum) serta aktivitas
antibakterinya. Hasil penelitian
diharapkan dapat memberikan informasi
yang bermanfaat tentang kelompok
senyawa metabolit sekunder dan potensi
antibakteri landak laut (D. setosum),
terhadap bakteri E. coli dan S .aureus.
METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian telah dilakukan selama 9
bulan pada bulan Juni 2014 hingga Februari
2015. Pengambilan dan preparasi sampel
dilaksanakan di Pulau Lemukutan
Kecamatan Sungai Raya Kepulauan dan
sampel landak laut diuji di Laboratorium
Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas
Tanjungpura Pontianak.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah
vakum evaporator, autoklaf, timbangan
analitik, penangas air, seperangkat alat
gelas, spektrofotometer UV-Vis (genesys 6)
dan vortex.
Bahan-bahan yang digunakan
antara lain cangkang landak laut (D.
setosom) yang diperoleh dari Pulau
Lemukutan dani reagen pro analitis Merck
serta reagen teknis
Preparasi Sampel Cangkang Landak
Laut
Sampel yang akan digunakan untuk
diekstrak adalah landak laut (D. setosum).
Landak laut diambil dan dibersihkan,
dipisahkan antara cangkang dan duri dari
bagian isi perut landak laut.
Ekstraksi Sampel
Ekstraksi Secara maserasi dengan Etanol
Sebanyak 20 kg potongan landak
laut direndam dengan 5 L etanol di dalam
ISSN 2303-1077
bejana maserasi, ditutup dan dibiarkan
selama 24 jam disimpan dalam keadaan
terlindung dari cahaya matahari, lalu
disaring. Ampas direndam lagi dengan
etanol dan dibiarkan selama 24 jam.
Penyarian dilakukan sebanyak 3 kali.
Ekstrak etanol yang diperoleh dipekatkan
dengan alat evaporator hingga diperoleh
ekstrak landak laut pekat kemudian di
lakukan partisi.
Partisi ekstrak berdasarkan kepolaran
(Harborne, 1987)
Ekstrak yang telah didapatkan dari
hasil evaporasi sebanyak 80 gram di
larutkan menggunakan 1 L pelarut etanol
ini 96%. Setelah didapatkan hasil dilanjutkan
dengan proses partisi dengan pelarut n-
heksan, kloroform dan etil asetat.
Ekstrak etanol dan berbagai fraksi
landak laut dibuat 5 seri konsentrasi (20-
100 mg/ml) dengan menggunakan DMSO.
Konsentrasi tersebut dibuat dengan cara
menimbang masing-masing ekstrak dan
hasil dari setiap fraksi sebanyak 100 mg.
kemudian dilarutkan masing-masing ke
dalam DMSO hingga volumenya 1ml dan
dilakukan pengenceran (Dewi, 2010).
Identifikasi Komponen Metabolit
Sekunder
Prosedur identifikasi metabolit
sekunder menurut Harborne (1987),
meliputi identifikasi alkaloid, steroid/
triterpenoid, saponin, flavonoid dan
polifenol.
Uji Aktivitas Antibakteri
Metode uji aktivitas antimikroba
yang digunakan adalah metode difusi
sumuran. Sebanyak 50 µL suspensi bakteri
penguji dinokulasikan ke dalam 20 mL
media agar NA yang telah dituangkan
kedalam petri dish. Setelah itu dibuat sumur
dengan diameter 5 mm diisi dengan 50 µL
larutan sampel ekstrak antibakteri (ekstrak
etanol, etil asetat, kloroform dan n-heksan)
yang telah diencerkan sebelumnya ke
dalam sumur pada masing-masing cawan
yang telah diinokulasikan bakteri E. Coli
dan S. aureus. Lalu, diinkubasi pada suhu
37ºC selama 24 jam ke dalam inkubator.
Kemudian diukur Diameter Daya Hambat
(DDH) pada daerah bening lubang dengan
menggunakan jangka sorong. Sebagai
kontrol positif digunakan tetrasiklin 2% yang
dibuat dengan cara sebanyak 0,02 gram
ampisilin dilarutkan dalam 1 mL akuades
54
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60
