Konstituen tanaman Perlengkapan Mobileephase Deteksi

tulis
tahap

Karbohidrat Gel silika Etil asetat: toluena (1: 1) 10% etanol

asam belerang

Alkaloid / fenantren Gel silika Toluena: etil Reagen Dragendorff

asetat: dietilamina (7: 2: 1)
Flavonoid Gel silika Etil asetat: asam format: glasial UV 254 nmor
asam asetat: air (10: 1.1: 1.1: 2.6) 366 nm
Tanin Gel silika Etil asetat: asam format: glasial Asam sulfat vanillin
asam asetat: air (7.5: 0.3: 0.2: 2) reagen
Saponin glikosida Gel silika Kloroform: asam asetat glasial: Asam sulfat vanillin
bertemu
reagen
hanol: air (6.4: 3.2: 1.2: 0.8)
SpecificMobilephases
Betasitosterol Gel silika Benzene: ethylacetate (9: 1) Asam sulfat vanillin
reagen
Rutin Gel silika Etil asetat: asam format: glasial UV 254 nmor
asam asetat: air (10: 1.1: 1.1: 2.6) 366 nm

Kurkumin Gel silika Kloroform: metanol (9,8: 0,2) Cahaya tampak

Gingerol Gel silika Toluena: etilasetat (9.3: 0.7) Asam sulfat vanillin
reagen
Stigmasterol Gel silika Petroleumether: etil asetat (7: 3) Asam sulfat vanillin
reagen

Tabel 1.
Fase gerak TLC untuk kelas penting fitokonstituen [15].

sebuah aplikasi potensial dalam identifikasi obat otentik jika dibandingkan dengan penanda
bioaktif dan membantu dalam menjaga kualitas dan konsistensi isolat atau jamu dalam
penemuan obat alami [18].

7.1 Kromatografi kolom (CC)

Kromatografi kolom bekerja berdasarkan prinsip pertukaran ion, saringan molekuler, dan fenomena adsorpsi.
CC adalah teknik yang paling berguna untuk pemisahan konstituen aktif dengan konsentrasi yang
lebih besar. Terkadang pecahan membutuhkan langkah lain untuk konsentrasi. Kromatografi
perpindahan adalah metode baru yang mengandung elusi senyawa bioaktif yang memiliki afinitas
tinggi untuk adsorben. Pecahan bahan elut bisa lebih pekat daripada larutan asli yang ditempatkan
di kolom. Kolom disiapkan dengan menggunakan silika untuk kromatografi kolom. Fraksi
dilarutkan dalam volume pelarut sekecil mungkin dan dicampur dengan 2 gram silika untuk
kromatografi kolom. Pengepakan kolom basah atau kolom kering dapat dilakukan.

Pengepakan kolom memainkan peran penting dalam pemisahan kualitas yang baik. Campuran
dikeringkan untuk mendapatkan bubuk yang mengalir bebas dan ditambahkan ke kolom.
Kemudian kolom dielusi dengan pelarut dengan berbagai proporsi. Setiap eluen dikumpulkan
dalam tabung reaksi yang dibersihkan dengan benar secara terpisah untuk studi lebih lanjut yang
akan dilakukan.

1
 7.2 Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC)

Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) berperan penting dalam isolasi produk alami.
Ini adalah teknik serbaguna dan banyak digunakan untuk isolasi dan identifikasi. Di era
modern, teknik HPLC menjadi populer untuk mempelajari pemisahan, identifikasi, dan
studi sidik jari untuk pengendalian kualitas.

