FOLIA HISTOCHEMICA

ET CYTOBIOLOGICA
Vol. 48, No. 1, 2010
hlm. 148-152

Pewarnaan Trichrome Mallory dapat menunjukkan laju

diferensial sintesis RNA pada endometrium eutopik dan
ektopik

Maria Wo³uñ-Cholewa1, Krzysztof Szymanowski2, Miros³aw Andrusiewicz1,

Anna Szczerba1 dan Jerzy B. Warcho³1
1
Departemen Biologi Sel, K.Marcinkowski University of Medical Sciences, Poznañ, Polandia
2
Departemen Kesehatan Ibu dan Anak, K.Marcinkowski University of Medical Sciences, Poznañ,
Polandia

Abstrak: Pewarnaan rangkap tiga Mallory adalah teknik histokimia yang digunakan terutama untuk menganalisis ikat
jaringan dan kelenjar dan jaringan lain. Kami telah menjelaskan perbedaan pewarnaan nukleus antara endometrium eutopik
dan ektopik serta hiperplasia endometrium dan adenokarsinoma menggunakan metode Mallory. Perbedaan ultrastruktur
antara endometrium eutopik dan ektopik telah terdeteksi. Dalam endometrium normal dan hiperplastik, keberadaan inti sel
stroma dengan peningkatan afinitas terhadap biru anilin telah diamati. Afinitas telah menghilang setelah jaringan
pencernaan dengan RNase. Dalam kasus endometriosis, terlepas dari jenis sel, nukleus telah menunjukkan afinitas dengan
oranye G. Efek serupa pada adenokarsinoma telah dicatat. Studi ultrastruktural telah menunjukkan bahwa dalam
endometrium normal stroma mengandung sel dengan inti sel eukromatik dan kerapatan elektron rendah. Pada
endometriosis, inti sel heterokromatik yang ada di stroma dan di dalam kelenjar telah terdeteksi. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa teknik Mallory dapat menjadi alat yang berguna untuk mengenali perbedaan antara endometrium
eutopik dan ektopik. Afinitas untuk anilin biru pada endometrium normal dan hiperplastik kemungkinan besar terjadi
karena peningkatan sintesis RNA. Berdasarkan pewarnaan Mallory, kesamaan antara hiperplasia dan endometrium yang
tidak berubah berbeda dengan hasil pewarnaan serupa yang diperoleh pada kasus adenokarsinoma dan endometriosis
mungkin disarankan.
Kata kunci: pewarnaan trikrom Mallory, biru anilin, endometriosis, ultrastruktur.

Pendahuluan menggunakan laparoskopi atau laparotomi [2]

Endometriosis (endometrium ektopik) banyak
dijumpai pada wanita pada masa kematangan seksual.
Ini mempengaruhi 3-10% wanita usia reproduksi. Di
antara pasien infertil dan wanita dengan nyeri di
panggul, penyakit ini bahkan lebih sering ditemukan
dan ditemukan pada 20-90% kasus [1,2].
Endometriosis adalah adanya epithe lium dan
stroma endometrium di luar rongga rahim. Paling
sering terdeteksi di dalam pelvis, pertama di ovarium
dan di peritoneum viseral pelvis. Serupa dengan
endometrium khas, fokus endometriotik menunjukkan
perubahan siklik dengan perdarahan sebagai respons
terhadap rangsangan hormonal [2].
Korespondensi: M. Wo³uñ-Cholewa, Dept. of Cell Biology,
University of Medical Sciences, Rokietnicka 5D, 60-806 Poznañ,
Polandia; tel .: (+4861) 8547186; fax: (+4861) 8547169, e-mail:
doskon@amp.edu.pl
Dalam praktek klinis, endometriosis didiagnosis
bersama dengan biopsi dan konfirmasi selanjutnya
dari lesi khas dengan pemeriksaan histopatologi.
Teknik histokimia menggunakan sifat kromofilik
selektif untuk diagnosis diferensial. Pewarnaan
histokimia asam dan alkali yang diterapkan
memungkinkan untuk membedakan antara sel
basofilik, aci dophilic atau chromophobic. Dalam
beberapa kasus afinitas dari setiap pewarnaan dan
prinsip pewarnaan sel belum cukup dikenali. Namun,
metode pewarnaan non-spesifik [3] dapat memberikan
alat diagnosis yang berguna untuk mengenali
perubahan patologis, yang mengarah untuk
membedakannya dari jaringan normal.
Metode, yang memungkinkan untuk membedakan
sel sekretori, melibatkan teknik deteksi serat jaringan
ikat. Pewarnaan Mallory termasuk dalam teknik yang
umum digunakan di mana tiga pewarna: biru anilin,
oranye G dan asam fuchsin digabungkan [4,5].
Pewarnaan multi-pewarna ini memiliki kemampuan
berbeda
© Polish Histochemical et Cytochemical Society Folia
Histochem Cytobiol. 2010: 48 (1): 148 (148-152)
10.2478 / v10042-008-0106-4
Pewarnaan Trichrome Mallory pada endometrium eutopik dan ektopik 149

