Halaman 1

OECD / OCDE407Diadopsi:3 Oktober 2008© OECD, (2008)Anda bebas menggunakan materi ini untuk
tujuan pribadi, non-komersial tanpa meminta persetujuan sebelumnyaOECD, asalkan sumbernya
disebutkan. Setiap penggunaan materi ini secara komersial dapat ditulisizin dari OECD.PEDOMAN OECD
UNTUK PENGUJIAN BAHAN KIMIAStudi Toksisitas Oral 28-Hari Dosis Berulang pada Hewan Pengerat

PENGANTAR

1. Pedoman OECD untuk Pengujian Bahan Kimia ditinjau secara berkala dalam terang ilmiah kemajuan.
Pedoman Tes 407 asli diadopsi pada tahun 1981. Pada tahun 1995 versi revisi diadopsi,
untukmemperoleh informasi tambahan dari hewan yang digunakan dalam penelitian, khususnya tentang
neurotoksisitas danimunotoksisitas.

2. Pada tahun 1998, OECD memulai kegiatan dengan prioritas tinggi, untuk merevisi Pedoman Tes yang
ada dan untukmengembangkan Pedoman Tes baru untuk penyaringan dan pengujian potensi gangguan
endokrin (8). Satu Elemen dari kegiatan ini adalah memperbarui pedoman OECD yang ada untuk “dosis
berulang 28 hari toksisitas oralbelajar di tikus ”(TG 407) dengan parameter yang sesuai untuk mendeteksi
aktivitas endokrin zat uji. Iniprosedur menjalani program internasional yang luas untuk menguji relevansi
dan kepraktisan parameter tambahan, kinerja parameter ini untuk bahan kimia dengan (anti)
oestrogenik,(anti) androgenik, dan (anti) aktivitas tiroid, reproduktifitas intra dan antarlaboratorium,
dangangguan dari parameter baru dengan yang diperlukan oleh TG 407 sebelumnya. Jumlah data yang
besardengan demikian diperoleh telah disusun dan dievaluasi secara rinci dalam laporan OECD yang
komprehensif (9). Ini Pedoman Tes yang diperbarui 407 adalah hasil dari pengalaman dan hasil yang
diperoleh selama internasional program uji. TG 407 ini memungkinkan efek yang dimediasi endokrin
tertentu untuk dimasukkan ke dalam konteks dengan yang lainefek toksikologis.

PERTIMBANGAN DAN BATASAN AWAL

3. Dalam penilaian dan evaluasi karakteristik toksik suatu bahan kimia, penentuantoksisitas oral
menggunakan dosis berulang dapat dilakukan setelah informasi awal tentang toksisitas telah
diperolehdengan pengujian toksisitas akut. TG ini dimaksudkan untuk menyelidiki efek pada berbagai
potensi yang sangat luastarget toksisitas. Ini memberikan informasi tentang kemungkinan bahaya
kesehatan yang mungkin timbul dari pengulanganpaparan selama periode waktu yang relatif terbatas,
termasuk efek pada saraf, kekebalan tubuh dan endokrinsistem. Mengenai titik akhir tertentu, harus
mengidentifikasi bahan kimia dengan potensi neurotoksik,yang mungkin memerlukan penyelidikan lebih
lanjut mendalam tentang aspek ini, dan bahan kimia yang mengganggu tiroidfisiologi. Ini juga dapat
memberikan data tentang bahan kimia yang mempengaruhi organ reproduksi pria dan / atau wanitapada
hewan dewasa muda dan dapat memberikan indikasi efek imunologis.

4. Hasil dari TG 407 harus digunakan untuk identifikasi bahaya dan penilaian risiko. Ituhasil yang
diperoleh oleh parameter terkait endokrin harus dilihat dalam konteks “OECDKerangka Konseptual untuk
Pengujian dan Penilaian Bahan Kimia Pengganggu Endokrin ”(11). Metodeterdiri dari studi toksisitas
dosis dasar berulang yang dapat digunakan untuk bahan kimia di mana studi 90 hari adalahtidak dijamin
(misalnya ketika volume produksi tidak melebihi batas tertentu) atau sebagai pendahuluan ke astudi
jangka panjang. Durasi paparan harus 28 hari.

5. Program internasional dilakukan pada validasi parameter yang sesuai untuk mendeteksi secara
potensialaktivitas endokrin zat uji menunjukkan bahwa kualitas data yang diperoleh oleh TG 407 ini akan
tergantungbanyak pengalaman laboratorium uji. Ini berkaitan secara khusus dengan
histopatologispenentuan perubahan siklik pada organ reproduksi wanita dan penentuan berat

Halaman 2

407OECD / OCDE© OECD, (2008)2organ kecil yang tergantung hormon yang sulit dibedah. Sebuah
panduan tentang histopatologi telahdikembangkan (19). Ini tersedia di situs web publik OECD pada
Pedoman Tes. Ini dimaksudkan untuk membantuahli patologi dalam pemeriksaan mereka dan
membantu meningkatkan sensitivitas uji. Berbagai parameterditemukan sebagai indikasi toksisitas
terkait endokrin dan telah dimasukkan dalam TG. Parameteruntuk data yang tidak cukup tersedia untuk
membuktikan kegunaan atau yang hanya menunjukkan bukti lemah diprogram validasi kemampuan
mereka untuk membantu dalam mendeteksi gangguan endokrin diusulkan sebagai opsionaltitik akhir
(lihat Lampiran 2).

