LOGBOOK
TANGGAL KEGIATAN
20/3/2021 Pemaparan hasil studi literatur (ZOOM I)
3/4/2021 Pemaparan metode preparasi & validasi
terpilih (ZOOM 2)
8/4/2021 Menemui Bu Lidya (Contact Person ITD)
10/4/2021 Survei bahan dan alat
13/4/2021 Survei bahan dan alat
14/4/2021 Membeli botol dan vial online
15/4/2021 Mengunjungi lab analisis Farmasi Unair
16/4/2021 Mengunjungi CV. INTERLAC Bronggalan
17/4/2021 (ZOOM 3)
HASIL
 Membahas metode preparasi dan validasi pada plasma,
urine, saliva dan DBS
 Pemilihan fase gerak (isokratik 50:50)
 Perubahan volume larutan baku
 Membahas teknis kerja (waktu retensi, panjang
gelombang
 Membahas inform consent untuk blank sample
 Membahas stabilitas pada metode validasi
 Penentuan LLOQ
 Membahas pemilihan ISTD
 Mengecek alat HPLC dan LCMS
 Membahas fase gerak, fase diam dan alat sentrifuse suhu
khusus (4 derajat C dan – 20)
 Membeli methanol 2 L
 Kebanyakan yang di jual bukan untuk analisis
 Diantum ada, namun harga mahal
 37 vial + 5 botol
 Bertemu dengan Pak kushairi untuk menanyakan tempat
pembelian bahan dan alat
 Stock ada di Lakarsantri
 Follow up HPLC, LC-MS & supplier
29/4/2021 Penentuan bahan laboratorium yang akan
di beli(ZOOM 4)
02/5/2021 Pendaftaran lab kampus B (per anak)
15/5/2021 Pemaparan materi plasma & follow up
minggu lalu (ZOOM 5)
20/5/2021 Pembahasan teknis follow up 6 bulan
dengan apt Febri & bu ica (ZOOM 6)
21/5/2021 Menyiapkan kit untuk follow up 6 bulan
Bertemu pak kusairi di lab kampus
Bertemu bu Aty di ITD
Swab
25/5/2021 Melunasi & mengambil asam format di
Dianum
29/5/2021 Pemaparan materi Saliva & follow up
(ZOOM 7)
04/6/2021 Bertemu Bu Wahyuni di ITD
Bertemu Bu Ety di ULP
12/6/2021 Pemaparan materi urine & follow up
(ZOOM 8)
 Sudah order semua
 Sudah daftar
 Merencanakan follow up minggu selanjutnya
 Perlu menyiapkan kit untuk follow up pasien
 Sudah selesai dan sudah di revisi
 HPLC di kampus hanya bisa memisahkan tanpa melihat
spectra
 Disarankan untuk tetap melalui tahap analisis di HPLC
sebelum ke LC MS
 Sudah Swab
 Sudah lunas & sudah di ambil
 Merencanakan follow up minggu selanjutnya
 Koordinasi terkait peminjaman HPLC di lantai 10
 Menanyakan biaya filtrasi dan spesifikasi filter
 Menanyakan pak kus terkait faktu penyimpanan hasil
filter fase gerak & kepeluan ertas filter untuk injek
sampel; serta menanyaka kesediaa beliau memasang
bagian HPLC yg di bypass
 Koordinasi ke bu Putri terkait lab lantai 8 pasca berita

26/6/2021 Pemaparan materi DBS & Follow up
(ZOOM 9)
Melakukan filtrasi fase gerak di ULP
Pemaparan materi kepatuhan & Folow up
(ZOOM 10)
penutupan kampus sementara
 Koordinasi ke bu wahyuni terkait lab lantai 10 pasca
berita penutupan kampus sementara
 Menentukan kolom HPLC
 Menentukan kertas filter yang digunakan
 Asam format belum bisa di filtrasi karena terlalu asam,
perlu pengenceran

 LOGBOOK 2022

TANGGAL KEGIATAN
Minggu 1 & 2  Konvirmasi HPLC & LCMS ITD  HPLC full antrian
Januari  LCMS kosong  dipegang mas
Ayik
 Injek tenofovir di lantai 9  Terdapat peak di menit 7 kolom
 Injek di lantai 10 (pompa A& B) dengan baru  lalu mencoba injek blank
pengaturan pompa B & kolom Lama  peak di menit 7 ternyata milik
 Injek Tenofovir Kolom Baru blank run
 Peak menit 5 pada kolom lama
adalah milik blank run
 Injek fase gerak selalu dilakukan
terakhir

Minggu 3  Injek Plasma Kolom Baru  Blank run pada injek plasma
 Injek Plasma + Gas Kolom Baru adalah injek blank plasma
 Injek Plasma + spiked Teno 10 ppm
 Beli ACN pro HPLC
 Beli Nitrogen gas
 Injek Tenofovir FG Isokratik
 Injek Tenofovir & modifikasi FG gradient sesuai
 wiryakosol
 Saring ACN
 Injek Tenofovir & modifikasi wavelength 240-
 Mendaftar online pada lab in vitro
300
1&2
 Injek Tenofovir & modifikasi suhu 40 C
 Konvirmasi ke Bu Dian untuk pinjem vortex &
sentrifuse di lab in vitro 1
Minggu 4 Jan  Benerin hplc  pompa + lampu
Minggu 1 Feb  Cari jurnal terkait peak tenovofir di hplc
 Pembuatan larutan kerja baru
 Flushing kolom baru
 Injek teno kolom baru
 Flushing kolom lama
 Injek teno kolom lama
 Injek plasma kolom lama
Minggu 2 Feb  Lapor Bu wahyuni printer lt 10  Sudah dilaporkan ke fakultas&
disarankan untuk minta bantuan
Pak Kus
 Menghubungi Pak Kus  Printer lt 10 sudah bisa kembali
 Injek TFV + nitrogen di kolom lama  FG yg ada di botol pompa habis
 Pembuatan FG Grad baru
 Injek TFV tanpa nitrogen di kolom baru
 Ambil blanko darah baru
 Penyaringan FG
Minggu 3 Feb  Beli gas nitrogen
 Injek TFV + nitrogen di kolom lama
 LIBUR
Minggu 4 Feb  Injek tenofovir in plasma dengan pengaturan  Menit 2,5 – 5 dengan
gradient tanpa gas perbandingan FG2 : ACN yaitu
75:25 (pH 3)
 Menit 2,5 – 5 dengan
perbandingan FG2 : ACN yaitu
50:50 (pH 4)
 Menit 2,5 – 5 dengan
perbandingan FG2 : ACN yaitu
60:40 (pH 4)
 Menit 2,5 – 5 dengan
perbandingan FG2 : ACN yaitu
80:20 (pH 3)
Minggu 1 Mar  Membuat Larutan Baku & kerja baru (Maret)  + tenofovir in methanol 2 & 10
ppm
 Berdiskusi dengan Bu rista  Melihat match factor dari data
hplc tenofovir in water vs
tenofovir in plasma untuk melihat
kesamaan spectra nya
 Menanyakan ke Pak iwan & pak kus terkait
match factor  Disarankan untuk tanya ke teknisi
HPLC mas anggara
 Menanyakan ke mas anggara
 Beliau menawarkan jasa pelatihan
  Injek teno in plasma dengan pengkondisian suhu
preparasi hingga injek sebesar 4 C tanpa gas
 Injek teno in water & methanol dengan
pengkondisian injek sebesar 4 C  pH asam format 2 ; pH plasma +
 Pembuatan FG gradient baru & disaring 2x teno + asam format 3
 Injek teno in plasma dengan penambahan asam
format 0,1% in water sebesar 180 & 360
mikroliter tanpa gas
Minggu 2 Mar  metode baru  sonifikasi 5 menit
 sample plasma ; spiked teno ; +
AF 360 mikroL
 pH 0,1% AF in water = 5
 pH plasma + 0,1% AF in water =
 FG 2 lala tanpa ammonium acetat 5

 FG 4
 pump A = 0,05% AF in ACN (pH
2)
 pump B = 0.05% AF in water (pH
4)
 pH mix 50:50 = 3
 FG 3 isokratik
 sonifikasi 2 menit
 plasma ; + AF 360 mikroL & AF
180 mikroL
Minggu 3 Maret  tamping urin  Urine A : pH 7
 Pembuatan FG4  pH fase gerak : AF in water 2 ;
AF in ACN 6