tiating sejumlah besar struktur jaringan. Serat kolagen Masalah etika. Studi ini disetujui oleh Badan Peninjau Etik
ditunjukkan dengan warna biru tua, jaringan ikat yang setempat. Semua pasien yang berpartisipasi dalam penelitian ini
mengandung kolagen berwarna biru, eritrosit memberikan persetujuan tertulis mereka.
berwarna oranye, dan kromatin, nuklei, sitoplasma
basofilik, dan sitoplasma sel otot terlihat dalam warna Histokimia
© MasyarakatPolandia
dan SitokimiaFolia Histochem Cytobiol. 2010: 48 (1): 149 ()
merah. Pewarnaan Mallory saat ini digunakan untuk 148-15210.2478 / v10042-008-0106-4
mendeteksi banyak komponen jaringan di beberapa Analisis statistik. Uji chi-square (software STATISTICA ver.5,
organ [4,5]. Statsoft, Krakow, Polandia) digunakan untuk membandingkan
Dalam makalah ini kami menjelaskan perbedaan rasio pewarnaan dengan anilin biru dengan inti sel non-pewarnaan
dari endometria eutopik dan ektopik. Nilai P <0,05 dianggap
pewarnaan inti antara endometrium ektopik ujung signifikan.
eutopik menggunakan metode triple-chrome Mallory.
Hasil yang diperoleh dari pewarnaan Mallory Mikroskop elektron. Untuk analisis mikroskop elektron,
dibandingkan dengan hasil yang dicatat pada kasus spesimen jaringan endometrium eutopik dan ektopik direndam
hiperplasia endometrium dan adenokarsinoma. Selain pada suhu 20 ° C selama minimal 2 jam, dalam larutan fiksatif
yang mengandung 8% glu taraldehida (Taab, Berkshire, UK) dan
itu, perbedaan ultrastruktural antara endometrium 8% paraformaldehida (Merck, Darmstadt, Jerman ) disangga
eutopik dan ektopik dikonfirmasi dengan dengan buffer fosfat 0,1 M (Merck), pH 7,3. Setelah perendaman,
menggunakan mikroskop elektron transmisi. spesimen dipotong dan diinkubasi semalaman dalam larutan
fiksatif, dibilas selama 60 menit dalam buffer fosfat 0,1 M, pH
dalam0,1 M
7,3, dan di-postfiks dalam 2% OsObuffer fosfat 4
Bahan dan metode selama 2 jam (Merck). Spesimen didehidrasi dalam etanol,
Pengumpulan dan persiapan sampel endometrium. Sampel diwarnai blok dengan alkoholik uranyl asetat dan tertanam dalam
jaringan dari endometria normal diperoleh selama histerektomi media Spurr (Merck). Setelah kontras, ultrastruktur sel epitel dan
dari 8 wanita yang didiagnosis dengan neoplasia intra-epitel fibroblas diperiksa dengan menggunakan JEOL 100 Transmission
serviks. Fragmen endometriosis ovarium dari 15 wanita (usia: 28- Electron Microscope [6].
42 tahun, median: 35) dikumpulkan selama laparoskopi atau
laparotomi dengan biopsi lesi. Diagnosis endometriosis dipastikan
dengan pemeriksaan histopatologi jaringan. Semua wanita yang Hasil
diperiksa (dengan atau tanpa endometriosis) memiliki siklus
menstruasi yang teratur dan tidak mengalami pengobatan Pewarnaan trikrom Mallory pada inti sel endometrium
hormonal setidaknya selama 6 bulan sebelum operasi. Spesimen eutopik dan ektopik menunjukkan afinitas variabel
diambil selama fase sekresi dari siklus menstruasi, dikonfirmasi terhadap pewarna yang diterapkan. Inti sel dalam
dengan pengukuran kadar hormon serum. Spesimen jaringan endometrium normal menunjukkan afinitas yang kuat
bedah diperoleh di Departemen Kesehatan Ibu dan Anak, terhadap anilin biru (77% ± 11 inti sel biru) (Gbr. 1a),
Universitas Ilmu Kedokteran Poznan. Sampel jaringan yang
dikumpulkan dicuci dengan PBS bebas kalsium untuk yang terlihat sangat jelas pada sel stroma. Sedangkan,
