8.3.

Hubungan struktur-aktivitas untuk aktivitas antibakteri flavonoid

Berbagai fungsi sel yang dipengaruhi oleh flavonoid dalam sistem eukariotik didokumentasikan dengan
baik [10,20]. Meskipun ada relatif sedikit studi ke dalam mekanisme yang mendasari aktivitas antibakteri
flavonoid, informasi dari literatur yang diterbitkan menunjukkan bahwa senyawa yang berbeda dalam
kelas phytochemical ini dapat menargetkan komponen dan fungsi yang berbeda dari sel bakteri [137-
139]. Jika ini masalahnya, maka mengejutkan bahwa sejumlah kecil kelompok yang telah menyelidiki
hubungan antara struktur flavonoid dan aktivitas antibakteri (dirangkum di bawah) telah mampu
mengidentifikasi fitur struktural umum di antara senyawa aktif. Namun, itu mungkin bahwa flavonoid
antibakteri individu memiliki beberapa target seluler, daripada satu tempat aksi spesifik. Atau, fitur
struktural umum ini mungkin hanya diperlukan untuk flavonoid untuk mendapatkan proksitas atau
penyerapan ke dalam sel bakteri.
Tsuchiya dan rekan berusaha untuk membangun hubungan struktur-aktivitas untuk flavanon dengan
mengisolasi sejumlah senyawa tersubstitusi berbeda dan menentukan MIC mereka terhadap MRSA [29].
Studi mereka menunjukkan bahwa 2× , 4× - atau 2× , 6× -dihydroxylation dari cincin B dan 5,7-
dihydroxylation dari cincin A dalam struktur flavanon penting untuk aktivitas anti-MRSA. Substitusi pada
posisi 6 atau 8 dengan grup alifatik rantai panjang seperti lavandulyl (5-metil-2- isopropenyl-hex-4-enyl)
atau geranyl (trans-3,7-dimethyl-2,6-octadienyl) juga ditingkatkan aktivitas [29]. Menariknya, laporan

terbaru oleh Stapleton dan rekan menunjukkan bahwa stitution sub dengan C 8 dan C10 rantai juga

meningkatkan aktivitas anti staphylococcal flavonoid milik flavan- kelas3-ol [94].