(2%) (w/v). Kontrol negatif adalah larutan
DMSO yang dibuat dengan cara melarutkan
DMSO 5 ml kedalam akuades 50 mL
(Davis and Stout, 1971).
Analisis Data
Semua analisa diulang sebanyak
dua kali dan diuji dengan menggunakan
Analysis of Variance (ANOVA) pada tingkat
kepercayaan 95% dan taraf α 0,05.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan dan Preparasi sampel
Sampel landak laut (D.setosum) di
preparasi dengan cara dipotong kecil-kecil
sebanyak 20 kg (basah) kemudian
dimaserasi menggunakan pelarut etanol.
Gambar 1. Landak Laut
Maserasi Sampel
Maserasi dilakukan selama 24 jam
dengan tiga kali pengulangan hingga
diharapkan semua komponen senyawa
terekstraksi kedalam pelarut etanol.
Maserat dikumpulkan kemudian diuapkan
pelarutnya dengan evaporator pada suhu
dibawah 50 oC. Suhu yang digunakan lebih
rendah dari titik didih etanol, sehingga tidak
akan merusak senyawa metabolit sekunder
yang terdapat pada ekstrak etanol landak
laut. Ekstrak etanol pekat yang diperoleh
seberat 142 gram dan berwarna hitam.
Partisi Sampel
Ekstrak etanol yang telah didapatkan
pada proses maserasi kemudian dilanjutkan
dengan proses partisi. Proses partisi yang
dilakukan dengan metode cair-cair, partisi
menggunakan empat pelarut yaitu n-
heksan, kloroform, etil asetat dan etanol.
Proses pertama dilakukan
penimbangan ekstrak landak laut sebanyak
80 gram yang kemudian dilarutkan ke
dalam etanol 1 L. Hal ini dilakukan agar
ekstrak terendam dan larut sempurna pada
pelarut etanol. Ekstrak etanol yang telah
55
ISSN 2303-1077
larut kemudian dipartisi dengan pelarut n-
heksan. Hasil ini memberikan dua lapisan
yang terdapat didalam corong pisah. Fraksi
n-heksan yang berada pada lapisan atas
sedangkan etanol yang berada pada
lapisan bawah, dikarenakan n-heksan
memiliki massa jenis yang lebih rendah
dibandingkan dengan etanol yaitu (0,66 g/L)
sedangkan etanol (0,789 g/L).
Hasil fraksi n-heksan memberikan
warna kuning. Perubahan warna dari
pelarut yang sebelumnya tidak berwarna
berubah menjadi kuning menunjukkan
bahwa adanya kemungkinan terdapat
komponen yang terlarut dalam pelarut n-
heksan. Lapisan etanol kemudian dipartisi
kembali dengan pelarut kloroform sehingga
diperoleh dua lapisan yang berbeda
kelarutan. Lapisan kloroform berada pada
lapisan bawah yang dikarenakan massa
jenis kloroform yang lebih berat
dibandingkan etanol sebesar 1,48g/L,
warna yang didapatkan pada lapisan
kloroform lebih gelap dibandingkan pada
fraksi n-heksan. Lapisan etanol yang
didapat kemudian dipartisi kembali
menggunakan pelarut etil asetat. Lapisan
etil asetat yang didapatkan berada pada
lapisan bawah, hal ini dikarenakan massa
jenis etil asetat lebih berat sebesar 0,894g/L
dibandingkan dengan massa jenis etanol,
warna yang didapatkan lebih gelap
dibandingkan pada hasil fraksi n-heksan
dan kloroform.
Fraksi yang telah didapatkan pada
proses partisi kemudian dilanjutkan dengan
pemekatan dengan menggunakan alat
evaporator. Hal ini bertujuan agar
didapatkan hasil pekat dari fraksi n-heksan,
kloroform, etil asetat dan etanol pada
proses partisi.
Tabel 1 Randemen Ekstrak dan Fraksi
Landak Laut (D.setosom)
Randemen
Sampel Uji Bentuk Warna
(%)
Ekstrak Padat Hitam 0,71
etanol
Fraksi Etanol Pasta Hitam 22,25
Fraksi Etil Pasta Coklat 21,87
asetat
Fraksi Pasta Coklat 5,37
Kloroform
Fraksi n- Pasta Kuning 2,48
heksana
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60 ISSN 2303-1077