menghilangkan residu darah, dan diinkubasi dalam media inti sel dari sel epitel menunjukkan ciri khas untuk
budidaya F-12 DMEM / Ham yang bebas serum (Sigma, St. teknik ini afinitas dengan orange G (Gbr. 1a, inti sel
Louis, USA). Beberapa sampel jaringan difiksasi dalam 4% oranye). Namun demikian, dalam semua kelenjar
buffered paraformaldehyde (PFA), pH 7.4 (Sigma), diproses dan
ditanam parafin.
endometrium normal hanya beberapa inti sel epitel
Selain itu, bagian jaringan yang tertanam parafin arsip dari yang diwarnai dengan warna biru anilin (Gbr. 1a).
endometriosis ovarium (n = 15), adenokarsinoma endometrium (n Dalam kasus endometrium ektopik, penerapan teknik
= 4) dan hiperplasia endometrium tanpa atipia (n = 1) digunakan Mallory menunjukkan adanya inti sel oranye dan biru
untuk pewarnaan trikrom Mallory (usia pasien: 32-45 tahun , di kelenjar (masing-masing 66% ± 7 dan 34% ± 5)
median 35). Sebelum pewarnaan trichrome Mallory, bagian serial
di dewaxed dalam xylene dan direhidrasi dalam seri etanol
serta di stroma (59% ± 8 dan 41%) ± 5 masing-
bertingkat. masing; Gbr. 1b). Analisis statistik dari hasil yang
diperoleh untuk kelenjar dan sel stroma menunjukkan
Pewarnaan Mallory trichrome. Sampel endometrium eutopik perbedaan yang signifikan dalam jumlah inti sel
dan ektopik, difiksasi dalam PFA 4% dan diproses seperti yang diwarnai biru pada endometria eutopik dan ektopik.
dijelaskan di atas, dipotong menjadi dua mikron. Bagian jaringan
setelah dewaxing dan rehydrating diwarnai sesuai dengan
Untuk setiap tipe sel nilai p kurang dari 0,05.
prosedur trikrom Mallory. Pewarnaan dilakukan dalam dua solusi. Pada tahap penelitian selanjutnya, bagian parafin
Pada awalnya, bagian jaringan diwarnai dalam larutan asam dicerna secara enzimatis dengan ribonuklease A,
fuchsin (Sigma) 1% dalam air suling. Langkah kedua termasuk deoksiribonuklease II dan tripsin. Setelah pencernaan
pewarnaan ulang dalam larutan 0,5% anilin biru (Sigma), 2% dengan inti sel ribonuklease dari bahan yang
oranye G (Sigma), dan 2% asam oksalat (Sigma) dalam air suling.
Langkah standar mengikuti yang dijelaskan oleh Bloom dan dianalisis benar-benar kehilangan afinitasnya dengan
Fawcett [3]. biru anilin. Semua inti sel, apa pun jenisnya, diwarnai
dengan oranye G (Gbr. 1c). Pra-pengobatan dengan
Pencernaan enzimatik. Sebelum bagian pewarnaan diinkubasi DNase dan tripsin tidak menyebabkan perubahan
selama 5 jam pada suhu 37 ° C dengan 0,4 mg / ml RNAse A apapun pada pewarnaan inti sel.
(Sigma) dalam air suling pH 6,8 atau dalam 0,2 mg / ml DNAse II
(Sigma) dalam 0,03 M buffer fosfat pH 7,0, diaktifkan dengan Setelah itu kami memutuskan untuk memeriksa
0,06% magnesium klorida atau 0,1% tripsin (Sigma) dalam 0,01 efek pewarnaan Mal lory pada kasus hipertrofi
buffer fosfat pH 7,6. Bagian kontrol yang berdekatan diinkubasi endometrium dan karsinoma endometrium. Dalam inti
dalam buffer fosfat tanpa enzim4. sel hipertrofi endometrium ditemukan menunjukkan
 afinitas yang kuat ke garis biru ani (Gbr. 1d). Efek sedangkan inti sel stroma diwarnai dengan oranye G
pewarnaan tidak tergantung pada jenis sel yang dan biru anilin (Gbr. 1e).
diwarnai. Sedangkan pada karsino ma endometrium, Studi ultrastruktural pada endometria eutopik dan
inti sel epitel bermanifestasi kuat dengan oranye G, ektopik dihasilkan dari perbedaandari Mallory
150 M. Wo³uñ-Cholewa et al.

