Metode selulosa anti-ssDNA tidak membuahkan hasil sehingga penggunaannya dalam

penelitian dihentikan. Hasil kami menunjukkan antibodi dengan kemurnian sangat tinggi
yang diperoleh dengan metode manik magnetik terdeteksi oleh pewarnaan perak pada
tingkat sensitivitas nanogramGel Melon memurnikan semua IgG, juga, tetapi pada tingkat
kemurnian yang jauh lebih rendah, seperti yang ditentukan oleh pewarnaan SDS-PAGE perak
dan metode Agilent 2100 Lab-on-chip
Tingkat pemulihan, meskipun awalnya rendah, yaitu 20-40% dapat ditingkatkan
dengan menambahkan lebih banyak manik-manik dan dimodifikasi dengan pH buffer elusi
yang disesuaikan
Perbandingan awal (SDS-PAGE) dari antibodi anti-DNA yang dimurnikan dari donor
normal dan pasien leukemia limfositik B-sel kronis (BCLL) menggunakan metode pemurnian
afinitas dua langkah menggunakan manik-manik magnetik, mengungkapkan tidak ada
perbedaan nyata dalam berat molekul dan jumlahnya.

anti-DNA yang dimurnikan dari serum pasien dengan systemic lupus erythematosus (SLE)
menyatakan pola elektroforesis yang berbeda dari kontrol normal dan bervariasi antara
pasien lupus individu dari satu-band hingga empat-band. Band-band banyak menunjukkan
bahwa beberapa protein selain IgG bergabung bersama dengan fraksi antibodi, selama
pemurnian Melon Gel.Namun, metode ini mengungkapkan "pola tersembunyi" yang
sebelumnya tidak terdeteksi oleh elektroforesis SDSPAGE karena keterbatasan konsentrasi
yang diperlukan untuk visualisasi dengan pewarnaan perak. Tabel 3 menunjukkan bahwa
pasien lupus memiliki berbagai pola pita (1-4) sementara donor normal dan Pasien B-CLL
memiliki pola yang sama, yaitu dua pita.

Analisis Western blot menegaskan bahwa antibodi yang dimurnikan oleh manik-manik
magnetik dan pemurnian spin gel melon, memang termasuk dalam isotipe IgG (Gambar 4).
Perbedaan yang mencolok sekali lagi adalah kemurnian; perbandingan kedua metode
tersebut mengungkapkan dan menegaskan efisiensi pemurnian yang unggul dari metode
manik-manik magnetik dua langkah.
 Profil subclass IgG manusia ELISA mendeteksi keberadaan keempat subclass IgG di kedua
manik-manik dan sampel murni Melon -gel Nilai-nilai yang dinyatakan dalam ug / ml jauh lebih
tinggi dalam sampel murni Melon -gel (lebih dari 1600 untuk IgG1 versus 46 dalam sampel
manik), dengan partisipasi yang sama dari Igg1, IgG2 dan IgG3 dan perbedaan IgG4 yang jauh
lebih tinggi pada kelompok yang dimurnikan MelonGel . Karena ini adalah sampel yang sama,
dan dua metode yang berbeda, kami percaya bahwa nilai yang lebih tinggi dalam IgG4
terisolasi Melon-gel adalah karena masalah teknis dengan pipet yang telah menciptakan
peningkatan yang salah. Data ini dibandingkan dengan nilai referensi untuk subkelas antibod
isoelektrik mengungkapkan sifat poliklonal dari antibodi murni lupus manusia (pola
yang dioleskan, pI ~ 9) dibandingkan dengan antibodi monoklonal tikus (tiga pita jelas
berbeda pI ~ 7) (Gambar 10a & 10b). Data menunjukkan bahwa antibodi yang dimurnikan dari
pasien lupus adalah poliklonal dan bahwa B-CLL dan antibodi donor normal adalah
monoklonal, dengan demikian memperhitungkan pola pita yang berbeda. Ini juga
menunjukkan bahwa sel-B pada pasien B-CLL dan pada orang normal lebih dekat dalam
evolusi daripada sel B-lupus

Gambar 10a dan 10b

Data Agilent-Lab-on-chip ) mengkonfirmasi data hidrolitik awal yang diperoleh oleh

spektrofotometri UV. Kita dapat melihat dari Gambar 12a bahwa reaksi DNAse1 terjadi
sangat cepat (sekitar 30 menit diperlukan untuk mendapatkan nukleotida kecil (20-50bp)
Dan untuk mendapatkan nukleotida kecil dengan anti body anti SS DNA dari substrat yang sama
memerlukan waktu 12 jam pada suhu 37°c ( gambar 12a)
Kami tidak membandingkan sampel yang diisolasi Melon-gel dan sampel yang terisolasi dari
magneticbeads karena yang diperoleh dari pemurnian Melon-gel tidak memiliki kemurnian
yang cukup. Hasil kami menunjukkan bahwa manik-manik magnetik memurnikan antibodi
anti-ssDNA mungkin memiliki aktivitas hidrolitik terhadap ssDNA. Tampaknya kegiatan ini
dipertahankan dalam molekul IgG antibodi anti-ssDNA selama dan setelah pemurnian.