 Pembuatan 0,6% AF in water  pH 0,6% AF in water : 1

 Pembuatan 0,1% AF in water  pH 6

 Mencoba similaritas dengan Pak iwan
 Konsul hasil siilaritas dengan bu rista
 Metode FG4
 Metode FG 2 Gradien
 similarity 0,6 pada retention time
yg sama 2,9 (teno water v steno
plasma)
 saran : cari titik dimana
similaritasnya bagus, dan cek
peak 3D
 Preparasi seperti plasma
 Preparasi 1: 80 mikroLurine +
800 mikroL0,6% AF in water +
50 mikroL tenofovir
 Preparasi 2: 100 mikroL urine +
125 mikroL 0,1% AF in ACN +
20 mikroL tenofovir
 Preparasi 3 : 50 mikroL urin +
450 mikroL 0,015M Am. Acetat +
20 mikroL teno
  Preparasi 1, 2 & 3
Minggu 4 Maret  Tampung saliva
 Flushing kolom baru (welch)
 FG 2 lala gradient  36 μL saliva + 40 μL ACN + 4 μL
tenofovir. Vortex & sentrifuge.
(0,001 – 10 ppm)

 pH saliva  7
 pH saliva + ACN 100 mikroL  7
 pH saliva + ACN + teno 0,5 ppm  6
 FG 2 lala gradient
 Pembuatan FG 5 isokratik (5mM 3% As. Format
(v/v) ACN 400 mL
 80 μL saliva + 100 μL ACN + 20
μL tenofovir. Vortex & sentrifuge
(0,5 – 10 + 100 ppm) 
peningkatan area pada RT 2,8
 pH FG5  6
 36 μL saliva + 40 μL ACN + 4 μL
tenofovir. Vortex & sentrifuge
(0,5 – 10 + 100 ppm) 
peningkatan area pada RT 3,0

 pH saliva + ACN  7
 Pembuatan FG 6
Pump B : 0,05% AF in water  pH pump B  2
Pump D : 0,05% AF in methanol  pH pump D  6
 pH combine (95%B ; 5%D)  6
  100 μL saliva + 50 μL water + 50
μL tenofovir. + 500 μL ACN 
vortex 30 s  tunggu 15 menit
presipitasi  sentrifuge 10 m
2200xg suhu ruang  ambil 600
mikroL supernatant + tanpa gas
 peningkatan area pada RT 2,8
 100 μL saliva + 50 μL water + 50
μL tenofovir. + 500 μL ACN 
vortex 30 s  tunggu 15 menit
presipitasi + sentrifuge 10 m
2200xg suhu ruang  ambil 600
μL supernatant  gas N2 + 500
μL water  sentrifuge ulang 
ambil supernatant  peningkatan
 pH saliva : 9
area pada RT 5,0-5,1
 FG 2 lala gradient
 metode tanpa ACN
 80 μL saliva + 20 μL tenofovir.
Vortex & sentrifuge (0,5 – 10 +
100 ppm)  peak tinggi pada RT
3,2-3,3
 72 μL saliva + 8 μL tenofovir.
Vortex & sentrifuge (0,5 – 10 +
 Ambil darah
100 ppm)  peak tinggi pada RT
 Preparasi FG 2 lala LCMS
3,1
  Menimbang standard tenofovir & abacavir 1,5
mg
 Preparasi larutan kerja tenofovir LCMS
 Injek LCMS
Minggu 5 Maret  Flushing 3 jam
 Preparasi DBS
 FG Isokratik 0,1% As. Format in 0,5% ACN +
water
 Preparasi plasma for LCMS
 Preparasi plasma for LCMS
 Preparasi plasma for LCMS  supernatant 90
mikroL + ACN ad 0,5 mL untuk pengenceran
 Saring dengan kertas saring  masukkan ke vial

 3 mm disk  + 200 μL methanol
+ 20 μL tenofovir  sonikasi 10
menit  sentrifuge 2 menit 4000
rpm 4 C  ambil supernatant +
keringkan dengan N2 ==> + 100
μL water
 Mas Ayik belum berani sample
biologis
 Injek teno in water 0,001 ; 0,5 ; 2 ;
10 ppm
 Terdapat peak pada RT 1, dan
sesuai m/z 288 serta ion product
176 & 136
 Mas Ayik belum berani kalau
tidak disaring
 Blank ; 0,005 ; 2 ; 10 ppm
 Dengan LC-MS biasa tidak
 autosampler yg sudah diberi insert
Minggu 1 April  Berdiskusi dengan Bu Rista mengenai hasil
LCMS
 Melakukan preparasi tenofovir 10 ppm in plasma
 Pembuatan naskah tesis
Minggu 2 April  Melakukan preparasi plasma dengan pengenceran
yg lebih pekat
 Preparasi urine for LCMS
 Untuk urine di setting MS karena Mas Ayik tidak
bisa menampilkan area jika di setting MS/MS
terlihat
 Dicoba dengan Qtof  terdapat
peningkatan peak pada RT 3,2
namun m/z nya sekitar 400, tidak
ditemukan di 288
 Penyaringan meggunakan 0,2 μM
tidak berpengaruh dengan kadar
yg terdeteksi
 Saran : injek 10 ppm in plasma
dengan setting m/z 288  176
 Beberapa kali mas Ayik ada
urusan sehingga tidak dilakukan
injek pada minggu ini
 80 μL plasma + 100 μL ACN + 20
μL tenofovir Vortex & sentrifuge
(10 ppm)
 ambil 120 μL supernatant ad 300
μL ACN
 setting MS/MS
 Menyaring urine sebelum
preparasi
 80 μL urine + 100 μL ACN + 20
 μL tenofovir Vortex & sentrifuge
(2 & 10 ppm)
 ambil supernatant paling atas
 setting MS (rentang 200-500 dan
100-300)
Minggu 3 April  Flushing 2 jam
 Preparasi saliva dengan pengaturan pH  + FG  80 μL saliva + 100 μL ACN + 20
2 (yg asam firmat & ammonium in water) 20 & μL tenofovir  + FG 2 20 μL
30 μL (blank ; 10 & 100 ppm)  tidak
terlihat peningkatan area
Metode dengan FG 2 lala  pH 5
 80 μL saliva + 100 μL ACN + 20
μL tenofovir  + FG 2 30 μL
(blank ; 10 & 100 ppm)  tidak
terlihat peningkatan area
 pH 5

 Preparasi saliva dengan pengaturan pH  + FG  80 μL saliva + 100 μL ACN + 20

2 50 & 70 μL μL tenofovir  + FG 2 50 μL
(blank ; 10 & 100 ppm) 
Metode dengan FG 2 lala peningkatan area pada RT 3,2
 pH 5
 80 μL saliva + 100 μL ACN + 20

 Preparasi saliva dengan pengaturan pH  +
0,6% Asam Format in water 20 & 40 μL
Metode dengan FG 2
Metode dengan FG 5 isokratik
 Preparasi urin dengan pengenceran
Metode FG 4 isokratik
μL tenofovir  + FG 2 70 μL
(blank ; 10 & 100 ppm) 
peningkatan area pada RT 3,1
 pH 5
 80 μL saliva + 100 μL ACN + 20
μL tenofovir  + 0,6% AF in
water 20 μL (blank ; 10 & 100
ppm)  tidak terjadi peningkatan
area
 pH 5
 80 μL saliva + 100 μL ACN + 20
μL tenofovir  + 0,6% AF in
water 40 μL (blank ; 10 & 100
ppm)  peningkatan area pada
RT 2,7 – 2,8
 pH 4
 36 μL saliva + 40 μL ACN + 4 μL
tenofovir  + 0,6% AF in water
20 μL (blank ; 10 & 100 ppm) 
terjadi peningkatan area pada RT
3,0
 pH 4
50 ppm  5 ppm  100 μL urine + 125 μL AF in
100 ppm  10 ppm ACN + 25 μL tenofovir  (blank
1000 ppm  100 ppm ; 50 ; 100 ; 1000 ppm)  terjadi
peningkatan area pada RT 8,3
 pH 4-5

 100 μL urine + 125 μL AF in

water + 25 μL tenofovir 
(blank ; 50 ; 100 ; 1000 ppm) 
terjadi peningkatan area pada RT
Metode FG 2 lala 8,2
 pH 2

 100 μL urine + 125 μL 0,6% AF

in ACN + 25 μL tenofovir 
(blank ; 50 ; 100 ; 1000 ppm) 
terjadi peningkatan area pada RT
2,9
 pH 6

 100 μL urine + 125 μL 0,6% AF

in water + 25 μL tenofovir 
 Preparasi DBS (blank ; 50 ; 100 ; 1000 ppm) 
 terjadi peningkatan area pada RT
2,9
 pH …

 3 tetes darah ke DBS + spike 20

μL tenofovir  plong 5 mm +
200 μL methanol + sonikasi 10
menit + sentrifuge 2 menit 4000
rpm 4 C + ambil supernatant 
10 μL 0,1 AF in CAN
 pH 4
Minggu 4 April – LIBUR LEBARAN
Minggu 1 Mei
Minggu 2 Mei  (10/5) flushing kolom panjang 3 jam  Dilakukan pembagian pada 3 vial
 Pembuatan larutan baku kerja (dari timbang per ppm yg dibuat (untuk
tenofovir bulan 7/21) pengecekan stabilitas  1 vial yg
digunakan rutin beku-cair)
 Preparasi DBS card  Bersihkan jari dengan alcohol
swab  Ambil darah ujung jari
menggunakan alat  buang tetes
pertama darah  tampung
tetesan darah pada microtube 200
μL  ambil 80 μL darah + 20 μL
tenofovir  kocok  ambil 30