pewarnaan trichrome. Dalam endometrium normal,
stroma mengandung sel-sel dengan inti sel ekromatik
dan kerapatan elektron rendah (Gambar 2a dan 2b).
Sebagian besar sel epitel memiliki peningkatan rasio
nukleositoplasma dan nukleus dengan jumlah
heterokromatin yang tinggi. Pada endometriosis, inti
sel heterokromatik hadir baik di stroma maupun
kelenjar dan memiliki bentuk yang tidak beraturan
(Gambar 2c dan 2d).
Diskusi
Dalam beberapa publikasi [7-9] kesamaan dalam
struktur histologis endometrium yang terletak di luar
mukosa uterus
Gambar. 1. Pewarnaan trikrom Mallory pada endometrium (a)
eutopik tanpa RNase A, (b) ektopik, (c) RNase eutopik diobati, (d)
hiper plasia endometrium tanpa atipia dan (e) karsinoma
endometrium. Inti sel dalam endometrium normal dan sel stroma
bermanifestasi ke anilin biru. Beberapa inti sel epitel menunjukkan
keterkaitan dengan G oranye (ditunjukkan dengan panah). Dalam
endometrium ektopik, keberadaan inti sel oranye dan biru di dalam
kelenjar dan juga di stroma diamati. Dalam kasus pencernaan
dengan ribonuklease A semua nuklei diwarnai dengan oranye G.
Pada hiperplasia endometrium tanpa atip ia inti sel menunjukkan
afinitas ke biru anilin. Inti sel epitel karsinoma endometrium
menunjukkan afinitas yang kuat hanya pada jingga G sedangkan
inti sel sel stroma diwarnai dengan jingga G dan biru anilin.
dan di endometrium lokalisasi normal telah
didokumentasikan, bertentangan dengan beberapa
kasus klinis, di mana epitel kelenjar ektopik berbeda
dalam fungsi dan morfologi dari sel endometrium
normal. Anomali yang paling sering dijelaskan telah
© Polish Histochemical et Cytochemical Society Folia
Histochem Cytobiol. 2010: 48 (1): 150 (148-152)
10.2478 / v10042-008-0106-4
Pewarnaan Trichrome Mallory pada endometrium eutopik dan ektopik 151
alat lengkap untuk diagnosis perubahan patologis
pada endometriosis. Metode yang diterapkan sekarang
didasarkan pada analisis perbedaan tingkat ekspresi
gen yang dipilih antara jaringan normal dan jaringan
patologis. Dibutuhkan pendekatan baru untuk
dijelaskan oleh perkembangan awal endometriosis
atau oleh mekanisme yang mengarah ke
endometriosis. Usia wanita yang terkena
endometriosis juga dianggap penting, yang
dikonfirmasi oleh identitas struktural dan fungsional
dari endometrium dan epitel kelenjar ektopik [1,9,10].
Tidak ada publikasi yang menjelaskan kesesuaian
teknik histokimia yang mungkin bermanfaat.
membedakan endometrium eutopik dan ektopik.
Sayangnya penggunaan kadar CA125 sebagai
penanda spesifik endometriosis belum terbukti. Studi
semacam itu membutuhkan dukungan finansial yang
signifikan dan sangat memakan waktu [11].
 Dalam studi ini kami telah memutuskan untuk
menerapkan metode pewarnaan trikrom klasik
menurut Mallory dalam kasus endometrium eutopik
dan ektopik. Konsisten dengan efek pewarnaan
Mallory, sekretori
Gambar. 2. nuklei pada (a, b)
Ultrastruktureutopik dan (c, d) endometria ektopik.
Dalam kasus endometrium normal,
stroma mengandung sel dengan ekromat
ic dan inti selkerapatan elektron rendah
dengandengan jumlah heterokromatin tinggi. Pada
endometriosis,sel heterokromatik
intitelah ada baik di
stroma maupun di dalam kelenjar.sel ini
Intimemiliki bentuk yang tidak beraturan.
© Polish Histochemical et Cytochemical Society Folia
Histochem Cytobiol. 2010: 48 (1): 151 (148-152)
10.2478 / v10042-008-0106-4
152 M. Wo³uñ-Cholewa et al.