Tabel 2 Hasil Uji Fitokimia Pada ekstrak kasar, fraksi etanol, fraksi etil asetat, fraksi kloroform
dan fraksi n-heksan pada sampel landak laut (Diadema setosum)
Senyawa Metabolit Sekunder
No Fraksi Alkaloid
Flavonoid Steroid Triterpenoid Fenolik Saponin
Wagner Dragendroff
1 Ekstrak - - + + + + +
Kasar
2 n- Heksan - - + - - - -
3 Kloroform - - + + + + +
4 Etil Asetat - - + + + + +
5 Etanol - - + + + + +
Ket: Terdapat senyawa metabolit sekunder (+), tidak terdapat senyawa metabolit sekunder (-)

Uji Fitokimia penampak noda, serta dibantu dengan

Uji fitokimia menunjukkan bahwa
ekstrak etanol, fraksi kloroform, etil asetat, n-
heksan dan etanol positif mengandung
senyawa triterpenoid. Pada ekstrak etanol,
fraksi kloroform, fraksi etil asetat dan etanol
positif mengandung alkaloid, polifenol dan
saponin, sedangkan fraksi n-heksan tidak
teridentifikasi terdapatnya kandungan
senyawa metabolit saponin, polifenol dan
alkaloid. Senyawa triterpenoid yang
dihasilkan pada uji fitokimia positif dilihat dari
terbentuknya warna merah pada ekstrak
etanol dan hasil fraksi n-heksan, fraksi
klororoform, fraksi etil asetat dan fraksi
etanol. Senyawa alkaloid dan senyawa
saponin yang dihasilkan pada hasil uji
ekstrak etanol, fraksi kloroform, fraksi etil
asetat dan fraksi etanol dilihat dengan
terdapatnya endapan coklat pada uji alkaloid
menggunakan reagen wagner dan
dragendrof dan terdapatnya busa pada uji
saponin.
Masing-masing ekstrak etanol dan
fraksi yang telah diidentifikasi dengan uji
fitokimia kemudian dilanjutkan dengan uji
menggunakan plat KLT dan reagen
pemanasan untuk mempercepat reaksi.
Menurut Pratiwi, dkk (2012) skrining fitokimia
senyawa golongan alkaloid menunjukkan
hasil positif jika penyemprotan dengan
reagen serium (IV) sulfat menghasilkan
bercak noda berwarna coklat jingga dengan
visualisasi pada sinar tampak dan pendar
hijau muda dengan visualisasi
menggunakan sinar UV 366 nm dan sinar
UV 254 nm. Uji senyawa golongan flavonoid
menunjukkan hasil positif dengan
menunjukkan warna kuning-hijau setelah
disemprot dengan menggunakan reagen
AlCl3 dan diloanjutkan dengan pemanasan
untuk mempercepat proses reaksi
(Handayani dkk., 2014). Uji senyawa
golongan fenolik menunjukkan hasil positif
dengan menunjukkan warna coklat setelah
disemprot dengan reagen serium (IV) sulfat
(Pratiwi dkk., 2012). Uji senyawa golongan
triterpenoid dan steroid memberikan hasil
positif dengan menunjukkan warna merah-
ungu pada triterpenoid dan warna hijau pada
steroid setelah disemprotkan dengan reagen
Libermann-Burchard dan dibantu dengan
proses pemanasan.

