JURUSAN TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

LAPORAN PRAKTIKUM INSTRUMENTASI II

Kelompok :3

Nama : Annida Zahrani

NIM : P2790311805

Judul : Prosedur Pemeriksaan ELISA

Alat : Well Plate 96, Rak sampel, Mikropipet multi terminal 5-50 µl, Mikropipet 10-100 µl,
Tip putih, Inkubator, Alumunium Foil, ELISA

Bahan : Sampel serum, Dilution buffer, Control positive (tutup merah), Control negative (tutup
biru), Larutan konjugat 1x, Substrate solution, Stop solution

Cara Kerja :

1. Menyiapkan alat dan bahan

2. Tambahkan dilution buffer kedalam masing-masing well menggunakan mikropipet
sebanyak 25 µl
3. Tambahkan 25 µl control positive kedalam well A1 dan B1
4. Tambahkan 25 µl control negative kedalam well C1 dan D1
5. Tambahkan 25 µl masing-masing sampel serum kedalam well
6. Kemudian bungkus well plate menggunaka alumunium foil dan inkubasi selama 45
menit pada suhu 37 o C di inkubator
7. Setelah 45 menit keluarkan well plate dari incubator
8. Cuci well plate selama 3 menit dengan 300 µl wash solution dialat ELISA washer
9. Siapkan larutan konjugasi 1x kemudian buat pengenceran konjugasi 10x dengan
perbandingan 1:9 (1 bagian larutan konjugat 1x : 9 bagian dilution buffer)
10. Tambahkan 100 µl konjugat 1x yang telah diencerkan kedalam masing-masing well
 11. Kemudian bungkus well plate menggunakan alumunium foil dan inkubasi selama selama
30 menit pada suhu 21 oC
12. Cuci well plate selama 3 menit dengan 300 µl wash solution dialat ELISA washer
13. Tambakan 100 µl substrate solution kedalam setiap well
14. Kemudian bungkus well plate menggunakan alumunium foil (dalam keadaan gelap) dan
inkubasi selama selama 15 menit pada suhu 21 oC
15. Tambahkan 100 µl stop solution kedalam setiap well
16. Lakukan pembacaan optical density dengan mensetting “RPR Antibody” pada alat
menggunakan panjang gelombang 450 nm

Interpretasi hasil dan Validasi :

Hasil valid jika ODnc > 0,7

Dan rasio ODpc control / ODnc < 0,3

Rumus nilai SN :

SN = OD sample / ODnc x 100

S/N < 50% = positive

50 % < S/N < 60% = doubtful

S/N > 60% = negative

Keterangan :

OD : Optical Density

nc : Negative Control

pc : Positive Control

Daftar Pustaka:

Lamichhane, Utsav,. 2020. How to do ELISA. Diakses di Youtube tanggal 17 Oktober 2020

ID VET Innovative diagnostic. 2006. ID Screen PPR Competition.pdf