Perbedaan pewarnaan mencerminkan kandungan
variabel DNA dan protein dalam inti sel dan
perubahan yang bergantung pada protein dalam
struktur DNA [12]. Delgado dan rekan kerja [13]
menemukan juga bahwa perbedaan pewarnaan inti sel
dengan warna biru anilin asam tercermin pada
integritas membran yang terganggu.
Dalam penelitian kami, keberadaan inti sel dengan
peningkatan afinitas terhadap anilin biru telah diamati
sebagian besar di stroma endometrium normal.
Berbeda dengan itu, hanya beberapa sel epitel yang
menunjukkan afinitas terhadap anilin biru dan telah
diwarnai secara khas untuk teknik Mal lory, serta
dalam kasus endometrium hipertrofik. Pada
endometriosis, baik dalam bahan yang baru saja
ditanamkan maupun dalam sampel arsip, peningkatan
jumlah sel terlepas dari tipe dengan afinitas ke oranye
G telah terdeteksi yang serupa dengan hasil dari
adenokarsinoma. Pengamatan menunjukkan
kesamaan antara jaringan yang terkena hipertrofi
sederhana dan endometrium normal. Terlebih lagi,
adenokarsinoma dan endometriosis, memiliki noda
yang sama, yang tampaknya menunjukkan karakter
yang sama dari kedua jenis jaringan.
Dalam penelitian ini efek pencernaan enzimatik
dengan tiga enzim [4,5] telah dilakukan. Hanya
ribonu clease A pencernaan telah ditemukan
mempengaruhi sifat kromofilik inti sel di
endometrium. Setelah perlakuan seperti itu, semua
inti sel telah diwarnai kuat dengan warna oranye G.
Hal ini menunjukkan bahwa sel dengan inti sel yang
diwarnai biru menunjukkan peningkatan sintesis
RNA. Untuk membuktikan saran tersebut dilakukan
pewarnaan dengan acridine orange. Hal ini
memungkinkan jenis sel membedakan tergantung
pada keberadaan DNA dan RNA [data tidak
ditampilkan]. Sama halnya dengan teknik Mallory,
perbedaan isi RNA telah terdeteksi dan dikonfirmasi
ketergantungan pada jenis endometrium.
Untuk memperjelas perbedaan cara pewarnaan inti
sel yang diteliti dalam penelitian ini, studi
ultrastruktur pada endometrium normal dan
endometriosis telah dilakukan. Endometrium eutopik
telah menunjukkan peningkatan jumlah sel dengan
inti sel telah diwarnai dengan oranye G [4,5]. Selain
itu, inti sel menunjukkan afinitas yang kuat terhadap
garis biru ani. Hasil yang diperoleh memanifestasikan
konsistensi tertentu dengan yang diperoleh
sebelumnya. Kovaks dan rekan kerja [12] menerapkan
teknik pewarnaan trikroma yang didefinisikan sebagai
astrin, mirip dengan metode Mallory. Dalam
penelitian mereka, perbedaan pola pewarnaan yang
semula diasumsikan dalam inti sel hati dan pankreas
dicatat. Itu tergantung pada bentuk kromatin inti.
Selain itu, penulis menemukan bahwa stimulasi sel
dengan pilocarpine atau prednisolone menghasilkan
pewarnaan biru yang lebih kuat pada inti sel.
Percobaan berikutnya dengan pencernaan enzimatik
dari jaringan yang dipelajari menyarankan bahwa
inti sel ekromatik. Dalam sel endometrium ektopik
dengan heterokromatin padat elektron telah terdeteksi.
Untuk menjelaskan hasil yang diperoleh, kondisi
inti sel pada saat melakukan percobaan telah
dipertimbangkan. Inti sel yang diwarnai dengan
warna biru anilin mungkin telah terlibat dalam proses
transkripsi. Meningkatnya jumlah RNA
mempengaruhi penyerapan struktur sel dan,
akibatnya, inti sel diwarnai dengan warna biru
menggunakan teknik Mallory. Akibatnya inti sel
diwarnai dengan warna berbeda dari yang diharapkan.
Efek pewarnaan dan perbedaan yang dihasilkan