 (11/5) injek teno in water pada FG4 gradien &
FG 5 isokratik menggunakan lar baku kerja
penimbangan 7/21
 Pembuatan larutan baku kerja (dari timbang
tenofovir bulan 3/22)
 (12/5) injek teno in water pada FG4 gradien &
FG 5 isokratik menggunakan lar baku kerja
penimbangan 3/22
 injek ulang pada FG 5 isokratik
 (13/5) pembuatan FG 5 baru
 injek teno in water pada FG4 gradien & FG 5
isokratik menggunakan lar baku kerja
penimbangan 3/22
 Pengukuran similarity
μL teteskan pada DBS card
 FG4 
pump A = 0,05% AF in ACN
pump B = 0.05% AF in water
 FG5  5mM 3% As. Format
(v/v) ACN  pH 6
 Tidak muncul peak
 Baku kerja 3/22  + 50 & 100
ppm  pH 6
 Tidak muncul peak  kolom
bocor dari 11/5
 Peningkatan peak pada RT 2,9-
3,0 hanya sampai 2 ppm ; 10-100
ppm tidak muncul peak  FG
habis
 FG 4  terjadi peningkatan peak
pada RT 8,2
 FG 5  terjadi peningkatan peak
pada RT 3,0
 U 100 ppm (21/4/22) vs T 100

Minggu 3 Mei  Flushing 3 jam
 Preparasi DBS (17/5)
5 mm disk => + 200 μL methanol => sonifikasi =>
sentrifuge (2 menit 4 C 4000 rpm) => + Gas N2 => +
100 μL water pro HPLC => 0,1% AF in ACN
FG2 isokratik : kolom A ACN 10%
Kolom B 0,1% AF in water (90%)
 Preparasi DBS tanpa sentrifuge (18/5)
5 mm disk => + 200 μL methanol => sonifikasi => +
Gas N2 => water pro HPLC => 0,1% AF in ACN
80 μL => + 40 μL water + 4 μL AF in ACN
70 μL => + 35 μL water + 3,5 μL AF in ACN
ppm (13/5/22)  0,853 pada RT
8,2 (FG 4 grad)
 S 10 ppm + 40 μL AF (20/4/22)
vs T 10 ppm (3/3/22)  1 pada
RT 3,0 (FG 2 lala)
 S 10 ppm + 20 μL AF(20/4/22) vs
T 10 ppm (13/5/22)  0,998
pada RT 3,0 (FG 5)
 S 100 ppm + 20 μL AF (20/4/22)
vs T 100 ppm (13/5/22)  0,998
pada RT 3,0 (FG 5)
 Blank, 2 ppm & 10 ppm dengan
lama sonifikasi yg berbeda (10,
15, 30 menit)  peningkatan di
RT 4,9
 matriks yg diambil 35 – 50 μL 
penambahan AF sebesar 5 μL
 pH 4
 blank, 2 ppm & 10 ppm
dengan lama sonifikasi yg
berbeda (10, 15, 25, 30 menit)
 sonifikasi 10 menit  terjadi
peningkatan peak pada RT 2,5
 sonifikasi 15 menit  terjadi
 peningkatan peak pada RT 3,3
FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN  sonifikasi 20 menit  terjadi
Kolom B : 0,1% AF in water peningkatan peak pada RT 2,8
– 2,9
 sonifikasi 25 menit  terjadi
peningkatan peak pada RT 2,8
 sonifikasi 30 menit 
peningkatan tidak terlihat
 Preparasi saliva (19/5)
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 –  blank, 2 ppm, 10 ppm dan 100
60 μL 0,6% AF  vortex 10 detik  sentrifuge 15 ppm pada penambahan AF yg
menit 4 C 4000 rpm berbeda ( 50 & 60 μL)
 50 μL AF  pH 3-4 
peningkatan peak pada RT 2,3
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN & 2,7
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
 60 μLAF  pH 3-4 
water
peningkatan peak pada RT 2,3
& 2,9
 Preparasi saliva (20/5)
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL  blank, 2 ppm, 10 ppm & 100
1% AF  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C ppm : pH 3
4000 rpm  terjadi peningkatan peak pada
RT 2,9 & 3,1 kecuali yg 100
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN ppm mengalami penurunan
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
 water

Pembuatan AF 1% : 0,1 mL (100 μL) AF + water ad 10

mL
Minggu 4 Mei  Tenofovir in water (23/5)  Blank, 2pm, 10ppm, 50 ppm, 100
FG 3 isokratik : 0,1% AF in (0,5% ACN in water) ppm
 Tidak terlihat peningkatan peak

FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN  Blank, 2pm, 10ppm, 50 ppm, 100
Kolom B : 0,1% AF in water ppm
 Terlihat peningkatan peak pada
RT 4,0

 Preparasi DBS (24/5)

5 mm disk => + 200 μL methanol => sonifikasi 15  Blank, 2ppm, 10 ppm, 100 ppm :
menit => sentrifuge (2 menit 4 C 4000 rpm) => + Gas pH 4
N2 => + 100 μL water pro HPLC => 10 μL 0,1% AF in  Terlihat peningkatan peak dari 10
ACN ke 100 ppm pada RT 3,7

FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN

Kolom B : 0,1% AF in water

 Injek ulang saliva 100 ppm

Injek saliva 100 ppm
karena tgl 20 tidak terjadi
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL
1% AF  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C
4000 rpm
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
 Preparasi Urine, Saliva & Plasma (25/5)
Saliva
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL
1% AF  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C
4000 rpm
Plasma
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40
μL 2% AF  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4
C 4000 rpm
Urine
100 μL urine + 20 μL tenofovir + 125 μL 0,6% AF 
vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
peningkatan
 Terdapat peningkatan peak pada
RT 2,9 tanpa peak pengganggu di
RT 3,1
 Blank, 2ppm, 10 ppm, 100 ppm :
pH 3
 Terjadi peningkatan peak dari 10
ke 100 ppm pada RT 2,9
 Blank, 2ppm, 10ppm, 100 ppm :
pH 4
 Peak di 2,9 sangat lebar dan
tinggi tidak seperti peak plasma
yg biasa
 10ppm, 100 ppm  pH 3
 peningkatan pada RT 2,7 & 3,7
water

 Rekrutment dan pengambilan sample volunteer

(26/5)
4 volunteer : 2 wanita 2 pria
volunteer 1 : wanita 40 th minum vitamin dan obat flu
tidak rutin ; pagi tadi minum kopi
volunteer 2 : Pria 37 th
volunteer 3 Wanita 50 th sudah tidak pernah minum
obat Hipertensi  blank, 2ppm, 10 ppm, 100 ppm :
volunteer 4 : Pria 37 th pH 7
 Peningkatan pada peak 2,8 namun
 Preparasi plasma volunteer 3 (27/5) tidak signifikan pada 100 ppm
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 
vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  Penambahan AF 40 μL

 Pada spiked terjadi peningkatan

Preparasi plasma mahasiswa pada beberapa kondisi
1) blank plasma  pH 7
2) blank plasma + AF 2%  pH 4
3) blank plasma + Teno 100 ppm  pH 7
4) Blank plasma + teno 100 ppm spiked akhir 
pH 7
area pada RT 2,7 – 3,6 sedangkan
RT lain cenderung menurun bila
dibandingkan preparasi teno biasa
 Pada penambahan AF terjadi
peningkatan peak pada RT 7,1 yg
kemungkinan merupakan peak
AF
 5) Blank plasma + teno 100 ppm + AF 2%  pH 4
6) Blank plasma + teno 100 ppm spiked + AF 2%
 pH 4
Minggu 1 & 2 Juni  Flushing
 Tenofovir in water (30/5)  Blank run, 2 ppm, 10 ppm, 100
FG 5 : 5 mM 3% AF v/v ACN ppm

 Tenofovir in saliva (30/5)  FG 5  pH 3

80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL  blank, 2 ppm, 10 ppm, 100 ppm
AF 1%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C
4000 rpm

 Tenofovir in plasma  pH 7  tsnpa AF

FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40
μL AF 2%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4
C 4000 rpm
 pH 4 dengan AF
1. blank plasma
2. blank plasma + 40 μL AF 2%
3. blank plasma + teno 100 ppm
4. blank plasma + teno 100 ppm
spiked akhir
5. blank plasma + teno 100 ppm +
40 μL AF 2%
6. blank plasma + 40 μL AF 2% +
teno 100 ppm spiked akhir

 pH 7  tsnpa AF
 Tenofovir in plasma ( 31/5)  Melinda  pH 4 dengan AF
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN 1.
blank plasma
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in 2.
blank plasma + 40 μL AF 2%
water 3.
blank plasma + teno 100 ppm
4.
blank plasma + teno 100 ppm
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40 spiked akhir
μL AF 2%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 5. blank plasma + teno 100 ppm +
C 4000 rpm 40 μL AF 2%
6. blank plasma + 40 μL AF 2% +
teno 100 ppm spiked akhir
Peak tinggi pada RT 4,9 – 5,1

