Ilovepdf Merged

LAPORAN TUGAS AKHIR
PEMANFAATAN LIMBAH KULIT PISANG KEPOK

SEBAGAI BAHAN BAKU BIOETHANOL OLEH AKTIVITAS
ENZIMATIS
Aspergillus fumigatus DAN Saccharomyces cerevisiae
BUNGA FARADHANI
082001500014
JURUSAN TEKNIK LINGKUNGAN

FAKULTAS ARSITEKTUR LANSKAP DAN TEKNOLOGI
LINGKUNGAN
UNIVERSITAS TRISAKTI
JAKARTA
2020
LAPORAN TUGAS AKHIR
PEMANFAATAN LIMBAH KULIT PISANG KEPOK

SEBAGAI BAHAN BAKU BIOETHANOL OLEH AKTIVITAS
ENZIMATIS
Aspergillus fumigatus DAN Saccharomyces cerevisiae
TUGAS AKHIR
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Strata Satu Teknik Lingkungan
BUNGA FARADHANI
082001500014
JURUSAN TEKNIK LINGKUNGAN

FAKULTAS ARSITEKTUR LANSKAP DAN TEKNOLOGI
LINGKUNGAN
UNIVERSITAS TRISAKTI
JAKARTA
2020
LEMBAR PERSETUJUAN UJIAN TUGAS AKHIR
Judul : Pemanfaatan Limbah Kulit Pisang Kepok Sebagai Bahan Baku
Bioethanol Oleh Aktivitas Enzimatis Aspergillus fumigatus dan
Saccharomyces cerevisiae
Nama : Bunga Faradhani
NIM : 082001500014
Laporan Tugas Akhir ini telah diperiksa oleh Tim Pembimbing untuk diajukan
dalam Ujian Tugas Akhir di Jurusan Teknik Lingkungan, Fakultas Arsitektur
Lansekap dan Teknologi Lingkungan, Universitas Trisakti, Jakarta.
Jakarta, Juli 2020
Menyetujui,
Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II
Dr. Astri Rinanti, MT Dr. Ir. Ratnaningsih, MT

NIK 2234/USAKTI NIK 1441/USAKTI
ii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada kehadirat Tuhan Yang Maha Esa
karena berkat rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan penyusunan
laporan Tugas Akhir dengan judul “Pemanfaatan Limbah Kulit Pisang Kepok
sebagai Bahan Baku Bioethanol oleh Aktivitas Enzimatis Aspergillus
fumigatus dan Saccharomyces cerevisiae” dapat terselesaikan dengan baik.
Penulisan Tugas Akhir ini dibuat dan diajukan sebagai salah satu syarat
untuk memenuhi syarat guna memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Teknik
Lingkungan pada Fakultas Aristektur Lansekap dan Teknik Lingkungan. Selama
penulisan tugas akhir ini penulis menerima banyak dukungan dan bantuan. Oleh
karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah
membantu penulis menyelesaikan laporan Tugas Akhir, yaitu:
1. Orang tua, kakak dan adik yang telah memberikan dukungan moril dan
materil kepada penulis.
2. Ibu Dr. Astri Rinanti, MT selaku dosen pembimbing I tugas Akhir di
Jurusan Teknik Lingkungan Universitas yang selalu membimbing dan
memberikan ilmu, arahan, motivasi, nasehat dan waktunya sehingga penulis
dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan laporan ini.
3. Ibu Dr. Ir. Ratnaningsih, MT selaku dosen pembimbing II Tugas Akhir di
Jurusan Teknik Lingkungan Universitas Trisakti yang telah memberi ilmu,
arahan, masukan dan waktunya hingga penulis dapat menyelesaikan
penulisan laporan ini.
4. Ibu Pramiati Purwaningrum, ST., MT selaku Ketua Jurusan Teknik
Lingkungan Universitas Trisakti
5. Ibu Dr. Rositayanti Hadisoebroto, ST., MT selaku Sekretaris Jurusan
Teknik Lingkungan Universitas Trisakti.
6. Ibu Tazkiaturrizki, ST., MT dan Ibu Lailatus Siami ST., MT selaku
koordinator Tugas Akhir di Jurusan Teknik Lingkungan Universitas
Trisakti.
iii
7. Seluruh dosen dan karyawan di Jurusan Teknik Lingkungan Fakultas
Arsitektur Lansekap dan Teknik Lingkungan Universitas Trisakti yang telah
membantu penulis selama menjalani perkuliahan di jurusan Teknik
Lingkungan, Fakultas Arsitektur Lansekap dan Teknik Lingkungan,
Universitas Trisakti.
8. Mas Dani, Mas Nano, Mba Erna, Mba Rinia yang telah bersedia membantu
penulis dalam pengerjaan Tugas Akhir.
9. Mala Lussa, Amanda Frisilla, Octaviani Putri, Safira Dwita, Sarrah Fitriana
sebagai sahabat penulis yang selalu menemani, membantu, mendukung dan
menjadi tempat bertukar pikiran.
10. Seluruh angkatan 2015 yang telah menjadi tempat berbagi cerita suka dan
duka, serta memberi dukungan kepada penulis.
Penyusunan laporan tugas akhir ini memiliki kekurangan baik dari isi
maupun susunannya. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang
dapat menjadi acuan bagi penulis untuk lebih baik lagi. Semoga laporan ini dapat
bermanfaat tidak hanya bagi penulis tetapi juga bagi para pembaca.
Jakarta, Juli 2020
Penulis
iv
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ............................................................................................ ii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL .................................................................................................. vi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... viii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang Masalah ................................................................................ 1
1.2 Maksud dan Tujuan ....................................................................................... 2
1.3 Ruang Lingkup .............................................................................................. 3
1.4 Sistematika Penelitian ................................................................................... 3
BAB II TINJUAUAN PUSTAKA .......................................................................... 4
2.1 Keberadaan Limbah Kulit Pisang Kepok ...................................................... 4
2.2 Lignoselulosa ................................................................................................ 5
2.2.1 Selulosa .................................................................................................. 6
2.2.2 Hemiselulosa .......................................................................................... 7
2.2.3 Lignin ..................................................................................................... 7
2.3 Bioethanol ..................................................................................................... 8
2.4 Mekanisme Pembuatan Bioethanol ............................................................... 9
2.4.1 Pre-treatment .......................................................................................... 9
2.4.2 Hidrolisis .............................................................................................. 10
2.4.3 Fermentasi ............................................................................................ 10
2.4.4 Destilasi ................................................................................................ 12
2.5 Pertumbuhan Mikroba................................................................................. 14
2.6 Aspergillus fumigatus .................................................................................. 15
2.7 Saccharomyces cerevisiae........................................................................... 16
2.8 Analisis Sampel Penelitian.......................................................................... 17
2.8.1 Analisis Gula Pereduksi ....................................................................... 17
2.8.2 Analisis Ethanol ................................................................................... 18
2.9 Penelitian Terdahulu ................................................................................... 18
BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 20
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ..................................................................... 20
3.2 Alat dan Bahan ............................................................................................ 20
3.2.1 Alat ........................................................................................................... 20
3.2.2 Bahan ....................................................................................................... 20
3.3 Variabel Penelitian ...................................................................................... 21
3.4 Rancangan Penelitian .................................................................................. 21
3.4.1 Preparasi Limbah Pisang sebagai Substrat ........................................... 25
3.4.2 Kultivasi Fungi ..................................................................................... 25
3.4.3 Tahap Delignifikasi .............................................................................. 25
3.4.4 Tahap Hidrolisis ................................................................................... 26
3.4.5 Tahap Fermentasi ................................................................................. 26
3.4.6 Analisis Kandungan Pati ...................................................................... 26
3.4.6.1 Pembuatan Larutan DNS................................................................... 26
v
3.4.6.2 Analisis Sampel................................................................................. 26
3.4.7 Analisis Ethanol ................................................................................... 27
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 28
4.1 Uji Aktivitas Enzim .................................................................................... 28
4.2 Kultivasi Mikroba ....................................................................................... 30
4.2.1 Aspergillus fumigatus .......................................................................... 30
4.2.2 Saccharomyces cerevisiae .................................................................... 32
4.3 Delignifikasi ................................................................................................ 32
4.3.1 Delignifikasi Mikrobiologi................................................................... 33
4.3.1 Delignifikasi Kimia .............................................................................. 34
4.4 Hidrolisis ..................................................................................................... 35
4.4.1 Hidrolisis Mikrobiologi ........................................................................ 35
4.4.2 Hidrolisis Kimia ................................................................................... 37
4.5 Fermentasi ................................................................................................... 38
4.5.1 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Mikrobiologi ...... 39
4.5.2 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Kimia .................. 41
4.6 Bioethanol ................................................................................................... 49
4.6.1 Produksi Ethanol pada Rasio Substrat : S. cerevisae = 1 : 1 .................... 53
4.7 Pilot Scale Pembentukan Bioethanol .......................................................... 56
BAB V SIMPULAN ............................................................................................. 62
5.1 Simpulan ..................................................................................................... 62
5.2 Saran ............................................................................................................ 63
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 65
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 2. 1 Komposisi Mineral pada Kulit Pisang .................................................. 4
Tabel 2. 2 Analisa Komposisi Nutrisi Pada Kulit Pisang....................................... 4
Tabel 3. 1 Alat yang digunakan …………………………………………………20
Tabel 3. 2 Bahan yang digunakan ……………………………………………... 20
Tabel 3. 3 Variabel Penelitian ………………………………………………….. 21
Tabel 4. 1 Uji Aktivitas Enzim ………………………………………………… 29
Tabel 4.2 % Penyisihan Lignin ………………………………………………... 33
Tabel 4. 3 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Biokatalisator (A. fumigatus) …36
Tabel 4. 4 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Katalisator Kimia (H2SO4) …… 37
Tabel 4. 5 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Biologi) ……….39
Tabel 4. 6 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Kimia) ……...…41
Tabel 4.7 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Substrat:Biokatalisator = 1:1 …………………………………………43

Substrat:Biokatalisator = 1:2 ………………………………………....44

Substrat:Biokatalisator = 2:1 …………………………………………44
Tabel 4.10 Rekapitulasi Perhitungan Kinetika Fermentasi dengan Metode

Michaelins Menten …………………………………………………. 46
Tabel 4. 11 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Substrat:Biokatalisator = 1:2 ……………………………………….. 47

Substrat:Biokatalisator = 2:1 ……………………………………….. 47

Michaelins Menten …………………………………………………. 49
Tabel 4. 14 Konsentrasi Bioethanol ……………………………………………. 49
vii
Tabel 4. 15 Kandungan Phenylethyl Alcohol …………………………………...51
Tabel 4. 16 Perhitungan Konsentrasi Ethanol dan Phenylethyl Alcohol ………. 52
Tabel 4. 17 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 72 Jam …………………… 53
Tabel 4.18 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 120 Jam …………………... 53
Tabel 4.19 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 420 Jam …………………... 53
Tabel 4. 20 Hasil GC-MS Rasio 1:2 Waktu Kontak 72 Jam …………………... 54
Tabel 4. 21 Hasil GC-MS Rasio 1:2 Waktu Kontak 120 Jam …………………. 50
Tabel 4. 22 Hasil GC-MS Rasio 1:2 Waktu Kontak 420 Jam …………………. 51
Tabel 4. 23 Hasil GC-MS Rasio 2:1 Waktu Kontak 72 Jam …………………... 54
Tabel 4. 24 Hasil GC-MS Rasio 2:1 Waktu Kontak 120 Jam ………………….. 54
Tabel 4. 25 Hasil GC-MS Rasio 2:1 Waktu Kontak 420 Jam ………………….. 55
viii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2. 1 Struktur biomasa lignoselulosa yang terdiri dari selulosa, lignin dan
hemiselulosa ..................................................................................... 6
Gambar 2.2 Rangkaian Destilasi Sederhana........................................................ 14
Gambar 2.3 Kurva Pertumbuhan Fungi ............................................................... 15
Gambar 3. 1 Diagram Alir Penelitian .................................................................. 24
Gambar 4. 1 Kurva Pertumbuhan Fungi Aspergillus fumigatus ......................... 31
Gambar 4. 2 Kurva Pertumbuhan Ragi Saccharomyces cerevisiae..................... 32
Gambar 4.3 Efisiensi Penyisihan Lignin dengan Biokatalisator ......................... 34
Gambar 4.4 Efisiensi Penyisihan Lignin dengan Katalisator Kimia NaOH........ 35
Gambar 4.5 Hubungan Perbandingan Substrat:Biokatalisator Biologi terhadap

Waktu Kontak................................................................................. 36
Gambar 4.6 Hubungan Perbandingan Biokatalisator Kimia (H2SO4) terhadap

Waktu Kontak................................................................................. 37
Gambar 4. 7 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Mikrobiologi..40
Gambar 4. 8 Penurunan Glukosa (%) Pada Proses Fermentasi (Hidrolisis

Mikrobiologi) ................................................................................. 40
Gambar 4. 9 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Kimia ........... 42
Gambar 4.10 Penurunan Glukosa (%) Pada Proses Fermentasi (Hidrolisis Kimia)
........................................................................................................ 42
Gambar 4. 11 Hubungan antara 1/[S] dengan 1[V] pada Variasi Perbandingan

Substrat:Biokatalisator = 1:1 ....................................................... 44


ix
Gambar 4.14 Hubungan antara 1/[S] dengan 1[V] pada Variasi Perbandingan
Gambar 4. 16 Grafik Kandungan Bioethanol ...................................................... 50
Gambar 4. 17 Konsentrasi Bioethanol Terhadap Pengaruh Waktu Kontak dan

Rasio Substrat:Biokatalisator ....................................................... 51
Gambar 4. 18 Hasil Konsentrasi Ethanol pada Senyawa Phenylethyl Alcohol

Terhadap Pengaruh Waktu Kontak dan Rasio
Substrat:Biokatalisator ................................................................. 52
Gambar 4. 19 Ilustrasi Pembuatan Ethanol ......................................................... 60
Gambar 4. 20 Ilustrasi Wadah ............................................................................. 61
x
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah

