kultus untuk dicapai dengan metode biasa

(mis. Ekstrak daun kasar adalah fraktasi

satu titik di TLC). Baru-baru ini, a
kromatografi cair kinerja tinggi
(HPLC) studi Bupleuri Radix (Bu-
pleurum falcatum) telah dilaporkan
[26]. Saikosaponin asli
ada hubungan sekutu loksida yang tidak
p
stabil diubah menjadi diena-saponin buatan
dengan pengobatan asam ringan dan
dipisahkan
dengan kromatografi fase terbalik pada a
kolom gel silika bersililasi oktadekilsililasi
dengan MeOH
- H, O - AcOH - (Et), K
(75: 25: 0,2: 0,2). Pemisahan file
stereoisomer diperoleh DCCC itu
sebanding, bahkan lebih baik, dari yang satu
itu diperoleh dengan HPLC. Tapi untuk
kuantitatif
analisis, HPLC, tentu saja, jauh
metode yang lebih cepat.
pertama.
dilapisi oleh kromatografi kolom gel silika
phy menjadi biosida dan triosida. Frac-
yang mengandung biosida telah ditaklukkan.
ted ke DCCC menggunakan CHCI, -MeOH-
H, O (5: 10: 6) dengan metode menaik
dan memberikan senyawa
I dan 2. The
lebih banyak triosida kutub
3 dan 4 terpisah
ted dengan CHCI, -MeOH-H, O (5: 9: 7,
sebagai-
cending)

Dengan kromatografi kolom berulang

dan DCCC, ICHII dkk.
[27], diisolasi sepuluh
saponin tipe oleanene berkerabat dekat
dari akar Platycodon grhdij7or-
pasu. Sistem pelarut terbentuk dari CHC1, -
MeOH-H, O diindikasikan dengan baik
untuk
pemisahan berbagai jenis saponin
n
Pemurnian digironin dicapai-
dan bisa digunakan baik di ascending
ved oleh
mode (saponin sangat polar) atau di des-
T.AXI \ ICHA dkk. [I91 dengan CHCI, -
mode cending (saponin memiliki satu
1MeOH-H, O (5: 6: 4) di naik
atau dua gula dan sedikit hidroksil bebas
mode.
kelompok). Kami menggunakan yang relatif
lemah
glikosida lridoid dan secoiridoid
sistem kutub CHCI, -MeOH-H, O
Kami menerapkan DCCC untuk isolasi
(65:35:20) dalam mode turun untuk glikosida iridoid dari Ajnga pyramidalis
isolasi rriterpen seperti ole- (Labiatae) [I2]. Ekstrak butanol mentah
asam anolic dari spesies Gentiana [28]. (1,4 g) difraksinasi dengan
a
CHCI, -MeOH-H, O (43:37:20) oleh
Glikosida jantung metode naik. Ini menghasilkan tiga
Cardenolides terkait secara struktural pecahan utama (Gbr.
untuk saponin, pelarut yang disebutkan di 5). Fraksi yang dielusi dengan bagian depan
atas pelarut (680 mg) adalah a
sistem dapat digunakan. Selama kursus campuran
investigasi ulang glikosi jantung- dari konstituen paling kutub,
des dari Nerium oleander (Apocynaceae), sedangkan pecahan
AUI dan YAMAUI HI [29] mengisolasi gly- 1 (1 14 mg) dan 2 (508
cosides dengan kerangka yang tidak biasa.