6. Atas dasar data yang dihasilkan dalam proses validasi, harus ditekankan bahwa sensitivitaspengujian
ini tidak cukup untuk mengidentifikasi semua zat dengan (anti) androgenik atau (anti) oestrogenik
modeaksi (9). TG tidak dilakukan dalam tahap kehidupan yang paling sensitif terhadap gangguan
endokrin. TGNamun, selama proses validasi mengidentifikasi senyawa lemah dan sangat mempengaruhi
tiroidfungsi, dan zat aktif endokrin kuat dan moderat bertindak melalui estrogen atau androgenreseptor,
tetapi dalam banyak kasus gagal mengidentifikasi zat aktif endokrin yang lemah mempengaruhi estrogen
ataureseptor androgen. Dengan demikian tidak dapat digambarkan sebagai uji skrining untuk aktivitas
endokrin.

7. Akibatnya, kurangnya efek yang terkait dengan mode tindakan ini tidak dapat dianggap sebagai
buktikurangnya efek pada sistem endokrin. Mengenai efek yang dimediasi endokrin, senyawaOleh
karena itu karakterisasi seharusnya tidak didasarkan pada hasil TG ini saja tetapi harus digunakan dalam
abobot bukti pendekatan menggabungkan semua data yang ada pada bahan kimia untuk
mengkarakterisasi potensiaktivitas endokrin. Karena alasan ini, pengambilan keputusan pengaturan
tentang aktivitas endokrin (gabungan)karakterisasi) harus menjadi pendekatan berbasis luas, tidak hanya
bergantung pada hasil dari penerapan iniTG.

8. Diakui bahwa semua prosedur berbasis hewan akan sesuai dengan standar lokal hewanpeduli; uraian
perawatan dan perawatan yang ditetapkan di bawah ini adalah standar kinerja minimal, dan akan
menjadidigantikan oleh peraturan daerah di mana lebih ketat. Bimbingan lebih lanjut tentang perawatan
yang manusiawi darihewan diberikan oleh OECD (14) .

9. Definisi yang digunakan diberikan dalam Lampiran 1.

TES

10. Substansi uji diberikan secara oral setiap hari dalam dosis bertahap ke beberapa kelompok
eksperimenhewan, satu tingkat dosis per kelompok untuk jangka waktu 28 hari. Selama periode
administrasi, hewan-hewan itudiamati dengan cermat, setiap hari untuk tanda-tanda toksisitas. Hewan
yang mati atau ditidurkan selama tes adalahnecropsied dan pada akhir uji hewan yang masih hidup di-
eutanasia dan necropsied. Sebuah studi 28 harimemberikan informasi tentang efek paparan oral
berulang dan dapat menunjukkan kebutuhan untuk lebih lamastudi jangka. Ini juga dapat memberikan
informasi tentang pemilihan konsentrasi untuk studi jangka panjang. Itudata yang diperoleh dari
penggunaan TG harus memungkinkan untuk karakterisasi toksisitas zat uji, untukindikasi hubungan
respons dosis dan penentuan Efek Samping Tanpa DiamatiLevel (NOAEL).

DESKRIPSI METODE

Pemilihan spesies hewan

11. Spesies hewan pengerat yang disukai adalah tikus, meskipun spesies hewan pengerat lainnya dapat
digunakan. Jikaparameter yang ditentukan dalam TG 407 ini diselidiki dalam spesies hewan pengerat lain
pembenaran rinciharus diberikan. Meskipun secara biologis masuk akal bahwa spesies lain harus
menanggapi racun dalammirip dengan tikus, penggunaan spesies yang lebih kecil dapat menyebabkan
peningkatan variabilitas karena teknis

Halaman 3

OECD / OCDE4073© OECD, (2008)tantangan membedah organ yang lebih kecil. Dalam program validasi
internasional untuk deteksipengganggu endokrin, tikus adalah satu-satunya spesies yang digunakan.
Hewan dewasa sehat muda yang biasa digunakanstrain laboratorium harus digunakan. Wanita harus
nulipara dan tidak hamil. Dosis harusmulai sesegera mungkin setelah disapih, dan, dalam hal apa pun,
sebelum hewan berumur sembilan minggu. PadaDimulainya penelitian, variasi berat hewan yang
digunakan harus minimal dan tidak melebihi ± 20%dari berat rata-rata setiap jenis kelamin. Ketika dosis
oral berulang dilakukan sebagai pendahuluan untuk jangka panjangstudi, lebih disukai bahwa hewan dari
strain dan sumber yang sama harus digunakan dalam kedua studi.Tempat tinggal dan makan.

12. Semua prosedur harus sesuai dengan standar lokal perawatan hewan laboratorium. Suhu diruang
hewan percobaan harus 22 ° C (± 3 ° C). Meskipun kelembaban relatif harus setidaknya30% dan lebih
baik tidak melebihi 70% selain selama pembersihan kamar, tujuannya harus 50-60%. Peneranganharus
buatan, fotoperiode menjadi 12 jam terang, 12 jam gelap. Untuk pemberian makan, laboratorium
konvensionaldiet dapat digunakan dengan persediaan air minum yang tidak terbatas. Pilihan diet
mungkin dipengaruhi olehperlu memastikan campuran zat uji yang cocok bila diberikan dengan metode
ini. Hewan seharusnyamenjadi kelompok yang bertempat di kelompok kecil berjenis kelamin sama;
hewan dapat ditempatkan secara individual jika secara ilmiahdibenarkan. Untuk kandang kelompok,
tidak lebih dari lima hewan harus ditampung per kandang.
13. Pakan harus dianalisis secara teratur untuk kontaminan. Sampel makanan harus disimpansampai
finalisasi laporan.Persiapan hewan.