Limbah kulit buah biasanya sering kali tidak dimanfaatkan oleh masyarakat.
Limbah kulit buah yang dihasilkan oleh rumah tangga dan industri-industri
pengolah buah biasanya langsung dibuang ke tempat sampah. Salah satu limbah
kulit buah yang banyak di Indonesia adalah limbah kulit pisang. Pengelolaan
limbah kulit pisang yang ada di Indonesia masih belum dilakukan secara optimal
padahal pada limbah kulit pisang terdapat kandungan pati, protein dan serat yang
berpotensi untuk dimanfaatkan lebih lanjut.
Jumlah produksi buah pisang di Indonesia setiap tahunnya mengalami
peningkatan. Berdasarkan data BPS (Badan Pusat Statistik) Indonesia tahun 2017,
2018 dan 2019 jumlah produksi pisang berturut-turut adalah 7.603.405 ton,
7.755.475 ton, dan 7.907.545 ton. Adanya produksi pisang dengan jumlah banyak
ini maka akan menghasilkan limbah kulit pisang yang banyak pula. Dari
keseluruhan jumlah produksi pisang tersebut terdapat jenis buah pisang yang sering
diolah dalam bentuk gorengan, salah satunya pisang kepok. Kulit pisang kepok
inilah yang nantinya akan menjadi sampah dan permasalahan lingkungan.
Permasalahan limbah kulit pisang ini dapat diatasi dengan melakukan usaha
pemanfaatan lebih lanjut. Salah satu usaha yang bisa dilakukan ialah mengubah
kandungan pati yang ada pada kulit pisang menjadi bioetanol dengan beberapa
tahapan. Bioetanol merupakan etanol (etil alkohol) yang dihasilkan dari tanaman
yang banyak mengandung pati dengan bantuan dari aktivitas mikroba.
Kandungan pati atau karbohidrat yang terdapat pada tanaman yang menjadi
bahan baku bioetanol tadi akan melalui proses alih bentuk dari karbohidrat menjadi
gula atau glukosa dengan menggunakan beberapa metode. Metode yang biasa
digunakan adalah metode hidrolisis asam dan hidrolisis secara enzimatis. Metode
hidrolisis secara enzimatis dinilai lebih ramah lingkungan dibandingkan dengan
metode hidrolisis menggunakan katalis asam. Oleh karena itu, hidrolisis secara
enzimatis lebih sering digunakan. Setelah tahap hidrolisis menghasilkan glukosa
1
maka proses selanjutnya adalah proses fermentasi atau peragian dengan
menambahkan ragi sehingga diperoleh hasil akhir bioetanol.
Berdasarkan uraian permasalahan diatas maka penulis melakukan penelitian
mengenai pemanfaatan limbah kulit pisang kepok sebagai bahan baku bioetanol
melalui proses hidrolisis menggunakan Aspergillus fumigatus dan proses
fermentasi menggunakan Saccharomyces cerevisiae.
1.2 Maksud dan Tujuan
Maksud dari penelitian ini adalah untuk mengolah limbah kulit pisang kepok
menjadi bioetanol (minyak bakar nabati) dengan memanfaatkan aktivitas fungi
Aspergillus fumigatus dan ragi Saccharomyces cerevisiae. Penelitian yang akan
dilakukan mempunyai tujuan sebagai berikut:
1) Membandingkan efektivitas katalisator kimia dibandingkan biokatalisator
dalam proses delignifikasi dan hidrolisis.
2) Menentukan rasio fungi sebagai katalisator mikrobiologi terhadap bubuk kulit
pisang kepok untuk memperoleh kandungan glukosa paling tinggi.
3) Menentukan waktu kontak pada proses pembentukan bioetanol yang
menghasilkan glukosa dan etanol paling banyak.
1.3 Ruang Lingkup
Ruang lingkup penelitian ini adalah:
1) Penelitian ini dilakukan pada skala laboratorium pada kondisi lingkungan yang
terkontrol.
2) Proses delignifikasi dan proses hidrolisis dilakukan secara enzimatis
menggunakan fungi Aspergillus fumigatus dan secara kimia sebagai
pembanding.
3) Proses fermentasi dilakukan secara enzimatis menggunakan ragi
Saccharomyces cerevisiae yang diperoleh dari koleksi Laboratorium
Biologi/Mikrobiologi, Jurusan Teknik Lingkungan, Universitas Trisakti.
4) Sampel limbah merupakan limbah kulit pisang kepok yang berasal dari limbah
industri kecil pengolah pisang kepok di daerah Tanjung Duren, Jakarta Barat.
2
1.4 Sistematika Penulisan
Penulis menyusun sistematika penulisan untuk memudahkan penyelesaian dari
penelitian ini. Sistematika penulisan dalam penelitian ini terdiri dari lima bab yang
terdiri dari:
1. Bab I Pendahuluan
Bab I terdiri dari latar belakang, maksud dan tujuan penelitian, ruang lingkup
dan sistematika penulisan.
2. Bab II Tinjauan Pustaka
Bab II berisi tinjauan pustaka bagi teori-teori yang mendasari, relevan dan
terkait dengan penelitian ini.
3. Bab III Metode Penelitian
Bab III berisi waktu dan lokasi penelitian, alat dan bahan yang digunakan serta
menjelaskan tentang metodelogi penelitian yang dilakukan di laboratorium.
4. Bab IV Hasil dan Pembahasan
Bab IV menjelaskan data-data hasil penelitian yang disertai dengan
pembahasan data-data yang didapatkan dari hasil penelitian.
5. Bab V Simpulan
Bab V berisikan tentang rangkuman beberapa simpulan dari pembahasan pada
bab sebelumnya serta dilengkapi dengan saran yang diharapkan dapat berguna
bagi peneliti selanjutnya dengan tema yang serupa.
3
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Keberadaan Limbah Kulit Pisang Kepok

Buah pisang yang dikenal dengan nama Latin Musa paradisiaca L. adalah jenis
buah pada negara tropis salah satunya adalah Indonesia.
Pisang dengan nama Latin Musa paradisiaca L. merupakan jenis buah-buahan
tropis yang sangat banyak dihasilkan di indonesia. DKI Jakarta mempunyai
kapasitas produksi kira-kira 4361 ton pertahun (BPS,2017). Dari keseluruhan
jumlah pisang tersebut terdapat jenis buah pisang yaitu pisang kepok.
Kulit pisang digunakan karena banyak mengandung karbohidrat. Selain
karbohidrat, kulit pisang juga mengandung mineral-mineral seperti yang
ditunjukkan pada tabel di bawah ini:
Tabel 2.1 Komposisi Mineral pada Kulit Pisang
Sumber: anhwange, B.A. et al. EJEAFChe, 8 (6), 2009

Tabel 2.2 Analisa Komposisi Nutrisi Pada Kulit Pisang
Sumber: anhwange, B.A. et al. EJEAFChe, 8 (6), 2009
4
Berdasarkan Tabel 2.2 di atas, kulit pisang dapat dimanfaatkan sebagai bahan bakar
alternatif karena kandungan pati yang cukup tinggi sekitar 59% (Anhwange et al,
2009). Kandungan pati yang terdapat dalam kulit pisang berpotensi sebagai bahan
pembuatan etanol.
Produksi bioetanol dari tanaman yang mengandung pati atau
karbohidrat,dilakukan melalui proses konversi karbohidrat menjadi gula atau
glukosa dengan beberapa metode diantaranya dengan hidrolisis asam dan secara
enzimatis.
Lignoselulosa perlu perlakuan awal (pretreatment) sebelum dikonversi
menjadi bioetanol. Perlakuan awal tersebut meliputi perlakuan awal fisik
(pengecilan ukuran,pemanasan), perlakuan awal kimia (asam, alkali) dan perlakuan
biologis (Taherzadehand Karimi, 2007)
Perlakuan awal menggunakan asam (hidrolisis asam) lebih banyak
diterapkan dibandingkan hidrolisis menggunakan enzim karena harga enzim sangat
mahal dan sulit didapatkan.Hidrolisis dengan asam bertujuan untuk memecah
ikatan lignin, selulosa dan hemiselulosa agar selulosa dan hemiselulosa mudah
didegradasi menjadi glukosa. Larutan asam seperti asam sulfat dapat memotong
ikatan beta 1,4 selulosa sehingga diharapkan dapat meningkatkan kadar gula yang
dihasilkan dan dapat mengoptimalkan kadar bioetanol yang dihasilkan. Kondisi
optimal produksi bioetanol dengan perlakuan awal asam dari bahan baku kulit
pisang belum ditemukan sehingga pada penelitian ini akan dilakukan
penelitianmengenai optimasi proses hidrolisis dan fermentasi substrat kulit pisang.
2.2 Lignoselulosa
Lignoselulosa terdiri dari selulosa, hemiselulosa, dan lignin. Menurut Saha
(2004) Lignoselulosa mengandung selulosa sekitar 35-50%, hemiselulosa 20–35%
dan lignin 10-25%. Struktur lignoselulosa dapat dilihat pada Gambar 2.1
5
Gambar 2.1 Struktur biomasa lignoselulosa yang terdiri dari selulosa, lignin
dan hemiselulosa (Boudet et al, 2003)
Bahan lignoselulosa biasanya didapatkan dari berbagai sumber, contohnya
tangkai kayu, jerami padi, daun, rumput dan sebagainya. Komponen bahan
lignoselulosa terdiri dari polimer selulosa, hemiselulosa dan lignin yang kompleks.
Pada proses degradasi, penggunaan sebagai substrat harus melalui beberapa
tahapan antara lain yaitu delignifikasi untuk melepaskan selulosa dan hemiselulosa
dari ikatan kompleks lignin dan depolimerisasi untuk mendapatkan gula bebas
(Anindyawati, 2010).
2.2.1 Selulosa
Selulosa adalah senyawa karbon yang terdiri lebih dari 1000 unit glukosa
yang terikat oleh ikatan beta 1,4 glikosida dalam rantai lurus (Desvaux,
2005).Ikatan ß-1,4 glukosida pada serat selulosa dapat dipecah menjadi monomer
glukosa dengan cara hidrolisis asam atau enzimatis.
Selulosa mengandung 50-90% bagian berkristal (ikatan antara beberapa
molekul selulosa melalui jembatan hidrogen) dan sisanya bagian amorf (bagian
yang lebih mudah dihidrolisis baik secara kimiawi maupun enzim.Ikatan beta 1,4
glikosidapada selulosa dapat dihidrolisis oleh asam kuat menghasilkan glukosa dan
seelobiosa. Ikatan beta 1,4 glikosidatidak dapat dihidrolisis oleh enzim glikosidase
6
yang terdapat dalam saluran pencernaan manusia atau hewan, tetapi ular
menghasilkan enzim selobiosa yang dapat menghidrolisis polimer ini.
Selulosa merupakan komponen utama dinding sel tanaman yang tersusun dari
monomer glukosa sehingga dapat digunakan sebagai bahan baku bioetanol.
Berdasarkan sumber perolehannya selulosa dibedakan menjaditiga macam
yaitu:sampah pertanian (jerami gandum, daun jagung, tongkol jagung, jerami padi
dan bagasse), sisa hasil hutan (kayu yang telah mati dan pohon-pohon kecil) dan
sampahpadat (kertas, kayu dan bahan organik lainnya). Bahan berselulosa lebih
murah dibanding jagung namun untuk mengubahnya menjadi gula sangat sulit.
Selulosa terdiri dari gula berikatan rantai panjang. Pengubahan selulosa menjadi
gula pada umumnya dengan menggunakan asam encer atau pekat (Morris dan
Armada, 2006).
2.2.2 Hemiselulosa
Selain selulosa, komponen utama lignoselulosa adalah hemiselulosa.
Hemiselulosa merupakan kelompok polisakarida heterogen dengan berat molekul
rendah yang jumlahnya sekitar 15-30% dari berat kering lignoselulosa (Lynd et
al,2002). Hemiselulosa relatif mudah dihidrolisis dengan asam dan menghasilkan
monomer yang mengandung glukosa, manosa, galaktosa, xylosa, dan arbinosa.
Hemiselulosa mengikat lembaran serat selulosa membentuk mikrofibril yang
meningkatkan stabilitas di dinding sel
2.2.3 Lignin
Lignin merupakan polimer struktural yang berasosiasi dengan selulosa dan
hemiselulosa. Jumlah lignin pada dinding tanaman tinggi lebih dari 30% berat
kering (Lynd et al,2002). Selain itu, lignin merupakan struktur aromatik yang
dibentuk oleh sub unit fenil propanoid yang saling terikat dengan C-C atau C-O-C
membentuk struktur 3D yang komplek. Struktur lignin yang komplek dan
heterogen memiliki berat molekul sampai 11.000, mengeraskan mikrofibril
selulosa dan berikatan secara fisik dan kimia dengan hemiselulosa dan selulosa
dalam jaringan tanaman sehingga menyebabkan lignin sulit didegradasi.
7
2.3 Bioetanol
Etanol (alkohol) adalah nama suatu golongan senyawa organik yang
mengandung unsur C, H dan O. Etanol dalam ilmu kimia disebut sebagai etil
alkohol dengan rumuskimia C₂H₅OH. Rumus umum dari alkohol adalah R-OH.
Secara struktur alkoholsama dengan air, namun salah satu hidrogennya digantikan
oleh gugus alkil. Gugus fungsional alkohol adalah gugus hidroksil, OH.
Karakteristik etanol meliputi: berupa zat cair, tidak berwarna, berbau spesifik,
mudah terbakar dan menguap, dapat bercampur dengan air dalam segala
perbandingan. Secara garis besar penggunaan etanol adalah sebagai pelarut untuk
zat organik maupun anorganik, bahan dasar industri asam cuka, ester, spiritus, dan
asetaldehid. Selain itu etanol juga digunakan untuk campuran minuman serta
digunakan sebagai bahan bakar yangterbarukan (Endah dkk, 2007).
Pembuatan etanol dalam industri ada 2 macam yaitu: 1) cara non fermentasi
(sintetik), suatu proses pembuatan alkohol yang tidak menggunakan enzim ataupun
jasad renik, 2) cara fermentasi, merupakan proses metabolisme dimana terjadi
perubahan kimia dalam substrat karena aktivitas enzim yang dihasilkan oleh
mikroba (Endah dkk, 2007).
Etanol yang diproduksi melalui proses fermentasi menggunakan mikroba
disebut bioetanol. Proses pembuatan bioetanol terdiri dari tiga langkah meliputi:
pengubahan polisakarida menjadi gula sederhana, fermentasi dan terakhir adalah
destilasi (proses pemurnian etanol) (Morris dan Armada, 2006).
Bioetanol dapat diproduksi dari berbagai macam bahan baku yang berbeda dan
dikelompokkan menjadi tiga meliputi: bahan bersukrosa (gula tebu, gula bit dan
shorgum), bahan berpati (jagung, kentang, gandum), bahan berselulosa (kayu,
rumput,kulit nanas)(Prados dan Fito, 2010).
Bahan berselulosa lain yang dapat digunakan untuk menghasilkan bioetanol
adalah jerami padi dan alang-alang melalui fermentasi oleh Saccharomyces
cerevisiae (Sari dan Yulneriwarni, 2010).
Bahan baku bioetanol di Amerika Serikat 90% berasal dari jagung, sedangkan
di Brasil yang merupakan produsen etanol terbesar di dunia bahan baku berasal dari
gula tebu. Etanol juga dapat diproduksi dari gandum, kentang, gula bit dan lain
8
sebagainya (Morris dan Armada, 2006). Saat ini di Indonesia bioetanol di produksi
dari tetes tebu, ubi kayu maupun jagung sehingga bersaing dengan kebutuhan untuk
pangan, pakan dan bahan baku industrilain.
Satu diantara alternatif bahan baku untuk pembuatan bioetanol adalah biomassa
berselulosa. Potensi limbah pertanian yang tersedia di Indonesia berupa limbah
biomassa hasil pertanian (jerami padi, jagung dan lainnya), limbah kehutanan (sisa
biomassa setelah diambil kayunya), limbah industri hasil kehutanan dengan
pertanian (sisa biomassa kertas, pabrik gula dan lainnya), maupun sampah rumah
tangga (hijauan, kertas dan lainnya). Potensi biomassa sebagai bahan baku
bioetanol bervariasi sesuai dengan kandungan bahan penyusun yang dapat
dikonversi menjadi gula sederhana yaitu selulosa dan hemiselulosa. Produk
pertanian yang berpotensi sebagai penghasil biomassa meliputi tanaman pangan
(padi, jagung, kedelai, ubi kayu, ubi jalar dan lainnya), tanaman hortikultura
(kentang, tomat, cabai dan lainnya), tanaman perkebunan (karet, minyak palem,
kelapa sawit, kakao, kopi, teh, tebu, dan tembakau) dan tanaman kehutanan
(Riyanti, 2009).
2.4 Mekanisme Pembuatan Bioetanol
Proses pembuatan bioethanol secara umum terdiri dari beberapa tahap, yaitu:
tahap persiapan bahan baku (Pre-treatment), hidrolisis, fermentasi, dan destilasi.
2.4.1 Pre-treatment
Pembuatan bioetanol yang digunakan adalah selulosa sehingga lignin harus
dihilangkan. Proses pemisahan atau penghilangan lignin dari serat –serat
selulosa disebut delignifikasi atau pulping. Perlakuan pendahuluan dapat
dilakukan secara fisika, fisika-kimia, kimia,biologis maupun kombinasi dari
cara-cara tersebut (Sun dan Cheng 2002).
Tujuan dari pre-treatment adalah untuk membuka struktur lignoselulosa
agar selulosa menjadi lebih mudah diakses oleh enzim yang memecah polimer
sakarida menjadi monomer gula. Pretreatment menyediakan akses yang lebih
mudah untuk enzim sehingga akan mengalami peningkatan hasil glukosa dan
xilosa.
Proses pre-treatment dan hidrolisa merupakan tahapan proses yang sangat
9
penting yang dapat mempengaruhi perolehan yield etanol. Proses pre-treatment
dilakukan untuk mengkondisikan bahan-bahan lignoselulosa baik dari segi
struktur dan ukuran. Proses perlakuan awal dilakukan karena beberapa faktor
seperti kandungan lignin, ukuran partikel serta kemampuan hidrolisis dari
selulosa dan hemiselulosa (Hendriks dan Zeeman, 2009).
2.4.2 Hidrolisis
Hidrolisis adalah proses konversi pati menjadi gula pereduksi. Prinsip
hidrolisis pati adalah pemutusan rantai polimer pati menjadi unit-unit dekstrosa
(C₆H₁₂O₆). Hidrolisis pati menjadi gula pereduksi dapat dilakukan dengan cara
hidrolisis asam dan enzimatis. Hidrolisis secara enzimatis memiliki perbedaan
mendasar dibandingkan hidrolisis secara kimiawi dan fisik dalam hal spesifitas
pemutusan rantai polimer pati. Hidrolisis secara kimiawi dan fisik akan
memutus rantai polimer secara acak, sedangkan hidrolisis enzimatis akan
memutus rantai polimer secara spesifik pada percabangan tertentu. Hidrolisis
dapat digolongkan menjadi hidrolisis murni, hidrolisis asam (penambahan
katalisator asam) dan hidrolisis enzim.Sedangkan berdasarkan fase reaksi yang
terjadi diklasifikasikan menjadi hidrolisis fase cair dan hidrolisis fase uap
(BeMiller dan Whistler, 2009).
Hidrolisis merupakan reaksi pengikatan gugus hidroksil/OH oleh suatu
senyawa. Gugus OH dapat diperoleh dari senyawa air. Hidrolisis pati terjadi
antara suatu reaktan pati dengan reaktan air. Reaksi ini adalah orde satu karena
reaktan air yang dibuat berlebih, sehingga perubahan reaktan dapat diabaikan.
Reaksihidrolisis pati dapat menggunakan katalisator ion H⁺ yang dapat diambil
dari asam. Reaksi yang terjadi pada hidrolisis pati adalah sebagai berikut
(Yuniwati, dkk., 2011):
(C₆H₁₀O₅)x + x H₂O → x C₆H₁₂O₆
Karbohidrat Air Gula pereduksi
2.4.3 Fermentasi
Menurut Purwoko (2007) fermentasi adalah pemanfaatan senyawa organik
untuk pembentukan energi melalui transfer elektron di sitoplasma.
Pembentukan energi melalui transfer elektron di sitoplsama disebut sebagai
10
fosforilasi tingkat substrat. Oleh karena itu fermentasi juga didefinisikan
sebagai pembentukan energi tingkat substrat. Fermentasi etanol adalah proses
biologi yang melibatkan mikroorganisme untuk mengubah bahan organik
menjadi komponen sederhana. Selama proses fermentasi mikroorganisme
memproduksi enzim untuk menghidrolisis substrat menjadi komponen
sederhana (gula) selanjutnya mengubahnya menjadi etanol.
Beberapa penelitian melaporkan bahwa produksi etanol yaitu dengan
menggunakan mikroorganisme seperti kapang, khamirdan bakteri. Mikroba
yang sering digunakan dalam proses fermentasi adalah S.cerevisiae. Khamir ini
dapat tumbuh di media yang mengandung gula sederhana seperti glukosa,
fruktosa dan mannose (Lin dan Tanaka, 2005).
Faktor-faktor yang mempengaruhi proses fermentasi meliputi:
a) Derajat keasaman (pH)
pH optimum untuk proses fermentasi berkisar antara 4,5-5, pada pH 3
proses fermentasi akan berkurang kecepatannya. Hal tersebut dikarenakan
pH mempengaruhi efektivitas enzim yang dihasilkan mikroorganisme
dalam membentuk kompleks enzim substrat. Selain itu perubahan pH dapat
menyebabkan terjadinya proses denaturasi sehingga menurunkan aktivitas
enzim (Poedjiadi dan Titin, 2006).
b) Mikroorganisme
Pemilihan mikroorganisme biasanya didasarkan pada jenis karbohidrat
yang digunakan sebagai medium. Sebagai contoh untuk memproduksi
alkohol dari pati dan gula digunakan S. Cerevisiae dan kadang-kadang juga
digunakan S. elliopsoides, untuk bahan–bahan laktosa menggunakan
Candida pseudotropicalis sedangkan untuk bahan-bahan yang mengandung
selulosa yaitu dengan menggunakan Candida shehatae, Clostridum
thermocellum, Aspergillus sp dan lain-lain. Seleksi tersebut bertujuan untuk
mendapatkan mikroorganisme yang mampu tumbuh dengan cepat dan
mempunyai toleransi terhadap konsentrasi gula yang tinggi serta mampu
menghasilkan alcohol dalam jumlah yang banyak dan tahan terhadap
alkohol sebagai daya tolak umpan balik (Budiyanto, 2004).
11
c) Suhu
Suhu fermentasi akan mempengaruhi aktivitas mikroorganisme. Sampai
pada suatu titik, kecepatan suatu reaksi enzimatik mikroba meningkat
sejalan dengan meningkatnya suhu. Hal inidikarenakan substrat akan
bertumbukan 17 dengan tempat aktif lebih sering ketika molekul itu
bergerak lebih cepat (Campbell dkk, 2002).
d) Waktu
Waktu yang digunakan untuk fermentasi tergantung pada jenis substrat,
suhu, pH fermentasi dan mikroorganisme yang digunakan. Penelitian yang
telah dilakukan oleh Reddy dkk(2010) tentang pembuatan bioetanol dari
daun pisang menggunakan bakteri C. thermocellum menunjukkan bahwa
kadar bioetanol tertinggi yaitu 22% dicapai pada lama fermentasi 5 hari.
Penelitian yang dilakukan oleh Bries (2008) melaporkan bahwa kadar
bioetanol tertinggi yaitu 5,22% dicapai pada lama fermentasi 1 hari.
Bioetanol diperoleh dari hasil fermentasi kulit nanas dengan perlakuan awal
hidrolisis menggunakan enzim xylanase dan dilanjutkan dengan proses
fermentasi menggunakan S. cerevisiae.
e) Media (makanan atau nutrisi)
Media merupakan salah satu faktor penting dalam fermentasi karena
mikroba dapat hidup dalam media tersebut, tumbuh serta dapat berkembang
biak dan dapat mensintesis produk. Oleh karena itu media harus
dipersiapkan dengan kandungan bahan-bahan yang memenuhi syarat dan
cukup untuk berkembang biak dan cukup pula untuk diubah menjadi
produk. Mikroba memerlukan unsur karbon dan nitrogen. Unsur karbon
dapat meningkatkan energidan biosintesissehingga persediaan sumber
karbon yang cukup, dibutuhkanuntuk proses fermentasi. Sedangkan sumber
nitrogen digunakan oleh mikroba untuk mempercepat pertumbuhan sel
dalam fermentasi. Salah satu contoh sumber nitrogen yang dapat digunakan
adalah urea (Trismilah dan Sumaryanto, 2005).
2.4.4 Destilasi
Destilasi adalah suatu metode pemisahan Hukum Raoult berdasarkan
12
perbedaan titik didih. Untuk membahas destilasi perlu dipelajari proses
kesetimbangan fasa uap-cair; kesetimbangan ini tergantung pada tekanan uap
larutan. Hukum Raoult digunakan untuk menjelaskan fenomena yang terjadi
pada proszes pemisahan yang menggunakan metode destilasi; menjelaskan
bahwa tekanan uap suatu komponen yang menguap dalam larutan sama dengan
tekanan uap komponen murni dikalikan fraksimol komponen yang menguap
dalam larutan pada suhu yang sama (Armid,2019)
Prinsip destilasi adalah penguapan cairan dan pengembunan kembali uap
tersebut pada suhu titik didih. Titik didih suatu cairan adalah suhu dimana
tekanan uapnya sama dengan tekanan atmosfer. Cairan yang diembunkan
kembali disebut destilat. Tujuan destilasi adalah pemurnian zat cair pada titik
didihnya, dan memisahkan cairan tersebut dari zat padat yang terlarut atau dari
zat cair lainnya yang mempunyai perbedaan titik didih cairan murni. Pada
destilasi biasa, tekanan uap di atas cairan adalah tekanan atmosfer (titik didih
normal). Untuk senyawa murni, suhu yang tercatat pada termometer yang
ditempatkan pada tempat terjadinya proses destilasi adalah sama dengan titik
didih destilat (Sahidin,2008).
Destilasi sederhana atau destilasi biasa adalah teknik pemisahan kimia untuk
memisahkan dua atau lebih komponen yang memiliki perbedaan titik didih
yang jauh. Suatu campuran dapat dipisahkan dengan destilasi biasa ini untuk
memperoleh senyawa murni. Senyawa yang terdapat dalam campuran akan
menguap saat mencapai titik didih masing-masing. Destilasi ini dilakukan pada
tekanan atmosfer. Aplikasi destilasi sederhana digunakan untuk memisahkan
campuran air dan alkohol. (Walangare,2013)
13
Destilasi sederhana seperti pada gambar berikut :
Gambar 2.2 Destilasi Sederhana (Wahab dan Nafie,2014)
2.5 Pertumbuhan Mikroorganisme