mg) menunjukkan bercak tunggal pada
KLT. Itu senyawa murni entifikasi
diid agai
melalui studi spektroskopi seb
p
harpagidc dan 8-0-asetat Iharpagide,
masing-masing. Seluruh proses isolasi
hanya membutuhkan sekitar Sh dan jumlah
total pelarut yang digunakan untuk elusi
kurang dari 150 ml. Dari alat tulis yang
tersisa tahap,94 mg campuran konstituen
minor dapat diperoleh kembali.
Gentiopicrin, salah satu prinsip pahit
Gentlanu, dan secoiridoid terkait
glikosida juga telah diisolasi oleh DCCC
[12]. konsumsi pelarut untuk pemisahan
dengan HPLC preparatif pada skala yang
sama jauh lebih tinggi. HPCL sangat
cepat, tetapi membutuhkan pemurnian
sampel yang membosankan sebelum
injeksi untuk menghindari kontaminasi
kolom [30]
Dari spesies Casrilleja
(Scrophulariaceae) yang dikumpulkan di
Colorado, kami diperoleh setelah
kromatografi kolom pada Sephadex LH-20
sebuah fraksi yang mengandung
konstituen iridoid minor. Pecahan ini,
ketika diserahkan ke DCCC, memberikan
empat glikosida yang hampir murni.
Pemurnian akhir dicapai dengan HPLC
semipreparatif pada suatu C ,, silika gel
yang terikat secara kimiawi dengan
MeOH-H, O. Studi sptektroskopi pada
u
senyawa murni menunj kkan itu mereka
terkait erat dengan loganin dan
dihidrokornin. Penentuan struktur saat ini
sedang diselidiki dan
akan segera diterbitkan.
Campuran CHCI, -MeOH-H, O
ditemukan menjadi ideal untuk pemisahan
kelas glikosida ini. Untuk ester glikosida
iridoid, diinginkan untuk menggunakan
lapisan bawah yang kurang polar sebagai
fase gerak.
Diterpenoid
Hanya satu contoh pemisahan
senyawa polar lemah oleh DCCC telah
Dilaporkan hingga saat ini, yaitu isolasi
sitotoksik norditerpenoid dilakton dari
Podocarpus nagi [31]. Senyaw a
I dan 2 keduanya menunjukkan sangat
mirip perilaku kromatografi dan bisa
tidak dipisahkan oleh KLT ataua HPLC.
Hanya teknik gabungan kromatagrafi
adsorpsi dengan DCCC yang memberikan
apemisahan yang memuaskan dari
1 dan 2. The sistem pelarut yang
digunakan adalah CHC1, -MeOH- H, O
(7: 13: 8) dalam mode turun.
Polifenol (flavonoid, xanthone, katekin,
antrakuinon,
chromenes, lignan)
Gugus hidroksil asam dalam polifenol
sering menyebabkan adsorpsi ireversibel
pada fase sationer padat selam a
prosedur kromatografi kolom.
Hal ini dapat dihindari dengan
menambahkan asam ke fase gerak dan
berguna untuk pekerjaan analitis. Namun
saat mengembangkan pemisahan skala
preparatif, penggunaan asam sebagai salah
satu komponennya fase gerak tidak selalu
ditunjukkan. Risiko kerusakan sampel,
mis. hidrolisis glikosida, meningkat
selama operasi yang lama dan pemulihan
jumlah sampel dari yang relatif besar
volume eluen.
Campuran CHC1, -MeOH-H, O dalam
proporsi berbeda telah digunakan untuk
pemisahan berbagai kelas polifenol
glikosida oleh DCCC. Untuk flavonoid
dan senyawa terkait yang mengandung
sedikit gugus hidroksil dan satu gula atau
aglikon yang memiliki beberapa hidroksil
bebas kelompok, pemisahan dapat dicapai
dengan menggunakan lapisan bawah yang
kurang polar sebagai fas e gerak (mode
turun), sedangkan lapisan yang lebih kutub
cocok untuk lebih banyak monosakarida
kutub atau disakarida.
Misalnya, dari pecahan kasar
Tecoma stuns (Bignoniaceae), kami werc
mampu mengisolasi dalam 6 jam glikosida
murni diidentifikasi sebagai quercetin-3-0-
glukosidr menggunakan lapisan atas
CHCI, -MeOH- H, O (7: 13: 8) sebagai
fase gerak[I I]. [:atau
pemisahan glikosida flavon sangat polar,
kami menggunakan n-BuOH-AcOH-H1O
(4: 1: 5), tetapi waktu pemisahannya lama.
karena viskositas tinggi pelarut ini
sistem [I I]. DCCC juga telah diterapkan-
berbohong pada isolasi flavon-c-glikosida
dari berbagai sumber tanaman (Tabel II).
Perpisahan yang luar biasa baru-baru ini
dilaporkan oleh
T. \>, \ ~ A et al. [35].
Mereka mengisolasi 3 "-0-aceryl-quercitrin
(SAYA)
dan 4 "-0-asetil-quercitrin (2) dari
bagian udara dari
Pteris grandifolia (Pteridaceae)
menggunakan CHC1, -MeOH-HIO (4: 4:
3)
dalam mode menaik (fase seluler:
lapisan atas).
Pemisahan garis dasar I dan 2 diperoleh.
Pemisahan flavonoid asilnter isonlerik