 Tenofovir in water (2/6)  blank run, 2 ppm, 10 ppm, 50

FG 3 isokratik ppm, 100 ppm
FG 2 B  blank run, 2 ppm, 10 ppm, 100
ppm  peningkatan area pada RT
4,3 – 4,4

 blank saliva < 50 th ; blank saliva

 Tenofovir in Saliva  LCMS > 50 th ; 2 ppm ; 10 ppm; 100
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL ppm
AF 1%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C Tidak terdeteksi pada m/z 288 ; 176 dan
4000 rpm 136
Pengenceran : 100 μL supernatant ad 400 μL ACN
Saring dengan filter 0,22 μM
 P4 : P / 35 th ; As. Mefenamat
 Ke RSKI (6/6) P10 : L/ 42 th ; B12, kotrimoxazole,
Menimbang Tenofovir bisoprolol , gentamicin 0,1% salep
Menata semua sample P14 : P / 29 th
Memilih plasma pasien yg akan di injek ke LCMS P15 : L / 30 th

P14 & P15 dengan penambahan AF 

 Tenofovir in plasma pasien (7/6)  HPLC & pH 4
LCMS P4 & P10 tanpa AF  pH 7
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in Terdeteksi m/z 288 hanya pada P4
water

80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40

μL AF 2%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4
C 4000 rpm

Pengenceran : 100 μL supernatant ad 400 μL ACN

Saring dengan filter 0,22 μM

HPLC injek :
Blank run
P4, P10, P14, P15  dengan pengenceran
P4, P10, P14, P15  tanpa pengenceran  pH dengan AF : 4
100 μL ACN + 40 μL AF 2%  pH ACN + AF 2% : 2
blank plasma, 0,005 ppm; 0,02 ppm ; 2
Reverse flushing ppm ; 100 ppm
 Tenofovir in plasma (8/6)  Lian Sejak blank plasma sudah ada peak
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN dengan puncak tinggi
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
 S1; S2; S3; P1; P2
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40  volunteer 1 : wanita 40 th minum
μL AF 2%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 vitamin dan obat flu tidak rutin ;
C 4000 rpm pagi tadi minum kopi
 volunteer 2 : Pria 37 th
 volunteer 3 Wanita 50 th sudah
 Blank plasma & saliva volunteer (9/6)
tidak pernah minum obat
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Hipertensi
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL
AF 1%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C blank urine ; 0,1 ppm ; 0,5 ppm ; 2 pm ;
4000 rpm 10 ppm
pH 5
80 μL plasma + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 40 Gagal  fase gerak salah
μL AF 2%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4
C 4000 rpm
 blank ; blank 50 th ; 10 ppm ; 100
  Tenofovir in urine (9/6)  nanda ppm
FG 4 kolom A : 0,05% AF in water  pH 6  cek H+ 1
Kolom B : 0,05% AF in ACN
100 μL urine + 20 μL tenofovir + 125 μL AF in ACN
 vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000
rpm
 blank run; blank urine ; 0,1 ppm ;
 Tenofovir in DBS (9/6)  LCMS 0,5 ppm ; 2 pm ; 10 ppm; 100
5 mm disk => + 200 μL methanol => sonifikasi 15 ppm
menit => sentrifuge 2 menit 4000 rpm 4 C + Gas N2 =>
 HPLC pump leak setelah 10 ppm
100 μL water pro LCMS => 0,1% AF in ACN 10 μL

FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN

Kolom B : 0,1% AF in water

 Tenofovir in urine (10/6)  nanda

FG 4 kolom A : 0,05% AF in water
Kolom B : 0,05% AF in ACN

100 μL urine + 20 μL tenofovir + 125 μL AF in ACN

 vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000
rpm

Minggu 3 Juni  (13/6) Pump leak sudah diperbaiki oleh pak Kus
 saran : menggunakan kolom lain dahulu  Water : pressure 212
karena kemungkinan kolom panjang uda jenuh /  50 : 50 : pressure > 300
 ada buntu
 Flushing kolom pendek
 Ambil darah : Melinda & Alfa masing masing 5
mL
 Injek tenofovir 100 ppm in water di kolom
pendek
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
 (14/6) Preparasi tenofovir in plasma LCMS (2x
volume tanpa pengenceran)
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
water
160 μL plasma + 40 μL tenofovir + 200 μL ACN +
(tanpa AF)  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit
4 C 4000 rpm  ambil 300 μL  saring 0,2 μm d 13
mm
 methanol : pressure 148
 Peak di RT 2,5
 LCMS bermasalah  injek H+1
dengan disimpan di kulkas /
freezer ITD
 Blank plasma ; 0,01 ppm ; 0,5
ppm ; 2 ppm ; 10 ppm ; 10 ppm
wtith 80 μL AF 2% ; 10ppm
spiked akhit ; 50 ppm ; 100 ppm
 m/z yg dicantumkan di hasil
LCMS seama ini hanya yg 10
besar saja  bisa dicari semua
m/z nya. Terdeteksi m/z 288 pada
RT 1,4 – 1,5 dan m/z 136 pada
RT 8
 10 besar terlihat m/z 288 pada
0,01 dan 0,1 ppm
 teno in water (100 ppm) peak
pada RT 6,3

 (15/6) flushing kolom lama ; FG 4 pressure 144 -
176
 Preparasi & injek tenofovir water & tenofovir in
urine
FG 4 kolom A : 0,05% AF in water
Kolom B : 0,05% AF in ACN
 Teno in urine ( blank; 0,5 – 100
ppm) : tidak terlihat (?)  pH 5
 Teno in saliva pada blank ; 0,01 –
100 ppm  peningjatan peak
pada RT 1,4  pH 3

100 μL urine + 20 μL tenofovir + 125 μL AF in ACN

 vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000
rpm

 (15/6) flushing kolom lama ; FG 2 B pressure  Water : 240 – 283

174 - 178  50:50 : > 300
 Preparasi & injek tenofovir in saliva  metanol : 187
FG 2B (Grad lala) kolom A : 100% ACN  injek T 100 ppm : > 300
Kolom B : 0,1% AF + Am. Acetat in
 Pneingkatan peak di RT 3,1
water
namun peak lebar
80 μL saliva + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN + 50 μL
AF 1%  vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C
4000 rpm

 (16/6) flushing kolom baru setelah di flushing  pH 4

 pak kus sehari
 Injek teno in water FG 2 B

 Preparasi teno water in DBS pada 50 & 100 ppm

(kolom panjang)
20 mikro teno add ke DBS card

 (18/6) Preparasi & injek tenofovir in plasma pada

kolom baru FG 2 B  hasil jelek
Minggu 4 Juni  (20/6) Flushing 3 jam
 Injek teno water in dbs yg preparasi tgl 16/6
FG 7 / FG DBS  Hasil tidak bagus
FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN
Kolom B : 0,1% AF in water

5 mm disk (gunting jadi 2 bagian) => + 200 μL

methanol => sonifikasi 15 menit => sentrifuge 2 menit
4000 rpm 4 C + Gas N2 => 100 μL water pro LCMS
=> 0,1% AF in ACN 10 μL
 Blank ; 10 50 100 ppm teno in
 (21/6) Flushing kolom pendek water ; 10 50 100 teno in plasma ;
 Preparasi teno in plasma FG 2 B 100 ppm dengan AF 2% di akhir
 pH 4
  teno in water peak pada RT 1,7 –
1,8
 teno in plasma  peningkatan
oeak pda beberapa RT namun
tidak signifikan
 AF diberikan di akhir : peak di RT
6, lebih kecil dan peak di RT 1, ..
meningkat

 (22/6) Preparasi plasma LCMS  volume 2x  Blank ; 0,1 ; 0,5 ; 2 ; 10 biasa ; 10

tanpa filter (volume normal) ; 10
denganAF ; 50 ; 100

 Ph tanpa AF 7 ; dengan AF 5
 Tidak terlihat pada 10 besar m/z
 Peningkatan peak pada RT 1,2
 10 ppm dengan AF terdapat
peningkatan peak di 4,.. yg diduga
peak AF
 tanpa filter peak pada RT 1,2
sedikit lebih tinggai dari dengan
filter dan peak peak pengganggu
 (23/6) flushing kolom pendek (?) yg kecil kecil lebih berkurang
 Preparasi & injek teno in urine pada FG 4
 peningkatan peak pada RT 9,5