Pertumbuhan mikroorganisme untuk menghasilkan produk tertentu mempunyai
siklus pertumbuhan tertentu tergantung produk yang akan dihasilkan. Fase
pertumbuhan mikroorganisme dibagi menjadi empat diantaranya fase lag
(adaptasi), fase eksponensial, fase stasioner, dan fase menurun (Dwidjoseputro,
2003).
a.Fase Adaptasi
Pada saat ini mikroorganisme baru beradaptasi dengan lingkungan barunya. Pada
fase ini belum terjadi pembelahan sel dan berlangsung cepat atau lambat tergantung
jenis mikroorganisme dan inokulum serta kondisi lingkungan.
b.Fase Eksponensial
Pada saat ini mikroorganisme memulai pertumbuhan dan pembelahan guna
perbanyakan populasinya sesuai kondisi lingkungannya. Saat ini mikroorganisme
mengalami pertumbuhan yang tertinggi tetapi tidak berlangsung lama karena
pertumbuhan dibatasi oleh jumlah nutrien dan penimbunan zat racun sebagai hasil
metabolisme sekunder.
14
c.Fase Stasioner
Pada saat ini mikroorganisme memiliki jumlah yang tidak berimbang dengan
jumlah substrat sehingga bakteri akan mengalami kematian. Pertumbuhan
mikroorganisme terhenti dan terjadi akumulasi produk didalam sel atau media
fermentasi. Dengan terakumulasinya produk pada media fermentasi akan
mengganggu proses sintesis enzim. Pada fase ini sel-sel menjadi lebih tahan
terhadap keadaan ekstrim seperti panas, dingin, radiasi, dan bahan kimia.
d.Fase Menurun (kematian)
Pada fase ini sebagian mikroorganisme mulai mengalami kematian. Jumlah sel
yang mati semakin lama akan semakin banyak, dan kecepatan kematian
dipengaruhi oleh kondisi nutrien, lingkungan, dan jenis jasad renik.
Pada setiap fase pertumbuhan mikroorganisme selalu melakukan pembelahan yang
bersifat mitosis terhadap intisehingga dapat menghasilkan dua organisme yang
morfologis identik dan memiliki sifat fisiologis yang identik.
Gambar 2.3 Kurva Pertumbuhan Bakteri