Tabel 3 Uji Kromatografi Lapis Tipis menggunakan Reagen Semprot

Fraksi
No Uji KLT E. Etanol Fraksi Etil Fraksi Kloroform Fraksi n-heksan
Etanol
1 Alkaloid Coklat Coklat Coklat Coklat Coklat
2 Triterpenoid Merah Merah Merah Merah Merah
3 Flavonoid Kuning Kuning Kuning Kuning Kuning
4 Fenol Coklat Coklat Coklat Coklat Coklat
5 Steroid Hijau Hijau Hijau Hijau Hijau

56
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60
Menurut Venogupal (2009) anggota
Echinodermata banyak memproduksi
beberapa senyawa metabolit sekunder satu
anggota Echinodermata yang dikenal
memiliki senyawa metabolit sekunder yang
dapat digunakan sebagai antibakteri adalah
teripang. Salah satu jenis teripang yang
dikenal memiliki kemampuan terhadap
aktivitas anti bakteri tersebut ialah
Stichopus hermanii. Menurut Rasyid (2012)
hasil ekstrak metanol teripang S. hermanii
memiliki kemampuan sebagai antibakteri.
Selain itu pada pengujian terhadap teripang
anggota Echinodermata lain seperti
teripang (Holoturia atra) diketahui
mengandung senyawa metabolit sekunder
berupa alkaloid, steroid, triterpenoid dan
saponin (Septiadi, dkk 2013).
Uji Aktivitas Antibakteri
Aktivitas antibakteri sampel uji dilihat
dari zona hambat pertumbuhan bakteri
yang dihasilkan. Hasil uji aktivitas
antibakteri Staphylococccus aureus dari
sampel landak laut dapat dilihat pada Tabel
4 Ekstrak etanol, fraksi kloroform, fraksi etil
asetat, fraksi etanol dan fraksi n-heksan
diterapkan untuk pengujian aktivitas
antibakteri terhadap bakteri S. aureus dan
bakteri E. coli menggunakan metode sumur.
A B
C D
Gambar 2 (a) daya hambat ekstrak etanol,
(b) daya hambat fraksi kloroform, (c) daya
hambat fraksi etil asetat, dan (d) daya
hambat fraksi etanol
Kontrol positif yang digunakan
adalah antibiotik tetrasiklin sedangkan
kontrol negatifnya adalah DMSO (dimetil
sulfoksida). Pemilihan tetrasiklin sebagai
kontrol positif ialah tetrasiklin memiliki
spektrum antibakteri yang luas karena telah
teruji mempunyai kemampuan untuk
57
ISSN 2303-1077
menghambat pertumbuhan bakteri gram
positif maupun gram negatif (Rostinawati,T
2009). Penelitian ini menggunakan
konsentrasi tetrasiklin 2% karena tetrasiklin
merupakan senyawa murni dan telah teruji
kemampuannya sebagai antibakteri.
Gambar 3 Kontrol negatif dan kontrol positif
(tetrasiklin) terhadap bakteri S.aureus
Hasil penelitian menunjukkan bahwa
kontrol negatif tidak memberikan zona
hambatan (Gambar 3). Hal tersebut
membuktikan bahwa pelarut tidak
berpengaruh terhadap aktivitas antibakteri,
sehingga aktivitas hanya berasal dari
larutan sampel uji, bukan dari pelarut yang
digunakan.
Perlakuan uji aktivitas dilakukan
dengan seri konsentrasi 20 mg/ml, 40
mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml, 100 mg/ml.
Ekstrak kasar menunjukkan hasil positif
dengan terbentuknya zona bening pada
konsentrasi 40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml
dan 100 mg/ml. Diameter tertinggi terlihat
pada konsentrasi 100 mg/ml sebesar 7,01
mm dan konsentrasi terendah 40 mg/ml
dengan diameter sebesar 4,01 mm (Tabel
4).
Uji aktivitas antibakteri pada fraksi
kloroform menunjukkan hasil positif dengan
terbentuknya zona bening pada konsentrasi
terendah 40 mg/ml sebesar 3,00 mm dan
konsentrasi tertinggi 100mg/ml dengan
diameter sebesar 5,07 mm. Fraksi etil
asetat menunjukkan zona bening pada
konsentrasi terendah 20 mg/ml diameter
sebesar 4,04 mm dan konsentrasi tertinggi
100 mg/ml dengan diameter 12,02 mm.
Fraksi etanol menunjukkan zona bening
pada konsentrasi terendah 60 mg/ml
diameter sebesar 3,05 mm dan konsentrasi
tertinggi 100 mg/ml dengan diameter 5,04
mm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
fraksi etil asetat merupakan fraksi yang
paling efektif dalam membentuk zona
bening dikarenakan dengan konsentrasi 20
mg/ml sudah dapat membentuk zona
bening dibandingkan dengan fraksi yang
lainnya.
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60 ISSN 2303-1077