glikosida biasanya sangat sulit
capai, bahkan dengan HPLC. Jadi, DCCC
membuka kemungkinan baru dan akan
menjadi sangat membantu di masa depan
untuk semua ahli kimia tertarik pada
flavonoid.
r
Struktur xanthone saling berhubungan
dengan flavonoid dan perilaku u
kromatografinya serupa. Ada di
menunjukkan minat yang besar pada
senyawa ini sejak SUZUKI dkk. [36]
mendemonstrasikan itu xanthone diisolasi
dari GENTIANA menghambat
mitokondria otak tikus1 monoamine
oxidase (MAO) in vitro. Sehubungan
dengan investigasi sistematis kami pada
xanthone dari GENTIANA, kami
mempelajari beberapa Spesies Norrh-
Amerika. Minyak mentah ekstrak
kloroform (200 mg) dari Gentiana
strictiflora telah dikirim ke DCCC dengan
CHCI, -MeOH-H, O (65:35:20, descen-
mode ding)
[12]. Tiga pecahan
diperoleh (Gbr. 6). Konstitu-
ents (pigmen warna, asam lemak, triter-
penes) tidak dipisahkan di bawah pilihan
kondisi sen dan dielusi dengan
pelarut depan, sedangkan pecahan
1 (29 mg) Dan 2 (10 mg) menunjukkan
bercak tunggal
T1.C. Studi spektroskopi murni
senyawa menyebabkan struktur bellidifolin
dan desmethyl-bellidifolin, masing-
masing. Aglikon xanton ini jauh lebih
mudah dipisahkan daripada kromatografi
kolom dan dengan konsumsi pelarut yang
lebih kecil (jumlah total ponsel yang
digunakan 160 ml)
Sistem pelarut yang disebutkan di atas
adalah diindikasikan untuk pemisahan
lainnya jenis fenolat non glikosidik. Kita
digunakan untuk isolasi merah
pigmen warna dari ekstrak kasar
Hypericum perforaturn (umum St. John's
wort) [37]. Keduanya, menaik dan
mode turun, dilengkapi hypericin
dan pseudohypericin
[38] dalam bentuk murni.
Di antara polifenol lain berhasil
dipisahkan oleh
DCCC, kami harus menyebutkan isolasi
katekin yang tidak stabil
glikosida dari
Dalbergiu nitidula (Leguminosae)
[I I], pemisahan sennosides
(glikosida bisanthrone) dari rhubarb [19, larva kupu-kupu kuning Eurema hecabe
201, pemurnian lucidin primeveroside dari mandarin. Mereka terisolasi dari
kultur sel dari Galium mollugo daun dari Lespedeza cuneata dua aktif
[38] dan isolasi lignan [40] dan kromen senyawa yang diidentifikasi sebagai myo-
[32, 411 dari berbagai spesies Pteridaceae. inositol dan D-pinitol.
Semua pemisahan ini dapat dicapai dengan
menggunakan CHCI, -MeOH-H20 atau
CHCIl-MeOH- n-PrOH-H: O sebagai
sistem pelarut.