14. Hewan dewasa muda yang sehat secara acak ditugaskan ke kelompok kontrol dan perlakuan.
Kandangharus diatur sedemikian rupa sehingga efek yang mungkin karena penempatan kandang
diminimalkan. Hewan-hewan itudiidentifikasi secara unik dan disimpan dalam kandang mereka selama
setidaknya lima hari sebelum dimulainya studi pengobatanmemungkinkan aklimatisasi dengan kondisi
laboratorium.Persiapan dosis.

15. Senyawa uji diberikan melalui gavage atau melalui makanan atau air minum. Metode
lisanadministrasi tergantung pada tujuan penelitian, dan sifat fisik / kimia / tokso-kinetikdari bahan uji.

16. Bila perlu, bahan uji dilarutkan atau ditangguhkan dalam kendaraan yang sesuai.
inimerekomendasikan bahwa, jika memungkinkan, penggunaan larutan / suspensi berair
dipertimbangkan terlebih dahulu,diikuti dengan pertimbangan larutan / suspensi dalam minyak (mis.
minyak jagung) dan kemudian dengan kemungkinan solusi dalam lainnyakendaraan. Untuk kendaraan
selain air, karakteristik racun kendaraan harus diketahui. Stabilitasdari zat uji dalam kendaraan harus
ditentukan.PROSEDURJumlah dan jenis kelamin hewan.

17. Setidaknya 10 hewan (lima betina dan lima jantan) harus digunakan pada setiap tingkat dosis. Jika
sementaraeutanasia direncanakan, jumlah harus ditingkatkan dengan jumlah hewan yang dijadwalkan
untuk eutanasiasebelum studi selesai. Pertimbangan harus diberikan kepada kelompok satelit tambahan
yang terdiri dari sepuluh oranghewan (lima per jenis kelamin) dalam kontrol dan dalam kelompok dosis
teratas untuk pengamatan reversibilitas, kegigihan, atautertunda terjadinya efek toksik, untuk setidaknya
14 hari pasca perawatan.

Halaman 4

407OECD / OCDE© OECD, (2008)4Dosis.

18. Umumnya, setidaknya tiga kelompok uji dan kelompok kontrol harus digunakan, tetapi jika dari
penilaiandata lain, tidak ada efek yang diharapkan pada dosis 1000mg / kg bb / hari, tes batas dapat
dilakukan. Jika adatidak ada data yang cocok tersedia, sebuah studi penemuan jangkauan (hewan dari
jenis dan sumber yang sama) mungkindilakukan untuk membantu penentuan dosis yang akan
digunakan. Kecuali untuk perawatan dengan zat uji,hewan dalam kelompok kontrol harus ditangani
dengan cara yang identik dengan subjek kelompok uji. Jika kendaraandigunakan dalam pemberian zat uji,
kelompok kontrol harus menerima kendaraan dalam volume tertinggibekas.

19. Tingkat dosis harus dipilih dengan mempertimbangkan toksisitas dan data kinetik (toksiko-) yang
adatersedia untuk senyawa uji atau bahan terkait. Tingkat dosis tertinggi harus dipilih dengan
tujuanmenyebabkan efek toksik tetapi bukan kematian atau penderitaan parah. Setelah itu, urutan
tingkat dosis menurunharus dipilih dengan tujuan untuk menunjukkan respon terkait dosis dan efek
samping yang tidak diamatipada tingkat dosis terendah (NOAEL). Dua hingga empat interval lipat sering
optimal untuk pengaturanmenurunnya tingkat dosis dan penambahan kelompok uji keempat sering lebih
baik daripada menggunakan interval yang sangat besar (misalnyalebih dari faktor 10) antara dosis.

20. Di hadapan toksisitas umum yang diamati (misalnya penurunan berat badan, hati, jantung, paru-paru
atauefek ginjal, dll.) atau perubahan lain yang mungkin bukan respons toksik (misalnya berkurangnya
asupan makanan, hatipembesaran), efek yang diamati pada titik akhir imun, neurologis atau endokrin
sensitif seharusnyaditafsirkan dengan hati-hati.

Tes batas.

21. Jika tes pada satu tingkat dosis minimal 1000 mg / kg berat badan / hari atau, untuk makanan atau
air minumadministrasi, persentase yang setara dalam makanan, atau air minum (berdasarkan berat
badanpenentuan), menggunakan prosedur yang dijelaskan untuk penelitian ini, tidak menghasilkan efek
toksik yang dapat diamati dan jikatoksisitas tidak akan diharapkan berdasarkan data dari senyawa yang
terkait secara struktural, maka penelitian penuh menggunakantiga tingkat dosis mungkin tidak dianggap
perlu. Tes batas berlaku kecuali saat paparan pada manusiamenunjukkan perlunya tingkat dosis yang
lebih tinggi untuk digunakan.

Pemberian dosis

22. Hewan-hewan diberi dengan zat uji setiap hari 7 hari setiap minggu selama 28 hari. Kapanzat uji
diberikan oleh gavage, ini harus dilakukan dalam dosis tunggal untuk hewan menggunakan atabung
perut atau kanula intubasi yang cocok. Volume cairan maksimum yang dapat diberikan disatu kali
tergantung pada ukuran hewan uji. Volume tidak boleh melebihi 1 ml / 100g berat badankecuali dalam
kasus larutan air di mana 2 ml / 100 g berat badan dapat digunakan. Kecuali untuk menjengkelkanatau
zat korosif, yang biasanya akan mengungkapkan efek yang diperburuk dengan konsentrasi yang lebih
tinggi,variabilitas dalam volume pengujian harus diminimalkan dengan menyesuaikan konsentrasi untuk
memastikan volume yang konstandi semua tingkatan dosis.