Tabel 4 Diameter zona hambat landak laut (Diadema setosum) terhadap bakteri
Staphylococcus aureus
Konsentrasi ekstrak (mg/ml)
No Fraksi
20 40 60 80 100
1 Ekstrak kasar - 4,01 mm 5,01 mm 5,07 mm 7,01 mm
2 N- Heksan - - - - -
3 Kloroform - 3,00 mm 3,07 mm 4,04 mm 5,07 mm
4 Etil Asetat 4,04 mm 6,02 mm 8,02 mm 10,08 mm 12,02 mm*
5 Etanol - - 3,05 mm 4,00 mm 5,04 mm

Hasil yang berbeda ditunjukkan oleh aktivitas dilakukan seri konsentrasi 20

fraksi n-heksan dimana pada uji aktivitas
anti bakteri fraksi n-heksan tidak terbentuk
zona bening sama sekali. Ketidak-reaktifan
dalam menghambat pertumbuhan bakteri uji
diduga berkaitan dengan kemampuan
senyawa yang larut dalam n-heksan yang
tidak memiliki aktivitas antibakteri.
Komponen yang umumnya larut dalam
heksana adalah lilin, lemak dan komponen
terpenoid. Ekstrak heksan mengandung
minyak dan lemak karena bersifat non
polar. Lemak dan minyak yang terdapat
dalam fraksi n-heksan memungkinkan
mengganggu proses difusi dan melindungi
bakteri dari senyawa antibakteri. Ekstrak
etanol, fraksi kloroform, fraksi etil asetat dan
fraksi etanol memiliki aktivitas antibakteri
dikarenakan dalam ekstrak tersebut
terkandung senyawa aktif yang dapat
digunakan sebagai aktivitas antibakteri
dengan menunjukkan hasil zona bening.
Hasil uji aktivitas antibakteri E.coli
terhadap ekstrak etanol landak laut dan
hasil partisi etil asetat menunjukkan hasil
positif berupa zona bening. Perlakuan uji
mg/ml, 40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml dan
100 mg/ml. Zona bening terbentuk pada
ekstrak kasar dan fraksi etil asetat
sedangkan pada fraksi kloroform, n-heksan
dan etanol tidak terbentuk zona bening.
Ekstrak kasar menunjukkan hasil positif
dengan terbentuknya zona bening pada
konsentrasi terendah 40 mg/ml diameter
sebesar 2,00 mm dan konsentrasi tertinggi
100 mg/ml dengan diameter zona bening
sebesar 5,08 mm. Fraksi etil asetat
menunjukkan hasil positif dengan
terbentuknya zona bening pada konsentrasi
terendah 20 mg/ml diameter sebesar 4,05,
dan konsentrasi tertinggi 100 mg/ml dengan
diameter sebesar 11,02 mm. Diameter zona
bening tertinggi berada pada konsentrasi
100 mg/ml fraksi etil asetat dengan
diameter sebesar 11,02 mm dan terendah
pada konsentrasi 20 mg/ml dengan
diameter sebesar 4,05 mm. Hal ini sesuai
dengan penelitian Kusmiyati (2007) yang
menunjukkan semakin tinggi konsentrasi
ekstrak maka semakin tinggi aktivitas
antibakteri.

