20181189-S33175-Yuli Daswiyah

UNIVERSITAS INDONESIA
PENGARUH METODE STERILISASI TERHADAP

STABILITAS VITAMIN C DALAM SEDIAAN INJEKSI
SKRIPSI
YULI DASWIYAH
0706197830
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

PROGRAM STUDI FARMASI
DEPOK
JANUARI 2011
Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

UNIVERSITAS INDONESIA
PENGARUH METODE STERILISASI TERHADAP

STABILITAS VITAMIN C DALAM SEDIAAN INJEKSI
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi
YULI DASWIYAH
0706197830
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

PROGRAM STUDI FARMASI
DEPOK
JANUARI 2011
ii



KATA PENGANTAR
Syukur Alhamdulillah, penulis panjatkan kepada Allah subhanallahu ta’ala,

atas rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.
Saya menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari
masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sulit bagi saya untuk
menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, saya mengucapkan terima kasih
kepada:
1. Ibu Prof.Dr. Yahdiana Harahap, MS selaku Ketua Departemen Farmasi
FMIPA UI.
2. Bapak Dr. Abdul Mun'im selaku Ketua Program Ekstensi dan Pembimbing
Akademis Farmasi FMIPA UI.
3. Bapak Sutriyo MSi dan Ibu Pharm. Dr Joshita Djajadisastra MS, PhD
selaku pembimbing yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan
selama penelitian berlangsung sampai tersusunnya skripsi ini.
4. Bapak Drs. Hayun MSi yang telah memberikan nasihat dan bimbingan.
5. Seluruh staf pengajar Departemen Farmasi FMIPA UI atas segala ilmu
pengetahuan yang diberikan selama ini.
6. Seluruh staf karyawan serta laboran yang telah membantu selama
menempuh pendidikan di Departemen Farmasi FMIPA UI.
7. Ibu, Bapak, Mba Retno, Mba Enggar dan Adikku Dani, atas kasih sayang
serta doa.
8. Teman-teman Ekstensi Farmasi angkatan 2007.
Penulis menyadari dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini
masih jauh dari sempurna. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi
semua pihak yang membutuhkan.
Penulis
2010
v

iv

ABSTRAK
Nama : Yuli Daswiyah

Program Studi : Ekstensi Farmasi
Judul : Pengaruh Metode Sterilisasi terhadap Stabilitas Vitamin C dalam
Sediaan Injeksi
Dalam bentuk larutan vitamin C tidak stabil karena mudah teroksidasi. Adanya
perubahan tersebut akan menyebabkan kerusakan pada sediaan obat dan
perubahan jumlah vitamin C yang terkandung. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui pengaruh metode sterilisasi terhadap stabilitas vitamin C dalam
sediaan injeksi. Metode sterilisasi yang digunakan yaitu filtrasi dan pamanasan
pada suhu 98 – 100°C selama 30 menit, otoklaf pada suhu 115 – 116°C selama
30 menit dan otoklaf pada suhu 120 – 121°C selama 15 menit. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa stabilitas vitamin C dalam sediaan injeksi lebih baik pada
sediaan yang dibuat dengan metode sterilisasi secara filtrasi dengan kadar vitamin
C sebesar 84,37 + 0,27% dibandingkan metode sterilisasi secara pemanasan suhu
98 – 100°C selama 30 menit sebesar 82,01 + 0,40% , dalam otoklaf suhu 115 –
116°C selama 30 menit sebesar 77,52 + 0,24 %, sedangkan dalam otoklaf suhu
120 – 121°C selama 15 menit sebesar 58,32 + 0,21%. Penggunaan antioksidan
sodium metabisulfit dapat meningkatkan stabilitas vitamin C dalam sediaan
injeksi sebesar 4,42 % dibandingkan tanpa penambahan antioksidan.
Kata kunci:
Metode Sterilisasi, Stabilitas Vitamin C, Injeksi
Xii+45 hal; 16 gbr; 11 tab; 4 lamp
Bibliografi 28: (1973-2010)
vii

ABSTRACT
Name : Yuli Daswiyah

Study Program : Pharmacy, Extension program
Title : The Influence of Sterilization Methods on the Stability of
Vitamin C in Injection Dosage Forms
Vitamin C in aqueous solution are unstable, because the solutions of vitamin C are
easily oxidized. The existence of such a change will cause decay to the drug
dosage and change in the amount of vitamin C. The purpose of this research is to
analyze the influence of sterilization methods on the stability of vitamin C in
injection dosage forms. Sterilization method used are filtration and heating at
temperature of 98 – 100°C for 30 minutes, autoclave at temperature of 115 –
116°C for 30 minutes and autoclave at a temperature of 120 – 121°C for 15
minutes. The results of this research showed that the stability of vitamin C in
injection dosage forms sterilized by filtration amount of 84,37 + 0,27% are
better than in heating sterilization methods at temperature of 98 – 100°C for 30
minutes amount of 82,01 + 0,40%, in autoclave at temperature of 115 –116°C
for 30 minutes amount of 77,52 + 0,24 % , and autoclave at temperatures of 120 –
121°C for 15 minutes amount of 58,32 + 0,21%. The use of sodium
metabisulphite as antioxidants can increase the stability of vitamin C in injection
dosage as about 4,42% compared to without the addition of sodium
metabisulphite.
Keywords:
Sterilization Methods, Stability of Vitamin C, Injection
Xii+45 pages; 16 figs; 11 tabs; 4 appendix
Bibliografi 28: (1973-2010)
viii

DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ............................................................................................ ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ……………………………...iii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. iv
KATA PENGANTAR ............................................................................................v
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ........................ vi
ABSTRAK ........................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ........................................................................................................ ix
DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi
DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xii
BAB 1. PENDAHULUAN .....................................................................................1
1.1 Latar Belakang .....................................................................................1
1.2 Tujuan Penelitian .................................................................................2
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................3

2.1 Vitamin C ............................................................................................3
2.2 Antioksidan ..........................................................................................8
2.3 Disodium edetat.................................................................................. 9
2.4 Sodium bikarbonat............................. .............................................. 10
2.5 Metode Sterilisasi …………………………………………………..10
2.6 Injeksi……………………………………………………………….12
BAB 3. METODE PENELITIAN .......................................................................14

3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian.............................................................14
3.2 Alat....................................................................................................14
3.3 Bahan ................................................................................................14
3.4 Cara Kerja .........................................................................................14
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN ...............................................................21

4.1 Pembuatan sediaan injeksi vitamin C dalam metode sterilisasi.........21
4.2 Evaluasi metode sterilisasi menggunakan cara filtrasi dan panas. ....21
4.2.1 Evaluasi fisik…………………………………………….…. 21
4.2.2 Evaluasi mikrobiologi…………………………………….…22
4.2.3 Evaluasi kimia……………………………………………….23
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ...............................................................25

5.1 Kesimpulan .......................................................................................25
5.2 Saran .................................................................................................25
DAFTAR ACUAN................................................................................................26
ix

DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Rumus bangun vitamin C.. .................................................................. 3
2.2 Degradasi vitamin C pada kondisi aerob .. .......................................... 4
2.3 Degradasi vitamin C pada kondisi anaerob ........................................ 5
2.4 Skema rute pemberian parenteral ....................................................... 13
4.1 Hasil pengamatan secara visual warna sediaan injeksi vitamin C
selama 8 minggu pada suhu ruang ..................................................... 30
4.2 Hasil pengamatan uji sterilitas sediaan injeksi vitamin C dalam
medium Thioglikolat cair selama 2 minggu ....................................... 31
4.3 Hasil pengamatan uji sterilitas sediaan injeksi vitamin C dalam
medium Sabouraud Dektrose cair selama 2 minggu ........................... 31
4.4 Hasil pengamatan uji sterilitas indikator positif dalam medium
Thioglikolat cair (a) dan medium Sabouraud Dektrose cair (b)… ...... 31
4.5 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap pH pada formula A
selama penyimpanan 8 minggu pada suhu ruang ............................... 32
4.6 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap pH pada formula B
selama penyimpanan 8 minggu pada suhu ruang ................................ 32
4.7 Spektrum serapan komplek Cr-DPC pada panjang gelombang
543nm .................................................................................................. 33
4.8 Spektrum serapan standar vitamin C konsentrasi 40 ppm................... 33
4.9 Spektrum serapan sampel vitamin C konsentrasi 40 ppm ................... 34
4.10 Kurva kalibrasi standar vitamin C dengan berbagai konsentrasi ........ 34
4.11 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap kadar vitamin C
pada formula A selama 8 minggu pada suhu ruang ............................ 35
4.12 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap kadar vitamin C
pada formula B selama 8 minggu pada suhu ruang ............................. 35
x

DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
3.1 Rancangan formulasi sediaan injeksi vitamin C 100 mg/ml ............... 16
4.1 Hasil pengamatan secara visual warna sediaan injeksi vitamin C
selama 8 minggu pada suhu ruang....................................................... 37
4.2 Hasil pengamatan uji kejernihan sediaan injeksi vitamin C
selama 8 minggu pada suhu ruang....................................................... 37
4.3 Hasil pengamatan pH sediaan injeksi vitamin C selama 8 minggu .... 38
4.4 Hasil pengamatan uji sterilisitas sediaan injeksi vitamin C dalam
medium Thioglikolat cair selama 2 minggu ...................................... 38
4.5 Hasil pengamatan sterilisitas sediaan injeksi vitamin C dalam
medium Sabouraud Dektrose cair selama 2 minggu ........................... 38
4.6 Data kurva kalibrasi vitamin C pada panjang gelombang 543 nm ...... 39
4.7 Hasil perhitungan uji presisi ............................................................... 39
4.8 Hasil perhitungan uji perolehan kembali analisis (%recovery) ........... 40
4.9 Hasil penetapan kadar vitamin C secara filtrasi pada minggu ke-4 .... 40
4.10 Hasil penetapan kadar sediaan injeksi vitamin C selama peyimpanan
8 minggu pada suhu ruang ................................................................... 40
xi

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Perhitungan penetapan kadar vitamin C ......................................................... 42

2. Alat Otoklaf (a), Oven (b), Spektrofotometer UV-Vis (c), Inkubator (d) ....... 43
3. Komposisi medium uji sterilisitas .................................................... ............... 44
4. Sertifikat analisis vitamin C ............................................................................ 45
xii

BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Vitamin C merupakan vitamin larut dalam air, yang dibutuhkan oleh
manusia sebagai komponen nutrisi esensial. Salah satunya dalam pembentukan
kolagen, yang dibutuhkan dalam pertumbuhan normal dan memperbaiki jaringan
tubuh, sebagai antioksidan yang mencegah kerusakan oleh radikal bebas dan
polusi. Manusia tidak dapat memproduksi vitamin C sehingga harus didapat dari
luar tubuh, seperti dari buah-buahan dan sayuran. Sekarang ini vitamin C tidak
hanya digunakan sebagai asupan supplemen, juga sebagai tambahan terapi untuk
beberapa infeksi virus dan terminal cancers (Jiang, Q., Reitz, R., & Chan, S.,
2010).
Untuk mendapatkan suatu hasil sediaan yang baik, kestabilan sediaan
farmasi menjadi salah satu kriteria yang perlu diperhatikan. Ketidakstabilan suatu
sediaan farmasi dapat diamati melalui perubahan sifat fisika yang menyebabkan
kerusakan pada sediaan obat dan perubahan kimia yang dapat merubah jumlah
vitamin C yang terkandung dalam sediaan.
Stabilitas dalam arti luas dapat didefinisikan sebagai ketahanan suatu
produk sesuai dengan batas-batas tertentu selama penyimpanan dan penggunaan,
atau shelf life suatu produk dimana produk tersebut masih mempunyai sifat dan
karakteristik yang sama seperti pada waktu pembuatan (The United States
Pharmacopoeia 28 ed., 2005).
Stabilitas vitamin C dalam bentuk larutan dipengaruhi oleh beberapa
faktor contohnya seperti adanya panas, cahaya, udara dan ion-ion logam terutama
tembaga dan besi (Kim, Chul-Hwan., & Yoon, Hyun-Nam., 2008).
Upaya untuk menstabilkan vitamin C dalam sediaan injeksi dapat dibuat
dengan menambahkan stabilisator yang sesuai yaitu menambahkan antioksidan
dan pengkhelat (Noordam, Bertus., & Edens, Luppo., 2001).
Vitamin C dalam bentuk sediaan injeksi mengandung tidak kurang dari
95,0% dan tidak lebih dari 115,0% C6H8O6 dari jumlah yang tertera pada etiket
dan berada pada pH antara 5,5 sampai 7,0 (Farmakope Indonesia III, 1979).
1
Universitas Indonesia

2
Pemberian injeksi vitamin C dilakukan secara intramuskular, subkutan atau

intravena (Trissel, 1983). Untuk memperoleh sediaan injeksi yang steril dilakukan
proses sterilisasi. Sterilisasi yang digunakan dalam pembuatan sediaan injeksi
bertujuan untuk membuat suatu sediaan bebas mikroba.
Pada penelitian ini dilakukan pengujian stabilitas vitamin C dalam sediaan
injeksi yang dibuat dengan berbagai metode sterilisasi. Metode sterilisasi yang
digunakan yaitu filtrasi dan pemanasan yang dilakukan pada suhu 98 – 100°C,
Otoklaf pada suhu 115 – 116°C selama 30 menit dan otoklaf pada suhu 120 –
121°C selama 15 menit.
1.2 Tujuan
Mengetahui pengaruh metode sterilisasi terhadap stabilitas vitamin C
dalam sediaan injeksi.

BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Vitamin C
Nama lain vitamin C adalah asam askorbat, acidum ascorbicum, asam L-

askorbat, asam cevitamat. Vitamin C mengandung tidak kurang dari 99,0% dan
tidak lebih dari 100,5% C6H8O6. Rumus molekul dari vitamin C adalah C6H8O6
dengan bobot molekul sebesar 176,13. Vitamin C berupa serbuk atau hablur,
berwarna putih atau agak kuning, tidak berbau, dan rasa asam. Adanya pengaruh
cahaya lambat laun menjadi gelap sedangkan dalam keadaan kering, mantap di
udara, dalam larutan cepat teroksidasi. Vitamin C mudah larut dalam air, agak
sukar larut dalam etanol (95%), praktis tidak larut dalam kloroform, benzene, eter.
Melebur pada suhu lebih kurang 190°C (Farmakope Indonesia IV, 1995). Rumus
bangun vitamin C dapat dilihat pada Gambar 2.1.
Gambar 2.1 Rumus bangun vitamin C [Sumber : FI III, 1979]
2.1.1 Farmakologi
Secara farmakologi vitamin C berperan sebagai kofaktor dalam sejumlah

reaksi hidroksilasi dengan memindahkan elektron ke ion logam dari suatu enzim
yang harus berada dalam keadaan tereduksi. Contohnya vitamin C mempercepat
perubahan residu prolin dan lisin pada prokolagen menjadi hidroksiprolin dan
hidroksilisin pada sintesis kolagen, yaitu protein bahan penunjang utama dalam
tulang rawan dan jaringan ikat. Bila sintesis kolagen terganggu, maka mudah
terjadi kerusakan pada dinding pembuluh yang berakibat perdarahan (Linder,
1992). Sifat vitamin C adalah sebagai agen pereduksi yang digunakan sebagai
3

4
antioksidan. Potensial oksidasi Eo adalah -0,115 V pada pH 5,2 suhu 30°C

(Lund, 1994).
2.1.2 Farmakokinetik
Secara Farmakokinetik vitamin C mudah diabsorbsi dalam saluran cerna.

Absorpsi akan menurun kurang lebih sekitar 50% bila digunakan dosis yang lebih
besar yaitu diatas 1 g. Vitamin C terdapat dalam plasma dan terdistribusi luas ke
seluruh jaringan tubuh. Konsentrasi vitamin C dalam leukosit dan platelet lebih
besar dibandingkan dengan konsentrasi dalam plasma. Vitamin C dioksidasi
secara reversibel menjadi asam dehidroaskorbat. Beberapa vitamin C
dimetabolisme menjadi komponen tidak aktif membentuk asam askorbat-2-sulfat
dan asam oksalat yang kemudian akan dieksresikan melalui urin (McEvoy, G.K.,
2002).
2.1.3 Stabilitas Vitamin C
Vitamin C sangat tidak stabil dalam bentuk larutan. Larutan vitamin C

mudah teroksidasi oleh udara. Oksidasi dapat dipercepat dengan adanya cahaya,
panas, basa dan ion logam terutama Cu2+ dan Fe3+ (Remington, 2006; Connors
1992).
Asam askorbat Asam dehidroaskorbat Asam 2,3-diketogulonat
Gambar 2.2 Degradasi vitamin C pada kondisi aerob [Sumber : Connors, 1992]

5
Degradasi vitamin C pada kondisi aerob menyebabkan vitamin C akan

teroksidasi menjadi asam dehidroaskorbat dan reaksi ini bersifat reversibel.
Asam dehidroaskorbat ini dapat mengalami hidrolisis yang bersifat irreversibel
menjadi asam 2,3-diketogulonat dan kemudian teroksidasi menjadi asam
oksalat yang sudah tidak memiliki aktivitas antiskorbut (Connors, 1992).
Sedangkan pada kondisi anaerob, vitamin C akan mengalami dehidrasi dan
hidrolisis menghasilkan furfural dan karbondioksida.
Asam askorbat Asam dehidroaskorbat
Furfural
Gambar 2.3 Degradasi vitamin C pada kondisi anaerob [Sumber : Connors, 1992]
2.1.4 Analisis Kandungan Vitamin C

Beberapa metode analisis dapat digunakan dalam menentukan kandungan
vitamin C dalam sampel. Sampel yang akan dianalisa dapat berupa dalam sediaan
farmasi atau dalam buah-buahan dan sayuran. Berdasarkan beberapa hasil
penelitian yang telah dilakukan, metode analisis dapat digunakan antara lain
secara volumetri, spektrofotometri, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
dan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Densitometri.
1. Metode Volumetri
Titrasi dengan 2,6-dikorofenol indofenol (Hashmi, 1973)
Larutan vitamin C akan teroksidasi menjadi asam dehidroaskorbat dengan
penambahan larutan 2,6-diklorofenol indofenol. Setelah semua larutan

6
vitamin C teroksidasi, kelebihan 2,6-diklorofenol indofenol akan

memberikan warna merah muda pada larutan.
2. Metode Spektrofotometri
Merupakan sebuah alternatif dalam menentukan kandungan atau kadar
vitamin C yang relatif sederhana dan waktu analisis yang dibutuhkan relatif
cepat bila dibandingkan dengan metode lainnya.
a) Spektrofotometri dengan potasium kromat-difenilkarbazid
(Noroozifar & Khorasani-Motlagh, 2003)
Reaksi vitamin C dengan potassium kromat-difenilkarbazid akan
membentuk komplek kromium-difenilkarbazid yang berwarna
ungu yang memberikan panjang gelombang maksimum 548 nm.
2 CrO42- + 3 C6H8O6 + 10 H+ → 2 Cr3+ + 3 C6H6O6 + 8H2O
CrO42- yang tidak bereaksi + Sym-DPC → kompleks Cr-DPC

Dalam metode ini merupakan reaksi redoks (reduksi dan oksidasi)
yang dapat digunakan sebagai analisis vitamin C karena vitamin C
bersifat sebagai reduktor dan kromat bersifat sebagai oksidator.
b) Spektrofotometri dengan diazotisasi dengan p-Nitroanilin
(Hasmi,1973)
Diazotasi p-nitroanilin dengan vitamin C menjadi bentuk fenil
hidrazid. Penambahan natrium hidroksida menghasilkan bentuk
garam dinatrium yang berwarna oranye yang memberikan panjang
gelombang maksimum 480 nm.
c) Spektrofotometri dengan potasium ferisianida (Hasmi, 1973)
Reaksi vitamin C dengan potasium ferisianida terjadi pada pH 3,5.
Ion ferisianida yang dihasilkan akan diubah menjadi ion ferro yang
direaksikan dengan 1,10-fenantrolin untuk menghasilkan kompleks
berwarna merah yang memberikan panjang gelombang maksimum
510 nm.
d) Spektrofotometri dengan 2,4-dinitrofenil hidrazin (Rahman et al,
2006)
Berdasarkan reaksi oksidasi vitamin C menjadi asam
dehidroaskorbat, kemudian perubahan asam dehidroaskorbat