23. Untuk zat yang diberikan melalui makanan atau air minum, penting untuk memastikan bahwajumlah
zat uji yang terlibat tidak mengganggu nutrisi normal atau keseimbangan air. Ketikazat uji diberikan
dalam makanan baik konsentrasi makanan konstan (ppm) atau tingkat dosis konstandalam hal berat
badan hewan dapat digunakan; alternatif yang digunakan harus ditentukan. Untuk suatu zatdiberikan
oleh gavage, dosis harus diberikan pada waktu yang sama setiap hari, dan disesuaikan
seperlunyamempertahankan tingkat dosis konstan dalam hal berat badan hewan. Dimana studi dosis
berulang digunakan sebagai astudi pendahuluan untuk jangka panjang, diet yang sama harus digunakan
dalam kedua studi.

Halaman 5

OECD / OCDE4075© OECD, (2008)Pengamatan

24. Periode pengamatan harus 28 hari. Hewan dalam kelompok satelit dijadwalkan untuk tindak
lanjutpengamatan harus dilakukan setidaknya selama 14 hari tanpa pengobatan untuk mendeteksi
keterlambatan kejadian, ataukegigihan, atau pemulihan dari efek toksik.
25. Pengamatan klinis umum harus dilakukan setidaknya sekali sehari, lebih disukai pada waktu yang
samasetiap hari dan mempertimbangkan periode puncak dari efek yang diantisipasi setelah pemberian
dosis. Kondisi kesehatanhewan harus dicatat. Setidaknya dua kali sehari, semua hewan diamati untuk
morbiditas dan mortalitas.

26. Sekali sebelum paparan pertama (untuk memungkinkan perbandingan dalam subjek), dan setidaknya
seminggu sekalisetelah itu, pengamatan klinis terperinci harus dilakukan pada semua hewan.
Pengamatan ini harus dilakukandi luar kandang di arena standar dan lebih disukai pada waktu yang sama
setiap hari. Merekaharus dicatat dengan hati-hati, lebih disukai menggunakan sistem penilaian, secara
eksplisit ditentukan oleh laboratorium pengujian.Upaya harus dilakukan untuk memastikan bahwa
variasi dalam kondisi pengujian minimal dan pengamatan yang dilakukansebaiknya dilakukan oleh
pengamat yang tidak mengetahui pengobatan. Tanda-tanda yang dicatat harus termasuk, tetapi tidak
terbatasuntuk, perubahan kulit, bulu, mata, selaput lendir, terjadinya sekresi dan ekskresi dan
otonomaktivitas (misalnya lakrimasi, piloereksi, ukuran pupil, pola pernapasan yang tidak biasa).
Perubahan dalam gaya berjalan, postur danMenanggapi penanganan serta adanya gerakan klonik atau
tonik, stereotip (misalnya berlebihanperawatan, pengulangan berputar-putar) atau perilaku aneh (mis.
melukai diri sendiri, berjalan mundur) juga harusdirekam (2).

27. Pada minggu keempat paparan reaktivitas sensorik terhadap rangsangan dari berbagai jenis (2)
(misalnya auditori, visualdan rangsangan proprioseptif) (3) (4) (5), penilaian kekuatan cengkeraman (6)
dan penilaian aktivitas motorik (7) harusdilakukan. Rincian lebih lanjut dari prosedur yang dapat diikuti
diberikan dalam referensi masing-masing.Namun, prosedur alternatif dari yang dirujuk dapat digunakan.

28. Pengamatan fungsional yang dilakukan pada minggu paparan keempat dapat dihilangkan saat
penelitian dilakukandilakukan sebagai studi pendahuluan untuk studi subkronik (90 hari) berikutnya.
Dalam hal itu, fungsionalobservasi harus dimasukkan dalam studi tindak lanjut ini. Di sisi lain,
ketersediaan data aktifpengamatan fungsional dari studi dosis berulang dapat meningkatkan
kemampuan untuk memilih tingkat dosis untuk astudi subkronis berikutnya.

29. Sebagai pengecualian, pengamatan fungsional juga dapat dihilangkan untuk kelompok yang
mengungkapkan tanda-tandatoksisitas sampai taraf yang secara signifikan akan mengganggu kinerja tes
fungsional.

30. Pada saat nekropsi, siklus estrus dari semua wanita dapat ditentukan (opsional) dengan
menggunakan vaginasmear. Pengamatan ini akan memberikan informasi mengenai tahap siklus oestrus
pada saat ituberkorban dan membantu dalam evaluasi histologis jaringan-jaringan sensitif estrogen (lihat
panduan tentang histopatologi(19)).Berat badan dan konsumsi makanan / air.

31. Semua hewan harus ditimbang setidaknya seminggu sekali. Pengukuran konsumsi makanan
harusdibuat setidaknya setiap minggu. Jika zat uji diberikan melalui air minum, konsumsi air harusjuga
diukur setidaknya setiap minggu.

Halaman 6
407OECD / OCDE© OECD, (2008)6Hematologi.

32. Pemeriksaan hematologis berikut harus dilakukan pada akhir periode pengujian:hematokrit,
konsentrasi hemoglobin, jumlah eritrosit, retikulosit, leukosit total dan diferensialjumlah, jumlah
trombosit dan ukuran waktu / potensi pembekuan darah. Penentuan lain yang seharusnyadilakukan, jika
zat uji atau metabolitnya diduga atau diduga mengoksidasisifat termasuk konsentrasi methaemoglobin
dan tubuh Heinz.