 (24/6) Injek teno water in DBS
 Berdiskusi dengan Bu Rista
 Berdiskusi dengan mas Ayik terkait FEE &
jadwal injek sample validasi & pasien rutin
namun sempat turun di 10 ppm
lalu naik lagi pada 50 ppm
 Bu rista ingin ikut ke ITD saat
injek sample minggu depan 
sample yg di injek adalah teno in
water namun dengan targeted MS
MS dan beberapa settingan yg lain
 beliau curiga m/z belum
langsung di pilih (masih dalam
rentang) sehingga hasilya selama
ini kurang baik
 Saran : setting collision energy
lebih rendah / tinggi tidak harus
sesuai literature
 Saran : bertanya ke pak kus
mengenai FRITZ kolom (seperti
pelindung kolom) yg seharusnya
di maintenance, ketika rit di
maintenance seharusnya
kerusakan tidak langsung pada
kolom yg digunakan
 Saran : mixed well berdasarkan
jurnal mungkin yg dimaksud
 adalah plasma + teno  mixed
well (vortex) lalu + ACN
Minggu 5 Juni  (27/6/2022)
Flushing kolom pendek

Preparasi u/ injek uji validitas  stabilitas

penyimpanan 30 hari
0,01 ppm  saliva plasma urine (27/6) ; DBS (28/6)

Injek DBS  Pressure 190

5 mm disk (gunting jadi 2 bagian) => + 200 μL  Blank 1 ; 10 – 50 – 100 ppm
methanol => sonifikasi 15 menit => sentrifuge 2 menit  Blank II ; 10 – 50 – 100 ppm
4000 rpm 4 C + Gas N2 => 100 μL water pro LCMS  pH 3
=> 0,1% AF in ACN 10 μL

FG 7 / FG DBS
FG Gradien DBS kolom A : 0,1% AF in ACN
Kolom B : 0,1% AF in water
 Peak / area pada 50 ppm lebih
Sonikasi suhu ruang rendah dari 10 ppm

 Peningkatan area pada RT 1,8 ; 1,9

Sonikasi suhu dingin ; 2,5 ; 3,5 ; 3,7 namun beberapa RT
pada blank lebih tinggi areanya
dibanding 10 ppm
Bilas Metanol 30 menit

 Pressure 180
FG 3 isokratik : 0,1% AF in (0,5% ACN in water)  Blank 1 ; 10 – 50 – 100 ppm
 Blank II ; 10 – 50 – 100 ppm
Sonikasi suhu ruang  pH 3
 Peningkatan area yg kecil pada RT
1,8

 (28/7/2022)
Preparasi plasma, saliva, urine  Plasma & Saliva FG 2
 Urine FG 4
1 : 80 μL matrix + 20 μL tenofovir + (vortex 10s) +  P1&P2 : pH 4
100 μL ACN + 40/50 μL AF 2/1%  vortex 10 detik  P3 : pH 3
 sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  S1 : pH 3
 S2 : pH 4
2 : 80 μL matrix + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN +
40/50 μL AF 2/1%  vortex 10 detik  sentrifuge 15  Memilih preparasi 1
menit 4 C 4000 rpm

3 : 80 μL matrix + 20 μL tenofovir + (vortex 10s) +

100 μL ACN  vortex 10 detik  sentrifuge 15
menit 4 C 4000 rpm  ambil 100 uL supernatant +
40/50 μL AF 2/1% + Vortex

4 : 80 μL matrix + 20 μL tenofovir + 100 μL ACN 

 vortex 10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm
 ambil 100 uL supernatant + 40/50 μL AF 2/1% +
Vortex

untuk urine : 100 uL matriks ; 25 uL tenofovir ; 125 uL

0,1% AF in ACN
 hanya poin 1 & 2

 (30/6/2022) LCMS
ke ITD dengan bu Rista
setting LCMS mode targeted
 tenofovir in water  0,5 ; 2 ; 10 ppm
 Plasma 10 ppm
 Saliva 10 ppm

 (1/7/2022) LCMS
Tenofovir in water : 0,001 ; 0,01 ; 0,1 ppm
Plasma 10 ppm
Urine 10 & 100 ppm
Minggu 1 Juli  5/7/2022
Injek DBS kolom panjang  pH 3
Blank ; 10-50-100 ppm

 6/7/2022 pH 3
 Injek ulang pada kolom pendek
 pH plasma :4
 7/7/2022 LCMS  pH saliva : 3
Optimasi Collision energy di 35 ev  pH Urine 6
Plasma ; saliva ; urine 10 ppm  pH DBS 3
DBS 100 ppm
Minggu 2 Juli  11/7/2022  0,1 ppm : terdeteksi m/z 176
Injek Plasma 0,1 dan 10 ppm  10 ppm : terdeteksi m/z 288
160 μL plasma + 40 μL tenofovir + (vortex 10s) + 200  Peak pada RT 1,3 di 0,1 ppm
μL ACN + 80 μL AF 2%  vortex 10 detik  lebih tinggi dari 10 ppm
sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil 300 μL
supernatant  saring  ambil 100 μL

 13/7/2022
Injek blank matriks  Plasma : peak blank lebih rendah
Plasma, Saliva, Urin, DBS dibandingkan peak dengan
tenofovir  peak dibawah 1.
Abund 100-300 pada RT 1,6
 DBS : cenderung landai,
peningkatan peak pada RT 7,5 – 8
 Saliva : RT 1-1,5 dengan area
dibawah 1. Muncul peak sekitar
1,6
 Urine : muncul peak pada RT 3,5
-4
Minggu 3 Juli  18/7/2022
Preparasi DBS blank & 10 ppm

Berdiskusi dengan Prof. Aty dan Mas Ayik terkait
biaya LCMS dan progress optimasi
 19/7/2022
Injek DBS di LCMS : blank , 1 ppm dan 10 ppm
Berdiskusi dengan dokter Tripudy terkait sample pasien
non TDF
 Potongan –potongan sekitar 1,8 jt /
3 injek
 Pelarut / fase gerak pribadi tidak
seberapa berpengaruh ke potongan
harga karena banyak yg harus di
maintain termasuk kolom dan
kalibran
 Total 38 jt dari biaya awal 50/60 jt

 20/7/2022
Nempil water for LCMS di mas ayik  2,5 L
Pembuatan FG 2 ; FG 4 dan FG 7

 21/7/2022  V3 : Duviral (Lamivudin +

Ambil sample pasien non TDF untuk validasi metode Zidovudin)
(V3 & V 4)
 V4 : Duviral (Lamivudin +
Zidovudin) + Neviral (Nevirapin)
Minggu 4 Juli  26/7/2022
Membuat sample validasi stabilitas  Plasma  Tenofovir : 0,01 & 1 ppm
 160 μL plasma + 40 μL tenofovir & 40 μL abacavir +  Abacavir : 2 ppm
(vortex 10s) + 200 μL ACN + 80 μL AF 2%  vortex  Penyimpanan : - 20
10 detik  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil
300 μL supernatant  saring  ambil 100 μL

Injek DBS 1 ppm

 30/7/2022  Sebaiknya saat meminta peak list

Berdiskusi dengan bu Rista via Zoom adalah menggunakan range (misal
: 1,2 – 1,8). Tidak meminta satu
per satu karena ditakutkan data
peak list yg didapatkan berupa
pecahan fragmen  288 176 136
 Memilih yg 25 eV karena
walaupun abund di 288 (induk)
kecil namun di 176 dan
146(daughter) besar. Karena
penentuan qualifier teno adalah
288=> 176 atau 288=> 136
 Coba injek abacavir in water dan
mix aba teno in water
Minggu 1 Agustus  2/8/2022
Injek abacavir 2 ppm + tenofovir 1 ppm pada FG 2 ; FG  FG 2 1,524 m/z
4 dan FG 7 135,05 : 1566,06
176,09 : 3383,53
191,103 : 951,52
 288,08 : 1737,17

 FG 4 1,699 m/z
136,07 : 4937,47
136,92 : 1326,01
176,09 : 3140,16
191,026 : 1269
191,103 : 164863,05
287,160 : 9873,98
288,086 : 1823,42
288,162 : 2074,14

 FG 7 1,913 m/z
136,05 : 43,88
136,08 : 8,13
136,93 : 33,33
Injek Abacavir 2 ppm : 176,088 : 365,85
288,08 : 52,53
 FG 2 1,545 m/z
191,40 : 6
287,96 : 5
288,29 : 5
 FG 4
136,06 : 26,04
136,12 : 19,13
 136,84 : 31,88
176,076 : 60,89
176,885 : 58,26
176,92 : 33,21
191,10 : 2421,08
191,23 : 19,53
191,599 : 27,02
 4/8/2022 191,64 : 24,05
Timbang Tenofovir 287,11 : 17,13
Timbang Abacavir 287,159 : 53,12
Membuat larutan baku kerja tenofovir dan abacavir 287,190 : 35,63
288,160 : 38,92
MINGGU 4  22/8/2022
AGUSTUS Diskusi Biaya LCMS dengan Bu Lidya

 23/8/2022
Injek DBS CARD Baru di LCMS
5 mm disk (gunting jadi 2 bagian) => + 200 μL 0,1%
AF in Water + 800 μL ACN  vortex 10s =>
sentrifuge 4000 rpm 10 menit 4C  ambil 850 μL +
Gas N2  + 300 μL Water : ACN (99:1)