antara endometrium eutopik dan ektopik memerlukan
penelitian lebih lanjut. Dapat diasumsikan bahwa
alasan dari hasil ini mencerminkan adanya molekul
biru anilin -NH2 dan grup -NH +. Dalam lingkungan
asam (pH <3,0) mereka
© Polish Histochemical et Cytochemical Society
Folia Histochem Cytobiol. 2010: 48 (1): 152 ()
148-15210.2478 / v10042-008-0106-4
menjalani protonisasi dan, oleh karena itu, secara
selektif dapat mengikat RNA bermuatan negatif yang
baru disintesis. Di sisi lain, dalam fase non-
transkriptif kelompok asam nukleat anionik
digabungkan dengan protein inti dan berinteraksi
dengan oranye G. Kesimpulannya, afinitas inti sel
tertentu dengan oranye G atau anilin biru mungkin
disebabkan oleh peningkatan transkripsi [ 4,5].
Penelitian saat ini telah menunjukkan bahwa
teknik histologis klasik, yang dilupakan saat ini, dapat
memberikan cara yang mudah dan ekonomis untuk
membedakan aktivitas transkripsi inti sel dalam
jaringan normal dan jaringan yang diubah secara
patologis yang memungkinkan diagnosis lesi yang
cepat secara paralel.
Pengakuan: Studi ini didukung sebagian oleh Komite Nasional
untuk Penelitian Ilmiah, memberikan No .: NN 407 084 836 dan
NN 407 109 533.
Referensi
[1] Bondza PK, Maheux R, Akoum A. Wawasan tentang
disfungsi endometrium terkait endometrio sis : ulasan.
Depan Biosci (Elite Ed). 2009; 1: 415-28.
[2] Wolun-Cholewa M, Butowska W, Fischer N, Warchol W,
Nowak-Markwitz E. Terapi foto dinamis yang dimediasi
oleh asam 5-aminolevulinic dari sel epitel primer
endometriotik manusia. Photomed Laser Surg. 2009; 27:
295-301.
[3] Bloom W dan Fawcett Don W. Buku teks histologi. Edisi ke-
10. Philadelphia, PA: WB Saunders; 1975.
[4] Chieffi-Baccari G, Marmorino C, Minucci S, Di Matteo L,
pewarnaan d'Istria M. Mallory dapat menunjukkan kecepatan
diferensial sintesis RNA: II. Pengamatan komparatif dalam
inti vertebrata. Eur J Histochem. 1992; 36: 187-96.
[5] Chieffi Baccari G, Marmorino C, Minucci S, Di Matteo L,
Varriale B, d'Istria M, Pewarnaan Chieffi G. Mallory dapat
menunjukkan laju diferensial sintesis RNA: I. Siklus
musiman di kelenjar harderian hijau katak (Rana esculenta).
Eur J Tokemnya. 1992; 36: 81-90.
[6] Wasko R, Wolun-Cholewa M, Bolko P, Kotwicka M.
Pengaruh bromocriptine pada apoptosis sel dan proliferasi
dalam kultur sel GH3. Neuro Endocrinol Lett. 2004; 25: 223-
8.
[7] Matthews CJ, Redfern CP, Hirst BH, Thomas EJ.
Karakterisasi sel epitel dan stroma manusia yang dimurnikan
dari endometrium dan endometriosis dalam kultur jaringan.
Pupuk Ster il. 1992; 57: 990-7.
[8] Ulangi DB. Apakah Sampson salah? Steril Pupuk. 2002; 78:
686-93.
[9] Vinatier D, Cosson M, Dufour P. Apakah endometriosis
merupakan penyakit percobaan endome? Berbagai Reprod
Eur J Obstet Gynecol. 2000; 91: 113-25.
[10] Campbell IG & Thomas EJ. Endometriosis: gen kandidat.
Reprod Hum. 2001; 7: 15-20.
[11] Winkel CA. Evaluasi dan manajemen wanita dengan
endometriosis. Obstet Gynecol. 2003; 102: 397-408. [12] Kovács
P, Csaba G, Balogh G. Deteksi status fungsi inti sel yang berbeda
dengan teknik pewarnaan trikrom baru. Acta Histochem. 1982;
71: 73-5. [13] Delgado NM, Sánchez-Vázquez ML, Hernández O,
Reyes R. Korelasi antara destabilisasi membran sperma oleh
heparin dan pewarnaan biru anilin sebagai indeks integritas
membran. Arch Androl. 1998; 40: 147-52.

Dikirim: 3 Agustus 2009

Diterima setelah tinjauan: 17 Januari 2010