33. Sampel darah harus diambil dari tempat yang disebutkan tepat sebelum atau sebagai bagian dari
prosedureuthanasia hewan, dan disimpan dalam kondisi yang sesuai. Hewan harus berpuasa
semalamansebelum euthanasia 1- waktu pengorbanan karena variasi konsentrasi hormon diurnal.

Biokimia klinis.

34. Penentuan biokimia klinis untuk menyelidiki efek toksik utama pada jaringan dan,khususnya, efek
pada ginjal dan hati, harus dilakukan pada sampel darah yang diperoleh dari semua hewan sajasebelum
atau sebagai bagian dari prosedur untuk eutanasia hewan (terlepas dari yang ditemukan hampir mati
dan / ataueutanasia sebelum penghentian penelitian). Investigasi plasma atau serum meliputi
natrium,kalium, glukosa, kolesterol total, urea, kreatinin, protein total dan albumin, setidaknya dua
enzimindikasi efek hepatoseluler (seperti alanin aminotransferase, aspartate aminotransferase,
alkalifosfatase, γ-glutamil trans-peptidase dan glutamat dehidrogenase), dan asam empedu.
PengukuranEnzim tambahan (asal hati atau asal lain) dan bilirubin dapat memberikan informasi yang
berguna di bawah tertentukeadaan.

35. Secara opsional, penentuan urinalisis berikut dapat dilakukan selama minggu terakhirstudi
menggunakan pengumpulan volume urin waktunya; penampilan, volume, osmolalitas atau berat jenis,
pH, protein,glukosa dan sel darah / darah.

36. Selain itu, penelitian untuk menyelidiki plasma atau penanda serum kerusakan jaringan umum
harusdipertimbangkan. Penentuan lain yang harus dilakukan, jika diketahui sifat bahan ujidapat, atau
diduga mempengaruhi profil metabolisme terkait termasuk kalsium, fosfat, trigliserida,hormon spesifik,
dan cholinesterase. Ini perlu diidentifikasi untuk bahan kimia di kelas tertentu atau pada akasus per
kasus.

37. Meskipun dalam evaluasi internasional dari endokrin terkait endpoints manfaat yang jelaspenentuan
hormon tiroid (T3, T4) dan TSH tidak dapat ditunjukkan, mungkin membantusimpan sampel plasma atau
serum untuk mengukur T3, T4 dan TSH (opsional) jika ada indikasi efekpada sumbu hipofisis-tiroid.
Sampel-sampel ini dapat dibekukan pada -20 ° untuk penyimpanan. Faktor-faktor berikut
mungkinmempengaruhi variabilitas dan konsentrasi absolut dari penentuan hormon:- metode
pengorbanan untuk menghindari stres yang tidak semestinya pada hewan yang dapat memengaruhi
konsentrasi hormon- test kit untuk penentuan hormon yang mungkin berbeda dengan kurva standar
mereka.1 Untuk sejumlah pengukuran dalam serum dan plasma, terutama untuk glukosa, puasa dalam
semalamlebih disukai. Alasan utama untuk preferensi ini adalah bahwa peningkatan variabilitas yang
pasti akan terjadihasil dari non-puasa, akan cenderung menutupi efek yang lebih halus dan membuat
interpretasi menjadi sulit. DiSebaliknya, puasa semalaman dapat mengganggu metabolisme umum
hewan dan,khususnya dalam studi makan, dapat mengganggu paparan harian terhadap zat uji. Jika
puasa semalaman adalahDiadopsi, penentuan biokimiawi klinis harus dilakukan setelah melakukan
fungsionalpengamatan pada minggu ke 4 penelitian.

Halaman 7

OECD / OCDE4077© OECD, (2008)Identifikasi pasti bahan kimia aktif tiroid lebih dapat diandalkan
dengan analisis histopatologisdari kadar hormon.

38. Sampel plasma yang khusus ditujukan untuk penentuan hormon harus diperoleh pada awaktu yang
sebanding dalam sehari. Disarankan bahwa pertimbangan harus diberikan untuk T 3, T 4 dan
TSHdeterminasi dipicu berdasarkan perubahan histopatologi tiroid. Nilai numerik yang diperolehketika
menganalisis konsentrasi hormon berbeda dengan berbagai alat uji komersial. Akibatnya, mungkin
sajatidak mungkin memberikan kriteria kinerja berdasarkan data historis yang seragam. Kalau
tidak,laboratorium harus berusaha untuk menjaga koefisien kontrol variasi di bawah 25 untuk T 3 dan T 4
dan di bawah 35 untukTSH. Semua konsentrasi harus direkam dalam ng / ml.

39. Jika data dasar historis tidak memadai, pertimbangan harus diberikan untuk penentuanvariabel
biokimia hematologis dan klinis sebelum pemberian dosis dimulai atau lebih disukai pada sekelompok
hewantidak termasuk dalam kelompok eksperimen.

PATOLOGI

Necropsy kotor.