Osawa et al. menilai aktivitas sejumlah flavonoid yang berbeda secara struktural termasuk flavon,
flavanon, isoflavon, dan isoflavanon berdasarkan uji difusi agar disk kertas [115]. Terlihat bahwa 5-
hydroxyflavanones dan 5-hydroxyisoflavanones dengan satu, dua atau tiga gugus hidroksil tambahan
pada posisi 7, 2× dan 4× menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans dan Streptococcus sobrinus.
Hasil ini berkorelasi baik dengan orang-orang dari Tsuchiya dan kolega [29]. Juga dilaporkan oleh
Osawa dan rekannya bahwa 5-hydroxyflavones dan 5-hydroxyisoflavones dengan tambahan kelompok
hidroksil pada posisi 7 dan 4× tidak menunjukkan aktivitas penghambatan ini [115]. Namun, ketika Sato
et al. memeriksa dua isoflavon dengan gugus hidroksil pada posisi 5, 2× dan 4× menggunakan uji
pengenceran agar, aktivitas penghambatan intensif terdeteksi terhadap berbagai spesies streptokokus
[107]. Ini mungkin menunjukkan bahwa hidroksilasi pada posisi 2 × penting untuk aktivitas. Atau,
kurangnya aktivitas yang terdeteksi oleh Osawa et al. mungkin hanya karena difusi yang buruk dari
flavon dan isoflavon (dibandingkan dengan flavanon dan isoflavanon) melalui medium.
Makalah yang lebih baru [104] juga melaporkan pentingnya kelompok hidroksil pada posisi 5 flavanon
dan flavon untuk aktivitas melawan MRSA, mendukung temuan awal Tsuchiya et al. [29].Lebih lanjut
menyatakan bahwa chalcones lebih efektif terhadap MRSA daripada flavanon atau flavon, dan bahwa
gugus hidroksil pada2x posisipenting untuk aktivitas anti-stafilokokus senyawa ini. Grup metoksi dilaporkan
secara drastis mengurangi aktivitas antibakteri flavonoid [104]. Pentingnya hidroksilasi pada posisi 2×
untuk aktivitas antibakteri chalcones didukung oleh pekerjaan sebelumnya dari Sato dan rekan, yang
menemukan bahwa 2,4,2× -trihydroxy-5× -methylchalcone dan 2,4,2× - trihydroxychalcone dihambat
pertumbuhan 15 strain streptokokus kariogenik [140].
Seperti yang disebutkan sebelumnya, Ward dan rekannya mensintesis sejumlah turunan
terhalogenasi dari 3- methyleneflavanone [131]. Pergantian dari cincin B ditemukan untuk meningkatkan
aktivitas antibakteri, dengan 3× -chloro, 4× - kloro dan 4× -Bromo analog masing-masing menjadi sekitar
dua kali lebih efektif sebagai senyawa induk mereka terhadap S.aureus,dan empat kali lebih aktif
terhadap Enterococcus faecalis. Juga,2× , 4× turunan-dichloro menunjukkan peningkatan aktivitas empat
hingga delapan kali lipat terhadap S. aureus dan peningkatan dua hingga empat kali lipat terhadap E.
faecalis. Sebaliknya, 3-metilen-6-bromoflavanon kurang kuat daripada senyawa induk dan penulis
menyarankan bahwa halogenasi cincin A dapat mengurangi aktivitas [131]. Namun, yang jelas, perlu
mempersiapkan analog dengan substitusi pada posisi A-ring lain sebelum ini dapat dikatakan dengan
pasti. Pada chalcone, baik fluorinasi maupun klorinasi pada posisi 4 dari cincin B dilaporkan
mempengaruhi potensi antibakteri secara signifikan [104]. Namun, sekali lagi, analog struktural lain dari
kelas flavonoid ini perlu disintesis dan diperiksa sebelum efek halogenasi pada aktivitas antibakteri dapat
dinilai dengan tepat.

8.4. Sifat aktivitas flavonoid: bakteriostatik atau bakterisida?

Beberapa kelompok penelitian telah berusaha untuk menentukan apakah aktivitas flavonoid bersifat
bakteriostatik atau bakterisida dengan melakukan penelitian yang mematikan waktu. Dalam percobaan
seperti itu, epicococatechin gallate [89], galangin [75] dan 3-O-octanoyl- (+) - catechin [94] telah terbukti
menyebabkan pengurangan 1000 kali lipat atau lebih dalam jumlah yang layak dari MRSA- YK, S.
aureus NCTC 6571 dan EMRSA-16, masing-masing. Ini akan segera muncul untuk menunjukkan bahwa
flavonoid mampu melakukan aktivitas bakteri. Namun, baru-baru ini telah menunjukkan bahwa 3-O-
octanoyl - (-) - epicatechin menginduksi pembentukan agregat pseudomultiseluler baik dalam strainpeka
terhadap antibiotik dan resisten antibiotik. S. aureus yang [94]. Jika fenomena ini diinduksi oleh senyawa
lain dalam kelas flavonoid (dan penelitian liposomal menunjukkan bahwa ini adalah kasus untuk
epigallocatechin gallate [88]), pertanyaan muncul tentang interpretasi hasil dari studi time-kill. Mungkin
saja flavonoid tidak membunuh sel bakteri tetapi hanya menginduksi pembentukan agregat bakteri dan
dengan demikian mengurangi jumlah CFU dalam jumlah yang layak.