2.6 Aspergillus fumigatus
Aspergillus fumigatus merupakan salah satu jamur saprofitik yang berfilamen
dan paling banyak ditemukan di udara. Aspergillus fumigatus adalah jamur yang
memiliki peran yang sangat penting dalam daur ulang karbon dan nitrogen di
15
lingkungan. Sebagai salah satu jamur saprofitik yang paling banyak ditemukan,
Aspergillus fumigatus bersifat sangat thermotoleran dan dapat tumbuh dengan baik
pada suhu 30-50oC dan menghasilkan sejumlah enzim stabil seperti selulase dan
phytase. Selain itu Aspergillus fumigatus mengandung 263 glikosa hidrolase (GH)
yang lebih tinggi dibandingkan dengan T. reesei (200 GH) dan P. chrysosporium
dan jamur putih busuk yang dikenal untuk mendegradasi lengkap komponen utama
dari dinding sel tanaman termasuk lignin, selulosa dan hemiselulosa. Hal tersebut
membuktikan bahwa Aspergillus fumigatus merupakan penghasil selulosa yang
efisien untuk mendegradasi lignoselulosa secara baik (Sharma, dkk., 2016).
Klasifikasi Aspergillus fumigatus adalah sebagai berikut: kingdom fungi, divisi
Ascomycota, kelas Eurotiomycetes, ordo Eurotiales, familia Trichocomaceae,
genus Aspergillus, spesies A. fumigatus.
2.7 Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces berasal dari bahasa Latin Yunani yang berarti “gula jamur”
sedangkan cerevisiae berasal dari bahasa Latin yang berarti bir. Saccharomyces
cerevisiae merupakan jenis khamir yang mempunyai sel tunggal. Sel khamir terdiri
dari kapsul, dindingsel, membrane sitoplasma, nucleus, vakuola, globula lipid dan
mitokondria. Khamir ini berbentuk oval (bulat telur) dengan ukuran sekitar 1-5 μm
atau 20-25 μm dengan lebar sekitar 1-10 μm. Koloninya berbentuk rata, lembab,
mengkilap dan halus (Agustining, 2012).
Saccharomyces cerevisiae termasuk dalam golongan Ascomycomycetes karena
dapat membentuk askospora dalam askus. Spesies ini dapat bereproduksi secara
seksual dengan membentuk spora seksual berupa konidium atau juga bereproduksi
secaraa seksual dengan membentuk spora aseksual berupaa skospor asebanyak 4-8
buah dalam askus serta melakukan pertunasan. Pertunasan pada spesies ini dapat
berupa pertunasan multilateral, yaitu tunas dapat tumbuh disekitar ujung sel
(Agustining, 2012). Sel S.cerevisiae dapat tumbuh pada medium yang mengandung
air gula dengan konsentrasi tinggi. S.cerevisiae merupakan golongan khamir yang
mampu memanfaatkan senyawa gula yang dihasilkan oleh mikroorganisme
selulotik untuk pertumbuhannya. Spesies ini dapat memfermentasikan berbagai
karbohidrat dan menghasilkan enzim invertase yang bisa memecah sukrosa menjadi
16
glukosa dan frukosa serta dapat mengubah glukosa menjadi alcohol dan karbon
dioksida sehingga banyak digunakan dalam industri pembuatan bir,roti ataupun
anggur (Agustining, 2012)
2.8 Analisis Sampel Penelitian
2.8.1 Analisis Gula Pereduksi
Gula reduksi merupakan monosakarida/disakarida yang mengandung gugus
aldehid atau keton bebas. DNS (Dinitrosalycilic acid) merupakan metode
untuk menentukan gula reduksi dalam suatu bahan. Sampel gula pereduksi
akan mengalami oksidasi sedangkan gugus NO₂ pada senyawa DNS
mengalami reduksi.
Metode 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) melibatkan deteksi
kolorimetri berdasarkan oksidasi gugus karbonil dan reaksi dengan molekul
penyerap UV-Vis. Dalam reaksinya terjadi oksidasi gugus aldehid/keton
dari gula pereduksi dan DNS tereduksi menjadi 3-amino-5-notrisalicylic
acid. Banyak reaksi sampingan (seperti dekomposisi gula yang bersaing
dengan jumlah/ketersediaan DNS) yang bergantung pada karakter gula
pereduksi, gula yang berbeda akan menghasilkan intensitas warna yang
berbeda, sehingga perlu dikalibrasi untuk tiap gula. Karena spesifitas
rendah, harus ada blanko untuk hasilkan tes yang akurat dan tepat
(Miller,1959).
Reagen DNS mengandung 1% DNS, 0.2% fenol, 0.05% Sodium bisulfit,
dan 1% Sodium hidroksida. Fenol digunakan untuk meningkatkan warna
yang dihasilkan, bisulfit untuk menstabilkan warna, dan alkali berperan
dalam reaksi reduksi, penambahan NaOH digunakan untuk menciptakan
suasana basa agar reaksi dapat terjadi. Pemanasan sampel dengan reagen
DNS hingga muncul warna merah kecoklatan dan didinginkan karena suhu
dapat mempengaruhi absorbansi. Tanpa garam Rochelle yang ditambahkan
setelah munculnya warna dan pendinginan, warna yang dihasilkan tidak
akan stabil, selain itu juga berfungsi untuk mencegah reagen melarutkan O₂
Absorbansi diukur pada λ 575 nm yang dinilai memberikan serapan paling
maksimal untuk warna yang dihasilkan. Hilangnya karbohidart dapat diatas
17
dengan sodium bisulfit dan garam Rochelle, konsentrasi sulfit yang
ditambahkan jika kurang dari 0.05% menyebabkan kurva tidak linier namun
jika berlebih dapat menyebabkan depresi intensitas warna. Kadar NaOH
tinggi dapat berdampak pada hilangnya karbohidrat (Miller,1959).
2.8.2 Analisis Etanol
Gas chromathography (GC) adalah metode pemisahan yang digunakan
untuk menganalisis senyawa yang mudah menguap atau senyawa yang
mudah diuapkan. Senyawa yang mudah terdegradasi oleh panas tidak dapat
dianalisis dengan metode ini. Mass Spectrometer (MS) adalah suatu metode
analisis instrumental yang dipakai untuk identifikasi dan penentuan struktur
dari komponen sampel dengan cara menunjukkan massa relatif dari molekul
komponen dan massa relatif hasil pecahannya. Gas Chromathography-Mass
Spectrometer merupakan gabungan metode analisis antara GC dan MS.
Prinsip kerja GC-MS adalah sampel yang berupa cairan diinjeksikan ke
dalam injektor kemudian diuapkan. Sampel yang berbentuk uap dibawa
oleh gas pembawa menuju kolom untuk proses pemisahan. Setelah terpisah,
masing-masing komponen akan melalui ruang pengion dan dibombardir
oleh elektron sehingga terjadi ionisasi. Fragmen-fragmen ion yang
dihasilkan akan ditangkap oleh detektor dan dihasilkan spektrum massa.
2.9 Penelitian Terdahulu
Beberapa penelitian pembuatan bioetanol dengan menggunakan kulit pisang
kepok pernah dilakukan sebelumnya. Nityasa (2009), Pembuatan bioetanol dari
kulit pisang dengan proses ekstraksi 5 kg kulit pisang dihaluskan dan ditambahkan
air 2/3 dari jumlah kulit pisang dan diperoleh bubur 1,5 liter. Bubur tersebut
dihidrolisis dengan penambahan HCl 10% pada temperatur 60°C. Kemudian
dilanjutkan dengan proses fermentasi dengan bantuan Saccharomyces cerevisiae
pada temperatur 32°C sehingga dihasilkan 15% etanol per 1,5 L jumlah bubur.
Penelitian pembuatan bioetanol dari kulit pisang juga dilakukan oleh Dyah
(2011), kulit pisang yang digunakan adalah kulit pisang yang telah dikeringkan dan
dihidrolisis dengan menggunakan H₂SO₄ 0,5 N. Hasil penelitian ini menunjukkan
18
bahwa semakin lama fermentasi maka semakin banyak dihasilkan etanol sampai
pada waktu tertent. Penelitian ini juga menunjukkan semakin banyak ragi yang
ditambahkan maka akan dihasilkan etanol yang semakin rendah. Penelitian ini
menunjukkan bahwa waktu optimum fermentasi adalah 144 jam dengan kadar
etanol 13,54%. Hasil yang diperola Pada variasi penambahan berat ragi diperoleh
kadar etanol 13,5353% dengan berat ragi 0,0624 gram.
Penelitian pembuatan bioetanol dengan menggunakan kulit pisang selanjutnya
dilakukan oleh Asteria (2013), kulit pisang dihidrolisis secara kimia yaitu dengan
menggunakan larutan HCL 37% pada pH 1. Hidrolisis dilakukan pada suhu 50, 60,
70, dan 80°C selama 1 jam. Hasil dari hidrolisis kemida difermentasi dengan
Saccharomyces cerevisiae dengan variabel Diamonium phospat 10, 20, dan 30 gr/L
selama 12 hari. Hasil hidrolisis penelitian ini menunjukkan glukosa optimum yang
didapat adalah 83,021 gr/L pada suhu 70°C selama 1 jam. Hasil akhir bioetanol
optimum yang didapat sebesar 314,46 gr etanol/kg kulit pisang kering pada hari
ke-8 fermentasi.
19
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi/Mikrobiologi Lingkungan,
Jurusan Teknik Lingkungan, Gedung K Lantai 9, Universitas Trisakti selama 6
bulan, terhitung mulai dari bulan Juli 2019 hungga Desember 2019.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 3.1
Tabel 3. 1 Alat yang digunakan
No Alat Ukuran No Alat Ukuran

1 Autoclave 1 Ember
2 Blender 2 Hotplate
3 Beker gelas 50, 100, 1000 3 Neraca analitis
mL
4 Corong 4 Neraca tiga lengan
5 Erlenmeyer 500, 1000 5 Oven
mL
6 Gelas Ukur 25, 50 mL 6 Peralatan
Evaporasi
7 Labu Takar 250, 1000 7 Peralatan Kukusan
mL
8 Saringan 8 Peralatan Titrasi
9 Spatula 9 Thermometer
10 Pipet Tetes
3.2.2 Bahan
Bahan - bahan yang digunakan dalam penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 3.2
Tabel 3. 2 Bahan yang digunakan
No Bahan No Bahan
1. Saccharomyces cerevisae 1. Sampel limbah pisang
kepok
20
No Bahan No Bahan
2. Aspergillus niger 2. Alkohol
3. H2SO4 3. Aluminium foil
4. Media pertumbuhan Nutrien Agar 4. Aquadest
5. Media Pertumbuhan Potato Dextrose Agar 5. Kapas
6. Spiritus 6. NaOH
3.3 Variabel Penelelitian

Variabel penelitian dapat dilihat pada Tabel 3.4 dibawah ini.
Tabel 3. 3 Variabel Penelitian
Variabel Penelitian
Variabel tetap Variabel bebas Variabel terikat
Tahap Suhu (oC): 121 Rasio, fungi: Kandungan kadar
Delignifikasi Waktu kontak bubuk pisang : glukosa dan
(menit) : 60 1:1, 1:5, 1:10 lignin (mg/L)
Konsentrasi (%, Waktu kontak
v/v) NaOH : 5 (hari): 3, 5, dan 7
Tahap Hidrolisis Suhu (oC): 121 Rasio, fungi: Kandungan kadar

Waktu kontak bubuk pisang: glukosa dan
(menit) : 60 1:1, 1:5, 1:10 lignin (mg/L)
Konsentrasi (%, Waktu kontak
v/v) H2SO4 : 5 (hari): 3, 5, dan 7
Tahap Fermentasi Suhu (°C): 34 S. cerevisae (%, Penentuan kadar

pH : 5 v/v): 5, 10 dan 15 bioethanol
Waktu kontak
(hari): 3, 5, dan 7
3.4 Rancangan Penelitian

Proses produksi etanol melalui 4 tahapan utama yaitu, delignifikasi, hidrolisis,
fermentasi, dan destilasi. Penelitian dilakukan secara bertahap dan berurutan
dengan langkah-langkah kerja yang seperti tampak pada diagram alir pada Gambar
3.1.
21
Preparasi Limbah
Kulit Pisang Kepok
Kultivasi Fungi
Secara
Mekanis Aspergillus fumigatus
Tahap Delignifikasi
Katalisator Biologi
Variabel Bebas
Katalisator Kimia  Rasio fungi : bubuk
Variabel Tetap Kulit pisang =
 5 % NaOH 1:1, 1:5 dan

o
Suhu ( C): 27 1:10
Variabel Tetap
 Waktu kontak (jam): 24 o
 Suhu ( C): 27
 Waktu Kontak (jam):
Analisis :
24
Kandungan pati
(mg/L) dengan
Katalisator Biologi menggunakan
Variabel Bebas metode DNS
1. Waktu Kontak (hari): 3,
5 dan 7
Variabel Tetap
 Rasio fungi:bubuk
kulit pisang =
optimum pada tahap s
ebelumnya
o
 Suhu ( C): 47
22
1
Tahap Hidrolisis
Katalisator Kimia
Katalisator Biologi
Variabel Tetap Variabel Bebas
o
 Rasio fungi : bubuk
2. Suhu ( C): 121 kulit pisang =
3. Konsentrasi H2SO4 1:1, 1:5 dan
4. (%) : 5 1:10
5. Waktu kontak (jam): Variabel Tetap
o
1  Suhu ( C): 121
 Waktu Kontak (hari):
3 Analisis :
Kandungan pati
(mg/L) dengan
menggunakan
Katalisator Biologi metode DNS
Variabel Bebas
 Rasio fungi : bubuk
kulit pisang
= 1:1, 1:5 dan
1:10
Variabel Tetap
o
 Suhu ( C): 121
 Waktu Kontak (hari):
3
23
2
Tahap Fermentasi
Variabel Bebas
 Rasio substrat :S. cereviceae : 1:1, 1:2 dan 2:1
Variabel Tetap
 Suhu (oC) : 34
 Waktu Kontak (hari) :3
 pH :5
Variabel Bebas
 Waktu Kontak (hari) : 3, 5 dan 7
Variabel Tetap
 Suhu (oC) : 34
 Rasio substrat : S. cereviceae : optimum pada tah
ap sebelumnya
 pH :5
Destilasi
Pemisahan cairan (air dan minyak) berdasarkan
perbedaan titik didih.
Analisis:
Penentuan bioethanol dengan menggunakan Gas Chromatography (GC)
Gambar 3. 1 Diagram Alir Penelitian
24
3.4.1 Preparasi Limbah Kulit Pisang Kepok Sebagai Substrat
Bahan yang digunakan sebagai substrat untuk produksi bioetanol pada
penelitian ini adalah limbah kulit pisang kepok. Limbah kulit pisang kepok
tersebut berasal dari limbah industri kecil pengolah pisang kepok. Kulit
pisang kepok tersebut lalu dipotong menjadi bagian yang lebih kecil lalu
dioven selama 2 jam dan kemudian diblender sehingga menjadi bubuk kulit
pisang.
3.4.2 Kultivasi Fungi

Fungi Aspergillus fumigatus didapatkan dari koleksi Laboratorium
Biologi/Mikrobiologi Lingkungan, Universitas Trisakti, Jakarta. Fungi
Aspergillus fumigatus ditumbuhkan dalam media pertumbuhan Potato
Dextrose Agar (PDA). Pertumbuhan Aspergillus fumigatus diamati selama 7
hari, hingga mencapai fase eksponensial pada hari ke-5. Pada hari ke-5
dilakukan pemanenan fungi Aspergillus fumigatus. Biomassa kering
Aspergillus fumigatus sebanyak 1 mg dimasukkan ke dalam erlenmeyer berisi
100 ml media PDB guna memperoleh konsentrasi Aspergillus fumigatus
sebesar 1% (w/v) berupa suspensi spora.
3.4.3 Tahap Delignifikasi

Proses delignifikasi dilakukan untuk membuka struktur lignoselulosa
sehingga memecah polimer polisakarida menjadi monomer gula. Proses
delignifikasi pada penelitian ini ditujukan untuk mengetahui banyaknya fungi
Aspergillus fumigatus dengan waktu kontak tertentu agar dihasilkan pati yang
paling maksimal. Rasio substrat dan Aspergillus fumigatus yang dipakai
dalam penelitian ini adalah 1:1, 1:5 dan 1:10. Proses ini diawali dengan
memasukkan bubuk kulit pisang sebagai substrat dan Aspergillus fumigatus
dengan rasio yang telah ditentukan ke dalam Erlenmeyer yang berisi PDB,
suhu kamar. Proses delignifikasi diamati selama waktu kontak (Td) 24 jam,
72 jam dan 120 jam.
25
3.4.4 Tahap Hidrolisis
Tahap hidrolisis merupakan tahap yang dilakukan setelah tahap
delignifikasi selesai. Tahap hidrolisis dilakukan untuk memutus rantai
polimer pati menjadi unit-unit gula pereduksi. Tahap yang dilakukan pada
proses hidrolisis adalah diawali dengan menambahkan asam sulfat (H2SO4)
dengan konsentrasi 5% ke dalam erlenmeyer berisi PDB, bubuk kulit pisang
kepok (substrat) dan Aspergillus fumigatus dengan rasio tertentu, kemudian
dipanaskan pada suhu 100oC. Setelah itu dianalisis kadar glukosa yang
dihasilkan. Analisis kadar glukosa dilakukan dengan metode DNS (3,5-
dinitrosalisilat) (Byadgi dan Kalburgi, 2015).
3.4.5 Tahap Fermentasi

Hasil yang didapatkan pada tahap hidrolisis kemudian disaring
menggunakan kertas saring Whatman berukuran 110 mm untuk mengurangi
residu hasil hidrolisi. Proses fermentasi dilakukan oleh ragi Saccharomyces
cerevisiae. Proses fermentasi dilakukan dengan rasio substrat terhadap
Saccharomyces cerevisiae 1:1, 1:2 dan 2:1 dengan variasi waktu kontak 3, 5
dan 7 hari.
3.4.6 Analisis Kandungan Pati

3.4.6.1 Pembuatan Larutan DNS
Pembuatan larutan DNS diperlukan untuk mereduksi kandungan pati
yang terbentuk. Pembuatan larutan DNS 1% dilakukan dengan cara
menimbang 1 gr DNS, 005 gr sodium sulfit 2 gr NaOH yang kemudian
dimasukkan ke dalam labu ukur berwarna coklat sebesar 100 mL lalu
ditambahkan aquadest hingga tanda tera. Garam Rochelle 40% dibuat dengan
menimbang 20 gr sodium potassium tartrat yang dimasukkan ke dalam 20 mL
labu ukur berwarna bening kemudian diisi dengan aquadest hingga tanda tera.
3.4.6.2 Analisis Sampel

Analisi DNS bertujuan untuk mengukur kandungan pati yang
terbentuk. Asam 3,5-dinitrolisilat (DNS) ketika dipanaskan akan membentuk
warna merah kecoklatan dan intensitas warnanya diukur pada panjang
26
gelombang 540 nm yang menunjukkan adanya gula pereduksi dan dapat
digunakan untuk menentukan kandungan pati dalam bahan.
3.4.7 Analisis Etanol