 24/8/2022
Injek saran Bu ICA
Pengaturan transisi m/z 288,0 => 176,1
 ALFA PRA TESIS
 25/8/2022
NANDA PRA TESIS
MINGGU 5  29/8/2022
AGUSTUS Berdiskusi dengan Bu Lidya & Mas Ayik terkait Menunggu 1 minggu mas Ayik belajar ;
metode kuantitatif validasi & injek standard milik ITD

MINGGU 1  5/9/2022  Tidak ada data yang ditampilkan
SEPTEMBER Injek Plasma 0,01 ppm  Meminta capture screen menu menu
di LCMS kuantitaitf
 6/9/2022
Berdiskusi dengan Bu rista  Revisi metode validasi
 7/9/2022
Ke ITS untuk menanyakan LCMS  ITS LCMS Rusak
Berkeliling One-Med untuk mencara tube 1,5 mL yg  Tidak menemukan tube
tidak bocos
 8/9/2022  LCMS Rusak
Mencari info LCMS Ubaya
 9/9/2022
Berdiskusi Timeline Tesis
Menanyakan LCMS Politeknik Negeri Malang
MINGGU 2 & 3  12/9/22
SEPTEMBER Membuat FG 2 B HPLC dan LCMS
 13/9/22
Membuat stabilitas plasma 30 hari -Akan koordinasi dengan Pak Gun &
Berdiskusi dengan Bu Lidya Pak Doan
-Berdiskusi biaya
 14/9/22 & 15/9/22
Injek stabilitas Teno in water 0,1 1 10 ppm produksi 10 ppm
bulan Juli Agustus & September  kolom pendek  Peningkatan peak pada RT 2,2 –
Juli Agustus injek 14/9/22 2,3
September 15/9/22  Juli ke Agustus 9,8% penurunan
 Juli ke September 14% penurunan
 Agustus ke September 4,8%
 Perbandingan per bulan. Juli
paling rendah  karena -20.
Sedangkan Agustus & September
disimpan -80
0,1 - 1 ppm
 Pada RT 2,2 – 2,3, preparasi
semakin baru  area semakin
 16/9/22 rendah
Follow up Polinema
-tidak bisa untuk sample biologis

 21/9/22 Saran :
Berdiskusi dengan prof. Aty & Bu Lidya a. Injek blank plasma
b. Injek blank plasma + teno di awal
c. Injek blank plasma + teno spiked
 akhir
d. Injek blank plasma + teno di awal
+ spiked akhir
e. Atau Injek plasma pasien + teno
spiked akhir
 Injek standar & sample sambiloto
milik ITD terlebih dahulu
MINGGU 4  4/10/22
SEPTEMBER & Preparasi :
MINGGU 1  Plasma blank belum di injek
OKTOBER  Plasma spiked awal (plasma + T 10 ppm di awal)
 Plasma spiked akhir (plasma  preparasi  + T
10 ppm)
 Plasma spiked awal + akhir (Plasma + T 10 ppm
awal  preparasi  + T 10 ppm)

Plasma di injek 5/10/22

 5/10/22
In ACN hanya 100 ppm yg di injek
Preparasi :
 Plasma blank Tidak terlihat peningkatan abundance
 Plasma spiked akhir (0,1 ; 1 ; 10 ; 50 ; 100 ppm)
 Tenofovir in ACN (0,1 ; 1 ; 10 ; 50 ; 100 ppm) 100 ppm tidak terdeteksi m/z 136 176
Blank plasma (2:05) 288 pada RT 4, dan 9,
Blank plasma 2 (2:21)
Teno in ACN ( 2:34)
 T 100 in plasma (3:58)
T 50 in plasma (5:07)
T 10 in plasma (5:30)
T 1 in plasma (5:51)
*spiked akhir  preparasi seperti biasa  ambil 200
μL + 40 μL Tenofovir

MINGGU 2  10/10/22
OKTOBER Preparasi Plasma Peak tidak ada pergeseran dengan
160 μL plasma + 40 μL tenofovir + (vortex 30s) + 200 replikasi injek 2-3 kali
μL ACN  (vortex 30s) + 80 μL AF 2%  (vortex
30s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil - ada peak di RT 2,5 pada injek spiked
300 μL supernatant  saring  ambil 100 μL awal + akhir. M/z 136 176 288 lengkap
di RT tersebut
Blank - namun tidak terlihat m/z pada
P + T 100 ppm preparasi plasma kami yg biasanya
P + T spiked 100 ppm - blank bebas m/z target
- peak spiked vs normal tidak jauh
berbeda tinggi nya.
- spiked awal + akhir kami injek 3x
terdapat perbedaan tinggi peak namun
masih 1 RT
Preparasi Saliva
Nggak nutut di injek
160 μL saliva + 40 μL tenofovir + (vortex 30s) + 200
μL ACN  (vortex 30s) + 100 μL AF 1%  (vortex
30s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil
300 μL supernatant  saring  ambil 100 μL

 11/10/22
- ada peak di RT 2,5 pada injek spiked
Preparasi Saliva
awal + akhir. 2 dari 3 injek terlihat 3 m/z
160 μL saliva + 40 μL tenofovir + (vortex 30s) + 200
target. 1 dari 3 injek hanya terlihat 176
μL ACN  (vortex 30s) + 100 μL AF 1%  (vortex
288
30s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil
- pada preparasi saliva seperti biasa
300 μL supernatant  saring  ambil 100 μL
(spiked awal) 1 dari 2 injek terlihat m/z
Blank 136. Sisa nya tidak terlihat m/z target
S + T 100 ppm - blank bebas m/z target
S + T spiked 100 ppm

Preparasi Urin - m/z terlihat pada 136 saja

200 μL Urin + 50 μL tenofovir + 250 μL 0,1% AF in - blank sudah terlihat m/z 136 pada RT
ACN  (vortex 30s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 1,3 yg cukup besar abund nya
rpm  ambil 300 μL supernatant  saring  ambil - pada spiked awal + akhir abund nya
250 μL kecil => 80,57. Dibanding blank yg
23491,36
Blank
- preparasi biasa (spiked awal) abund
U + T 100 ppm
sekitar 13700
U + T spiked 100 ppm
 - RT pada kartu lama & baru sama yaitu
 12/10/22 pada 1,5
Preparasi DBS - blank pada kartu lama dan baru sama
5 mm disk  + 200 μL 0,1% AF in Water + 800 μL sama muncul m/z 176 dengan abund
ACN  vortex 10s => sentrifuge 4000 rpm 10 menit lebih besar pada kartu baru
4C  ambil 850 μL + Gas N2  + 300 μL Water : - pada spiked kolom baru RT muncul
ACN (99:1) pada 1.3 ; sedangkan pada kolom lama
pada 1.5
Blank lama - pada spiked kolom lama m/z lengkap
D + spiked T 100 ppm lama 136 176 288 sedangkan pada kolom
Blank baru baru hanya muncul 288
D + T 10 ppm baru - pada RT 1.5 di spiked kolom baru
D + spiked 100 ppm baru terdapat m/z 136 dan 176
 Teno 100 ppm in water
- Terdapat m/z target lengkap pada RT
 13/10/22 5,6 & 5,7
Injek Teno 100 ppm in water FG 2
P+T 100 ppm (tanpa AF)
Preparasi gas - Tidak ada m/z target pada RT 2,7
Plasma P+T 100 ppm + AF +G
160 μL plasma + 40 μL tenofovir + (vortex 60s) + 200 Pada RT 2,5
μL ACN  (vortex 60s) + 80 μL AF 2%  (vortex - Injek 1 : m/z 176
60s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil - Injek 2 : m/z 136 & 176
supernatant  Gas N2  + 200 μL FG 2  Saring  P+T 100 ppm +G (tanpa AF)
ambil 100 μL - Pada RT 2,5
- Injek 1: m/z 176
- Injek 2 : m/z 136 & 176

- Prparasi normal tgl 10 tidak terdeteksi

m/z target
- Gas dengan AF vs tanpa AF : pada m/z
176 tanpa AF abund lebih besar

Nggak Sempat di Injek

Saliva
160 μL saliva + 40 μL tenofovir + (vortex 60s) + 200
μL ACN  (vortex 60s) + 100 μL AF 1%  (vortex
60s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil
supernatant  Gas N2  + 200 μL FG 2  Saring 
ambil 100 μL
 14/10/22
Preparasi Gas
Saliva
160 μL saliva + 40 μL tenofovir + (vortex 60s) + 200
μL ACN  (vortex 60s) + 100 μL AF 1%  (vortex
60s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm  ambil
supernatant  Gas N2  + 200 μL FG 2  Saring 
ambil 100 μL
Urin (tanpa AF)
200 μL Urin + 50 μL tenofovir + 250 μL ACN 
(vortex 30s)  sentrifuge 15 menit 4 C 4000 rpm 
ambil 300 μL supernatant  saring  ambil 250 μL
S+T 100 ppm (tanpa AF)
- Pada RT 5,2 muncul m/z 136 pada
injek ke 2
S+T 100 ppm + AF +G
- Pada RT 2,5 : m/z 136 & 288
- Pada RT 5,3 : m/z 136
S+T 100 ppm +G (tanpa AF)
- Pada RT 2,5 : m/z 136 & 288
- Pada RT 5,2 : m/z 136 176 288
- Preparasi normal tgl 11 hanya m/z 136
dengan abundance yang lebih kecil
dibanding tgl 14
- gas AF vs tanpa AF : pada m/z 288
tanpa AF abund lebih besar
U + T 100 ppm tanpa AF
- RT 1,3 : m/z 136 & 288, abund lebih
kecil dibanding preparasi normal tgl 11
U+ T 100 ppm preparasi normal
- RT 1,3 : tidak terdeteksi m/z target
T in water
- RT 2,5 : m/z 136 176 288
 Teno in water FG 4
MINGGU 3  18/10/22
OKTOBER Injek teno in water Teno in water FG DBS
RT 2,7 : m/z 136 176 288