1
tanaman herbal. Saat ini, teknik ini berfungsi sebagai pilihan utama bagi para ilmuwan penelitian.
Sampel multikomponen pada skala analitik dan preparatif dapat dipisahkan dan dipelajari lebih
mudah dengan HPLC. Dengan demikian kekuatan pemecahan HPLC idealnya digunakan untuk
pemrosesan ekstrak herbal yang cepat. Instrumen HPLC dirancang dengan cara modular dan
berisi pompa pengiriman untuk pelarut dan katup injeksi manual bersama dengan auto-sampler.
Saat sampel dimasukkan dalam sampel otomatis, sampel tersebut dibawa ke bagian penting atau
jantung HPLC yaitu kolom analitik, kolom pelindung. Selanjutnya, detektor, perekam, dan printer
digunakan untuk menunjukkan representasi grafis pada perangkat komputer yang berbasis atau
diinstal perangkat lunak. Dalam setiap pemisahan bahan kimia, Perbedaan cara kerja dan hasil
produksi karena senyawa tertentu mempunyai kecepatan migrasi yang berbeda, yang dapat
dipenuhi dengan menggunakan HPLC dengan memanfaatkan kolom dan fasa gerak tertentu
sesuai persyaratan pemisahan.
Konsep trial and error diterapkan untuk mengembangkan fase gerak baru bersama dengan
pengetahuan sebelumnya tentang pemisahan, strukturnya, dan polaritas atau nonpolaritas pelarut
yang diperlukan. Jadi, luasan atau derajat pemisahan didasarkan pada pilihan fase diam atau
fase gerak. Secara umum identifikasi dan pemisahan fitokimia dapat dilakukan dengan
menggunakan sistem isokratik yaitu menggunakan fasa gerak tunggal. Elusi gradien terkadang
dapat digunakan jika proporsinya diubah dari pelarut organik ke air. Ini juga tergantung pada
waktu, dan mungkin diinginkan jika lebih dari satu komponen sampel dipelajari. Atau juga
berbeda dari satu sama lain secara signifikan dalam retensi komponen dengan kolom sesuai
kondisi yang dicapai. Identifikasi senyawa dengan HPLC adalah bagian penting dari uji HPLC.
Identifikasi senyawa bioaktif dengan pemilihan detektor HPLC sekali lagi merupakan langkah
penting berikutnya. Setelah detektor dipilih dan pengaturan selesai, pengujian dapat
dikembangkan dengan trial and error sistem pelarut. Setelah ketajaman puncak sampel yang
diketahui diperoleh, sistem pelarut dapat dipilih. Parameter penting dari pengujian ini adalah
bahwa puncak tajam yang bersih dari sampel yang diketahui diamati dari kromatograf. Waktu
retensi yang wajar untuk mengidentifikasi puncak harus ada. Puncak asing pada tingkat
deteksi harus dipisahkan dengan baik dari puncak utama yang tajam. Pada waktu maksimum,
detektor UV populer digunakan dalam deteksi HPLC. Detektor UV digunakan di antara semua
detektor karena mereka memiliki sensitivitas tinggi dan absorbansi UV dari sebagian besar
senyawa yang terjadi secara alami dimungkinkan pada panjang gelombang rendah 200–210 nm.
Jika senyawa bioaktif yang perlu diisolasi hanya terdapat dalam jumlah kecil di dalam sampel,
maka sensitivitas deteksi UV yang tinggi merupakan bonus dalam penemuan obat alami herbal.
Kromatografi cair yang digabungkan dengan spektrometri massa (LC / MS) juga merupakan
teknik yang ampuh untuk analisis ekstrak tumbuhan kompleks. Ini menawarkan penentuan yang
akurat dari berat molekul protein, peptida. Pola isotop juga dapat dideteksi dengan teknik ini.
Kemajuan baru-baru ini mencakup teknik penyemprotan listrik, thermospray, dan ionisasi ion,
yang menawarkan keuntungan unik dari sensitivitas dan spesifisitas deteksi tinggi [19].

HPLC yang dikombinasikan dengan spektrometri massa (MSn) memberikan banyak

informasi untuk penjelasan struktur suatu senyawa karena kemampuan pengenalannya
1
meningkat dan pemisahan dengan identifikasi struktur menjadi sangat mudah. Oleh karena
itu, ketika biomarker yang berstandar murni tidak tersedia, identifikasi cepat dan akurat
senyawa kimia bioaktif dalam tanaman obat dimungkinkan karena kombinasi HPLC dan MS.
Untuk menghitung keberhasilan keseluruhan produk alami dalam isolasi dan pemisahan,
yang paling penting adalah pemrosesan bahan mentah lebih lanjut untuk menghasilkan
sampel yang sesuai untuk analisis HPLC. Bantalan yang signifikan adalah pada pilihan
pelarut untuk identifikasi senyawa aktif sampel. Bahan sumber yaitu bahan tanaman herbal
bubuk kering harus dipelajari dengan sangat efisien pada tahap dan langkah awal: pertama,