8.5. Mekanisme kerja antibakteri dari berbagai flavonoid

8.5.1. Penghambatan sintesis asam

nukleat
Dalam sebuah penelitian yang menggunakan prekursor radioaktif, Mori dan kolega menunjukkan
bahwa sintesis DNA sangat dihambat oleh flavonoid dalam Proteus vulgaris, sementara sintesis RNA
paling terpengaruh pada S. aureus [138]. Flavonoid yang menunjukkan aktivitas ini adalah robinetin,
myricetin, dan (-) - epigallocatechin. Sintesis protein dan lipid juga terpengaruh tetapi pada tingkat yang
lebih rendah. Para penulis menyarankan bahwa cincin B dari flavonoid dapat memainkan peran dalam
interkalasi atau ikatan hidrogen dengan penumpukan basa asam nukleat dan bahwa ini dapat
menjelaskan aksi penghambatan pada sintesis DNA dan RNA [138].
Ohemeng et al. menskrining 14 flavonoid dari berbagai struktur untuk aktivitas penghambatan terhadap
Escherichia coli DNA gyrase, dan untuk aktivitas antibakteri terhadap Staphylococus epidermidis, S.
aureus, E. coli, S. typhimurium dan Stenotrophomonas maltophilia [68]. Ditemukan bahwa E. coli DNA
girasedihambat sampai batas yang berbeda oleh tujuh senyawa, termasuk quercetin, apigenin dan
3,6,7,3× , 4× - pentahydroxyflavone. Menariknya, dengan pengecualian 7,8-dihydroxyflavone,
penghambatan enzim terbatas pada senyawa-senyawa dengan B-ring hydroxylation [68.141]. Para
penulis mengusulkan bahwa aktivitas antibakteri yang diamati dari tujuh flavonoid sebagian disebabkan
oleh penghambatan mereka terhadap DNA gyrase. Namun, karena tingkat aktivitas antibakteri dan
penghambatan enzim tidak selalu berkorelasi, mereka juga menyarankan bahwa mekanisme lain yang
terlibat [68].
Baru-baru ini, Plaper dan rekan melaporkan bahwa quercetin berikatan dengan subunit GyrB dari E.
coli DNA gyrase dan menghambat aktivitas ATPase enzim [142]. Ikatan enzim ditunjukkan dengan
 mengisolasi E. coli DNA girasedan mengukur fluoresensi kuersetin dengan adanya dan tidak adanya
subunit girase. Situs pengikatan flavonoid diduga tumpang tindih dengan ATP dan novobiocin, karena
penambahan senyawa ini mengganggu fluoresensi kuersetin. Penghambatan aktivitas ATPase GyrB
oleh quercetin juga ditunjukkan dalam uji ATPase yang digabungkan. Penelitian ini sesuai dengan
temuan awal Ohe-et al. [68] dan mendukung pendapat bahwa aktivitas antibakteri kuersetin terhadap E.
coli mungkin setidaknya sebagian disebabkan oleh penghambatan DNA girase.
Ketika menyaring produk alami untuk inhibitor topoisomerase tipe II, Bernard dan rekan kerja
menemukan bahwa flavonol rutin glikosil sangat efektif [143]. Senyawa ini menunjukkan aktivitas
antibakteri terhadappermeabel E. coli yang strain(strain yang mana envA1 aleltelah dimasukkan
[144.145]). Dengan menggunakan uji enzim dan teknik yang dikenal sebagai SOS chromotest,
ditunjukkan bahwa secara rutin dipromosikan E. coli selektifitas DNAtopoisomerase IV yang tergantung,
menghambat aktivitas deklarasi dependen topoisomerase IV dan menginduksi respons SOS E. coli.
regangan. Kelompok menyarankan bahwa karena topoisomerase IV sangat penting untuk kelangsungan
hidup sel, pembelahan DNA topoisomerase IV yang dimediasi secara rutin mengarah pada respon SOS
dan penghambatan pertumbuhan E. coli sel [143].
Dalam laboratorium kami sendiri,resisten 4-kuinolon S. aureus yang strainterbukti meningkatkan
kerentanan terhadap flavonol galangin dibandingkan dengan strain 4-quinolone-sensitive dan -resistant
lainnya [146]. Menariknya, strain ini memiliki substitusi asam amino yang berbeda (serin ke pro-line)
pada posisi 410 dari subunit GrlB. Ini mungkin menunjukkan bahwa topoisomerase IV dan enzim girase
yang relatif homolog terlibat dalam mekanisme kerja bakteriat dari galangin. Jelas, bagaimanapun,
penelitian lebih lanjut dengan strain mutan dan enzim yang dimurnikan akan diperlukan sebelum ini
dapat diverifikasi.