7
menjadi asam diketogulonat, yang akan dikopling dengan 2,4-

dinitrofenil hidrazin dan memberikan warna merah osazon.
Panjang gelombang yang dihasilkan adalah 521 nm.
3. Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)
Penetapan kadar Vitamin B dan Vitamin C dalam Sediaan Multivitamin
Menggunakan HPLC Fase Terbalik (Siong, T.E., & Khor S.C., 1996)
Metode : Fase Terbalik
Fase Diam : C18 Bondapak
Fase Gerak : Metanol-asam asetat glasial-air = (26,5:0,5:73)
Detektor : UV Vis pada λ 265 nm, 290 nm dan 340 nm.
4. Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Densitometri
Penetapan Kadar Vitamin C dan turunannya dalam Larutan Topikal
secara Kromatografi Lapis Tipis Densitometri (Sari, 2010)
Fase Diam : Lempeng silika gel 60F 254
Fase Gerak : Butanol-asam asetat-air = (5:1:1)
Deteksi : KLT densitometri pada λ 266 nm.
2.2 Antioksidan
Antioksidan adalah molekul yang dapat menetralkan radikal bebas dengan

cara menerima atau mendonorkan satu elektron untuk menghilangkan kondisi
elektron tidak berpasangan. Antioksidan yang dikonsumsi dapat menghambat atau
memperlambat pembentukan radikal bebas dan ROS (Reactive Oxygen Species).
Tahap-tahap reaksi pembentukan radikal bebas adalah sebagai berikut (Muchtadi,

1995):
a) Reaksi inisiasi
Merupakan reaksi pembentukan radikal bebas, yaitu senyawa yang tidak stabil
dan bersifat reaktif karena kehilangan satu elektron atomnya. Reaksi ini
disebabkan oleh zat-zat endogen seperti H2O2 dan radikal O2-, ROO*, OH*,
1
O2, O2, radikal NO2 dan eksogen diantaranya pemanasan dan sinar uv.
Reaksi : AB → A* + B*

8
b) Reaksi propagasi
Radikal bebas yang terbentuk (A*) pada tahap inisiasi akan bereaksi dengan
sel mengikat hidrogen. Radikal alkil yang terbentuk (R*) akan bereaksi
dengan oksigen membentuk radikal peroksida (ROO*), kemudian radikal
peroksida akan menarik hidrogen dan membentuk hidroperoksida (ROOH)
dan radikal alkil yang baru (R*) reaksi ini akan berulang hingga terbentuk
radikal bebas yang banyak.
Reaksi : A* + RH→ AH + R*
R* + O2 → ROO*
ROO* + RH → ROOH + R*
c) Reaksi terminasi
Merupakan reaksi yang terjadi antara dua radikal bebas
Reaksi : ROO* + ROO* → ROO – ROO
R* + R* → R – R
ROO* + R* → ROO – R
Antioksidan berdasarkan sumbernya diklasifikasikan menjadi dua yaitu

antioksidan sintetik merupakan hasil produksi dari senyawa kimia berdasarkan
penelitian yang mempunyai aktivitas antioksidan. Contohnya BHT atau Butil
Hidroksi Toluen, BHA atau Butil Hidroksi Anisol, PG atau Propil Gallat (Barus
P, 2009). Sedangkan antioksidan alami merupakan antioksidan yang diperoleh
dari bahan alam. Sebagian besar berasal dari tumbuhan tingkat tinggi yang telah
diuji aktivitasnya sebagai antioksidan merupakan golongan fenol dan turunannya
dan beberapa golongan lainnya (Muchtadi, 1995).
2.2.1 Sodium metabisulfit
Sodium metabisulfit atau Natrium metabisulfit mempunyai rumus molekul

Na2S2O5, dengan berat molekul adalah 190,1. Sodium metabisulfit mengandung
tidak kurang dari 95% Na2S2O5 dan tidak kurang dari 64% dari SO2. Sodium

9
metabisulfit berupa serbuk kristal putih sampai putih kekuningan, berbau sulfur
dioksida dan rasa seperti garam asam. Titik leleh sodium metabisulfit tidak
kurang dari 150°C. Sodium metabisulfit mudah larut dalam gliserin, larut dalam
air 1:1,9 dan 1:1,2 (pada suhu 100°C), agak larut dalam etanol (95%). Sodium
metabisulfit sebagai antioksidan yang secara luas digunakan dalam formulasi
sediaan oral, parenteral, topikal. Khususnya terhadap pembuatan larutan asam dan
basa. Juga memiliki aktivitas antimikroba yang lebih besar pada pH asam serta
pengawet seperti dalam sediaan oral bentuk sirup. Konsentrasi yang digunakan
antara 0,01-1% (Wade, Ainley & Weller, Paul.J., 1994). Potensial oksidasi Eo
adalah -0,114 V pada pH 7,0 suhu 25 °C (Lund, 1994) .
2.3 Disodium edetat
Disodium edetat atau Dinatrium edetat merupakan serbuk kristal putih

dengan sedikit rasa asam. Rumus molekul C10H14N2Na2O8, dengan berat molekul
adalah 336,21. Disodium edetat larut dalam air 1:11, agak larut dalam etanol 95%,
praktis tidak larut dalam eter dan kloroform. Titik lelehnya 252°C. Disodium
edetat digunakan dalam sediaan injeksi sebagai chelating agent dengan
konsentrasi antara 0,01-0,1% (Wade, Ainley & Weller, Paul.J., 1994).
2.4 Sodium bikarbonat
Sodium Bikarbonat dikenal dengan nama lain sebagai natrium bikarbonat,

baking soda, sodium acid carbonate, sodium hydrogen carbonate. Rumus
molekul dari sodium bikarbonat adalah NaHCO3 dengan bobot molekul 84,01.
Sodium bikarbonat berupa serbuk kristal putih dengan garamnya, rasanya sedikit
basa dan tidak berbau. Sodium Bikarbonat praktis tidak larut dalam etanol (95%)
dan eter, larut dalam air 1:11 dan 1:4 (pada suhu 100°C). Titik leleh adalah 270
°C. Fungsi dari sodium bikarbonat sebagai buffering agent (Wade, Ainley &
Weller, Paul.J., 1994).

10
2.5 Metode Sterilisasi
Sterilisasi merupakan proses yang dirancang untuk menciptakan suatu

keadaan steril. Tujuan sterilisasi adalah menjamin sterilitas produk maupun
karakteristik kualitasnya. Dalam Farmakope Indonesia IV dikemukakan 5 cara
sterilisasi yang dapat dilakukan untuk mendapatkan sediaan steril adalah sebagai
berikut :
a) Sterilisasi uap
Sterilisasi uap merupakan proses sterilisasi termal menggunakan uap jenuh di
bawah tekanan, berlangsung dalam suatu bejana yang disebut otoklaf dan
mungkin merupakan proses sterilisasi yang paling banyak digunakan (suatu
siklus otoklaf yang ditetapkan dalam farmakope untuk media atau pereaksi
adalah 15 menit pada suhu 121°C kecuali dinyatakan lain). Prinsip dasar kerja
alat otoklaf ini adalah udara di dalam bejana sterilisasi diganti dengan uap
jenuh, dan hal ini digunakan alat pembuka dan penutup khusus (Farmakope
Indonesia IV, 1995). Secara garis besar, tahapan dalam proses otoklaf sebagai
berikut: adanya waktu tunggu atau loading yaitu waktu dari mulainya proses
pemanasan sampai tercapainya suhu uap sesuai dengan titik didih air pada
tekanan yang diberikan. Proses sterilisasi yaitu proses dimulainya sterilisasi
selama waktu yang ditentukan, dan tahap terakhir adanya proses pendinginan
yaitu waktu dimana proses sterilisasi selesai (Collet Diana & Aulton Michael,
1990). Mekanisme aksi penghancuran bakteri oleh uap air panas adalah
terjadinya denaturasi dan koagulasi beberapa protein essensial organisme
tersebut. Pada umumnya metode ini digunakan untuk sediaan farmasi dan
bahan-bahan yang dapat tahan terhadap temperatur yang digunakan (Ansel,
1989).
b) Sterilisasi Panas Kering
Proses sterilisasi termal yang dilakukan di dalam suatu oven yang didesain
khusus untuk tujuan itu. Oven modern dilengkapi dengan udara yang
dipanaskan dan disaring, didistribusikan secara merata ke seluruh bejana
dengan cara sirkulasi atau radiasi menggunakan sistem semprotan dengan
peralatan sensor, pemantau dan pengendali parameter kritis. Mekanisme aksi
penghancuran bakteri oleh panas kering, disebabkan oleh terjadinya koagulasi

