DBS

Instruments:
Preparasi Larutan Standar, QC, dan kurva baku
- Larutan standar : 2,5ng – 1000ng/ml
- Larutan kerja :
- Larutan QC : dibuat dalam konsentrasi 2,5/5/15/200/800/4000ng/mL
- Kurva Baku :
Preparasi Sampel
- 25mikroL ditotolkan 5x pada 903 protein saver cards
- Cards dikeringkan kurang lebih 2 jam  disimpan pd suhu 4,-20,-80oC
Ekstraksi sampel:
- Menggunakan micropuncher diambil 3mm disk dari DBS card (3 disk dapat didapatkan dari
25mikroL sampel DBS tsb)
- 1st DBS punch digunakan untuk mengekstraksi TVF parent drugs (A)
2nd DBS punch digunakan untuk mengekstraksi TFV active drug (B)
- A diletakkan di tabung mikrosentrifuge, kemudian diekstraksi dg 200mikroL 100% methanol
dan 20mikroL internal standard (isotopic TFV dan FTC)
- Cara ekstraksinnya dg dilakukan sonifikasi 10 menit, kemudian dilanjutkan sentrifugasi 2
menit
- Supernatan diambil dan dikeringkan, kemudian direkonstitusi dengan 100microL H2O pro
analisis

Metode Validasi
- Selektivitas :
- Linearitas :
- Sensitivitas :
- Akurasi : 5 larutan QC direplikasi 5x  run
- Presisi : 5 larutan QC di run 5x
- Extraction Rec :
- Stabilitas :
- Matrix interf :
2009  mengukur plasma
Instrument: HPLC
Coloumn: Synergy 4um Polar RP; 80 A, 2,00mm x 150mm
Mobile phase: 3% acetonitrile/1% as asetat dalam DI water; flow: 200uL/min

Preparasi Larutan Standar, QC, dan kurva baku

- Larutan standar :
a. Dibuat 2 larutan baku 1mg dalam 1ml water (utk kalibrasi #1 dan QC preparation)
b. Dibuat larutan baku 1mg dalam 1ml air untuk IS iso TFV, kemudian diambil 10uL dalam
3ml air
- Larutan kerja :
a. Dibuat 9 larutan kerja range 10-1500ng/mL dari larutan baku. Pelarut 50:50 metanol/air
(v/v)
- Larutan QC :
a. Dibuat dari larutan baku yg ke 2.
b. HQC: 1200ng/mL; MQC 300ng/mL; LQC: 30ng/mL; LLOQ: 30ng/mL
- Kurva Baku :
2011: mengukur ARV pada RBC dan PBMC
Instrumen:
Thermo Scientific TSQ Vantage® triple quadrupole mass spectrometer coupled with coupled
with a HESI II® probe
Thermo Scientific Accela® pump, Thermo Scientific, San Jose, CA, an Eppendorf
CH30/CH50 (Heater/Controller) Hauppauge, NY, and CTC Analytics HTC PAL®
autosampler, Zwingen, Switzerland
Kolom: XcaliburTM 2.0.7 SP1. A Synergi Polar RP 2.5 _M, 100 A, 2.0 × 100 mm
Mobile phase: 2% acetonitrile and 0,1% acetic acid dalam air
Aliran: isokratik 250uL/min; run time 8m menit
Temperature kolom: 40 derajat C

Preparasi
Preparasi Larutan Standar, QC, dan kurva baku
- Lysed cellular matrix:
a. Isolasi RBC dari darah  lisis dg 0,5mL cold 70:30 metanol:UP water  yg dianalisa
b. Blanko hPBMC  lisis 70:30 pada konsentrasi 10x106 cells/mL  QC prep and extraction
matrix for the calibration curve
- Larutan standar :
a. Dibuat larutan baku 1mg TFV dalam 1 ml UP water
- Larutan kerja :
a. Dibuat prep larutan baku dg konsentrasi 500,50,5pmol/uL
b. Sampel = 20uL larutan kerja ditambahkan oada 2ml 1M KCL yg dihasilkan dari blanko
hPBMC diatas
c. Larutan kerja IS dibuat pada konsentrasi 50fmol/uL (step sama dengan pembuatan
larutan kerja TFV)
- Larutan QC : dibuat dalam konsentrasi LQC1: 2.5; LQC2: 5; LQC3: 15; MQC: 150;
HQC: 1500fmol/sampel
d. Kurva Baku : Dari larutan kerja tsb dibuat dg range 1-2000fmol/sampel