1
senyawa yang menarik ke dalam solusi. Dalam kasus seperti itu, pengembangan fase gerak yang
awalnya menggunakan TLC dan memiliki gagasan tentang sistem pelarut sebelum menerapkan ke
HPLC menghemat waktu Anda. Jadi, dalam kasus ekstraksi normal, bahan tanaman kering diolah
dengan pelarut organik metanol, kloroform. Setelah ekstraksi, ekstrak dikeringkan dengan rotary
evaporator dan ekstrak bubuk dipekatkan dan diinjeksikan ke dalam HPLC untuk pemisahan dan
analisis. HPLC berguna untuk senyawa yang tidak dapat diuapkan atau yang terurai di bawah
suhu tinggi, dan memberikan pelengkap yang baik untuk kromatografi gas untuk mendeteksi
senyawa.

1. Metode deteksi

8.1 Spektroskopi inframerah transformasi-Fourier (FTIR)

FTIR telah terbukti menjadi alat yang berharga untuk karakterisasi dan identifikasi

senyawa atau gugus fungsi (ikatan kimia) yang ada dalam campuran ekstrak tumbuhan

yang tidak diketahui. Ini membantu untuk identifikasi dan penentuan struktur molekul.

Selain itu, spektrum FTIR dari senyawa bioaktif biasanya sangat unik sehingga disebut

sebagai “sidik jari” amolekuler. Setelah senyawa bioaktif dapat diisolasi, selanjutnya

dilakukan pengeringan ekstrak dan isolat menggunakan rotary evaporator. Spektrum

ekstrak tumbuhan bubuk kering dapat diperoleh dariFTIR. Perangkat lunak FTIR berisi

kumpulan senyawa yang diketahui, dan dengan demikian, spektrum senyawa yang tidak

diketahui dapat diidentifikasi dengan perbandingannya. Persiapan sampel untuk analisis

FTIR dapat dilakukan dengan berbagai cara. Di tahun-tahun sebelumnya, Serbuk ekstrak

tumbuhan herbal padat digiling dengan potassiumbromide (KBr) dengan teknik triturasi

yang baik kemudian dikompres menjadi pellet tipis, yang dapat dianalisis. Sekarang karena

kemajuan baru, hanya sampel padat atau cair yang tersedia dan Anda hanya perlu

menempatkan satu tetes atau sejumput sampel di antara dua pelat dan tetesan atau sampel

tersebut membentuk lapisan tipis di antara pelat. Ini adalah cara termudah untuk melakukan

FTIR, dan grafik serta bilangan gelombang direkam dengan menggunakan perangkat lunak

berbasis komputer. Wilayah dalam spektrum IR di atas 1200 cm Ini adalah cara termudah

untuk melakukan FTIR, dan grafik serta bilangan gelombang direkam dengan

menggunakan perangkat lunak berbasis komputer. Wilayah dalam spektrum IR di atas 1200

cm Ini adalah cara termudah untuk melakukan FTIR, dan grafik serta bilangan gelombang

direkam dengan menggunakan perangkat lunak berbasis komputer. Wilayah dalam

spektrum IR di atas 1200 cm - 1 menunjukkan pita spektral atau puncak karena getaran

ikatan individu atau gugus fungsi yang diperiksa. Wilayahnya di bawah 1200 cm - 1 dikenal
1
sebagai 'wilayah sidik jari'. Ini

menunjukkan pita karena getaran molekul bioaktif lengkap. Kompleksitas senyawa terlihat

di daerah sidik jari. Intensitas berbagai pita di FTIR direkam secara khusus pada skala

sederhana sebagai kuat (S), sedang (M), atau lemah (W). Dan sesuai dengan teknik baru

yang dikembangkan, instrumen canggih dari perusahaan bruker, jasco telah dipermudah

dengan penerapan satu tetes atau sejumput sampel pada instrumen dan perangkat lunak ini

akan memberikan hasil. Terakhir, keuntungannya adalah sampel dapat digunakan kembali.