40. Semua hewan dalam penelitian ini harus mengalami necropsy kotor lengkap dan terperinci yang
mencakup kehati-hatianpemeriksaan permukaan luar tubuh, semua lubang, dan lubang kranial, rongga
dada dan perutdan isinya. Hati, ginjal, adrenal, testis, epididimid, prostat + vesikula seminalispembekuan
kelenjar secara keseluruhan, timus, limpa, otak dan jantung semua hewan (terlepas dari yang
ditemukan)hampir mati dan / atau ditidurkan sebelum penghentian penelitian) harus dipangkas dari
setiap jaringan yang patuh,jika sesuai, dan berat basahnya diambil sesegera mungkin setelah diseksi
untuk menghindari pengeringan. Harus pedulidilakukan ketika memotong kompleks prostat untuk
menghindari tusukan cairan yang diisi vesikula seminalis.Atau, vesikula seminalis dan prostat dapat
dipangkas dan ditimbang setelah fiksasi.

41. Selain itu, dua jaringan lain dapat ditimbang secara opsional sesegera mungkin setelah diseksihindari
pengeringan: indung telur yang dipasangkan (berat basah) dan uterus, termasuk serviks (panduan
tentang pengangkatan danpersiapan jaringan uterus untuk pengukuran berat disediakan dalam TG 440
(18)).

42. Berat tiroid (opsional) dapat ditentukan setelah fiksasi. Pemangkasan juga harus dilakukansangat
hati-hati dan hanya setelah fiksasi untuk menghindari kerusakan jaringan. Kerusakan jaringan dapat
membahayakananalisis histopatologi.
43. Jaringan berikut harus dipertahankan dalam media fiksasi yang paling tepat untuk keduanyajenis
jaringan dan pemeriksaan histopatologis selanjutnya yang dimaksudkan (lihat paragraf 47): semua
kotorlesi, otak (daerah representatif termasuk otak besar, otak kecil dan pons), sumsum tulang belakang,
mata, perut,usus kecil dan besar (termasuk tambalan Peyer), hati, ginjal, adrenal, limpa, jantung, timus,
tiroid,trakea dan paru-paru (diawetkan oleh inflasi dengan fiksatif dan kemudian perendaman), gonad
(testis dan ovarium),organ seks tambahan (uterus dan serviks, epididimid, prostat + vesikula seminalis
dengan kelenjar koagulasi),vagina, kandung kemih, kelenjar getah bening (selain simpul pengeringan
yang paling proksimal, kelenjar getah bening lainnya harusdiambil sesuai dengan pengalaman
laboratorium (15)), saraf perifer (sciatic atau tibial) lebih disukai di dekatkedekatan dengan otot, otot
rangka dan tulang, dengan sumsum tulang (bagian atau, sebagai alternatif, segar)aspirasi sumsum tulang
terpasang). Disarankan agar testis diperbaiki dengan cara direndam dalam Bouin atau
dimodifikasiFiksatif Davidson (16) (17). Tunica albuginea harus ditusuk dengan lembut dan dangkal di
kedua kutuborgan dengan jarum untuk memungkinkan penetrasi cepat fiksatif. Temuan klinis dan lainnya
mungkinmenyarankan perlunya memeriksa jaringan tambahan. Juga setiap organ yang dianggap sebagai
organ targetpada sifat yang diketahui dari bahan uji harus dilestarikan.

Halaman 8

407OECD / OCDE© OECD, (2008)8

44. Jaringan berikut dapat memberikan indikasi berharga untuk efek yang berhubungan dengan
endokrin: Gonad (ovariumdan testis), organ seks tambahan (uterus termasuk serviks, epididimid,
vesikula seminalis dengan koagulasikelenjar, dorsolateral dan ventral prostat), vagina, hipofisis, kelenjar
susu jantan, tiroid dan adrenalkelenjar. Perubahan kelenjar susu jantan belum didokumentasikan secara
memadai tetapi parameter ini mungkinsangat sensitif terhadap zat dengan aksi estrogenik. Pengamatan
organ / jaringan yang tidak terdaftar diparagraf 43 adalah opsional (lihat Lampiran 2).

45. Panduan tentang histopatologi (19) merinci informasi tambahan tentang diseksi, fiksasi,
sectioningdan histopatologi jaringan endokrin.

46. Dalam program uji internasional beberapa bukti diperoleh bahwa efek endokrin halus olehbahan
kimia dengan potensi rendah untuk mempengaruhi homeostasis hormon seks dapat diidentifikasi
dengan gangguansinkronisasi siklus estrus dalam jaringan yang berbeda dan tidak begitu banyak dengan
histopatologis yang jujurperubahan pada organ seks wanita. Meskipun tidak ada bukti pasti yang
diperoleh untuk efek seperti itu, itumerekomendasikan bahwa bukti asinkron yang mungkin dari siklus
estrus harus dipertimbangkan dalaminterpretasi histopatologi ovarium (sel folikuler, thecal, dan
granulosa), uterus, serviksdan vagina. Jika dinilai, tahap siklus yang ditentukan oleh apusan vagina dapat
dimasukkan dalam hal iniperbandingan juga.

Histopatologi

47. Histopatologi penuh harus dilakukan pada organ dan jaringan yang diawetkan dari semua hewan
dikelompok kontrol dan dosis tinggi. Pemeriksaan ini harus diperluas ke hewan dari semua kelompok
dosis lain,jika perubahan terkait pengobatan diamati pada kelompok dosis tinggi.
48. Semua lesi berat harus diperiksa.

49. Ketika kelompok satelit digunakan, histopatologi harus dilakukan pada jaringan dan organ yang
diidentifikasisebagai menunjukkan efek pada kelompok yang diobati.