11
protein dari sel bakteri. Metode sterilisasi panas digunakan untuk alat-alat
gelas, logam, minyak dan bahan kimia yang tahan terhadap temperatur
(Lachman, 1994).
c) Sterilisasi Gas
Digunakan sebagai alternatif dari sterilisasi termal jika bahan yang akan
disterilkan tidak tahan terhadap temperatur tinggi pada proses sterilisasi uap
atau panas kering. Bahan aktif yang umumnya digunakan pada sterilisasi gas
adalah etilen oksida. Mekanisme aksinya dengan mengalkilasi metabolit
esensial yang mempengaruhi proses reproduktif. Alkilasi mungkin terjadi
dengan menghilangkan hidrogen aktif pada gugus sulfhidril, amino, karboksil
atau hidroksil dengan suatu radikal hidroksietil. Sterilisasi ini digunakan untuk
alat-alat medis, kemasan bahan plastik, alat-alat dari karet (Lachman, 1994).
d) Sterilisasi dengan Radiasi Ion
Ada 2 jenis radiasi ion yang digunakan, yaitu disintegrasi radioaktif dari
radioisotop (radiasi gamma) dan radiasi berkas elektron. Mekanisme aksinya
dengan menghentikan reproduksi sel, sebagai akibat dari mutasi letal.
Digunakan untuk mensterilkan alat medis plastik dan sediaan pilihan dengan
proses berkesinambungan (Lachman, 1994).
e) Sterilisasi dengan Penyaringan
Sterilisasi dengan penyaringan dapat digunakan untuk memisahkan partikel-
partikel, termasuk mikroorganisme, dari larutan dan gas tanpa menggunakan
pemanasan. Mekanisme yang diterapkan pada fungsi penyaringan dengan
menyaring menggunakan suatu penyaring membran yang dapat menahan
partikel-partikel, termasuk mikroorganisme di atas permukaan membran
penyaring, sehingga larutan tersebut dapat dipisahkan secara fisika.
Cara sterilisasi dengan penyaringan ini digunakan untuk sediaan yang tidak
tahan terhadap pemanasan (Lachman, 1994).

12
2.6 Injeksi
Injeksi adalah sediaan steril berupa larutan, emulsi atau suspensi atau
serbuk yang harus dilarutkan atau disuspensikan terlebih dahulu sebelum
digunakan, disuntikkan dengan cara merobek jaringan ke dalam kulit atau melalui
kulit atau selaput lendir. Injeksi diracik dengan melarutkan, mengemulsi atau
mensuspensikan sejumlah pelarut atau dengan mengisikan sejumlah obat ke
dalam wadah dosis tunggal atau wadah dosis ganda (Farmakope Indonesia III,
1979). Suatu sediaan injeksi harus memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan,
sehingga aman bagi pemakainya tidak menyebabkan iritasi jaringan atau efek
toksis. Persyaratan lain yang juga harus ada seperti harus jernih yang berarti tidak
ada partikel padat, kecuali yang berbentuk suspensi. Sediaan tidak berwarna
(kecuali bila obatnya memang berwarna), sediaan juga harus steril. Bila
pemberian dalam jumlah besar maka tidak boleh mengandung pirogen, sedapat
mungkin isotonus dengan cairan tubuh agar tidak terasa sakit bila akan
disuntikkan. Isotonus adalah suatu larutan yang mempunyai tekanan osmose yang
sama dengan darah dan cairan-cairan tubuh seperti darah, air mata, cairan lumbal
sama dengan tekanan osmose larutan NaCl 0,9% dan sedapat mungkin isohidris
yang dimaksudkan agar bila disuntikkan ke badan tidak terasa sakit dan
penyerapannya obat dapat optimal. Isohidris adalah pH larutan sediaan injeksi
sama dengan darah dan cairan-cairan tubuh lain seperti darah, air mata, cairan
lumbal (Anief, 2003).
Penggolongan menurut cara penyuntikan yang paling umum meliputi

pemberian melalui intravena (dimasukkan ke dalam vena) dengan volume 1 - 10
ml, pemberian obat secara intravena menghasilkan kerja obat yang cepat jika
dibandingkan dengan cara-cara pemberian lainnya. Pada pemberian intravena juga
absorbsi obat tidak menjadi masalah, maka tingkatan darah optimum dapat
dicapai dengan ketepatan dan kesegeraan yang tidak mungkin didapat dengan
cara-cara lainnya. Pada keadaan darurat, pemberian obat lewat intravena dapat
menjadi alternatif yang dipakai karena penempatan obat langsung ke sirkulasi
darah dan kerja obat yang terjadi cepat. Kendala yang dihadapi pada pemberian
intravena setelah obat disuntikkan maka obat tidak dapat ditarik kembali lagi atau
obat tidak mudah dikeluarkan dari sirkulasi lagi seperti pada pemberian per oral

13
yang dapat dikeluarkan misalnya dengan cara dimuntahkan (Ansel,1989).

Intramuskular (dimasukkan ke dalam otot) dengan volume 1 - 10 ml. Pada
pemberian obat melalui intramuskular menghasilkan efek obat yang kurang cepat,
tetapi biasanya efek berlangsung lebih lama dari yang dihasilkan oleh pemberian
melalui intravena. Larutan air atau minyak atau suspensi bahan obat dapat
diberikan melalui rute intramuskular. Kecepatan absorbsinya berbeda-beda
tergantung pada jenis sediaan yang diperlukan. Obat suntik dalam bentuk larutan
lebih cepat diabsorbsi daripada dalam bentuk suspensi ataupun dalam bentuk
sediaan minyak (Ansel,1989). Intradermal (dimasukkan dalam kulit) volume 0,1 -
0,2 ml, pada rute intradermal biasanya digunakan untuk tujuan diagnosis atau
imunisasi (Ansel,1989) dan subkutan (dimasukkan di bawah kulit) dengan volume
tidak lebih dari 1 ml (Anief, 2003).
Gambar 2.4 Skema rute pemberian parenteral [Sumber : Ansel, 1989]

BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1 Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmasetika Steril, Laboratorium
Mikrobiologi dan Laboratorium Formulasi Tablet Departemen Farmasi FMIPA
UI. Waktu pelaksanaannya adalah dari bulan Agustus 2010 sampai dengan
November 2010.
3.2 Alat
Timbangan analitik (AFA 210 LC Adam); Spektrofotometer UV-Vis UV-
1800 (Shimadzu); Oven (Swimmaden SR53); Otoklaf (Hirayana); pH meter
(Eutech); Inkubator (Memmert); Membran filter 0,22 µm (Millipore); Laminar
Air Flow (LAF); Spuit injeksi (Terumo) dan alat-alat gelas.
3.3 Bahan
Vitamin C (Chemical-Spec); Sodium metabisulfit (Chemical-Spec);
Sodium bikarbonat (Chemical-Spec); Disodium edetat (J.T. Baker); Medium
Thioglikolat cair (B.D. Difco lab); Medium Sabouraud Dekstrose cair (B.D. Difco
lab); Potasium Kromat (Merck); Sym-Difenilkarbazid (Merck); Larutan HNO3 0,8
M (Merck); Etanol p.a (Merck); Aqua bidest.
3.4 Cara Kerja

3.4.1 Sterilisasi alat-alat
3.4.1.1 Sterilisasi alat gelas ukur dan tutup karet vial menggunakan otoklaf
(Farmakope Indonesia IV, 1995; Hadioetomo, 1985).
a) Gelas ukur dan tutup karet vial dicuci dengan bersih.
b) Bagian atas leher gelas ukur ditutup dengan kertas perkamen lalu
diikat tali dan tutup karet vial dibungkus dengan kertas perkamen.
c) Otoklaf diisi dengan aquadest sampai batas saringan.
d) Alat-alat dimasukkan kedalam otoklaf lalu otoklaf ditutup.
14

15
e) Shaft (batang logam/tongkat) diturunkan pada posisi 90°,

kemudian diputar sekrup kecil warna hitam hingga tertutup rapat.
f) Tombol power diaktifkan pada posisi on.
g) Waktu sterilisasi diatur pada suhu 121°C selama 15 menit lalu
ditunggu hingga lampu hijau menyala (P = 1 atm).
h) Setelah bel berbunyi, sterilisasi telah selesai lalu dipindahkan
shaft (batang logam/tongkat) pada posisi vertikal, sehingga uap
akan keluar yang di tandai dengan bunyi berdesus, ditunggu sampai
bunyi hilang dibiarkan beberapa saat hingga otoklaf dingin lalu
dikendurkan sekrup hitam.
i) Setelah tekanan P= 0 atm, dibuka sekrup penutup otoklaf lalu ditarik
penutup dari arah belakang otoklaf dan alat-alat dikeluarkan dengan
pinset.
3.4.1.2 Sterilisasi alat-alat gelas menggunakan oven (Farmakope Indonesia

IV, 1995; Hadioetomo, 1985).
a) Beaker gelas, erlenmeyer, batang pengaduk, spatel logam,
kaca arloji, pinset dan vial dicuci dengan bersih.
b) Bagian atas leher beaker gelas, erlenmeyer ditutup dengan kertas
perkamen lalu ikat dengan tali. Batang pengaduk, spatel logam,
kaca arloji, pinset dibungkus dengan kertas perkamen.
c) Oven dinyalakan dengan menekan tombol power.
d) Suhu oven diatur pada suhu 170°C selama 30 menit.
e) Alat-alat yang telah dibungkus kertas perkamen dimasukkan dalam
oven.
f) Setelah waktu sterilisasi selesai, alat-alat dikeluarkan menggunakan
pinset.

16
3.4.2 Formula sediaan injeksi

Tabel 3.1 Rancangan formulasi sediaan injeksi vitamin C 100 mg/ml
Bobot bahan (%)
Bahan
Formula A Formula B
Vitamin C 10 10
Sodium metabisulfit 1 -
Sodium bikarbonat 4,7 4,7
Disodium edetat 0,1 0,1
Air untuk injeksi 84,2 ml 85,2 ml
3.4.3 Cara pembuatan

Ditimbang vitamin C 25 gram, Sodium metabisulfit 2,5 gram, Sodium
bikarbonat 11,75 gram, dan Disodium edetat 0,25 gram. Sodium metabisulfit
dilarutkan ke dalam beaker gelas dengan air untuk injeksi bebas O2. Lalu
ditambahkan vitamin C hingga larut semua. Kemudian masukkan sodium
bikarbonat sedikit demi sedikit sampai CO2 yang terjadi habis. Disodium edetat
ditambahkan dalam air untuk injeksi bebas O2 campurkan ke dalam larutan
tersebut. Cukupkan volumenya dengan menambahkan air untuk injeksi bebas O2.
3.4.4 Metode sterilisasi sediaan injeksi

Masing-masing formula sediaan injeksi vitamin C dibagi menjadi 4
kelompok :
a) Kelompok 1 dengan Filtrasi menggunakan membran filter 0,22 µm
Formula sediaan injeksi vitamin C dimasukkan ke dalam wadah sebanyak
5 ml yang telah di filtrasi dengan membran filter 0,22 µm lalu ditutup
dengan cara aseptis.
b) Kelompok 2 pemanasan pada suhu 98 -100 °C selama 30 menit.
c) Kelompok 3 dengan otoklaf pada suhu 115 -116 °C selama 30 menit.
d) Kelompok 4 dengan otoklaf pada suhu 120 -121 °C selama 15 menit.
Pada kelompok 2, 3 dan 4 formula sediaan injeksi vitamin C dimasukkan
ke dalam wadah sebanyak 5 ml di tutup dan masing-masing disterilkan
sesuai pada suhu dan waktu yang telah ditentukan.

17
3.4.5 Pembuatan Reagen

3.4.5.1 Pembuatan larutan induk ion kromat yang mengandung 100 µg/mL
ion kromium
Potasium kromat (K2CrO4) ditimbang sebanyak 0,3735 g, lalu
dilarutkan ke dalam labu ukur 1000,0 mL dengan aquadest hingga tanda batas.
3.4.5.2 Pembuatan larutan pereaksi Sym-Difenilkarbazid (4,0X10-3 mol/L)

Sym-Difenilkarbazid ditimbang sebanyak 0,2473 g , lalu dilarutkan
ke dalam labu ukur 250,0 mL dengan etanol p.a hingga tanda batas.
3.4.6 Evaluasi fisik

3.4.6.1 Pemeriksaan kejernihan dan warna sediaan
Prosedur pemeriksaan uji kejernihan sebagai berikut ini (Akers &
Larrimore, 2002) :
a) Label yang melekat dalam vial dibuang.
b) Vial dipegang pada bagian atas dan secara hati-hati diputar dengan
gerakan memutar yang perlahan.
c) Vial diletakkan sekitar 4 inci di bawah sumber cahaya yang berlawanan
arah dengan latar belakang hitam dan putih.
d) Vial dibalik secara perlahan dan diamati ada atau tidaknya partikel yang
terlihat dengan gerakan memutar.
e) Pengamatan dilakukan selama 5 detik untuk setiap latar belakang bagian
hitam dan 5 detik lagi untuk bagian putih.
f) Jika terlihat partikel didalam setiap vial menandakan sediaan tersebut tidak
jernih.
3.4.6.2 Pengukuran pH
pH diukur dengan menggunakan pHmeter. Alat pHmeter terlebih
dahulu dikalibrasi dengan larutan dapar standar pH 4 dan pH 7.
Pengukuran dilakukan pada suhu ruang (Farmakope Indonesia IV, 1995).