8.2 Spektrometri Massa (MS)

Spektrometri massa memainkan peran penting dan berfungsi sebagai teknik analisis
yang kuat. Ini adalah satu-satunya teknik yang digunakan untuk mengidentifikasi senyawa
yang tidak diketahui berat molekulnya.
Dengan demikian, penghitungan senyawa yang diketahui dan penjelasan struktur dan sifat
kimia molekul dimungkinkan karena MS. Spektrum MS yang paling kuat memberikan
gambaran tentang berat molekul sampel, yang dapat ditentukan. Nilai dari teknik ini adalah
bahwa ia hanya membutuhkan sejumlah mikrogram bahan dan dapat memberikan bobot
akurat molekul dan dapat menghasilkan pola fragmentasi yang kompleks, yang sering
menjadi ciri khas senyawa tersebut. Teknik ini berhasil untuk penjelasan struktural ekstrak
herbal dan senyawa organik, untuk sekuensing peptida atau oligonukleotida.

1
campuran kompleks dengan spesifisitas tinggi dengan mendefinisikan baik berat molekul
dan fragmen diagnostik molekul secara bersamaan. Peralatan kromatografi gas dapat
langsung digabungkan dengan spektrometer massa pindai cepat (GCMS) dari berbagai
jenis. Analisis resolusi tinggi dapat dilakukan karena kopling peralatan.
Kromatografi cair-spektroskopi massa (LC-MS) menawarkan penentuan yang akurat
dari berat molekul protein dan peptida. Pola isotop juga dapat dideteksi dengan teknik ini.
Kemajuan terbaru termasuk teknik penyemprotan listrik, termospray, dan ionisasi ion,
yang menawarkan keuntungan unik dari sensitivitas dan spesifisitas deteksi tinggi.

8.3 Spektroskopi resonansi nuklearmagnetik (NMR)

Spektroskopi resonansi magnetik nuklir memberikan sifat fisik, kimia, dan biologi
materi. C 13 NMR digunakan untuk mengidentifikasi jenis karbon yang ada di dalam
kompleks. H1-NMR digunakan untuk mengetahui jenis hidrogen yang ada dalam senyawa
dan untuk mengetahui bagaimana atom hidrogen terhubung. Spektroskopi protonNMR pada
dasarnya bekerja pada prinsipnya dengan mengukur momen magnetik atom hidrogennya
dan memberikan metode untuk menentukan struktur suatu senyawa organik. Di hampir
semua senyawa, atom hidrogen ada, yang terikat pada kelompok yang berbeda seperti
-CH2-, -CH-, -CHO, -NH2, -CHOH-, dll. Representasi grafis dari spektrump protonNMR
memberikan catatan jumlah atom hidrogen dalam situasi yang berbeda ini. Ini memberikan
informasi hanya tentang jumlah atom hidrogen dalam senyawa tetapi bukan jumlah atom
karbon. Namun, informasi langsung tentang sifat kerangka karbon molekul hanya dapat
diperoleh dengan spektroskopi karbon 13 NMR. Spektroskopi 13C-NMR bekerja sama
dengan protonNMR dan dengan demikian kombinasi hasil dua metode memberikan
informasi yang sangat berguna untuk identifikasi senyawa yang tidak diketahui. Ini adalah
sarana penjelasan struktural yang kuat untuk terpenoid, alkaloid, atau flavonoid baru. Ini
juga berguna dalam identifikasi atau analisis glikosida, dalam menunjukkan hubungan
antara gugus gula dan konfigurasinya.
Banyak protein atau makromolekul lain dapat diidentifikasi oleh proton dan 13C-NMR.
Untuk analisis NMR, jumlah sampel yang sangat kecil diperlukan untuk analisis dan sampel
tersebut dapat digunakan kembali untuk analisis lebih lanjut. Sebagai contoh, biaya
instrumen NMR sangat mahal sehingga banyak analisis teknis instrumentasi analitik yang
canggih tersedia untuk melaksanakan pekerjaan penelitian Anda. Ilmuwan yang menangani
NMR memiliki tangan yang baik dalam mengerjakan NMR. Untuk mendapatkan resolusi
tinggi, teknik baru yang digunakan adalah kromatografi cair - resonansi magnetik nuklir
(LC-NMR). Ini adalah kombinasi dari teknik pemisahan kromatografi untuk isolasi fraksi
aktif dan identifikasi nomor atom hidrogen atau karbon dengan spektroskopi NMR. Ini
adalah salah satu metode yang paling kuat dan hemat waktu untuk pemisahan dan penjelasan
struktural senyawa dan campuran yang tidak diketahui, terutama untuk penjelasan struktur
ekstrak tumbuhan herbal dan isolatnya dalam penemuan obat alami herbal.