Metode GC-MS digunakan untuk melakukan pengujian karakteristik
bioetanol. Metode GC-MS digunakan untuk mengetahui kadar kemurnian
etanol yang sebenarnya. (Yanuar,2015).
27
BAB IV
PEMBAHASAN
4.1 Uji Aktivitas Enzim
Salah satu mikroba yang mempunyai kemampuan merombak selulosa adalah
bakteri selulolitik, yaitu bakteri yang dapat menguraikan selulosa menjadi
oligosakarida yang lebih kecil dan menghasilkan glukosa pada tahap akhir dengan
menggunakan enzim selulase (Ibrahim,2007). Menurut Saratale, 2012, Selulolitik
dapat diartikan sebagai proses penguraian atau pemecahan senyawa selulosa yang
akan menghasilkan senyawa atau unit-unit glukosa yang lebih kecil.
Bakteri selulolitik dapat mendegradasi atau mengurai senyawa selulosa
dikarenakan enzim yang dihasilkan bakteri selulolitik tersebut saling bekerja sama
meskipun dengan spesifikasi yang berbeda. Hidrolisis sempurna dari senyawa
selulosa akan menghasilkan monomer selulosa, yaitu glukosa. Sementara hidrolisis
tidak sempurna akan menghasilkan disakarida dari selulosa, yaitu selobiasa. Pada
penelitian ini bakteri selulolitik dimanfaatkan untuk menguraikan kandungan
selulosa pada kulit pisang kepok. Kandungan selulosa pada kulit pisang akan
diuraikan menjadi glukosa.
Clostridum, Cellulomonas, Trichoderma, Penicillium, Neurospora, Fusarium,
Aspergillus dan lain sebagainya merupakan beberapa kelompok mikroorganisme
yang memiliki aktivitas selulolitik dan hemiselulolitik yang tinggi (Chandel,dkk,
2007). Penelitian ini menggunakan Aspergillus fumigatus untuk menghasilkan
enzim selulase. Enzim selulase diperlukan agar struktur mikrokristalin selulosa
dapat terurai atau terpecah menjadi glukosa. Glukosa tersebut selanjutnya akan
diproses pada tahap fermentasi.
Pada penelitian ini uji aktivitas enzim Aspergillus fumigatus dilakukan setiap
24 jam sekali selama 120 jam. Penelitian sebelumnya oleh Hassan dan Bakhiet
(2017), telah melakukan isolasi isolat Aspergillus fumigatus dan hasil yang
diperoleh adalah diameter koloni bervariasi dari 18 hingga 50 mm pada hari kelima.
Tabel 4.1 menunjukkan bahwa pada penelitian ini, fungi Aspergillus fumigatus
terbukti mampu menghasilkan enzim selulase dengan terbentuknya zona dengan
diameter sebesar 7 mm pada masa inkubasi 24 jam dan menghasilkan diameter
28
tertinggi pada masa inkubasi 120 jam yaitu sebesar 16 mm.
Tabel 4. 1 Uji Aktivitas Enzim
Masa Konsentrasi
Diameter Gambar
Inkubasi Gula
24 jam 7 mm g/L
48 jam 11 mm g/L
72 jam 13 mm g/L
29
Masa Konsentrasi
Diameter Gambar
Inkubasi Gula
96 jam 15 mm g/L
120 jam 16 mm g/L
Hasil penelitian uji aktivitas enzim ini didapatkan hasil bahwa fungi Aspergillus
fumigatus dapat menghasilkan enzim selulosa yang dibutuhkan dalam proses
pemecahan kandungan selulosa yang ada pada kulit pisang kepok sehingga menjadi
glukosa yang siap untuk difermentasi.
4.2 Kultivasi Mikroba

4.2.1 Aspergillus fumigatus
Media pertumbuhan Aspergillus fumigatus pada penelitian ini adalah
Potato Dextrose Agar (PDA) yang diletakkan di dalam cawan petri. Potato
Dextrose Agar (PDA) merupakan salah satu media yang baik digunakan untuk
membiakkan suatu mikroorganisme, baik berupa cendawan/fungi, bakteri
30
maupun sel makhluk hidup. Potato Dextrose Agar (PDA) digunakan untuk
kultivasi fungi Aspergillus fumigatus. Pertumbuhan Aspergillus fumigatus
diamati dalam keadaan lingkungan suhu ruang yang berkisar antara 25-28oC di
dalam ruang Laboratorium Biologi/Mikrobiologi Lingkungan, Universitas
Trisakti.
Metode berat kering merupakan salah satu metode yang digunakan di
dalam kurva pertumbuhan mikroorganisme berdasarkan bertambahnya jumlah
dan berat sel tersebut (Murni,dkk,2011). Kurva pertumbuhan terdiri dari fase
lag (adaptasi), fase eksponensial, fase stasioner dan fase kematian. Kurva
pretumbuhan fungi Aspergillus fumigatus dapat dilihat pada Gambar 4.1
2.0
1.8
1.6
Berat Kering (gr)
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Hari
Gambar 4. 1 Kurva Pertumbuhan Fungi Aspergillus fumigatus

Pada gambar kurva pertumbuhan fungi Aspergillus fumigatus diatas
terlihat adanya fase-fase yang terjadi. Fase lag terjadi pada hari ke-0 hingga hari
ke-1. Fase lag ini terjadi dikarenakan adanya perubahan media dan
lingkungannya maka fungi Aspergillus fumigatus baru menyesuaikan diri.
Setelah hari ke-1 fungi Aspergillus fumigatus mulai mengalami pertumbuhan
yang signifikasn hingga hari ke-7. Setelah memasuki hari ke-8 fungi
Aspergillus fumigatus mengalami penurunan. Penurunan ini membuktikan
bahwa fungi Aspergillus fumigatus mulai memasuki fase kematian.
31
4.2.2 Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae biasa digunakan dalam proses fermentasi.
Saccharomyces cerevisiae memiliki daya fermentasi yang tinggi, daya
pemilihan yang tinggi dalam menghasilkan produk dan dapat memecah
berbagi jenis gula dan tahan terhadap kadar etanol yang tinggi. Media
pertumbuhan untuk mengkultivasi Ragi Saccharomyces cerevisiae yaitu malt
extract, yeast extract, peptone dan glucose yang dilarutkan dalam 1 liter
aquadest. Kultivasi ragi Saccharomyces cerevisiae dilakukan pada suhu 30oC
dengan kecepatan pengadukan 150 rpm. Kurva perumbuhan ragi
Saccharomyces cerevisiae dapat dilihat pada Gambar 4.2 dibawah ini.
Kurva Pertumbuhan Ragi Saccharomyces cerevisiae

10
9
log jumlah sel
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 20 40 60 80 100
Jam
Gambar 4. 2 Kurva Pertumbuhan Ragi Saccharomyces cerevisiae

Pada gambar kurva pertumbuhan ragi Saccharomyces cerevisiae di atas
dapat dilihat ragi Saccharomyces cerevisiae mengalami peningkatan jumlah sel
mulai dari jam ke-0 hingga jam ke-70. Setelah jam ke-80 ragi Saccharomyces
cerevisiae mengalami penurunan jumlah sel.
4.3 Delignifikasi
Pada penelitian ini dilakukan proses pretreatment dengan menggunakan
delignifikasi. Menurut Hendriks dan Zeeman (2009), proses pre-treatment dan
hidrolisis merupakan tahapan proses yang sangat penting yang dapat
mempengaruhi perolehan yield etanol. Tujuan dari pre-treatment adalah untuk
membuka struktur lignoselulosa agar selulosa menjadi lebih mudah diakses oleh
32
enzim yang memecah polimer sakarida menjadi monomer gula yang kemudian
dapat difermentasi. Kadar lignin limbah kulit pisang kepok sebelum dilakukan
proses pretreatment adalah sebesar 0,53%.
4.3.1 Delignifikasi Mikrobiologi

Proses pretreatment secara biologi pada penelitian ini menggunakan
mikroorganisme. Beberapa kelebihan pretreatment secara biologi ini adalah
biaya rendah, pemakaian energi yang rendah, tidak menggunakan bahan kimia,
dampak terhadap lingkungan sedikit, dan tidak dihasilkan zat inhibitor (Menon
dan Rao,2012), dikarenakan proses degradasi substrat dilakukan secara
enzimatik dengan memanfaatkan enzim spesifik yang berasal dari
mikroorganisme seperti bakteri maupun jamur (Hendriks dan Zeeman, 2009).
Penelitian ini memanfaatkan fungi Aspergillus fumigatus dalam proses
delignifikasi. Delignifikasi dilakukan dengan menggunakan 3 jenis
perbandingan substrat terhadap fungi dan menggunakan 3 variasi waktu kontak
yaitu, 24, 72, dan 120 jam. Tabel 4.2 menunjukkan efisiensi penyisihan lignin
(%).
Tabel 4.2 Efisiensi Penyisihan Lignin (%)
Waktu Kontak (jam)

S:B
24 72 120
1:1 58% 57% 47%
1:5 60% 57% 45%
1:10 57% 58% 45%

Keterangan:
S:B = Perbandingan Substrat:Biokatalisator
Terlihat pada Gambar 4.3 bahwa semakin lama waktu kontak maka
semakin penyisihan lignin mengalami penurunan. Hal tersebut berhubungan
dengan kurva pertumbuhan fungi Aspergillus fumigatus yang sudah dibahas
33
sebelumnya. Semakin lama waktu kontak maka fungi Aspergillus fumigatus
akan memasuki fase kematian sehingga kemampuannya menurun.
70%
58% 60% 57%
Efisiensi Penyisihan Lignin (%)
60% 57% 57% 58%
50% 47% 45% 45%
40%
30%
20%
10%
0%
24 72 120
Waktu Kontak (jam)
1:1 1:5 1:10
Gambar 4.3 Efisiensi Penyisihan Lignin (%) oleh Biokatalisator

Pada Gambar 4.3 dapat dilihat hasil penyisihan terbaik dengan
menggunakan Aspergillus fumigatus sebagai biokatalisator pada rasio
perbandingan 1:5 dengan waktu kontak 24 jam sebesar 60%.
4.3.2 Delignifikasi Kimia

Pada penyisihan lignin dengan menggunakan katalisator kimia
ditemukan persen penyisihan terbesar sebesar 58% dengan menggunakan
NaOH sebesar 5%. Sementara hasil penyisihan lignin dengan menggunakan
NaOH sebesar 3% adalah 55% dan hasil penyisihan lignin dengan
menggunakan NaOH sebesar 1% adalah 19%. Hasil penyisihan lignin ini
digambarkan pada Gambar 4.4 dibawah ini.
34
70%
Efisiensi Penyisihan Lignin (%)

58%
60% 55%
50%
40%
30%
19%
20%
10%
0%
24
Waktu Kontak (Jam)
NaOH 1% NaOH 3% NaOH 5%
Gambar 4.4 Efisiensi Penyisihan Lignin (%) oleh Katalisator Kimia NaOH
Setelah membandingkan hasil delignifikasi kimia dan delignifikasi
mikrobiologi maka disimpulkan bahwa hasil penyisihan terbaik dengan
menggunakan Aspergillus fumigatus sebagai biokatalisator pada rasio
perbandingan 1:5 dengan waktu kontak 24 jam sebesar 60%. Sementara pada
penyisihan lignin dengan menggunakan katalisator kimia ditemukan persen
penyisihan terbesar sebesar 58% dengan menggunakan NaOH sebesar 5%.
4.4 Hidrolisis
Hidrolisis merupakan proses penguraian senyawa polisakarida menjadi
monomer gula penyusunnya yaitu glukosa dan xylosa. Pada penelitian ini tujuan
dari proses hidrolisis adalah mendapatkan glukosa yang nantinya akan diproses
pada tahap fermentasi. Secara umum hidrolisis dibagi menjadi dua yaitu hidrolisis
asam (hidrolisis kimia) dan hidrolisis enzim (hidrolisis mikrobiologi). Proses
hidrolisis pada penelitian ini memanfaatkan enzim yang terdapat pada fungi
Aspergillus fumigatus dan menggunakan asam H2SO4.
4.4.1 Hidrolisis Mikrobiologi

Hidrolisis mikrobiologi pada penelitian ini dilakukan dengan
memanfaatkan enzim yang berasal dari fungi Aspergillus fumigatus dengan
menggunakan perbandingan substrat : fungi sebesar 1:1, 1:5 dan 1:10 dengan
35
variabel waktu 24, 72 dan 120 hari. Hasil konsentrasi glukosa menggunakan
biokatalisator dapat dilihat pada Tabel 4.3.
Tabel 4. 3 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Biokatalisator (A. fumigatus)
Konsentrasi Glukosa (g/L)

Rasio
24 72 120
Substrat:Fungi
Co Cx Co Cx Co Cx
1:1 0.005 0.047 0.028 0.195 0.032 0.237
1:5 0.007 0.089 0.035 0.136 0.126 0.138
1:10 0.008 0.405 0.097 1.054 1.094 1.175
Keterangan:
Co = Konsentrasi Glukosa Sebelum Hidrolisis
Cx = Konsentrasi Glukosa Sesudah Hidrolisis
Pada Tabel 4.3 dapat dilihat hasil akhir konsentrasi glukosa terbesar
adalah 1,175 g/L dengan menggunakan Aspergillus fumigatus sebagai
biokatalisator pada variasi rasio substrat : fungi 1:10 dengan waktu kontak 120
jam. Pada Gambar 4.5 terlihat grafik hasil konsentrasi glukosa menggunakan
biokatalisator dengan masing-masing rasio dan waktu kontak yang dipakai,
GLUKOSA BIOLOGI
1.4
1.2
Kadar Glukosa (g/L)
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
24 72 120
Waktu Kontak (Jam)
1:01 Co 1:05 Co 1:10 Co 1:01 Cx 1:05 Cx 1:10 Cx
Gambar 4.5 Hasil Konsentrasi Glukosa Substrat : Biokatalisator terhadap Waktu

Kontak
36
4.4.2 Hidrolisis Kimia
Hidrolisis kimia dilakukan dengan menggunakan asam H2SO4 dengan
variabel 1, 3, dan 5 % terhadap variabel waktu kontak 30, 60 dan 90 menit.
Hasil hidrolisis kimia dapat dilihat pada Tabel 4.4. Hasil hidrolisis kimia
dengan menggunakan H2SO4 pada konsentrasi 5% glukosa terjadi peningkatan
terbesar dengan konsentrasi akhir glukosa sebesar 1,987 g/L. Pada Gambar 4.6
terlihat grafik hasil konsentrasi glukosa menggunakan katalisator kimia dengan
masing-masing rasio dan waktu kontak yang dipakai,
Tabel 4. 4 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Katalisator Kimia (H2SO4)

Konsentrasi
30 60 90
H2SO4
Co Cx Co Cx Co Cx
1% 0.026 0.457 0.057 0.552 0.079 0.534
3% 0.081 0.865 0.082 0.753 0.154 1.812
5% 0.09 1.126 0.134 1.644 1.178 1.987
Keterangan:
Co = Konsentrasi Glukosa Sebelum Hidrolisis
Cx = Konsentrasi Glukosa Sesudah Hidrolisis
GLUKOSA KIMIA
2.5
Kadar Glukosa (g/L0
2
1.5
1
0.5
0
30 60 90
Waktu Kontak (Menit)
1% Co 3% Co 5% Co 1% Cx 3% Cx 5% Cx
Gambar 4. 6 Hubungan Perbandingan Biokatalisator Kimia (H2SO4) terhadap