8.5.2. Penghambatan fungsi membran sitoplasmik

Sebuah tim peneliti yang sebelumnya menemukan sophoraflansonone G memiliki aktivitas antibakteri
intensif terhadap MRSA dan streptokokus [83-85] baru-baru ini melaporkan upaya untuk menjelaskan
mekanisme aksi flavanon ini [139]. Efek sophoraflavanone G pada fluiditas membran dipelajari
menggunakan membran model liposomal dan dibandingkan dengan flavanon naringenin yang kurang
aktif, yang tidak memiliki kelompok 8-lavandulyl dan 2× -hydroxyl. Pada konsentrasi yang sesuai dengan
nilai MIC, sophoraflavanone G terbukti meningkatkan polarisasi fluoresensi liposom secara signifikan.
Peningkatan ini menunjukkan perubahan fluiditas membran di daerah hidrofilik dan hidrofobik,
menunjukkan bahwa sophoraflavanone G mengurangi kelancaran lapisan luar dan dalam membran.
Naringenin juga menunjukkan efek membran tetapi pada konsentrasi yang jauh lebih tinggi. Korelasi
antara aktivitas antibakteri dan gangguan membran ini disarankan untuk mendukung teori bahwa
sophoraflavanone G menunjukkan aktivitas antibakteri dengan mengurangi fluiditas membran sel bakteri
[139].
Kelompok lain, Ikigai dan rekannya, melakukan penelitian pada (-) - epigallocatechin gallate, katridin
yang sangat antibakteri yang ditemukan dalam teh hijau. Catechin adalah kelompok flavonoid yang
tampaknya memiliki aktivitas lebih besar terhadap bakteri Gram-positif daripada bakteri Gram-negatif
[88]. Dalam penelitian ini, liposom sekali lagi digunakan sebagai model membran bakteri, dan
ditunjukkan bahwa epigallocatechin gallate menginduksi kebocoran molekul kecil dari ruang
intraliposomal. Agregasi juga dicatat pada liposom yang diobati dengan senyawa. Oleh karena itu,
kelompok ini menyimpulkan bahwa katekin terutama bekerja pada dan merusak membran bakteri. Tidak
diketahui bagaimana kerusakan ini terjadi tetapi dua teori diajukan. Pertama, katekin dapat mengganggu
lapisan ganda lipid dengan langsung menembusnya dan mengganggu fungsi sawar. Atau, katekin dapat
menyebabkan fusi membran, suatu proses yang mengakibatkan kebocoran bahan intramembran dan
penggumpalan. Menariknya, kelompok ini juga menunjukkan bahwa kebocoran yang disebabkan oleh
epigallocatechin gallate secara signifikan lebih rendah ketika membran liposom disiapkan mengandung
lipid yang bermuatan negatif. Oleh karena itu disarankan bahwa kerentanan katekin rendah dari bakteri
Gram-negatif mungkin

setidaknya sebagian disebabkan oleh keberadaan lipopolysacchat yang bertindak

sebagai penghalang [88].

Seperti disebutkan sebelumnya, Stapleton dan rekan menemukan bahwa substitusi dengan C 8 dan C10