1
8.4 Pengembangan teknologi baru dalam penelitian penemuan obat alami

Alam adalah anugerah Tuhan untuk menemukan obat herbal baru untuk melakukan
penelitian secara ilmiah. Kekuatan pendorong baru untuk skrining obat baru, metabolit
biologis aktif dari produk ini berasal dari alam yang mengarah pada keberhasilan obat. Kimia
merupakan cabang dimana teknologi baru bermunculan dimana kimia farmasi sangat penting
karena berkaitan dengan kesehatan masyarakat umum. Kimia kombinatorial, skrining
throughput tinggi, bioinformatika, proteomik, dan genomik adalah teknik baru yang telah
muncul secara luas di bidang penelitian penemuan farmasi. Semua penelitian penemuan obat
dan

1
teknologi memiliki potensi yang sangat besar untuk memanfaatkan keragaman kimiawi dan
alami produk. Teknik yang baru dikembangkan berkembang pesat dengan hasil yang baik
dalam penemuan obat alami [20]. Ini termasuk keragaman molekul, desain pustaka senyawa,
struktur protein 3D, skrining berbasis NMR, desain obat modern 3D-QSAR, konsep
fisikokimia, dan desain obat yang dibantu komputer menggunakan perangkat lunak yang
berbeda, prediksi toksisitas obat, dan metabolisme [21]. Pendekatan baru untuk
meningkatkan dan mempercepat penemuan obat bersama dan proses pengembangan
diharapkan mengambil tempat terutama dari inovasi dalam elusidasi target obat dan
penemuan struktur timbal. Teknologi baru yang kuat merevolusi penemuan obat. Beberapa
perangkat lunak akan berguna dalam melakukan studi, yang tersedia secara gratis seperti
Zinc.docking.org.

Teknologi untuk penemuan obat maju dan sangat beragam [22]. Aktivitas NPDD
(penemuan obat produk alami) bekerja bahu membahu dan sangat bermanfaat denganHTS,
kimia kombinatorial, dan genomik. Pendekatan baru telah terbukti menunjukkan perbaikan
dan mempercepat penemuan obat bersama dan proses pengembangan. Teknik baru sedang
bermunculan dan mengambil tempat terutama dari inovasi dalam penjelasan target obat. Ini
akhirnya mengarah pada penemuan struktur utama. Teknologi baru yang kuat merevolusi
penemuan obat herbal alami.