Waktu Kontak
37
Menurut penelitian yang dilakukan oleh Sukowati, dkk (2014), Hasil
analisis gula reduksi menunjukkan bahwa kadar gula reduksi berkisar antara
10,19 mg/100mL hingga 11,26 mg/100mL. Konsentrasi H2SO4 mempengaruhi
kadar gula yang didapatkan. Konsentrasi asam sulfat yang semakin tinggi akan
memberikan kesempatan yang lebih bagi selulosa dan hemiselulosa untuk
dihidrolisis menjadi gula-gula sederhana, tetapi jika konsentrasi asam sulfat
melebihi waktu optimalnya maka akan terjadi penurunan kadar gula reduksi.
Setelah melakukan hidrolisis secara kimia dan hidrolisis secara enzimatik

diperoleh hasil konsentrasi hidrolisis secara kimia lebih tinggi dibandingkan
hidrolisis secara enzimatik Meskipun hidrolisis secara kimia memperoleh hasil
lebih tinggi dan waktu yang dibutuhkan lebih cepat dibandingkan hidrolisis secara
enzimatik, akan tetapi hidrolisis secara enzimatis lebih baik dilakukan. Hal tersebut
dikarenakan hidrolisis secara enzimatik lebih ramah lingkungan.
Hidrolisis menggunakan asam akan menghasilkan produk senyawa baru yang
bersifat toksik seperti hidroksimetil furufural. Senyawa ini mengakibatkan
terganggunya proses fermentasi. Selain itu senyawa ini juga memiliki sifat tidak
ramah lingkungan. Meskipun hidrolisis secara enzimatik mepunyai kekurangan
waktu yang relatif lama dan harganya yang lebih mahal, hidrolisis secara enzimatik
lebih ramah lingkungan karena tidak menghasilkan produk samping yang dapat
mengganggu proses fermentasi. Hidrolisis secara enzimatik juga memiliki
keuntungan dalam proses pemutusan rantai ikatan pada pati lebih spesifik pada
percabangan tertentu sedangkan pada hidrolisis secara kimia terjadi pemutusan
rantai pati secara acak sehingga kurang spesifik (Susmiati,2011).
4.5 Fermentasi
Tahap fermentasi adalah tahap yang dilakukan setelah tahap hidrolisis selesai.
Glukosa yang dihasilkan pada proses hidrolisis selanjutnya difermentasi dengan
bantuan ragi untuk menghasilkan etil alkohol (etanol) dan CO₂. Fermentasi
merupakan proses perubahan kimia pada suatu substrat organik melalui aktivitas
enzim yang merupakan hasil metabolism mikroorganisme. Keberlangsungan
proses fermentsi sangat bergantung pada jenis mikroorganisme yang digunakan.
38
Mikroorganisme atau ragi yang digunakan pada penelitian ini adalah
Saccharomyces cerevisiae yang dapat memproduksi alkohol dalam jumlah besar
dan mempunyai toleransi pada kadar alkohol yang tinggi.
4.5.1 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Mikrobiologi
Glukosa yang diperoleh dari hasil hidrolisis mikrobiologi difermentasi
dengan bantuan Saccharomyces cerevisiae. Rasio substrat dan Saccharomyces
cerevisiae yang dipakai pada proses fermentasi ini adalah 1:1, 1:2, dan 2:1.
Fermentasi ini dilakukan selama 3, 5, dan 7 hari. Konsentrasi glukosa yang
dihasilkan dapat dilihat pada Tabel 4.5.
Tabel 4. 5 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Biologi)

Substrat :
72 jam 120 jam 168 jam
S. cerevisae
Cx Cz Cx Cz Cx Cz
1:1 0.047 0.005 0.195 0.038 0.237 0.092
1:2 0.089 0.044 0.136 0.057 0.138 0.062
2:1 0.405 0.113 1.054 0.130 1.175 1.016
Pada Tabel 4.5 dapat dilihat bahwa glukosa mengalami penurunan

setelah difermentasi. Hal tersebut membuktikan bahwa proses perubahan
glukosa menjadi etil alkohol dengan bantuan ragi Saccharomyces cerevisiae
telah berlangsung. Penurunan kadar glukosa ini terjadi karena ragi
Saccharomyces cerevisiae telah aktif mengubah glukosa menjadi etil alkohol.
Grafik glukosa sebelum dan sesudah difermentasi dapat dilihat pada Gambar
4.7.
39
1.4
1.2
Kadar Glukosa (g/L)

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
72 120 168
Waktu Kontak (Jam)
1:01 Cx 1:05 Cx 1:10 Cx 1:1 1:2 2:1
Gambar 4.7 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis

Mikrobiologi
Penurunan glukosa yang terjadi dapat dilihat pada Gambar 4.8. Hasil persen
penurunan glukosa paling tinggi sebesar 89% dengan rasio perbandingan
substrat dengan Saccharomyces cerevisiae 1:1 dengan waktu kontak sebesar
72 jam.
100
89 88
Persen Penurunan Glukosa (%)
90 81
80 72
70 61
58 55
60 51
50
40
30
20 14
10
0
72 120 168
Waktu Kontak (jam)
1:1 1:2 2:1
Gambar 4.8 Penurunan Glukosa (%) Pada Proses Fermentasi (Hidrolisis

Biologi)
40
4.5.2 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Kimia
Glukosa yang diperoleh dari hasil hidrolisis kimia (asam) difermentasi
dengan bantuan Saccharomyces cerevisiae. Rasio substrat dan Saccharomyces
cerevisiae yang dipakai pada proses fermentasi ini adalah 1:1, 1:2, dan 2:1.
Fermentasi ini dilakukan selama 3, 5, dan 7 hari. Konsentrasi glukosa yang
dihasilkan dapat dilihat pada Tabel 4.6.
Tabel 4. 6 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Kimia)

Substrat :
72 Jam 120 Jam 168 Jam
S. cerevisae
Cx Cz Cx Cz Cx Cz
1:1 0.457 0.265 0.552 0.223 0.534 0.205
1:2 0.865 0.115 0.753 0.129 1.812 0.197
2:1 1.126 0.121 1.644 0.317 1.987 0.248
Pada Tabel 4.6 dapat dilihat bahwa glukosa juga mengalami penurunan
setelah difermentasi. Hal ini sesuai dengan prinsip dasar fermentasi yaitu
mengaktifkan kegiatan mikroba tertentu dengan tujuan mengubah sifat bahan
agar dihasilkan suatu yang bermanfaat. Perubahan tersebut terjadi dikarenakan
dalam proses fermentasi jumlah mikroba diperbanyak dan digiatkan
metabolismenya didalam bahan tersebut dalam batas tertentu (Assegaf, 2009).
Hasil konsentrasi glukosa sebelum dan sesudah difermentasi dapat dilihat pada
Gambar 4.9.
41
2.5
Kadar Glukosa (g/L) 1.5
0.5
0
72 120 168
Waktu Kontak (Jam)
1:01 Cx 1:05 Cx 1:10 Cx 1:1 1:2 2:1
Gambar 4.9 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Kimia
Pada Gambar 4.10 dapat dilihat hasil penurunan glukosa. Persen penurunan
glukosa paling tinggi sebesar 89% dengan rasio perbandingan 1:2 pada waktu
kontak 168 jam.
100 89 89
87 88
Persen Penurunan Glukosa (%)
90 83 81
80
70 60 62
60
50 42
40
30
20
10
0
72 120 168
Waktu Kontak (jam)
1:1 1:2 2:1
Gambar 4.10 Penurunan Glukosa (%) Pada Proses Fermentasi (Hidrolisis Kimia)
Berdasarkan proses fermentasi yang telah dilakukan diperoleh hasil glukosa

yang tereduksi. Hal ini membuktikan bahwa mikroorganisme tumbuh dan
42
berkembang secara aktif merubah bahan yang difermentasi menjadi produk yang
diinginkan pada proses fermentasi (Suprihatin, 2010).
Menurut Taherzadeh dan Karimi (2008), reaksi fermentasi bioethanol dari gula
dengan menggunakan ragi Saccharomyces cerevisiae dapat dilihat dalam
persamaan (2). Persamaan (2) menunjukkan bahwa glukosa akan dikonversi
menggunakan ragi Saccharomyces cerevisiae sehingga menghasilkan ethanol dan
gas CO2. Persamaan (3) dapat digunakan dalam menghitung kecepatan
pembentukan produk (ethanol).
S. cerevisae
C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2 ….. (2)
𝑑[𝑃]
𝑉= … (3)
𝑡
Keterangan:
t = waktu fermentasi (jam)
[S] = Konsentrasi Subsrat/glukosa (mg/L)
[P] = Konsentrasi Produk/etanol (mg/L)
V = Kecepataan reaksi (mg/L.jam)
Berdasarkan rumus diatas maka didapatkan hasil yang tersaji pada Tabel 4.7 sampai
Tabel 4.9. Grafik hubungan antara 1/[S] dengan 1/[V] dapat dilihat pada Gambar
4.11 sampai Gambar 4.13.

Substrat:Biokatalisator = 1:1
T [S] 1/[S] [P] V 1/[V]

72 0.005 200.000 92000 1.28E+03 7.83E-04
120 0.038 26.316 114900 9.58E+02 1.04E-03
168 0.092 10.870 102400 6.10E+02 1.64E-03
43
T [S] 1/[S] [P] V 1/[V]

72 0.044 22.727 150100 2.08E+03 4.80E-04
120 0.057 17.544 366200 3.05E+03 3.28E-04
168 0.062 16.129 221500 1.32E+03 7.58E-04

T [S] 1/[S] [P] V 1/[V]

72 0.113 8.850 101100 1.40E+03 7.12E-04
120 0.130 7.692 185200 1.54E+03 6.48E-04
168 1.016 0.984 175500 1.04E+03 9.57E-04
1.40E+03
1.20E+03
1.00E+03
y = 2.8317x + 724.39
8.00E+02 R² = 0.7917
1/[V]
6.00E+02
4.00E+02
2.00E+02
0.00E+00
0.000 50.000 100.000 150.000 200.000 250.000
1/[S]

44
8.00E-04
7.00E-04
6.00E-04
5.00E-04
1/[V] y = -2E-05x + 0.001
4.00E-04 R² = 0.1331
3.00E-04
2.00E-04
1.00E-04
0.00E+00
0.000 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000
1/[S]

1.20E-03
1.00E-03
8.00E-04
1/[V]
6.00E-04
y = -4E-05x + 0.001
R² = 0.8921
4.00E-04
2.00E-04
0.00E+00
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000
1/[S]

Persamaan (4) dapat digunakan dalam mendapatkan kecepatan reaksi

maksimum (Vmaks) dan konstanta Michaelis Menten (Km).
45
1 1 Km 1
= +{ } … (2)
V Vmax Vmax [𝑆]
Keterangan:
1
= Intercept
Vmax
Km
= Slope
Vmax
Hasil perhitungan pada masing-masing variasi perbandingan substrat:rasio

secara ringkas dapat dilihat pada Tabel 4.10.

Michaelins Menten
1:1 1:2 2:1

Intercept 724.39 0.001 0.001
Slope 2.8317 0.00002 0.00004
Vmax
0.00138047 1000 1000
(mg/L.jam)
Km (mg/L) 0.00390908 0.02 0.04
1/V=724.39 + 1/V=0.001 + 1/V=0.001 +

Persamaan
2.8317 (1/S) 0.00002 (1/S) 0.00004 (1/S)
Dari Tabel 4.10 menghasilkan konstanta reaksi Michaelis Menten bertanda

positif (+) menandakan bahwa proses fermentasi bergerak kearah produk dan
berlangsung secara sempurna. Sedangkan apabila konstanta reaksi Michaelis
Menten bertanda negatif (-) menandakan bahwa reaksi fermentasi bergerak kearah
substrat.
Selain produk ethanol, dihasilkan produk lainnya diantaranya adalah penylethyl

alcohol yang secara kimia dapat disederhanakan menjadi ethyl alcohol (ethanol),
sehingga perhitungan yang ada pada Tabel 4.7 dapat dibuat perhitungan kinetika
fermentasi lainnya yang dapat dilihat pada Tabel 4.11 hingga Tabel 4.12.
46
T [S] 1/[S] [P] V 1/[V]

72 0.044 22.727 592300 8.23E+03 1.22E-04
120 0.057 17.544 497800 4.15E+03 2.41E-04
168 0.062 16.129 543700 3.24E+03 3.09E-04

T [S] 1/[S] [P] V 1/[V]

72 0.113 8.850 549900 7.64E+03 1.31E-04
120 0.13 7.692 204100 1.70E+03 5.88E-04
168 1.016 0.984 160900 9.58E+02 1.04E-03
Grafik hubungan antara 1/[S] dengan 1/[V] dapat dilihat pada Gambar 4.14
sampai Gambar 4.15. Hasil perhitungan pada masing-masing variasi perbandingan
substrat:rasio secara ringkas dapat dilihat pada Tabel 4.13.
Dari Tabel 4.13 menghasilkan konstanta reaksi Michaelis Menten bertanda

positif (+) pada variasi perbandingan 1:2 dan perbandingan 2:1 yang menandakan
bahwa proses fermentasi bergerak kearah produk dan berlangsung secara
sempurna.
47
3.50E-04
3.00E-04
2.50E-04
2.00E-04
1/[V]
1.50E-04
y = -3E-05x + 0.0007
1.00E-04 R² = 0.9743
5.00E-05
0.00E+00
0.000 5.000 10.000 15.000 20.000 25.000
1/[S]
1.20E-03
1.00E-03
8.00E-04
1/[V]
6.00E-04
4.00E-04
y = -1E-04x + 0.0012
2.00E-04 R² = 0.8572
0.00E+00
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000
1/[S]
48
Michaelins Menten
1:2 2:1
Intecept 0,0007 0,0012
Slope -0.00003 -0,0001
Vmaks (mg/L.jam) 1428,57 833,34
Km 0,0429 0,0834
Persamaan 1/V= -0,0007 + 0,00003 (1/S) 1/V= -0,0012 + 0,0001 (1/S)
4.6 Bioethanol
Tahap destilasi adalah tahap terakhir yang akan dilewati sampel limbah kulit
pisang. Pada tahap destilasi akan diperoleh hasil akhir etanol. Metode yang dipakai
untuk menganalisis menganalisis kadar ethanol adalah Gas chromatography-mass
spectrometry (GC-MS). GC-MS merupakan sistem yang terintergrasi dari dua
peralatan analitik. GC-MS mempercepat dalam menganalisis ethanol dengan
pemisahan simultan dan kapasitas identifikasi. Hasil kandungan bioethanol dari
tahap fermentasi dan telah melalui proses destilasi dapat dilihat pada Tabel 4.14.
Grafik hasil konsentrasi bioethanol terhadap pengaruh waktu kontak dan rasio
substrat:biokatalisator dapat dilihat pada Gambar 4.17.
Tabel 4. 14 Konsentrasi Bioethanol
Kandungan (%) Bioethanol

Substrat:S.cerevisiae
1:1 9,20 11,49 10,24
1:2 10,02 12,64 12,16
2:1 8,12 10,54 9,58
Hasil konsentrasi bioethanol dapat dilihat pada Tabel 4.14. Hasil konsentrasi
ethanol terbesar terdapat pada rasio perbandingan substrat:biokatalisator
(Saccharomyces cerevisiae) dengan waktu kontak 120 jam adalah sebesar 12,64%.
Sementara hasil yang didapat pada rasio perbandingan substrat:biokatalisator 1:1
dan 2:1 ditemukan kadar ethanol tertinggi pada waktu kontak 120 jam dengan hasil
ethanol sebesar 11,49% dan 10,54%. Tabel 4.14 menunjukkan hasil konsentrasi
bioethanol mengalami penurunan kandungan ethanol pada waktu kontak 420 jam,
49
hal tersebut dapat terjadi dikarnakan adanya penurunan nutrisi yang dialami oleh
ragi Saccharomyces cerevisiae. Rasio perbandingan 2:1 menunjukkan hasil
kandungan ethanol yang lebih kecil jika dibandingkan dengan rasio perbandingan
1:1 dan 1:2. Kecilnya kandungan ethanol pada rasio perbandingan 2:1 dikarenakan
substrat yang digunakan lebih banyak dibandingkan dengan biokatalisator yang
digunakan, sehingga kinerja Saccharomyces cerevisiae dalam mengkonversi
glukosa menjadi jenuh yang menyebabkan berkurangnya kemampuan
Saccharomyces cerevisiae yang sedikit jumlahnya. Pada penelitian Dewanti (2008)
hasil terbaik dari fermentasi kulit pisang kepok adalah pada 3 hari dengan jumlah
nutrient yang ditambahkan 5,5 gr, jumlah biomassa Saccharomyces cereviceae 329
x 1010 cfu /ml, kadar etanol 9,06%.Perlakuan terbaik fermentasi yaitu pada
konsentrasi ragi 10% (b/v) dengan lama fermentasi 72 jam. Sampel dianalisis lebih
lanjut kadar etanolnya denganmenggunakan metode Gas Chromatography.
14.00 12.64
12.16
11.49
12.00
Kandungan Bioethanol (%)
10.54 10.24
10.02 9.58
10.00 9.20
8.12
8.00
6.00
4.00
2.00
0.00
Waktu Kontak (Jam)
1:1 1:2 2:1
Gambar 4. 16 Grafik Kandungan Bioethanol
50
14.00
12.64
12.00 12.16
11.49
10.54
Kadar Etanol (%)