Karbohidrat dan Siklitol

Pemisahan yang memuaskan secara
alami terjadi monosakarida (arabinose,
xilosa, galaktosa, glukosa, fukosa dan
rhamnose) diperoleh oleh OGIHARA et
Sebuah]. [20] dengan CHCI, -MeOH-H, O
(7:13: 8) dalam mode naik. Itu
jumlah
dari pelat teoritis diperoleh di Fraksi kasar (1,549 g) telah dimasukkan
pemisahan ini adalah 1200. Sebagai bagian ke DCCC dengan CHC13-MeOH-H2O
dari bekerja untuk mengisolasi zat aktif
biologis serangga dari tanaman,
NUMATA et Al.
[34] mempelajari stimulan makan untuk
(50:57:30; mode turun) dan membeli D-
pinitol pertama (1,287 g) dan kemudian
myo-inositol (0,212 g).
Alkaloid
Coclaurin alkaloid benzylisoquinoline
diisolasi dari kulit akar
Zizyphus jujuba dengan CHCI, -MeOH-
Sistem H, O [42]. Kami menggunakan
pelarut ini sistem untuk pemisahan utama
alkaloid opium (Papaver somniferum)
[43]. Karena ekstrak terdiri dari
komponen-komponen dengan berbagai
macam polaritas, maka pemisahan harus
dicapai menjadi dua Langkah. Proses
pertama dengan lapisan atas yang lebih
polar sebagai fase gerak yang diberikan
morfin mentah, campuran narceine
dan kodein dan tebain murni. Setelah elusi
bain, fase diam yang tersisa, terdiri dari
yang kurang polar alkaloid
benzylisoquinoline ditemukan. Lari kedua
dengan lebih sedikit kutub lapisan bawah
mengakibatkan pemisahan narkotin dan
pnpaverine. Dua langkah pemisahan telah
dihindari oleh TANI et Al. [44, 45, 461
yang memodifikasi pH fase gerak selama
elusi. Dengan metode ini mereka
memperoleh barang resolusi alkaloid yang
sangat kompleks campuran dari tanaman
Papaveraceous. Untuk Misalnya, dari
Corydalis ophiocarpa, dua alkaloid
protoberberine baru diisolasi bersama
dengan alkaloid yang diketahui [46].
Hingga 5 g sampel telah diserahkan
untuk DCCC dengan CHCI, -MeOH-H, O
(50:55:30; solusi buffer McIlvain,
pH7) dengan metode menaik. Dalam
proses elusi, ponsel berair fase diganti
pertama oleh lapisan atas CHCI, -MeOH-
H, O (50:55:30; Larutan buffer McIlbain,
pH3) dan terakhir oleh lapisan atas CHCI,
-Me- OH-5 % HCI (50:55:30),
menghasilkan file pemisahan yang cepat
dan baik dari banyak orang
alkaloid.
Dalam perjalanan studi biosintika
alkaloid dari Cephaelis ipecacuanha
(Rubiaceae), NAGAKURA dkk. [47]
digunakan DCCC untuk pemurnian
ipecosidc dengan CHCI, -MeOH-n-PrOH-
Ha (45: 60: 2: 40) dalam mode menaik.
Aplikasi dalam Biokimia
Pemisahan pertama dilaporkan oleh di-
ventors dari DCCC, TANIMURA dkk. [1],
adalah resolusi tinggi dinitrofenil (DNP)
asam amino. Sistem pelarut adalah CHCI,
-AcOH-O.1N HCI (2: 2: 1)digunakan
dalam mode menaik. DCCC juga
diindikasikan untuk pemurnian peptida.
OKAMOTO dkk. [48] gramicidin mentah
difraksionasi menjadi gramicidin murni
A, B dan C dan tirosidin yang dimurnikan
sebagian menjadi tirosidin murni A, Band
C dengan C6 H6, - CHCI3 - MeOH-O.IN
HCI (11: 5: 10: 4), C6H6-CHCI3-MeOH-
H2O (15:15: 23: 7) atau CHCl3-MeOH-
0.1N HCI (19:19:12). Lapisan bawahnya
digunakan sebagai fase bergerak (mode
menurun) dengan laju alir 12-15 ml / jam.
NAKAYAMA dkk. [49] memperoleh
angiotensin unggas murni dari peptida
yang dimurnikan sebagian. Kallidin,
bradikinin dan angiotensin dipisahkan
dengan sec-BuOH-trifluoroacetic
asam-H, O (120: 1: 160), fase gerak: lo-
wer lapisan [19]. Campuran tiga serupa
peptida dipisahkan oleh Takahashi et