8.5Penyaringan throughput tinggi

High-throughput screening (HTS) adalah teknik yang dirancang khusus dalam

penemuan obat herbal yang merupakan metode standar untuk penemuan hit berdasarkan
identifikasi melalui perpustakaan yang tersimpan. HTS relevan dengan bidang biologi dan
kimia dan membantu eksperimen ilmiah terutama digunakan dalam penemuan obat.
HTS menggunakan perangkat lunak pengolah dan pengontrol data serta detektor sensitif
yang membantu para peneliti melakukan penelitian secara ilmiah untuk merancang dan
mengembangkan struktur baru dari penemuan obat herbal. Ini adalah robotika dan
memungkinkan peneliti untuk dengan cepat melakukan berbagai tes biokimia, genetik, atau
fitofarmakologis. Melalui HTS, seseorang dapat dengan cepat mengidentifikasi senyawa
bioaktif yang dapat berguna dalam jalur biomolekuler tertentu dalam menghambat kondisi
penyakit.
Dengan demikian, jalur biomolekuler memberikan informasi tentang mekanisme obat
serta cara internal seseorang terhadap kondisi penyakit. Pengetahuan dan hasil percobaan
ini memberikan titik awal untuk merancang obat dan untuk memahami interaksi atau
peran proses biokimia tertentu dalam biologi.

HTS adalah inovasi yang relatif baru dan membutuhkan teknologi komputer berkecepatan
tinggi. Ia bekerja berdasarkan prinsip penyaringan throughput tinggi dari sejumlah besar senyawa

1
 alami menggunakan teknologi berbasis komputer, yang lebih mudah dan lebih menghemat waktu.
Pengetahuan dapat dimanfaatkan lebih lanjut untuk penemuan obat herbal baru. Minat penelitian

dapat dihasilkan dalam penemuan obat alami melalui semua teknik yang lebih baru ini.
Banyak negara berkembang baik memiliki laboratorium skrining yang sangat terspesialisasi dan
mahal untuk menjalankan operasi HTS. Namun, negara-negara yang tertarik untuk bekerja dalam
penelitian yang kasusnya lembaga penelitian berukuran kecil hingga sedang akan menggunakan
fasilitas HTS yang ada sesuai kenyamanan mereka daripada pengaturan penuh.

2. Kesimpulan

Dengan meningkatnya minat dalam pengembangan obat herbal dengan efek samping
minimal, ada peluang yang lebih baik untuk mengeksplorasi sifat obat dan biologi lainnya
dari produk alami yang sebelumnya tidak dapat diakses. Untuk menetapkan kegunaannya,
itu

1
 wajib untuk fokus pada visualisasi dan identifikasi tanaman herbal yang
tidak terpakai di dunia. Kemudian ditekankan pada ekstraksi, isolasi, dan
karakterisasi fitokimia yang merupakan anugerah alam secara rasional dan
ilmiah. Ada kebutuhan yang belum terpenuhi untuk pemanfaatan produk alami
untuk kepentingan umat manusia dan pengembangan timbal baru untuk
penemuan obat. Setelah fitokimia diperoleh, ini dapat digunakan untuk
eksplorasi lebih lanjut melalui studi QSAR, pemodelan molekuler, dan studi
hewan diikuti dengan uji klinis. Keberhasilan produk bahan alam dalam
penemuan obat pada intinya bagi perusahaan farmasi dan lembaga penelitian
pada hakikatnya berkaitan dengan kemampuan dan manfaatnya bagi orang
awam yaitu manfaat sosio-ekonomi bagi kesejahteraan orang awam
kesehatannya penting bagi dunia daripada semua yang datang. datang ke tangan
Anda jika kesehatan adalah prioritas utama. Produk alami mengandung struktur
kimia yang kompleks, yang berbeda menurut berbagai spesiesnya di alam, dan
jika metode teknologi tinggi yang tersedia diterapkan, hal itu dapat mengarah
pada penemuan baru obat-obatan, yang bermanfaat bagi seluruh dunia. Dengan
demikian, dunia selalu dikaruniai alam, dan manusia dikaruniai otak, jadi mari
kita manfaatkan untuk menemukan entitas baru yang akan tersedia bagi orang
awam dengan harga ekonomis dan kita akan bahagia menjalani kehidupan di
bumi ini. . Bahkan, produk alami telah dan akan menjadi sumber penting dari
senyawa farmasi baru. Bertahun-tahun yang lalu kehidupan dimungkinkan atau
diperpanjang hanya karena ramuan alami sesuai referensi yang dapat diperoleh
dalam literatur. Di era baru abad kedua puluh satu, tidak ada kehidupan di bumi
tanpa jamu atau produk yang diperoleh melalui penemuan jamu alami. Angkat
topi untuk itu!