Bahan dan Alat

Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah plasma darah digunakan sebagai sampel uji,
n-heksan dan kloroform sebagai larutan pada ekstraksi cair-cair, TCA 10%, metanol,
asetonitril, 10% ZnSO4-NaOH (1:1), dan larutan jenuh (NH4)2SO4 sebagai cairan pengendap
protein plasma.
Ala yang digunakan pada praktikum ini adalah tabung sentrifuga, gelas ukur, mikropipet,
vortex, sentrifuga.

Prosedur

1. Pengendapan protein plasma

Plasma blanko dipipet sebanyak 250µl, dimasukan kedalam setiap tabung sentrifuga
sebanyak 5 tabung. Kemudian ditambahkan zat pengendap kedalam setiap tabung dengan
perbandingan :

Zat Pengendap Protein Perbandingan (Plasma:Zat pengendap protein)

10% TCA 1 : 0,2

Larutan jenuh (NH4)2SO4 1:2
10% ZnSO4 – NaOH 0,5N (1:1) 1:2
Asetonitril 1:2
Metanol 1:2

Tabung yang berisis campuran plasma dan larutan pengendap protein divortex selama
kurang labih 2 menit. Kemudian campuran plasma dan cairan pengendap disentrifuga
dengan kecepatan 4000rpm selama 15 menit. Supernatan dan endapan yang diperoleh
diamati dan dibandingkan hasilnya dengan bebagai zat pengendap protein lainnya.
2. Ekstraksi Cair – Cair
Plasma blanko dipipet sebanyak 1mL dimasukan kedalam setiap tabung sentrifuga
sebanyak 2 tabung. Kedalam setiap tabung yang berbeda dimasukan pelarut pengekstraksi
yaitu kloroform sebayak 5ml dimasukan kedalam tabung 1 dan n-heksan sebanyak 5ml
dimasukan kedalam tabung 2. Proses ekstraksi dilakukan dengan menaruh tabung diatas
vortex selama 15 menit dengan kecepatan maksimal. Kemudian tabung disentrifuga
menggunakan sentrifugasi dengan kecepatan 3500rpm selama 15 menit. Hasil ekstraki
diamati perbedaannya anra hasil ekstraksi menggunakan kloroform dengan n-heksan.
Data Pengamatan
1. Pengendapan Protein Plasma
Cairan yang Tinggi
Gambar Kejernihan Keterangan
digunakan endapan

0,8 cm
10% TCA + Agak jernih

Larutan
jenuh 1,7 cm + Agak jernih
(NH4)2SO4

10% ZnSO4
2 cm
– NaOH +++ Sangat jernih
0,5N (1:1)

1,5 cm
Asetonitril ++ Jernih

1,7 cm
Metanol + Agak jernih

Tabel . . Hasil Pengamatan Pengendapan Protein Plasma

2. Ekstraksi Cair-Cair
Larutan yang Keterangan
Gambar Kesimpulan
digunakan gambar

Atas : pelarut
Kloroform Tengah : emulsi
Bawah : plasma

n-heksan lenih
baik karena
pembentukan
emulsi lebih
sedikit yang
menunjukan
pemisahan lebih
baik dari
Atas : pelarut kloroform
Bawah : plasma
n-heksan

Tabel . . Hasil Pengamatan Ekstraksi Cair-Cair