18
3.4.7 Evaluasi mikrobiologi

3.4.7.1 Pembuatan dan Sterilisasi medium perbenihan
Media thioglikolat cair sebanyak 4,47 gram dan sabouraud
dekstrosa cair sebanyak 4,5 gram dimasukkan dalam labu bulat. Media
dilarutkan dengan aquadest sedikit demi sedikit sampai volume 150 ml,
kemudian dipanaskan hingga larut semua dan disterilkan dalam otoklaf
pada suhu 121°C selama 15 menit. (Farmakope Indonesia IV, 1995; The
United States Pharmacopoeia 28 ed., 2005).
3.4.7.2 Uji sterilisitas untuk pemeriksaan kuman

Disiapkan 8 tabung reaksi yang masing-masing berisi 15 ml
medium thioglikolat cair steril untuk setiap sediaan obat, dan 2 tabung
untuk kontrol, Masukkan 1 ml sediaan obat dengan menggunakan jarum
suntik steril ke dalam masing-masing tabung yang berisi medium
perbenihan. Inkubasi seluruh tabung tersebut pada suhu 37°C selama 14
hari. Sediaan memenuhi syarat, jika tidak nampak pertumbuhan kuman
dalam masing-masing tabung.
3.4.7.3 Uji sterilisitas untuk pemeriksaan jamur
Disiapkan 8 tabung reaksi yang masing-masing berisi 15 ml
medium sabouraud dekstrose cair steril untuk setiap sediaan obat, dan 2
tabung untuk kontrol, Masukkan 1 ml sediaan bahan obat dengan
menggunakan jarum suntik steril ke dalam masing-masing tabung yang
berisi medium perbenihan. Inkubasi seluruh tabung tersebut pada suhu 25-
28°C selama 14 hari. Sediaan memenuhi syarat, jika tidak nampak
pertumbuhan jamur dalam masing-masing tabung.
3.4.8 Evaluasi kimia (Noroozifar & Khorasani-Motlagh, 2003)

3.4.8.1 Validasi Metode Analisis
3.4.8.1.1 Pembuatan larutan induk vitamin C (1000 µg/mL vitamin C)
Vitamin C ditimbang 0,1000 g secara seksama, lalu dilarutkan ke dalam
labu ukur 100,0 mL dengan aquadest hingga tanda batas.

19
3.4.8.1.2 Penentuan Panjang Gelombang maksimum

Larutan induk vitamin C diencerkan dengan aquadest hingga diperoleh
konsentrasi 40 µg/mL, kemudian dipipet 5 ml dimasukkan dalam labu ukur 25,0
ml. Ditambahkan 5 ml larutan ion kromium mengandung 6 µg/mL yang telah
diencerkan dengan larutan HNO3 0,8 M. Lalu ditambahkan 4 ml larutan pereaksi
sym-Difenilkarbazid. Larutan dicukupkan volumenya dengan aquadest hingga
tanda batas. Larutan diukur serapannya dengan menggunakan spektrofotometer
UV-Vis, dan dilihat panjang gelombang maksimumnya.
3.4.8.1.3 Pembuatan Kurva Kalibrasi

Kurva kalibrasi dibuat dengan mengukur serapan larutan induk vitamin
C pada konsentrasi 0, 10, 20, 30, 40, 50 dan 60 µg/mL. Larutan induk vitamin C
dipipet 5 ml dimasukkan ke dalam labu ukur 25,0 ml, ditambahkan 5 ml larutan
ion kromium mengandung 6 µg/mL yang telah diencerkan dengan larutan HNO3
0,8 M. Lalu dimasukkan 4 ml larutan pereaksi sym-Difenilkarbazid, larutan
dicukupkan volumenya dengan aquadest hingga tanda batas. Larutan diukur
serapannya pada panjang gelombang maksimum. Serapan dari masing-masing
konsentrasi dicatat dan dibuat kurva hubungan antara konsentrasi dengan serapan.
3.4.8.1.4 Pengujian perolehan kembali analisis (% recovery)

Uji perolehan kembali vitamin C dilakukan dengan menggunakan metode
placebo, yaitu dengan mengetahui terlebih dahulu jumlah zat aktif yang ada
dalam sampel yang diukur. Lalu dibuat matriks sediaan injeksi tanpa adanya
vitamin C. Matriks ditimbang sesuai dengan perbandingan vitamin C yang akan
ditambahkan. Kemudian dilakukan pengukuran seperti pada preparasi sampel.
% Perolehan kembali = Kadar hasil analisis x 100%

Kadar sebenarnya

20
3.4.8.1.5 Pengukuran sampel

Larutan sampel dipipet 5 ml, masukkan dalam labu ukur 25,0 ml.
Tambahkan 5 ml larutan ion kromium mengandung 6 µg/mL yang telah
diencerkan dengan larutan HNO3 0,8 M, dan ditambahkan 4 ml larutan pereaksi
sym-Difenilkarbazid. Larutan dicukupkan volumenya dengan aquadest hingga
tanda batas. Ukur serapan larutan sampel dengan menggunakan spektrofotometer
UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.

BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Pembuatan sediaan injeksi vitamin C dalam metode sterilisasi

Pada penelitian kali ini digunakan vitamin C yang dibuat dalam bentuk
larutan injeksi vitamin C. Dalam bentuk larutan vitamin C tidak stabil, oleh
karena itu ditambahkan stabilisator untuk mencegah terjadinya proses oksidasi.
Penambahan sodium metabisulfit pada formula A berfungsi sebagai antioksidan
untuk memperlambat terjadinya reaksi oksidasi vitamin C dalam sediaan larutan.
Pada formula A ini dibandingkan dengan formula B yang tanpa adanya
penambahan antioksidan. Hal ini bertujuan untuk melihat pengaruh aktifitas dari
penambahan antioksidan dalam suatu sediaan dari segi perubahan fisik dan kimia.
Adanya sodium bikarbonat berfungsi untuk mengatur pH dan membentuk sodium
askorbat, sehingga larutan diharapkan dapat stabil. Disodium edetat berfungsi
sebagai chelating agent yang akan membentuk chelat dengan ion logam yang
dilepaskan dari permukaan gelas, sehingga dapat memperlambat reaksi oksidasi
vitamin C dalam sediaan larutan.
4.2 Evaluasi metode sterilisasi menggunakan cara filtrasi dan cara panas
Dari hasil pemeriksaan yang dilakukan terhadap kedua formula sediaan
injeksi vitamin C. Ditinjau dari aspek pengaruh metode sterilisasi terhadap
stabilitas vitamin C, diperoleh hasil evaluasi fisik, mikrobiologi dan kimia sebagai
berikut ini :
4.2.1 Evaluasi fisik
4.2.1.1 Pemeriksaan kejernihan dan warna sediaan
Hasil evaluasi selama 8 minggu pada formula A dan formula B yang
disterilisasi menggunakan cara filtrasi dan panas memperlihatkan sediaan larutan
tetap jernih. Warna sediaan injeksi adalah tidak berwarna dan jernih. Pada kedua
formula yang disterilisasi secara filtrasi tidak memperlihatkan perubahan warna
pada minggu ke-2. Hal ini disebabkan pada metode cara filtrasi tidak mengalami
proses pemanasan yang akan mempercepat terjadinya oksidasi. Sedangkan pada
metode cara panas formula B dengan pemanasan suhu 98 – 100°C maupun suhu
115-116°C selama 30 menit memperlihatkan perubahan warna kuning muda tipis
21