rantai meningkatkan aktivitas terial antibac- yang dipilih flavan-3-ols (katekin). Kelompok ini melanjutkan
untuk menunjukkan bahwa sel-sel dari isolat klinis MRSA diobati dengan (-) - epicatechin gallate dan 3-
O-octanoyl - (+) - catechin, masing-masing, masing-masing menunjukkan tingkat sedang dan sangat
tinggi tingkat pelabelan dengan selektif permeabel fluorescent stain propidium iodide. Selain itu, ketika
S. aureus selditumbuhkan dengan adanya (-) - epicatechin gallate atau 3- O-octanoyl - (-) - epicatechin
dan diperiksa dengan mikroskop elektron transmisi, mereka ditunjukkan untuk membentuk agregat
seluler pseudomulti [ 94]. Pekerjaan ini merupakan kemajuan substansial dalam pengembangan katekin
sebagai agen antibakteri dan mendukung argumen Ikigai bahwa katekin bertindak dan merusak
membran bakteri.
Hal ini juga telah dibuktikan oleh Sato dan rekannya bahwa chalcone 2,4,2 × -trihydroxy-5×
-methylchalcone menginduksi kebocoran zat penyerap 260 nm dari S. mutans. Pengamatan ini
umumnya menunjukkan kebocoran bahan intraseluler seperti nukleotida, dan penulis menyarankan
bahwa 2,4,2× -trihidroksi-5× -methylchalcone mengerahkan efek antibakteri dengan mengubah
permeabilitas membran seluler dan merusak fungsi membran [140].
Selain itu, efek galangin pada integritas sitoplasma di S. aureus telah diselidiki dengan mengukur
kehilangan kalium internal [147]. Ketika kepadatan sel yang tinggi dari S. aureus diinkubasi selama 12
jam dalam media yang mengandung 50 g / mL flavonol, penurunan 60 kali lipat dalam jumlah CFU
dicatat dan sel-sel kehilangan ca. 20% lebih banyak potasium daripada bakteri kontrol yang tidak diobati.
Data ini sangat menyarankan bahwa galangin menginduksi kerusakan membran sitoplasma dan
kebocoran kalium. Apakah galangin merusak membran secara langsung, atau tidak langsung sebagai
akibat dari autolisis atau kerusakan dinding sel dan lisis osmotik, masih harus ditegakkan [147].
Dalam penyelidikan terhadap aksi antimikroba dari propolis, Mirzoeva dan rekannya menunjukkan
bahwa salah satu flavonoid konstituennya, quercetin, menyebabkan peningkatan permeabilitas
membran bakteri dalam dan disipasi potensial membran [148]. Gradien elektrokimia proton melintasi
membran sangat penting bagi bakteri untuk mempertahankan kapasitas sintesis ATP, transportasi
membran dan motilitas. Mirzoeva et al. menyarankan bahwa efek propolis pada permeabilitas membran
dan potensi membran dapat berkontribusi besar terhadap aktivitas antibakteri keseluruhan dan dapat
menurunkan resistensi sel terhadap agen antibakteri lainnya. Diperkirakan bahwa ini mungkin
menjelaskan efek sinergis yang terjadi antara propolis dan antibiotik lain seperti tetrasiklin [148] dan
ampisilin [149]. Kelompok ini juga menunjukkan bahwa flavonoid quercetin dan naringenin secara
signifikan menghambat motilitas bakteri, memberikan bukti lebih lanjut bahwa kekuatan motif proton
terganggu. Motilitas bakteri dan kemotaksis dianggap penting dalam virulensi karena mereka
membimbing bakteri ke situs kepatuhan

dan invasi. Mirzoeva et al. menyarankan bahwa tindakan antimotilitas komponen propolis mungkin
memiliki peran penting dalam penghambatan patogenesis bakteri dan pengembangan infeksi [148].
Aktifitas membran sitoplasma yang terdeteksi untuk quercetin oleh Mirzoeva dan rekan kerja dapat
mewakili salah satu mekanisme tambahan aksi antibakteri yang diduga ada di antara tujuh senyawa
flavonoid penghambat girase penghambat DNA yang diuji oleh Ohemeng dan rekan [68].