DATA DAN PELAPORANData

50. Data individual harus disediakan. Selain itu, semua data harus dirangkum dalam bentuk
tabelmenunjukkan untuk setiap kelompok uji jumlah hewan pada awal tes, jumlah hewanditemukan
tewas selama tes atau eutanasia untuk alasan manusiawi dan waktu kematian atau eutanasia, yangangka
yang menunjukkan tanda-tanda toksisitas, deskripsi tanda-tanda toksisitas yang diamati, termasuk waktu
onset,durasi, dan tingkat keparahan efek toksik, jumlah hewan yang menunjukkan lesi, jenis lesi,
merekatingkat keparahan dan persentase hewan yang menunjukkan setiap jenis lesi.

51. Jika memungkinkan, hasil numerik harus dievaluasi dengan tepat dan secara umum dapat
diterimametode statistik. Perbandingan efek di sepanjang rentang dosis harus menghindari penggunaan
beberapa uji-t. Itumetode statistik harus dipilih selama desain penelitian.

52. Untuk kontrol kualitas diusulkan agar data kontrol historis dikumpulkan dan untuk numerikkoefisien
variasi data dihitung, terutama untuk parameter yang dikaitkan dengan pengganggu endokrindeteksi.
Data ini dapat digunakan untuk tujuan perbandingan ketika studi aktual dievaluasi.

Halaman 9

OECD / OCDE4079© OECD, (2008)Laporan pengujian.

53. Laporan pengujian harus mencakup informasi berikut:

Zat uji:- sifat fisik, kemurnian dan sifat fisikokimia;- data identifikasi.Kendaraan (jika perlu):- justifikasi
untuk pilihan kendaraan, jika selain air.Hewan uji:- spesies / galur yang digunakan;- jumlah, usia dan jenis
kelamin hewan;- sumber, kondisi perumahan, diet, dll.;- bobot individu hewan pada awal tes.- justifikasi
untuk spesies jika bukan tikusKondisi pengujian:-Penelitian untuk pemilihan tingkat dosis;- Rincian
formulasi zat uji / persiapan diet, konsentrasi tercapai, stabilitas danhomogenitas persiapan;- perincian
administrasi zat uji;-konversi dari konsentrasi zat uji diet / air minum (ppm) ke dosis aktual(mg / kg berat
badan / hari), jika berlaku;- Rincian kualitas makanan dan air.Titik akhir opsional diselidiki- daftar titik
akhir opsional yang diselidikiHasil:- perubahan berat badan / berat badan;- konsumsi makanan, dan
konsumsi air, jika berlaku;- data respons toksik menurut jenis kelamin dan tingkat dosis, termasuk tanda-
tanda toksisitas;- sifat, keparahan dan durasi pengamatan klinis (apakah reversibel atau tidak);- aktivitas
sensorik, kekuatan genggaman dan penilaian aktivitas motorik;- tes hematologis dengan nilai garis dasar
yang relevan;- Tes biokimia klinis dengan nilai garis dasar yang relevan;- berat badan pada euthanasia
dan data berat organ;- Temuan necropsy;- deskripsi terperinci dari semua temuan histopatologis;- data
penyerapan jika tersedia;- pengobatan statistik dari hasil, jika sesuai.Diskusi hasil.Kesimpulan.

Halaman 10
407OECD / OCDE© OECD, (2008)10

LAMPIRAN 1

DEFINISI

Dosis adalah jumlah zat uji yang diberikan. Dosis dinyatakan sebagai berat zat uji persatuan berat badan
hewan uji per hari (mis. mg / kg berat badan / hari), atau sebagai makanan tetapkonsentrasi.

Dosis adalah istilah umum yang terdiri atas dosis, frekuensinya, dan lamanya dosis.

Toksisitas jelas adalah istilah umum yang menggambarkan tanda toksisitas yang jelas setelah pemberian
teszat. Ini harus memadai untuk penilaian bahaya dan harus sedemikian rupa sehingga meningkatkan
Dosis yang diberikan dapat diharapkan menyebabkan timbulnya tanda-tanda toksik yang parah dan
kemungkinankematian.

NOAEL adalah singkatan untuk tingkat efek samping yang tidak diamati. Ini adalah tingkat dosis tertinggi
di mana tidak adaTemuan terkait pengobatan yang merugikan diamati karena pengobatan.Estrogenicity
adalah kemampuan suatu bahan kimia untuk bertindak seperti hormon estrogen alami (misalnya
estradiol 17ß)dalam organisme mamalia.

Androgenicity adalah kemampuan bahan kimia untuk bertindak seperti hormon androgenik alami
(misalnya testosteron) diorganisme mamalia.Aktivitas tiroid adalah kemampuan suatu bahan kimia untuk
bertindak seperti hormon tiroid alami (misalnya T 3 ) dalam suatuorganisme mamalia.

Antioestrogenicity adalah kemampuan suatu bahan kimia untuk menekan aksi hormon estrogen
alami(misalnya estradiol 17ß) dalam organisme mamalia.

Antiandrogenicity adalah kemampuan bahan kimia untuk menekan aksi hormon androgenik
alami(misalnya testosteron) dalam organisme mamalia.

Aktivitas antitiroid adalah kemampuan suatu bahan kimia untuk menekan aksi hormon tiroid alami
(misalnyaT 3 ) pada organisme mamalia.

Validasi adalah proses ilmiah yang dirancang untuk mengkarakterisasi persyaratan operasional dan
batasan amenguji metode dan untuk menunjukkan keandalan dan relevansinya untuk tujuan tertentu.