10.00 10.02 10.24
9.20 9.58
8.00 8.12
6.00
4.00
2.00
0.00
Konsentrasi Bioethanol (%)
Perbandingan Substrat dengan Saccharomyces cerevisae
terhadap waktu kontak (Td)
1:1 1:2 2:1
Gambar 4. 17 Konsentrasi Bioethanol Terhadap Pengaruh Waktu Kontak dan

Rasio Substrat:Biokatalisator
Hasil pembentukan ethanol meningkat dari waktu kontak 72 jam hingga 120
jam. Hasil tersebut dapat dilihat pada Gambar 4.18. Hasil pembentukan ethanol
pada waktu kontak setelah 120 jam menurun. Penurunan hasil pembentukan ethanol
tersebut dikarenakan glukosa yang terbentuk setelah tahap hidrolisis mulai
berkurang dan ragi Saccharomyces cerevisiae mulai berhenti dalam membentuk
enzim-enzim.
Selain ethanol, hasil pengukuran GC-MS menunjukkan adanya senyawa lain

yaitu phenylethyl alcohol yang secara kimia dapat disederhanakan menjadi ethanol.
Perhitungan kandungan ethanol dalam pehenylethyl alcohol dapat dihitung dengan
menggunakan perbandingan berat molekul dengan rumus seperti persamaan (5).
Kandungan Phenylethyl Alcohol dapat dilihat pada Tabel 4.15.
Tabel 4. 75 Kandungan Phenylethyl Alcohol
Kandungan (%) Phenylethyl Alcohol

1:2 59,23 49,78 54,37
2:1 54,99 20,41 16,09
51
BM ethanol /ethyl alcohol (C2H5OH) = 46
BM Phenylethyl alcohol (C8H10O) = 122
𝐵𝑀 𝑒𝑡ℎ𝑦𝑙 𝑎𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙
Rumus : x 1 kg/mol …. (5)
𝐵𝑀 𝑝ℎ𝑒𝑛𝑦𝑙𝑒𝑡ℎ𝑦𝑙 𝑎𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙
46
Perhitungan : x 1 kg/mol = 0,37 g/mol
122
Tabel 4. 86 Perhitungan Konsentrasi Ethanol dan Phenylethyl Alcohol

E (%) P (%) E (%) P (%) E (%) P (%)
1:2 10.02 21.94 12.64 18.44 12.16 20.14
2:1 8.12 20.37 10.54 9.86 9.58 5.96
Keterangan:
S:B = Substrat:Biokatalisator
E (%) = Persen Ethanol
P (%) = Persen Total Ethanol
Gambar 4. 18 Hasil Konsentrasi Ethanol pada Senyawa Phenylethyl Alcohol

Terhadap Pengaruh Waktu Kontak dan Rasio Substrat:Biokatalisator
52
Pada Tabel 4.15 dapat dilihat bahwa pada perbandingan substrat:Saccharomyces
cerevisiae 2:1 dan 1:2 menunjukkan bahwa mikroba belum maksimal dalam
mendegradasi phenylethyl alcohol menjadi ethanol. Perlu dilakukan penelitian
lebih lanjut mengenai proses degradasi phenylethyl alcohol menjadi ethanol. Hasil
Gas Chromatograph Mass Spectofotometry (GC-MS) dapat dilihat pada sub bab
selanjutnya dengan kadar-kadar yang lain yang didapatkan.
4.6.1 Produksi Ethanol pada Rasio Substrat : S. cerevisae = 1 : 1

Produksi ethanol pada rasio substrat : Saccharomyces cerevisiae 1:1 dengan
waktu kontak 72, 120, dan 420 jam dapat dilihat pada Tabel 4.17 sampai dengan
Tabel 4.19.
Tabel 4. 97 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 72 Jam
Waktu Retensi Senyawa Kandungan (%)

3,718 Ethanol 9,20
6,048 Oleic,Acid 18,40
7,951 1-Butanol, 3-methyl- 55,08
12,551 furfural 9,01
Tabel 4.108 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 120 Jam

3,718 Ethanol 11,49
12,551 furfural 14,10
Tabel 4.119 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 420 Jam

3,718 Ethanol 10,24
12,551 furfural 26,48
Dari hasil GC-MS rasio 1:1 dengan waktu kontak 72, 120, dan 420 jam terdapat
senyawa lain yang terbentuk. Senyawa lain yang ikut terbentuk adalah Oleic,Acid,
1-Butanol, 3-methyl-, dan furfural.
53
Tabel 4.22. Dari hasil GC-MS rasio 1:2 dengan waktu kontak 72, 120, dan 420 jam
terdapat senyawa lain yang terbentuk. Senyawa lain yang ikut terbentuk adalah
phenylethyl alcohol.

3,711 Ethanol 10,02
6,048 Phenylethyl Alcohol 59,23

3,711 Ethanol 12,64

3,711 Ethanol 10,24

Tabel 4.25. Dari hasil GC-MS rasio 2:1 dengan waktu kontak 72, 120, dan 420 jam
terdapat senyawa lain yang terbentuk.

3,718 Ethanol 8,12
6,062 6-Octadecenoic acid 7,99
54
3,718 Ethanol 10,54

3,718 Ethanol 9,58
Dari hasil GC-MS rasio 2:1 dengan waktu kontak 72, 120, dan 420 jam terdapat
senyawa lain yang terbentuk. Senyawa lain yang ikut terbentuk adalah 6-
Octadecenoic acid, 1-Butanol, 3-methyl-, dan phenylethyl alcohol.
Pada tahap akhir pembuatan bioetanol ini maka dapat diambil kesimpulan
penelitian ini perlu dilakukan lebih banyak. Penelitian ini perlu lebih dikembangkan
karena Indonesia sebagai negara tropis yang kaya akan keanekaragaman tanaman
pertanian dan perkebunan membuka peluang besar untuk pengembangan bioetanol.
Berbagai jenis umbi-umbian, buah-buahan dan tanaman lignoselulosa lainnya
menjadi sumber bahan baku bahkan limbahnya pun dapat kita manfaatkan untuk
pengembangan bioetanol untuk menggantikan bahan bakar fosil.
Bioetanol akan menjadi bahan bakar yang ramah lingkungan atau Green Energy
dimasa yang akan datang dan Indonesia dapat menjadi salah satu produsen
bioetanol terbesar di dunia karena luasnya ketersediaan bahan baku. Pemanfaatan
limbah sayur, buah, makanan, minuman dan lainnya sebagai bahan baku bioetanol
dapat juga menjadi solusi untuk penanggulangan limbah yang akan merusak
lingkungan. Untuk itu perlu lebih banyak penelitian pengembangan untuk bioetanol
ini.
55
4.7 Pilot Scale Pembentukan Bioethanol
Hasil penelitian yang telah didapatkan kemudian akan digunakan untuk

mementukan kriteria desain skala pilot. Variasi fermentasi terbaik pada penelitian
ini terdapat pada variasi substrat:biokatalisator = 1:2 pada waktu kontak 120 jam.
Gambaran ilustrasi pembuatan bioethanol dengan menggunakan bahan baku
limbah kulit pisang dapat dilihat pada Gambar 4.20.
Ilustrasi produksi bioethanol yang menghasilkan 10 mL sampel yang di analisis

dengan GC-MS yang berasal dari 100 mL larutan yang telah didestilasi pada suhu
70oC - 90oC dapat dilihat pada Gambar 4.20. Hasil kandungan ethanol beserta total
ethanol dikonversikan kedalam volume dengan menghasilkan 36,64 mL dan 10,14
mL pada variasi perbandingan substrat: biokatalisator. Perhitungan kandungan
ethanol dapat dilihat dibawah ini:
a) Ethanol
Diketahui:
Volume Sampel = 10 mL
Kandungan Ethanol (%) = 12,64
Ethanol Absolute (%) = 100%
Ditanya: Kandungan Etanol dalam mL?
Jawab:
Volume Sampel (mL) 100 %

= Kandungan Ethanol (mL)
Kandungan Ethanol (mL)
10 mL 100 %
= 12,64 %
Kandungan Ethanol = 1,26 mL
b) Total Ethanol
Diketahui:
Volume Sampel = 10 mL
Kandungan Ethanol (%) = 20,14
Ethanol Absolute (%) = 100%
56
Ditanya: Kandungan Etanol dalam mL?
Jawab:
Volume Sampel (mL) 100 %

= Kandungan Ethanol (mL)
10 mL 100 %
= 20,14 %
Kandungan Ethanol = 2,01 mL
Pada skala lab, di tahap delignifikasi dan tahap hidrolisis dibutuhkan fungi
sebanyak substrat (varasi optimum perbandingan substrat: biokatalisator = 1:10)
dan ragi sebanyak 100 mL (varasi optimum perbandingan substrat: biokatalisator =
1:1). Apabila memiliki 100 kg kulit pisang, maka fungi yang dibutuhkan sebesar
200 kg (untuk tahap delignifikasi dan tahap hidrolisis) dan ragi sebanyak 2.000 L.
Hasil dari perhitungan scale up tidak akan selalu sama, dikarenakan terdapat faktor
lingkungan yang tidak terkontrol, sehingga perhitungan ini akan dikurangi 30%
(asumsi) sebagai faktor pengurang.
a) Ethanol
Skala lab = Scale up
𝑆𝑢𝑏𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡 (𝑔𝑟) 𝑆𝑢𝑏𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡 (𝑔𝑟)
=
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿) 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿)
5 𝑔𝑟 100.000 𝑔𝑟
=
1,26 𝑚𝐿 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿)
Ethanol = 25.200 mL
= 25,2 L
Ethanol sebenarnya = (100% - 30%) x 25,2 L = 17,64 L
b) Total Ethanol
=
𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿) 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿)
5 𝑔𝑟 100.000 𝑔𝑟
=
2,01 𝑚𝐿 𝐸𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝐿)
Ethanol = 40.200 mL
57
= 40,2 L
Ethanol sebenarnya = (100% - 30%) x 40,2 L = 28,14 L
Dalam pembuatan ethanol digunakan erlenmeyer 250 mL dengan substrat 5
gram. Pada skala pilot, perhitungan scale up wadah adalah sebagai berikut:

=
𝑊𝑎𝑑𝑎ℎ (𝑚𝐿) 𝑊𝑎𝑑𝑎ℎ (𝑚𝐿)
5 𝑔𝑟 100.000 𝑔𝑟
=
250 𝑚𝐿 𝑊𝑎𝑑𝑎ℎ (𝑚𝐿)
Wadah = 5.000.000 mL
Pada hasil perhitungan menunjukkan bahwa diperlukan wadah berukuran

5.000.000 mL atau setara dengan 5.000 L. Proses produksi perlu terus berjalan
walaupun dengan adanya perbaikan maupun pemeliharaan, sehingga dibutuhkan
minimal 2 wadah. Wadah yang digunakan berbentuk tabung sehingga lebih
ekonomis.
Diketahui:
5.000.000
Volume Wadah = = 2.500.000 mL
2 𝑤𝑎𝑑𝑎ℎ
Volume Wadah = 2.500 dm3
Selimut Tabung = 2πrt

Luas alas = πr2
Volume = πr2t
Volume
T =
π 𝑥 𝑟2
2.500
T = π 𝑥 𝑟2
Luas = Luas Selimut + Luas Alas

Luas = 2πrt + πr2
A = 2πrt + πr2
58
2.500
A = 2πrπ 𝑥 𝑟 2 + πr2
5.000
A = + πr2
𝑟
dA
=0
dR
dA = -5.000 r -2 dr + π2 r dr
𝑑𝐴
= -5.000 r-2 + π2 r
𝑑𝑟
0 = -5.000 r-2 + π2r