8.5.3. Penghambatan metabolisme

energi
Haraguchi dan rekannya baru-baru ini melakukan penyelidikan ke dalam mode aksi antibakteri dari
dua retrochalcone (licochalcone A dan C) dari akar Glycyrrhiza inflata [137]. Flavonoid ini menunjukkan
aktivitas penghambatan terhadap S. aureus dan Micrococcus luteus tetapi tidak terhadap E. coli, dan
dalam tes awal licochalcone A menghambat penggabungan prekursor radioaktif ke dalam makromolekul
(DNA, RNA dan protein). Kelompok tersebut berhipotesis bahwa licochalcones mungkin mengganggu
metabolisme energi dengan cara yang mirip dengan antibiotik penghambat pernapasan, karena energi
diperlukan untuk penyerapan aktif berbagai metabolit dan untuk biosintesis makromolekul [137].
Menariknya, licochalcones ditemukan menghambat konsumsi oksigen yang kuat pada M. luteus dan S.
aureus tetapi tidak pada E. coli, yang berkorelasi baik dengan spektrum aktivitas antibakteri yang
diamati. Kelompok ini lebih lanjut menunjukkan bahwa licochalcone A dan C secara efektif
menghambatNADH-sitokrom c reduksi, tetapi bukan sitokrom c oksidase atau reduktase NADH-CoQ.
Oleh karena itu disarankan bahwa situs penghambatan retrochalcones ini adalah antara CoQ dan
cytochrome c dalam rantai transpor elektron pernapasan bakteri [137].
Laboratorium Penelitian Merck baru-baru ini melaporkan bahwa flavanon lonchocarpol A menghambat
sintesis makromolekul dalam Bacillus megaterium. Menggunakan prekursor radioaktif, itu menunjukkan
bahwa RNA, DNA, dinding sel dan sintesis protein semua dihambat pada konsentrasi yang sama
dengan nilai MIC [150]. Ini mungkin mewakili contoh lain dari flavonoid yang mengganggu metabolisme
energi.

9. Keterangan Penutup

Berkenaan dengan produk alami, secara umum diterima bahwa phytochemical kurang kuat sebagai
anti infeksi daripada agen yang berasal dari mikroba, yaitu antibiotik [48]. Namun, kelas baru obat
antimikroba sangat dibutuhkan dan flavonoid mewakili satu set timah baru. Optimalisasi masa depan dari
senyawa-senyawa ini melalui perubahan struktural dapat memungkinkan pengembangan agen
antimikroba yang dapat diterima secara farmakologis atau kelompok agen. Data struktur-aktivitas yang
ada menunjukkan bahwa mungkin saja, misalnya, untuk menyiapkan flavanon antibakteri yang kuat
dengan mensintesis senyawa dengan halogenasi cincin B serta substitusi lavandulyl atau ger- anyl dari
cincin A. Juga, perlu dicatat bahwa kemajuan pesat yang sedang dibuat menuju penjelasan
jalur biosintesis flavonoid [151] segera dapat memungkinkan produksi analog struktural dari flavonoid
aktif melalui manipulasi genetik. Penapisan analog-analog ini dapat mengarah pada identifikasi senyawa
yang cukup kuat untuk berguna sebagai kemoterapi antijamur, antivirus, atau antibakteri. Selain
perubahan struktural flavonoid antimikroba yang lemah dan cukup aktif, investigasi ke dalam mekanisme
aksi senyawa ini cenderung menjadi area penelitian yang produktif. Informasi tersebut dapat membantu
dalam optimalisasi aktivitas senyawa timbal, memberikan fokus perhatian toksikologis dan bantuan
dalam mengantisipasi resistensi. Juga, karakterisasi interaksi antara flavonoid antimikroba dan situs
target mereka berpotensi memungkinkan desain inhibitor generasi kedua.

Ucapan Terima
Kasih

Penulis sangat berterima kasih kepada Dr Paul Kong dan Dr Satyajit Sarker karena mengkritik
rancangan awal naskah dan untuk saran tentang klasifikasi dan struktur flavonoid. Terima kasih
disampaikan kepada Dr. Peter Taylor untuk komentar mendalam tentang interpretasi data dari penelitian
yang membunuh waktu dengan flavonoid. Terima kasih juga kepada Dr Derek Chapman, Miss Vivienne
Hamilton, Dr Bruce Thomson dan Mrs Amina Al-Mossawi atas dukungan dan dorongan mereka yang
baik.