Al. [50] dengan n-BuOH-AcOH-H, O (4:
1: 5). Tampak dari pekerjaan mereka itu
DCCC bisa menjadi metode yang cocok
untuk pemisahan oligopeptida sintetis.
Fraksinasi lipid serum manusia telah
dilaporkan oleh Konobu et al. [51].
Dengan heptana-n-BuOH-CHCII-MeOH-
AcOH
60% (3: 2: 2: 3: 5), se- garis dasar
parasi triolein, asam palmitat, kaprat
asam dan lesitin dicapai dengan metode
menaik. Selama studi tentang metabolit
dari Anthocidaris crassispina.dll
(bulu babi), KITAGAWA et al.
[52] mengisolasi sulfonoglikolipid dari
shell dengan menggunakan DCCC dalam
kombinasi dengan kromatografi kolom
pada silika gel.
Keuntungan dan Batasan Metode
DCCC terbukti efisien
dan teknik yang dapat direproduksi untuk
pemurnian dan pemisahan produk alami.
Kuantitas mulai dari sekitar
1 mg hingga 4 g dapat dengan mudah
ditangani. Sejak
tidak ada dukungan solid yang mungkin
menyebabkan adsorpsi ireversibel, sampel
dipulihkan secara kuantitatif. Ini dari
perhatian khusus saat mengisolasi senyawa
aktif biologis karena aktivitasnya sering
hilang selama kromatografi kolom
memakan waktu
proses. Berbeda dengan cara konvensional
metode counter-current distribution
(CCD), tidak ada getaran yang terlibat dan
karenanya,
tidak ada pembentukan busa; selanjutnya,
karena tidak ada ruang untuk oksigen
atmosfer di dalam peralatan, oksidasi
udara dari senyawa sensitif dapat
dihindari. Ekstrak tumbuhan mentah bisa
disuntikkan
tanpa pemurnian awal. Ini
akan menyebabkan kontaminasi kolom
jika pemisahan dicapai dengan preparatif
HPLC. Perlu dicatat bahwa pelarut
konsumsi jauh lebih kecil dibandingkan
dengan teknik kromatografi lainnya seperti
sebagai CCD, preparacive
HPLC atau kromatografi kolom terbuka.
Resolusi adalah
dapat dengan mudah diperoleh, tergantung
jumlah kolom yang digunakan.
Karena sistem pelarut tertentu. Bisa
digunakan baik di ascending atau in
mode menurun, digabungkan dengan a
berbagai macam polaritas dapat
dipisahkan. Dengan larutan buffer,
modifikasi file pH selama elusi
dimungkinkan
[45, 461. Air menjadi komponen dari
sistem pelarut yang digunakan sampai
sekarang, DCCC telah diterapkan terutama
pada glikosida dan senyawa polar lainnya.
Sebuah contoh pemisahan dilakton
diterpen polar lemah telah dilaporkan
[31]. Kami sedang berusaha untuk
menemukan sistem pelarut tanpa air yang
membentuk tetesan yang sesuai. Sejauh
ini, pelarut sistem yang cocok untuk
berbagai jenis pemisahan terbentuk dari
CHCI3-Me- OH-H2O dalam proporsi
berbeda (Tabel 1). Daftar beberapa pelarut
lain untuk DCCC telah diterbitkan oleh
OGIHARA et Al. [20]. Sistem yang
mengandung butanol adalah
bekerja, tetapi waktu pemisahan
meningkat karena viskositas tinggi ini
pelarut.
Pengoperasian instrumen DCCC
sederhana dan membutuhkan sedikit
pelatihan. Saat pemisahan selesai,
bersihkan dibuat dengan menyiram semua
tubing dengan fase diam untuk analisis
selanjutnya. Namun, kami mengamati itu
setelah beberapa kali
bulan, dengan menggunakan sistem pelarut
serupa, pembentukan tetesan menjadi
miskin. Itu perlu untuk membilas tabung
dengan deterjen yang sesuai. Itu
tekanan operasi dan laju aliran tergantung
pada sistem pelarut dan sekitar
5-15 kg / cm2 dan 8-25 ml / jam, masing-
masing. Dengan demikian, waktu
pemisahannya relatif
panjang. Operasi, termasuk pengisian
t
i
d
a
k
s r
e i
b t
a i
n s
d
i
n
g