5.000 r-2 = π2r
5.000
= π2r
𝑟2
5.000 = π2r3
3 5.000
=√ 2π
R = 9,266 dm
R = 0,9266 m
2.500 2.500
T = π 𝑥 𝑟 2 = π 𝑥 9,2662
T = 9,268 dm
T = 0,9268 m
59
Preparasi Limbah Kertas
Kultivasi Mikroba
A. fumigatus
100.000gr
Delignifikasi
Substrat:Aspergillus fumigatus = 1:5
24 jam
Hidrolisis
S. cerevisiae
Substrat:Aspergillus fumigatus = 1:10
120 jam
Fermentasi Destilasi
120 jam
Substrat:S. cerevisiae = 1:1
Gambar 4. 19 Ilustrasi Pembuatan Ethanol
60
92,68 cm
74,14 cm
cm
185,32 cm
Gambar 4.20 Ilustrasi Wadah
61
BAB V
SIMPULAN
5.1 Simpulan
Kesimpulan yang dapat ditarik berdasarkan analisa dan teori yang telah
dilakukan pada penelitian mengenai bioethanol yang berjudul “Pemanfaatan
Limbah Kulit Pisang Kepok sebagai Bahan Baku Bioetanol oleh Aktivitas
Enzimatis Fungi Aspergillus fumigatus dan Saccharomyces cerevisae” adalah
sebagai berikut :
1. Tahap awal atau disebut tahap pretreatment dilakukan dengan cara delignifikasi
dengan menggunakan katalisator kimia dan katalisator biologi. Fungi
Aspergillus fumigatus digunakan sebagi katalisator biologi dan NaOH sebagai
katalisator kimia. Pada proses pretreatment dengan menggunakan
biokatalisator di dapatkan efisiensi terbesar penyisihan lignin pada limbah kulit
pisang kepok yaitu sebesar 60% pada rasio perbandingan biokatalisator:substrat
sebesar 1:5. Efisiensi penyisihan lignin pada limbah kulit pisang kepok dengan
menggunakan NaOH sebagai katalisator kimia didapatkan hasil tertinggi
sebesar 58.% pada konsentrasi NaOH 5%. Hal tersebut mengindikasikan bahwa
Aspergillus fumigatus bersifat lignolitik, sehingga dapat memanfaatkan
lignoselulosa yang ada di dalam limbah kulit pisang kepok untuk memecah
ikatan lignin. Hasil yang didapat pada tahap ini menujukkan bahwa penggunaan
katalisator biologi lebih efisien dibandingkan dengan katalisator kimia serta
lebih ramah lingkungan.
2. Tahap hidrolisis adalah tahap yang dilakukan setelah tahap pretreatment. Tahap
hidrolisis dilakukan dengan menggunakan biokatalisator Aspergillus fumigatus
dan juga katalisator kimia H2SO4. Merusak sruktur kristal selulosa sehingga
terurai menjadi selulosa dan glukosa merupakan tujuan dari proses hidrolisis.
Pada tahap hidrolisis dengan menggunakan biokatalisator didapatkan
konsentrasi glukosa terbesar pada rasio substrat : biokatalisator sebesar 1:10
dengan waktu kontak 120 jam, konsentrasi glukosa setelah tahap hidrolisis
sebesar 1,175 g/L dengan konsentrasi glukosa sebelum tahap hidrolisis sebesar
62
1,094 g/L. Pada tahap hidrolisis dengan menggunakan katalisator kimia
ditemukan konsentrasi glukosa terbesar pada konsentrasi H2SO4 5% dengan
waktu kontak 90 menit, konsentrasi glukosa setelah tahap hidrolisis sebesar
1,987 g/L dengan konsentrasi glukosa sebelum tahap hidrolisis sebesar 1,178
g/L. Pada tahap ini didapatkan hasil konsentrasi glukosa yang lebih besar
dengan menggunakan katalisator kimia, namun apabila dibandingkan dengan
hasil konsentrasi gula dengan menggunakan biokatalisator hasil yang
didapatkan tidak terlampau jauh.
3. Pada proses fermentasi ragi Saccharomyces cerevisiae dimanfaatkan sebagai
biokatalisator. Ragi Saccharomyces cerevisiae memungkinkan untuk
mensekresi glukosa menjadi ethanol dengan memproduksi enzim invertase dan
zymase. Pada proses fermentasi terjadi penurunan kadar glukosa tertinggi pada
perbandingan rasio substrat dengan Saccharomyces cerevisiae sebesar 1:1
dengan waktu kontak 72 jam sebesar 89% dengan kadar glukosa yang
dihasilkan setelah fermentasi sebesar 0,005 g/L. Pada penelitian ini, didapatkan
hasil ethanol tertinggi sebesar 12,64% pada rasio perbandingan substrat dengan
biokatalisator yaitu 1:2 dengan waktu kontak 120 jam.
5.2 Saran
Setelah dilakukan penelitian produksi bioethanol dengan menggunakan bahan
baku limbah kulit pisang kepok, ditemukan beberapa saran yang seharusnya
dilakukan yaitu:
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai tahap delignifikasi dan
hidrolisis yang terdapat pada limbah kulit pisang kepok sehingga dapat
berpotensi meningkatkan produksi bioethanol.
2. Perlu dilakukan pengecekan lebih lanjut tahap delignifikasi secara terperinci
dari kemampuan fungi Aspergillus fumigatus dalam mendelignifikasi limbah
kulit pisang kepok.
3. Perlu dilakukan perbandingan dan waktu kontak tambahan agar dapat
meningkatkan hasil bioethanol.
63
4. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme pembentukan
phenylethyl alcohol
64
DAFTAR PUSTAKA
Agustining, D .2012. Daya hambat saccharomyces cerevisiae terhadap
pertumbuhan jamur fusarium oxysporum. Universitas Jember.
Anindyawati, Trisanti. Prospect of Enzyme and Lignocellulose Waste for
Bioethanol Production.
Anhwange, B., Ugye, T. & T. Nyiaatagher. 2009. Chemical Composition of Musa
Sapientum (Banana) Peels. Electronic JournalOf Environmental,
Agricultural, And Food Chemistry. 8 (6 ):[437442]ISSN: 1579-4377 .
Armid. 2009.Penuntun Praktikum Metode Pemisahan Kimia. Unhalu.Kendari.
Assegaf, F., 2009, Prospek Produksi Bioetanol Bonggol Pisang (Musa Paradisiacal)
Menggunakan Metode Hidrolisis Asam dan Enzimatis, Skripsi, Universitas
Jenderal Soedirman
Asteria, Apriliani.S, Franky, Agustinus. 2013. Pembuatan Etanol Dari KulitPisang
Secara Fermentasi. Semarang: Universitas Diponegoro.
BeMiller, J and R. Whistler .2009. Starch: Chemistry and Technology. Elsevier Inc.
New York.
Budiyanto,M.A.K.2004. Mikrobiologi Terapan. Malang: Universitas
Muhamadiyah Malang.
Boudet AM, Kajita S, Grima-Pettenati J, Goffner D. Lignins and lignocellulosics:
a better control of synthesis for new and improved uses. Trends in Plant
Science 2003; 8(12): 576-581.
Bries, A.R. 2008. The Extraction of Bioethanol from Pineapple (Ananas comosus)
Peelings Through SimultaneousSaccharification and Fermentation Using the
Yeast Sachharomyces cerevisiae. An Investigatory Project Submitted as an
Entry to the 16thInternational Environmental Project Olympiad. Turkey, 1-4
Juni 2008.
Byadgi, A. Shruti dan Kalburgi, P. B. 2015. Production of Bioethanol from Waste
Newspaper. International Conference on Solid Waste Management,
5IconSWM 2015. Procedia Environmental Sciences 35 (2016) 555 – 562.
Campbell, N.A., Jane, B.R. dan Lawrence, G.M. 2002. Biologi. Jilid 1. Jakarta:
Erlangga.
65
Chandel, A.K., E.S. Chan., R. Rudravaram, M.L. Narasu, L.V. Rao, and P.
Ravindra. 2007. Economics and Environmental impact of Bioetanol
Production Technologies : An Appraisal. Biotechnology and Molecular
Biology Review Vol 2(1), 14-32.
Desvaux, M. 2005. Clostridium cellulyticum: Model Organism of Mesophillic
Cellulolytic Clostridia. FEMS Microbiology Reviews.29:741-764.
Dewanti, 2008. Limbah kulit pisang kepok sebagai bahan baku pembuatan etanol.
UPN Veteran. Jawa Timur.
Dwidjoseputro, D.2003.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan, Jakarta.
Dyah, Tri Retno. Wasir, Nuri. 2011. Pembuatan Bioetanol Dari Kulit
Pisang.Yogyakarta: UPN Veteran.
Endah, R.D., Sperisa,D., Adrian, N.dan Paryanto. 2007. Pengaruh Kondisi
Fermentasi terhadap Yield Etanol pada Pembuatan Bioetanol dari Pati Garut.
Gema Teknik,No. 2.
Hassan, S. A. A,and Bakhiet,S. E. A. 2017.Optimization of antibacterial
compounds production by aspergillus fumigatusisolated from sudanese
indigenous soil. International Biological and Biomedical Journal.3:203-208.
Hendriks,ATWM.,and Zeeman,G.2009.Pretreatments to Enhance the Digestibility
of Lignocellulose Biomass.Biores Technol8:10-18.
Ibrahim. 2007. Penelitian dan Penilaian Pendidikan. Bandung : SinarBaru
Algensindo.
Lin, Y.dan Tanaka,S. 2005. Ethanol Fermentation from Biomass Resoure: Current
State and Prospects.Appl Microbiol Biotechno, 69: 627-642
Lincai Peng, Yuancai Chen.2011.Conversion of paper sludge to ethanol by
separate hydrolysis and fermentation (SHF) using Saccharomyces
cerevisiae. State Key Laboratory of Pulp and Paper Engineering, South
China University of Technology, Guangzhou 510640, China.
Lynd LR, Weimer PJ, van Zyl WH and Pretorius IS. 2002. Microbial cellulose
utilization: fundamentals and biotechnology. Microbiol Mol Biol Rev. 66(3):
506-577.
66
Miller, G.L. 1959. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of
Reducing Sugar. Anal. Chem. 31(3): 426-428.
Murni, S.W., Kholisoh, S.D., Tanti, D.L., dan Petrissia, E.M., 2011, Produksi,
Karakterisasi, dan Isolasi Lipase dari Aspergillus niger, Prosiding Seminar
Nasional Teknik Kimia “Kejuangan”, ISSN 1693-4933, Program Studi
Teknik Kimia Fakultas Teknik Industri UPN “Veteran” Yogyakarta
Morris, M.dan Armada,H. 2006. Ethanol opportunities and questions. ATTRA.
Nityasa, dkk. 2006. Pemanfaatan Kulit Pisang Sebagai Bahan Baku Bioetanol
Berbasis Fermentasi. Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Surabaya.
Purwoko, Tjahjadi. 2007. Fisiologi Mikroba. Jakarta: Bumi Aksara
Poedjiadi, A. danTitin, S. 2006. Dasar-DasarBiokimia. Jakarta: Universitas
Indonesia.
Prados, M., Segui, L. dan Fito,P. 2010. Industrial Pineapple Waste as A Feasiable
Source to Produce Bioethanol. Universidad Politechnica De Valencia.
Riyanti, E.I. 2009. Biomassa Sebagai Bahan Baku Bioetanol. Balai Besar Penelitian
dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumber Daya GenetikPertanian Bogor.
Jurnal Litbang Pertanian, 28(3).
Reddy, H.K.Y., Srijana, M., Madhusudhan, R.D dan Gopal, R. 2010. Coculture
Fermentation of Bananaagro-Waste to Ethanol by Cellulolytic Thermophilic
Clostridiumthermocellum. African Journal of Biotechnology,Vol. 9,No. 13:
1926-1934.
Saha, B.C., Hemicellulose bioconversion. Journal of Industrial Microbiology and
Biotechnology, .2003. 30(5): p. 279-291.
Sahidin .2008. Penuntun Praktikum Kimia Organik I. Unhalu. Kendari.
Sari, I.M., Noverita dan Yulneriwarni .2010. Pemanfaatan Jerami Padi dan Alang-
Alang dalam Fermentasi Etanol Menggunakan Kapang.
Saratale, G.D., Saratale, R.G., Oh, S.E. 2012. “Production and Characterization Of
Multiple Cellulolytic Enzymes By Isolated Streptomyces sp”. MDS. Biomass
and Bioenergy.47: 302-315.
Sharma GP, Ouyang H, Wang Q, Luo Y, Shi B, Yang J, et al. Insight into enzymatic
degradation of corn, wheat, and soybean cell wall cellulose using quantitative
67
secretome analysis of Aspergillus fumigatus. J Proteome Res.
2016;15(12):4387–402.
Sukowati, Asih. .2014. Pembuatan Bioetanol Dari Kulit Pisang Melalui Hidrolisis
Asam Sulfat. Jurnal Teknologi dan Industri Hasil Pertanian Vol. 19, No. 3.
Universitas Lampung.
Sun, Y., dan Cheng, J., .2002. Hydrolysis of lignocellulosic materials for ethanol
production.a review. Bioresource Technology 83, 1 –1.
Suprihatin. 2010. Teknologi Fermentasi. UNESA Press. Surabaya.
Susmiati, Y. 2011. Detoksifikasi Hidrolisat Asam dari Ubi Kayu untuk Produksi
Bioetanol. Agrointek,5 (1): 9 -15.
Tanaka, T., Kondo, A., 2015. Cell-surface display of enzymes by the yeast
Saccharomyces cerevisiae for synthetic biology. FEMS Yeast Research 15, 1–
9.
Trichoderma viridedan khamir Saccharomycess cerevisiae. Fakultas Biologi
Universitas Nasional, Jakarta. Vis vitalis, Vol. 1, No. 2.
Trismilah dan Sumaryanto. 2005. Pengaruh Kadar Nitrogen dalam Media pada
Pembuatan Protease Menggunakan Bacillus Megaterium Dsm 319. Jurnal
Ilmu Kefarmasian Indonesia, Vol. 3, No. 1: 9-12.
Taherzadeh, M.J. and K, Karimi. 2008. Acid-Based Hydrolysis Processes for
Ethanol from Lignocellulosic Materials : A Review. Bio Resources 2 (3) :
472-499.
Wahab, W A, dan Nafie, L N., (2014), Metode Pemisahan dan Pengukuran 2
(Elektrometri dan Spektrofotometri), FMIPA UNHAS, Makasar
Walangare K. B. A. Dkk,. 2013. “Rancangan Bangunan Alat Konversi Air Laut
Menjadi Air Murni Dengan Proses Destilasi Sederhana Menggunakan
Pemanasan Elektrik”, Jurnal Teknik Elektro Dan Komputer.
Yanuar, Bobi. Apip Amrullah. 2015. Uji Eksperimental Kadar Bioetnaol Eceng
gondong Hasil Destilasi dengan Variasi Waktu Fermentasi. Proceeding
seminar nasional tahunan Teknik Mesin. Universitas Lambun Mangkurat.
Kalimantan Selatan.
68
Yuniwati M., Ismiyati D., Kurniasih R., .2011. Kinetika Reaksi Hidrolisis Pati
Pisang Tnduk dengan Katalisator Asam Chlorida. Jurnal Teknologi, Volume
4 No. 2 Halaman 107-112
69

Ilovepdf Merged

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Ilovepdf Merged

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN TUGAS AKHIR

PEMANFAATAN LIMBAH KULIT PISANG KEPOK

JURUSAN TEKNIK LINGKUNGAN

PEMANFAATAN LIMBAH KULIT PISANG KEPOK

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

JURUSAN TEKNIK LINGKUNGAN

Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

Dr. Astri Rinanti, MT Dr. Ir. Ratnaningsih, MT

Jakarta, Juli 2020

Tabel 2. 2 Analisa Komposisi Nutrisi Pada Kulit Pisang....................................... 4

Tabel 3. 1 Alat yang digunakan …………………………………………………20

Tabel 3. 2 Bahan yang digunakan ……………………………………………... 20

Tabel 3. 3 Variabel Penelitian ………………………………………………….. 21

Tabel 4. 1 Uji Aktivitas Enzim ………………………………………………… 29

Tabel 4.2 % Penyisihan Lignin ………………………………………………... 33

Tabel 4. 3 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Biokatalisator (A. fumigatus) …36

Tabel 4. 4 Konsentrasi Glukosa Menggunakan Katalisator Kimia (H2SO4) …… 37

Tabel 4. 5 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Biologi) ……….39

Tabel 4. 6 Konsentrasi Glukosa Proses Fermentasi (Hidrolisis Kimia) ……...…41

Tabel 4.7 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Tabel 4.8 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Tabel 4.9 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Tabel 4.10 Rekapitulasi Perhitungan Kinetika Fermentasi dengan Metode

Tabel 4. 11 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Tabel 4. 12 Perhitungan Persamaan Michaelis Menten pada Variasi Perbandingan

Tabel 4.13 Rekapitulasi Perhitungan Kinetika Fermentasi dengan Metode

Tabel 4. 14 Konsentrasi Bioethanol ……………………………………………. 49

Tabel 4. 16 Perhitungan Konsentrasi Ethanol dan Phenylethyl Alcohol ………. 52

Tabel 4. 17 Hasil GC-MS Rasio 1:1 Waktu Kontak 72 Jam …………………… 53

Tabel 4. 20 Hasil GC-MS Rasio 1:2 Waktu Kontak 72 Jam …………………... 54

Tabel 4. 23 Hasil GC-MS Rasio 2:1 Waktu Kontak 72 Jam …………………... 54

Gambar 2.2 Rangkaian Destilasi Sederhana........................................................ 14

Gambar 2.3 Kurva Pertumbuhan Fungi ............................................................... 15

Gambar 3. 1 Diagram Alir Penelitian .................................................................. 24

Gambar 4. 1 Kurva Pertumbuhan Fungi Aspergillus fumigatus ......................... 31

Gambar 4. 2 Kurva Pertumbuhan Ragi Saccharomyces cerevisiae..................... 32

Gambar 4.3 Efisiensi Penyisihan Lignin dengan Biokatalisator ......................... 34

Gambar 4.4 Efisiensi Penyisihan Lignin dengan Katalisator Kimia NaOH........ 35

Gambar 4.5 Hubungan Perbandingan Substrat:Biokatalisator Biologi terhadap

Gambar 4.6 Hubungan Perbandingan Biokatalisator Kimia (H2SO4) terhadap

Gambar 4. 7 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Mikrobiologi..40

Gambar 4. 8 Penurunan Glukosa (%) Pada Proses Fermentasi (Hidrolisis

Gambar 4. 9 Fermentasi Glukosa yang diperoleh dari Hidrolisis Kimia ........... 42

Gambar 4. 11 Hubungan antara 1/[S] dengan 1[V] pada Variasi Perbandingan

Gambar 4. 12 Hubungan antara 1/[S] dengan 1[V] pada Variasi Perbandingan

Gambar 4. 13 Hubungan antara 1/[S] dengan 1[V] pada Variasi Perbandingan

Gambar 4. 16 Grafik Kandungan Bioethanol ...................................................... 50

Gambar 4. 17 Konsentrasi Bioethanol Terhadap Pengaruh Waktu Kontak dan

Gambar 4. 18 Hasil Konsentrasi Ethanol pada Senyawa Phenylethyl Alcohol

Gambar 4. 19 Ilustrasi Pembuatan Ethanol ......................................................... 60

Gambar 4. 20 Ilustrasi Wadah ............................................................................. 61

1.1 Latar Belakang Masalah

2.1 Keberadaan Limbah Kulit Pisang Kepok

Sumber: anhwange, B.A. et al. EJEAFChe, 8 (6), 2009

Sumber: anhwange, B.A. et al. EJEAFChe, 8 (6), 2009

Gambar 2.2 Destilasi Sederhana (Wahab dan Nafie,2014)

2.5 Pertumbuhan Mikroorganisme

Gambar 2.3 Kurva Pertumbuhan Bakteri

2.7 Saccharomyces cerevisiae

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

No Alat Ukuran No Alat Ukuran

3.3 Variabel Penelelitian

Tabel 3. 3 Variabel Penelitian