Tabel 5 Diameter zona hambat landak laut (Diadema setosum) terhadap bakteri Escherichia
coli
Konsentrasi ekstrak (mg/ml)
No Fraksi
20 40 60 80 100
1 Ekstrak Kasar - 2,00 mm 3,06 mm 4,04 mm 5,08 mm
2 n- Heksan - - - - -
3 Kloroform - - - - -
4 Etil Asetat 4,05 mm 6,01 mm 8,01mm 9,06 mm 11,02 mm*
5 Etanol - - - - -

58
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60
A B
Gambar 4 (a) daya hambat ekstrak etanol
(b) daya hambat fraksi etil asetat terhadap
bakteri E.coli
Gambar 5 Kontrol negatif dan kontrol positif
(tetrasiklin) terhadap bakteri E.coli
Fraksi etanol dan kloroform tidak
membentuk zona bening seperti pada uji
aktivitas antibakteri S. aureus disebabkan
karena bakteri E. coli merupakan bakteri
gram negatif. Bakteri gram negatif memiliki
struktur dinding sel yang lebih tebal di
bandingkan dengan S. aureus yang
merupakan bakteri gram positif. Menurut
Jawetz et al (2005) terdapat perbedaan
antara ketahanan pada bakteri gram positif
dan bakteri gram negatif terhadap senyawa
antibakteri. Bakteri gram positif cenderung
lebih sensitif terhadap komponen
antibakteri. Hal ini disebabkan oleh struktur
dinding sel bakteri gram positif lebih
sederhana sehingga memudahkan
senyawa anti bakteri untuk masuk kedalam
sel dan menemukan sasaran untuk bekerja,
sedangkan struktur dinding sel bakteri gram
negatif lebih kompleks.
Hasil penelitian kemudian dianalisis
dengan uji statistik One Way ANOVA
menggunakan tingkat kepercayaan 95%
dan dilanjutkan dengan Post Hoc Test
berupa uji Least Significance Difference
(LSD). Data diolah dengan program
Statistical Productand Service Solution
(SPSS) 20,00 for windows untuk melihat
perbedaan signifikan pada setiap diameter
zona hambat di tiap konsentrasi dari
masing-masing fraksi. Hasil pengujian One
Way ANOVA menunjukkan adanya
perbedaan yang signifikan pada setiap
fraksi sehingga dapat disimpulkan bahwa
59
ISSN 2303-1077
konsentrasi yang semakin tinggi akan
mempengaruhi diameter yang akan
terbentuk pada hasil uji. Fraksi etil asetat
menunjukkan diameter yang lebih besar
dibandingan dengan fraksi lainnya pada
kedua bakteri uji yang digunakan. Fraksi etil
asetat pada bakteri E. coli membentuk zona
bening sebesar 11,02 mm, fraksi etil asetat
pada bakteri S. aureus membentuk zona
bening sebesar 12,02 mm. selanjunya hasil
dari uji LSD (Least Significant Different)
menunjukkan perbedaan yang signifikan
pada semua konsentrasi.
Penelitian yang telah dilakukan
didapatkan hasil berupa terbentuk zona
bening yang mengandung senyawa
metabolit sekunder yang aktif sebagai
antibakteri yang terdifusi pada ekstrak
etanol dan fraksi kloroform, fraksi etil asetat
dan fraksi etanol pada bakteri S. aureus
sedangkan pada ekstrak etanol dan fraksi
etil asetat pada bakteri E. coli lebih kecil
dibandingkan dengan kontrol positif
Tetrasiklin 20 mg/ml (2%/) yaitu sebesar
28,04 mm pada bakteri S. aureus dan
sebesar 27,07 pada bakteri E. coli. Hal ini
menunjukkan bahwa kekuatan antibakteri
yang terdapat pada ekstrak etanol dan
beberapa fraksi pada dua bakteri belum
terlalu kuat dibandingkan dengan kontrol
positif yang digunakan (Tetrasiklin).
Simpulan
Pada ekstrak etanol, fraksi
kloroform, fraksi etil asetat dan fraksi etanol
yaitu alkaloid, fenolik, saponin dan
triterpenoid. Fraksi n-heksan hanya
terkandung triterpenoid.
Fraksi etil asetat merupakan fraksi
yang memiliki aktivitas antibakteri yang
terbaik dengan diameter zona bening
sebesar 12,02 mm pada konsentrasi 100
mg/ml terhadap bakteri S.aureus..
Fraksi etil asetat merupakan fraksi
yang memiliki aktivitas antibakteri yang
terbaik dengan diameter zona bening
sebesar 11,02 mm pada konsentrasi 100
mg/ml terhadap bakteri E. Coli.
DAFTAR PUSTAKA
Aprilia, H, dkk. 2012. Uji Toksisitas Ekstrak
Kloroform Cangkang dan Duri
Landak Laut (Diadema setosum)
Terhadap Mortalitas Nauplius
JKK, Tahun 2015, Volume 4(4), halaman 53-60 ISSN 2303-1077