d
e
n
g
a
n

H
P
L
C
,

b
a
g
a
i
m
a
n
a
p
u
n

1
0
0
0
-
1
5
0
0

p
e
l
a
t

t
e
o
instrumen dengan fase diam, untuk pemisahan skala preparatif dari
membutuhkan setidaknya 12-18 jam kutub alami produk.
tergantung jumlah kolom yang digunakan.
Bisa berlangsung selama beberapa hari, M
tetapi tidak boleh lebih dari satu minggu. e
Sistem pelarut yang berikan pemisahan s
yang relatif cepat seharusnya dipilih untuk k
meminimalkan risiko kerusakan sampel. i
Saat sampel berisi Senyawa aktif UV, p
deteksi aliran kontinu dapat dengan mudah u
dilakukan oleh detektor yang sesuai. n
Penggunaan detektor indeks bias tidak
diindikasikan karena terkadang sejumlah D
kecil alat tulis fase juga dielusi, C
menghasilkan garis dasar yang tidak stabil. C
Selama pemisahan saponin dan iridoid C
kami, fraksi yang diperoleh dipantau
TLC, prosedur yang umum digunakan s
untuk analisis kromatografi kolom. e
d
e
r
h
a
n
a

d
a
n

m
e
m
i
s
a
h
k
a
n

b
e
r
b
a
g
a
i

j
e
n
i b
s a
i
s k
e ,
n
y s
a a
w y
a a

d m
a e
l m
a i
m l
i
s k
k i
a
l k
a e
t
p e
r r
e b
p a
a t
r a
a s
t a
i n
f
y
d a
e n
n g
g
a t
n i
m
r b
e u
s l
o
l d
u a
s r
i i

y f
a a
n k
g t
a
 F
b r
a o
h
w e
a t

e a
f l
i .
s
i [
e 5
n ,
s
i 6
,
m
e 7
t ,
o 5
d 3
e ]

t m
e e
r r
g a
a n
n c
t a
u n
n g
g
s
s i
e s
l t
u e
r m
u
h b
n a
y r
a u

p h
a a
d n
a y
a
p
e b
m e
b r
d j
a a
s d
a i
r
k c
a e
n n
t
p r
a i
r f
t u
i g
s e
i
p
c l
a a
i n
r e
- t
c
a k
i u
r m
. p
a
M r
u a
n n
c [
u 5
l 3
,
t
e 5
k 4
n ]
i
k y
a
t n
a g
m
p m
a e
k r
n u
y p
a a
k
m a
e n
n
m e
e l
t i
o k
d s
e
v
k e
r r
o t
m i
a k
t a
o l
g
r y
a a
f n
i g

c p
o a
u n
n j
t a
e n
r g
-
c t
u a
r b
r u
e n
n g
t
m
m a
e s
n u
g k
g b
u i
n d
a a
k n
a g
n
s
k e
o n
l t
o r
m i
f
h u
g
a b
l e
. b
e
D r
e a
n p
g a
a
n b
e
d r
e j
m a
i m
k -
i j
a a
n m
, ,

w r
a e
k s
t o
u l
u
p s
e i
m n
i y
s a
a
h t
a i
n n
g
d g
i i
k ,
u
r t
a e
n t
g a
i p
i
m
e i
n n
j s
a t
d r
i u
m a
e a
n n
t n
a y
s a
i
n d
y a
a n

l p
e e
b n
i g
h o
p
r e
u r
m a
i s
t i
. a
n
D n
C y
C a
C b yang ahan
ekonomis
m (tidak
e mahal
n p
g e
g n
o g
d k e
a p
a
d k
e a
n n
g
a k
n o
l
k o
e m
s
e d
d a
e n
r
h s
a a
n n
g n
a
t m
e
k t
e o
c d
i e
l
k
k r
o o
n m
s a
u t
m o
s g
i r
a
p f
e i
l
a b
r i
u a
t s
) a
. ,

I t
t a
u p
i
t
i s
d a
a l
k i
n
a g
k
a m
n e
l
m e
e n
n g
g k
g a
a p
n i
t .
i
k D
a i
g
u k
n o
a l
k o
a m
n
d
s a
e n
n
d H
i P
r L
i C
,
a
t i
a n
u i

d s
i a
k n
o g
m a
b t
i
n m
a e
s m
i b
k a
a n
n t
u
d
e
n
g
a
n

k
r
o
m
a
t
o
g
r
a
f
i