Preparasi DBS
5 mm disk  + 200 μL metanol  ultrasonik 10 menit Blank baru
2 C sentrifuge 4000 rpm 10 menit 4C  ambil 180 μL - RT 2,5
+ Gas N2  + 300 μL Water Injek 1 : m/z 176
Injek 2 : m/z 136 176
M/z 176 abund lebih kecil dari tgl 12
D + 100 ppm baru
- RT 2,5 : m/z 136 176 288
D + 100 ppm spiked baru
- RT 2,5
Injek 1 : m/z 136 176 288
Injek 2 : m/z 136 176 288
Blank lama
- Tidak terdeteksi m/z target padaRT
2,43
D + 100 ppm spiked lama
- RT 2,5
Injek 1: m/z 136 176 288
 21/10/22 Injek 2: m/z 136 176 288
Injek Teno in water FG 2 & FG 4
 FG in water di injek lagi karna injek 1 & 2 profil peak FG 4
nya berbedad padahal di injek pada hari yang sama Injek 1 :
RT 2,5 : m/z 136
RT 4,6 : m/z 136 176 288
RT 4,9 : m/z 136 176 288

Injek 2
RT 2,5 : m/z 136
RT 4,7 : m/z 136 176 288
RT 5,0 : m/z 136 176 288
Injek LCMS minggu 3 Oktober bermasalah pada
fragmention voltage yang biasanya sekitar 175 Abundance paling tinggi pada RT 4,6
Minggu 4 Oktober  Libur
Minggu 5 Oktober  2/11 Preparasi Plasma & Saliva Di injek H+1 karena mas ayik tidak
N P PM ada kabar
Plasma 80 80 80 Disimpan suhu -80
Tenofovir 20 20 60
ACN 100 320 320 Peak
AF 40 40 80 Bila dibandingkan dengan prep yang
biasa, terlihat puncak peak bergeser
RT 2,5 ke 3,5, walaupun peak pada
preparasi yang baru ini tidak terlalu
meruncing

P 100 RT 2,4
 Injek 1: m/z 176
Injek 2 : m/z 176 & 288
Abundance < 80
RT 3,5 & 5 tidak terdeteksi m/z target

PM 100 RT 2,4
Injek 1 : m/z 176
Injek 2 : m/z 176 & 288
Abundance < 30
RT 3,5 : m/z 176 abund 6000
RT 5,0 : m/z 176 & 288 abund 1600 &
1900

P vs PM :
Pada P peak lebih besar (puncak 1x
10^2) , namun PM peak lebih meruncing
dan lebih rendah (puncak 0,7 x 10^2)

Bila dibandingkan prep biasa (vs tgl

10/10) : pada prep biasa tgl 10 tidak
terdeteksi m/z pada RT 2,55
N S SM
Saliva 80 80 80
Tenofovir 20 20 60 S100 :
ACN 100 320 320 Injek 1 :
AF 50 50 115 RT 2,5 m/z 288 (abund 10rb)
 RT 5,0 m/z 136 (abund 10rb)
Injek 2 :
RT 2,5 tidak detect
RT 5,0 m/z 136 (abund 6rb)

SM 100:
Injek 1:
RT 2,5 m/z 176 288 (abund 6 rb)
RT 5,0 m/z 136 (abund 5rb)

Injek 2:
RT 2,5 m/z 176 288 (abund 1 – 5 rb)
RT 5,0 no detect
4/11 Preparasi Plasma Mod & Gas
Peak S vs SM tidak jauh berbeda
N P PM PG PMG Profil peak hampir sama seperti plasma
Plasma 80 80 80 80 80
Tenofovir 20 20 60 20 60
ACN 100 320 320 320 320 P 100 :
AF 40 40 80 40 80 pada injek ke 2 peak lebih meruncing,
Supernatan yg di ambil 250 250 masih cenderung RT 3,5
FG yg ditambahkan 125 125 Injek 1 : RT 2,4 m/z 176
Injek 2 : RT 2,4 m/z 176
Abundance kecil
Tidak terdeteksi m/z target pada RT 5
PM 100 :
Injek 1 : RT 2,5 m/z 136 176 288
(abund 2000-5000)
Injek 2 : RT 2,4 m/z 176 abund kecil
RT 3,3 tidak terdeteksi

Peak P vs PM :
pada PM sedikit lebih runcing namun
tinggi sama. Pada PM abundance lebih
besar

PG 100 :
Pada RT 2,4 tidak terdeteksi
Injek 1 :
RT 5,0 m/z 136 176 288 (abund 400 –
1000)
RT 6,1 m/z 136 176 288 (abund 400 –
1200)
Injek 2 :
RT 5,0 m/z 136 176 288 (abund 400 –
1500)
RT 6,1 m/z 136 176 288 (abund 500 –
800)

PMG 100 :
 Injek 1:
RT 2,4 m/z 176 288 (abund kecil)
RT 5,0 m/z 136 176 288 (abund 1200 –
2300)
RT 6,1 m/z 136 176 288 (abund 900 –
3100)
Injek 2:
RT 2,4 m/z 176 (abund kecil)
RT 5,0 m/z 136 176 288 (abund 900 –
1500)
RT 6,0 m/z 136 176 288 (abund 1200 –
3900)

PG vs PMG :
Peak dengan gas menyerupai prep
plasma 10/10 dengan puncak pada 2,5
Pada PMG puncak lebih tinggi

Gas vs no gas :
Pada PG tidak detect RT 2,4, namun
pada PMG terdeteksi kecil; P & PM
terdeteksi RT 2,4
 7/11
- Injek plasma modified spiked (PMS) & plasma  PMS m/z pada RT 3,0 & 3,5
modified gas spiked (PMGS) dengan abund yg besar
 PMGS  m/z pada RT 2,5
 N PMS PMGS dengan abund yg besar
Plasma 80 80 80  PMS vs PMGS  Profil peak gas
Tenofovir 20 60 60 lebih kecil dengan abund yang
ACN 100 320 320 lebih kecil
AF 40 80 80  Pada gas puncak peak di 2,5
Spiked 80 80  Tanpa gas puncak peak di 3,0
(tidak runcing)
- Timbang Amonium Acetat
 9/11 Terdapat m/z pada RT 1,4 namun peak
Injek Urine 100 ppm pada RT tersebut lebih rendah
Injek 10 & 100 ppm dari 10 ppm

- Data kualitatif dirubah ke

Diskusi dengan Bu Lidya kuantitatif oleh Pak Doan by req
- Pak Gun sibuk sampai akhir bulan
- Menentukan jadwal lab di ITD
 11/11
Preparasi presipitan Metanol : ACN 50:50 - pH 4
N P/PS/PG/PGS M/MS/MG/MGS - PG : tidak di injek karena filter
Plasma 80 160 80 (mleduk ☹)
Tenofovir 20 40 60 Batch P
ACN 100 100:100 160:160 - Peak di 5,2 (Pada gas peak lebih
AF 40 80 80 runcing
- Peak (& abund) P K1 lebih tinggi
 dari P K2  peak PS diantara P
Plasma K1 & K2
Plasma Spiked - PGS peak paling tinggi dengan
Plasma gas abund yg lebih besar juga
Plasma Gas Spiked Batch M
- Peak di 5,2
- MGS peak paling tinggi dan
Modified runcing dengan abund yg lebih
Modified Spiked besar juga
Modified gas - Gas peak lebih tinggi
Modified Gas Spiked
 14/11
-Injek Plasma Abacavir & Plasma Campuran pada - Peak di 5,2
presipitan 50:50 - PGM peak lebih runcing, namun
-Injek Plasma pada presipitan 100% Metanol pada PG peak bergeser di 5,5-6
dan landai
N PM/PMS PA/PAS PC/PCS - PMS & PGMS peak sama tinggi
/PGM/PGMS - PA peak di 5,5-6 ; PAS peak di 5-
Plasma 80 160 160 160 5,5 dan lebih tinggi
Tenofovir 20 40 40 - PC peak di 5,5
ACN 100 200 100:100 40 - PCS peak di 5-5,5 dengan injek
AF 40 80 40 K1 lebih rendah
Abacavir 100 ppm 40 40 (2ppm)