Halaman 11

OECD / OCDE40711© OECD, (2008)LAMPIRAN 2Endpoint yang direkomendasikan untuk deteksi endokrin
gangguan (ED) pada TG 407Titik akhir wajibTitik akhir opsionalBerat- Testis- Epididimid- Adrenals- Prostat
+ vesikula seminalis dengan koagulasikelenjar- Ovarium- Rahim, termasuk leher rahim-
TiroidHistopatologi- Gonad:- Testis dan- Ovarium- Aksesori organ seks:- Epididimid,- Prostat + vesikula
seminalis dengankelenjar koagulasi- Rahim, termasuk leher rahim- Adrenal- Tiroid- Vagina- Corengan
vagina- Kelenjar susu jantan- HipofisisPengukuran hormon- Tingkat sirkulasi T3, T4- Tingkat sirkulasi TSH

Halaman 12
407OECD / OCDE© OECD, (2008)12LITERATUR(1) OECD (Paris, 1992). Laporan Ketua Pertemuan
Kelompok Kerja Pakar Ad hoc padaNeurotoksisitas Jangka Pendek dan (Tertunda) Sistemik.(2) IPCS
(1986). Prinsip dan Metode untuk Penilaian Neurotoksisitas yang Terkait dengan PaparanBahan kimia.
Dokumen Kriteria Kesehatan Lingkungan No. 60(3) Tupper, DE, Wallace, RB (1980). Utilitas Pemeriksaan
Neurologis pada Tikus. Acta Neurobiol.Exp., 40, 999-1003.(4) Gad, SC (1982). Layar Neuromuskuler untuk
Penggunaan dalam Toksikologi Industri. J. Toxicol Environ. Kesehatan,9, 691-704.(5) Moser, VC, McDaniel,
KM, Phillips, PM (1991). Strain Tikus dan Perbandingan Stok Menggunakan aBaterai Pengamatan
Fungsional: Nilai Dasar dan Efek Amitraz. Toxicol. Appl. Pharmacol., 108,267-283.(6) Meyer OA, Tilson
HA, Byrd WC, Riley MT (1979). Metode untuk Penilaian Rutin Orangdan Kekuatan Cengkeraman Hindlimb
Tikus dan Tikus. Neurobehav. Toxicol., 1, 233-236.(7) Crofton KM, Howard JL, Moser VC, Gill MW, Reiter
LW, Tilson HA, MacPhail RC (1991).Perbandingan Interlaboratory Eksperimen Aktivitas Motorik: Implikasi
untuk NeurotoksikologisPenilaian. Neurotoxicol. Teratol. 13, 599-609.(8) OECD (1998). Laporan
Pertemuan Pertama Pengujian dan Penilaian Gangguan Endokrin OECD(EDTA) Task Force, 10 th -11 th
Maret 1998, ENV / MC / CHEM / RA (98) 5.(9) OECD. (2006). Laporan Validasi Pedoman Tes yang
Diperbarui 407: Ulangi Dosis 28-Hari LisanStudi Toksisitas pada Tikus Laboratorium. Seri untuk Pengujian
dan Penilaian No 59, ENV / JM / MONO (2006) 26.(10) OECD. (2002). Makalah Ulasan Lengkap tentang
Penilaian Metode Tes untuk Mengganggu Hormon SeksBahan kimia. Seri tentang Pengujian dan
Penilaian No 21, ENV / JM / MONO (2002) 8.(11) OECD (2002). Kerangka Konseptual untuk Pengujian dan
Penilaian Gangguan EndokrinBahan kimia.
http://www.oecd.org/document/58/0,3343,fr_2649_37407_2348794_1_1_1_1_37407,00.html(12)
OECD (2006). Laporan Ringkasan Akhir dari pertemuan Kelompok Manajemen Validasi untukpengujian
mamalia. ENV / JM / TG / EDTA / M (2006) 2.(13) OECD (2006). Draf Ringkasan catatan pertemuan
Satuan Tugas tentang Gangguan EndokrinPengujian dan Penilaian. ENV / JM / TG / EDTA / M (2006) 3.
(14) OECD (2000) Dokumen panduan tentang pengakuan, penilaian dan penggunaan tanda-tanda klinis
sebagai manusiawititik akhir untuk hewan coba-coba yang digunakan dalam evaluasi keselamatan. Seri
tentang Pengujian dan Penilaian No 19.ENV / JM / MONO (2000) 7.(15) P. Haley, R. Perry, D. Ennulat, S.
Frame, C. Johnson, J.-M. Lapointe, A. Nyska, PW Snyder, D.Walker, dan G. Walter (2005). Makalah Posisi
STP: Pedoman Praktik Terbaik untuk Evaluasi Patologi Rutindari Sistem Kekebalan Tubuh . Toxicol Pathol
2005 33: 404-407.

Halaman 13

OECD / OCDE40713© OECD, (2008)(16) Hess RA, Moore BJ. (1993) Metode Histologis untuk Evaluasi
Testis. Dalam: Metode dalamToksikologi Reproduksi, Chapin RE dan Heindel JJ (eds). Academic Press: San
Diego, CA, hlm. 52-85.(17) Latendresse JR, Warbrittion AR, Jonassen H, Creasy DM. (2002) Fiksasi testis
dan mata menggunakancairan Davidson yang dimodifikasi: perbandingan dengan cairan Bouin dan cairan
Davidson konvensional. Toxicol. Pathol.30, 524-533.(18) OECD. (2007). Pedoman OECD untuk Pengujian
Bahan Kimia N ° 440: Uterotrophic Bioassay pada Hewan Pengerat:Tes skrining jangka pendek untuk sifat
estrogenik.(19) OECD. (2008). Dokumen Panduan tentang histopatologi. Gangguan endokrin: Pedoman
untukevaluasi histologis (konsep). Seri Pengujian dan Penilaian.