Artemia sp. Jurnal of Marine Bawang Mekah (Eleutherine

Research. Vol 1, No 1:75-83. americana merr.) Dengan Metode
Davis, W.W and Stout, T.R. 1971. Disc DPPH ( 2,2- Difenil-1- Pikril
Plate Methods of Microbiological hidrazil). Tras. Med, J. Vol 18(1),
Antibiotic Assay. Microbiology. p 9-16.
22(4): 659-665. Rasyid, A. 2012.Identifikasi Senyawa
Dewi, F.K., 2010, Aktivitas Antibakteri Metabolit Sekunder Serta Uji
Ekstrak Etanol Buah Mengkudu Aktivitas Antibakteri dan
(Morinda citrifolia, Linnaeus) Antioksidan Ekstrak Metanol
terhadap Bakteri Pembusuk Teripang Stichopus hermanii.
Daging Segar, Skripsi, Jurnal Ilmu dan Teknologi
Universitas Sebelas Kelautan Tropis, Vol 4,No 2,hlm
Maret,Surakarta. 360-368.
Handayani, V. Ahmad, A.R. Sudir, M. 2014. Rostinawati,T. 2009. Aktivitas Antibakteri
Uji Aktivitas Ekstrak Metanol Ekstrak Etanol Bunga Rosella
Bunga Dan Daun Patikala (Hubiscus Sabdariffa L.)Terhadap
(Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm) Escherichia coli, Salmonella
Menggunakan Metode DPPH. thyphi dan Staphylococcus
Universitas Muslim Indonesia. aureus Dengan Metode Difusi
Makasar. Pharm Sci ISSN 2407- Agar. Fakultas Farmasi
2354. Universitas Padjadjaran.
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia , Jatinagor.
terjemahan K. Radmawinata dan Septiadi, T., Pringgenies, D., dan Radjasa,
I. Soediro, penerbit ITB, O.K., 2013, Uji Fitokimia dan
Bandung, 69-94, 142-158, 234- Aktivitas Antijamur Ekstrak
238. 11. Teripang Keling (Holoturia atra)
Jawezt E. Adelberg E.A and Melniek J. Dari Pantai Bandengan Jepara
1996. Mikrobiologi Kedokteran. Terhadap Jamur Candida
Terj.Enugroho E & Maulana RF. albicans. J Of Marine Research,
Edisi ke-20. Jakarta: EGC. 2:76-84.
Kimball. 1983. Biologi Jilid 3 Edisi Kelima. Venugopal, V. 2009.Marine Products for
Jakarta: Erlangga. Healthcare. Functional and
Kusmiyati, Agustini Ni Wayan, S. 2007. Uji BioactiveNutraceutical
Aktivitas Senyawa Antibakteri Compounds from the Ocean. Di
Dari Mikroalga Porphyridium Dalam Aprilia, H, dkk.2012. Uji
Cruentum. J Biodiversitas, 8:48- Toksisitas Ekstrak Kloroform
43. Cangkang dan Duri Landak Laut
Lang C and Schrerther, S.C. 1976. Change (Diadema setosum) Terhadap
InSea Urchin Population After Mortalitas Nauplius Artemia sp.
The Destruction of Kelp Beds Jurnal of Marine Research.
marine Biologi 36; 321-326. Volume 1, Nomor 1, Hal 75-83.
Pratiwi, D. Wahdaningsih, S. Isnindar. 2013. 1st ed.; CRC Press: Boca
Uji Aktivitas Antioksidan Daun Raton,FL, Volume 1.

60