 15/11
Injek Saliva - pH 2
 - Preparasi saliva metode lama 
peak spiked lebih rendah (RT 5,5-
5,7 &
- Ada Peak sekitar 5,5 – 5,7 pada
injek abacavir
-
 16/11
Injek 1 set metode plasma methanol 100%
blank - Pada blank terdapat m/z tenofovir
0,0001 namun peak paling rendah
0,001 - Posisi puncak peak meningkat
0,01 dari blank hingga 10 ppm (kecuali
0,1 0,0001 ppm yg posisinya diantara
1 0,001 dan 0,01
10 - Besar abund tidak sepadan dengan
peningkatan peak

 17/11
Injek 1 set Plasma dengan presipitan ACN 4:1 dengan
Blank - 10 ppm
modifikasi
N PM - Pada RT 2,5 – 5,5  blank 0,0001
Plasma 80 80 & 0,001 peak diatas konsentrasi
Tenofovir 20 60 lainnya
ACN 100 320 - Blank tidak terdeteksi m/z
AF 40 80 tenofovir
 - Konsentrasi lainnya pada RT 2,5
berurutan dari 0,01 – 10 ppm.
Namun 0,01 peak lebih tinggi dari
0,1 (hampir sama dengan 1ppm)
 17/11
Injek 1 set plasma presipitan Metanol : ACN 50:50
N P/PS/PG/PGS
Plasma 80 160 -
Tenofovir 20 40
ACN 100 100:100
AF 40 80

Injek Teno 100 ppm in Metanol

Minggu 4  21/11/2022
November Preparasi Teno in Metanol - Peak tinggi Pada RT 2,5 dan peak
Penimbangan kecil pada 5,2  hanya terdeteksi
Pembuatan larutan Baku m/z pada injek 1 teno in water 10
Injek teno in methanol (tanpa plasma) ppm. Injek berikutnya tidak ada m/z

Preparasi Plasma Teno in Metanol  spiked & no - Peak tinggi pada RT 2,5 namun
spiked tidak terdeteksi m/z teno
Plasma 160 - Peak kecil pada RT 5,2 terdeteksi 1
Tenofovir 40 m/z teno saja (136/176)
Metanol 200
AF 2% 80
- Abacavir  injek spiked, peak lebih
Preparasi Plasma Abacavir & Plasma Teno Aba rendah dari no spiked pada RT 2,5.
(teno dilarutkan methanol ; aba dilarutkan water) Pada RT 6,5 spiked lebih tinggi
Aba/spiked Campuran/spiked - Campuran  Peak tinggi pada RT
Plasma 160 160 2,5 dan peak kecil pada RT 5,2.
Tenofovir 40 Terdeteksi m/z di RT 5,2 saja (m/z
Abacavir 40 40 136 saja)
Metanol 200 200
AF 2% 80 80

 23/11/2022
Preparasi Stabilitas plasma 1 bulan (masih - 1 ppm tanpa Abacavir
menggunakan tenofovir preparasi Oktober) - 1 ppm dengan Abacavir
Dengan Aba Tanpa Aba - 0,01 ppm tanpa Aabacavir
Plasma 160 160 - 0,01 ppm dengan Abacavir
Tenofovir 40 40 Disimpan pada suhu -20/30
Abacavir 40
Metanol 200 200
AF 2% 80 80 - Abacavir  peak tinggi RT 2,5
namun spiked lebih rendah. Peak
Preparasi Plasma Abacavir & Plasma Teno Aba kecil di 6,5 namun spiked lebih
Aba/spiked Campuran/spiked tinggi. m/z lengkap namun abund
Plasma 160 160 lebih tinggi pada RT 2,5 (disbanding
Tenofovir 40 5,2) RT 6,5 tidak di cek peak list
Abacavir 40 40 nya
 Metanol 200 200 - Campuran spiked peak & abund
AF 2% 80 80 lebih rendah. m/z terdeteksi

- Method lama peak spiked lebih

Preparasi Saliva metode lama & modifikasi rendah pada RT 2,5. Namun lebih
Saliva/spiked Modifikasi/spiked tinggi pada RT 5,2 & 6,5. m/z
Plasma 160 80 spiked hanya terdeteksi di 5,2 (RT
Tenofovir 40 60 6,5 tidak di cek)
Metanol 200 320
AF 2% 80 80 - Modifikasi  peak spiked lebih
rendah pada RT 2,5. Namun lebih
tinggi pada RT 5,2 & 6,5 - 7. m/z
lengkap pada RT 5,2 (m/z RT 6,5 –
7 tidak di cek)
Minggu 1  28/11/2022
Desember Injek : - Metanol murni  ada peak tinggi
Metanol murni 2,5 ; peak kecil 5,2. tidak detect m/z
Blank Plasma - Rendaman  ada peak tinggi 2,5 ;
Metanol rendaman cuci peak kecil 5,2. Tidak detect m/z
Blank Plasma - Blank  peak tinggi 2,5; peak kecil
5,2. terdeteksi m/z teno
Minggu 2  5/12/2022
Desember - Belum bisa injek karena belum selesei conditioning
QTOF
 dari m/z target tidak ditemukan
- Menanyakan ke Bu Lidya terkait hasil analisa Pak
Doan peak
  ‘di m/z 288 tidak ada peak ,
adanya di m/z 288,xxx’
 Memastikan ke bu lidya apa data
yg di olah Pak Doan benar karena
pada optimasi kualitatif terlihat
m/z target dan peak mengalami
peningkatan
 Pak doan salah file, yg di ambil
- Menanyakan tentang Pak Gunarso
adalah data lain
 Pak gunarso tidak bisa karena
 6/12/2022 harus ke jateng akhir tahun ini
Injek Plasma Tenofovir 100 ppm & Plasma Tenofovir
Abacavir 100 ppm (injek 2x) - Peak sangat berbeda dari optimasi
sebelumnya
- 7/12/2022 - Injek 1 & 2 peak sangat berbeda
Injek Teno in water ; blank saliva ; saliva tenofovir 100
ppm; saliva tenofovir spiked 100 ppm - Peak sangat berbeda dari optimasi
sebelumnya
- Injek 1 & 2 peak sangat berbeda
Mas ayik injek sample ITD - Curiga LCMS bermasalah

- Hasil berbeda & jelek

libur injek sampai LCMS selesai di
maintenance ulang
Minggu 3  10/12/2022
Desember Masih maintenance
- Ternyata data yg di proses adalah
- Menghubungi Bu Lidya terkait Pak Doan data DBS
- ‘di proses pada RT 4,9-5,3 tidak
ada peak di m/z 288. Pada plot ke
2 (tengah) menunjukkan ada peak
namun sangat kecil, dilihat pada
plot ke 3 besarnya peak hampir
sama dengan noise. Peak nya di
288,19’
- pada data yg lain ‘ ada peak di
288,0862 RT 2,493. Dilihat plot 3
ada peak cukup besar namun
terputus, hal ini kemungkinan
karena perubahan mode msms ke
ms’
- untuk targeted sample lebih baik
method analisis nya menggunakan
targeted m/s dan jangan
menggunakan scan. Targeted
perlu diesuaikan status parent ion
- 11/12/2022 (ms) atau product ion (msms)
alat masih maintenance

janjian bertemu bu lidya dan mas ayik -


- 12/12/2022
bu lidya mengirimkan hasil dari pak doan
Janjian dengan mas ayik jam 11
- kata mas ayik : sambungan ke
lcms ada yg bermasalah sehingga
perlu di perbaiki
- menanyakan ke bu lidya
mengenai sample yg diolah  bu
lidya langsung menghubungi pak
doan yg memang salah file. Ada
12 folder tapi pak doan hanya
bilang 1 folder  langusng di
olah pak doan
- menjelaskan ke bu lidya terdapat
tombol di lcms yg tidak bisa klik
 MRM analisis. Waktu itu
sudah mengikuti buku petunjuk
tapi saat memasukkan prekursor
& produk ion error gabisa lanjut
- mas ayik bilang sudah dikirimkan
prosedur oleh pak doan
- janjian analisa sendiri dengan mas
ayik jam 11 siang bsok
‘tidak ada peak di menit 5,2. Pak doan
mengirimkan prosedur basic prosesing
yg dilakukan dalam analisa sample
plasma
 - pada salah satu screenshot terlihat
yg terbaca pada RT 2,1 – 2,6

nanda nunggu dari jam 11 – 1 tidak

13/12/2022 datang karena mas ayik nganter prof aty
tidak ada kabar ke panen raya  tapiiii gaada ngasih
kabar ke teman teman balik jam berapa
14/12/2022
mas ayik bisa abis jumatan kira kira mas ayik balik ITD jam 5
ketemu teknisi berca

- jam 1 kurang nanda dihubungi

disuruh ke itd sekarang karena
jam 2 harus nganter prof aty ke
bandara 
- hasil analisa kuanti 
disampaikan mbak ling & nanda