22
pada minggu ke-0 jika dibandingkan formula A yang tidak memperlihatkan

perubahan warna. Pada formula A minggu ke-0 dalam otoklaf suhu 120 – 121°C
selama 15 menit berwarna kuning muda tipis dan formula B berwarna kuning
muda. Hal ini memperlihatkan telah terjadi proses oksidasi yang mengakibatkan
perubahan warna. Vitamin C akan teroksidasi menjadi asam dehidroaskorbat yang
kemudian diikuti oleh hidrolisis dan oksidasi membentuk asam diketogulonat dan
asam oksalat. Perubahan warna pada otoklaf suhu 120 – 121°C selama 15 menit
lebih cepat dibandingkan pemanasan pada suhu 98 – 100°C maupun suhu 115-
116°C selama 30 menit. Hal ini disebabkan adanya peningkatan suhu pada proses
pemanasan, sehingga dapat mempercepat terjadinya oksidasi. Hasil selengkapnya
dapat dilihat pada Gambar 4.1; Tabel 4.1 dan Tabel 4.2.
4.2.1.2 Pengukuran pH
Hasil pengukuran pH selama 8 minggu memperlihatkan perubahan pH.
Pada cara filtrasi formula A terlihat kenaikan pH pada minggu ke-0 dan minggu
ke-8 sebesar 0,13. Sedangkan formula B terlihat kenaikan pH pada minggu ke-0
dan minggu ke-8 sebesar 0,23. Pada cara pemanasan suhu 98 – 100°C selama 30
menit, formula A terlihat kenaikan pH pada minggu ke-0 dan minggu ke-8 sebesar
0,29. Sedangkan formula B terlihat kenaikan pH pada minggu ke-0 dan minggu
ke-8 sebesar 0,36. Pada otoklaf suhu 115-116°C selama 30 menit, kenaikan pH
formula A dan formula B pada minggu ke-0 dan minggu ke-8 sebesar 0,38 dan
0,37. Formula A dalam otoklaf suhu 120-121°C selama 15 menit, kenaikan pH
pada minggu ke-0 dan minggu ke-8 sebesar 1,05. Formula B dalam otoklaf suhu
120-121°C selama 15 menit, kenaikan pH pada minggu ke-0 dan minggu ke-8
sebesar 1,34. Adanya perubahan pH disebabkan antara lain oleh pengaruh
pemanasan dan lamanya waktu penyimpanan. Hasil selengkapnya dapat dilihat
pada Tabel 4.3.
4.2.2 Evaluasi mikrobiologi

Dari uji pemeriksaan mikrobiologi diperoleh hasil sediaan injeksi vitamin
C setelah disterilisasi secara filtrasi dan pamanasan pada suhu 98 – 100°C, otoklaf
pada suhu 115 – 116°C selama 30 menit dan otoklaf suhu 120-121°C selama 15
menit, pada masing-masing formula memberikan hasil pengamatan pertumbuhan

23
kuman maupun jamur negatif atau steril. Jika medium perbenihan menjadi keruh,
akan memberikan hasil pertumbuhan kuman maupun jamur positif. Pembuatan
indikator positif bertujuan untuk melihat medium yang digunakan mempunyai
sifat merangsang pertumbuhan bagi kuman maupun jamur. Dalam pembuatan
indikator positif ini digunakan aquadest sebanyak 1 ml kedalam tabung A yang
diisi medium perbenihan thioglikolat cair kemudian dimasukkan kedalam
inkubator pada suhu 37°C dan pada tabung B yang diisi medium perbenihan
sabouraud dektrose cair yang diinkubasi dalam suhu ruangan selama 14 hari. Data
dapat dilihat pada Gambar 4.2; Gambar 4.3; Gambar 4.4; Tabel 4.4 dan Tabel 4.5.
4.2.3 Evaluasi kimia

Metode sterilisasi cara filtrasi memberikan hasil kadar vitamin C pada
minggu ke-8, formula A sebesar 84,37 + 0,27% dan formula B sebesar 79,95+
0,65%. Sedangkan dengan cara pemanasan dalam suhu 98 – 100°C selama 30
menit pada formula A sebesar 82,01 + 0,40%, formula B sebesar 78,43 + 0,25 %.
Pada otoklaf suhu 115 – 116°C selama 30 menit, formula A sebesar 77,52 + 0,24
% dan formula B sebesar 71,80 + 0,23 %. Sedangkan otoklaf suhu 120 – 121°C
selama 15 menit pada formula A sebesar 58,32 + 0,21% dan formula B sebesar
49,89 +0,29%. Setelah penyimpanan suhu ruangan selama 8 minggu
memperlihatkan penurunan kadar vitamin C. Persentase penurunan kadar pada
formula A dan B yang disterilisasi secara filtrasi kadarnya turun rata-rata 4,3%
dan 5,1% tiap 4 minggu. Sedangkan dengan cara pemanasan pada suhu 98 –
100°C kadarnya turun rata-rata 4,6% dan 5,4% tiap 4 minggu. Suhu 115 – 116°C
selama 30 menit kadarnya turun rata-rata 5,8% dan 7,9% tiap 4 minggu dan pada
suhu 120 – 121°C selama 15 menit kadarnya turun rata-rata 14,5% dan 17,9%
tiap 4 minggu. Hasil selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 4.10.
Kadar Vitamin C dengan metode sterilisasi secara filtrasi lebih stabil
dibandingkan dengan metode sterilisasi dengan pemanasan suhu 98 – 100°C,
otoklaf pada suhu 115 – 116°C selama 30 menit dan otoklaf pada suhu 120 –
121°C selama 15 menit. Hal ini disebabkan pada metode cara filtrasi tidak ada
proses pemanasan yang akan mempercepat terjadinya oksidasi. Namun pada suhu
120 – 121°C selama 15 menit terjadi penyimpangan penurunan kadar, hal ini

24
mungkin disebabkan pada saat pengerjaan dalam preparasi sampel dan cara
penyimpanan yang kurang baik ketika akan dilakukan pengukuran kadar.
4.2.3.1 Validasi metode analisis
Pada awal percobaan dilakukan penentuan panjang gelombang maksimum
untuk analisis vitamin C dalam sediaan injeksi. Berdasarkan kurva serapan yang
dibuat, panjang gelombang maksimum yang didapat adalah 543 nm. Hasil
selengkapnya dapat dilihat pada Gambar 4.7.
Pada pembuatan kurva kalibrasi didapatkan persamaan garis untuk
penetapan kadar vitamin C dalam sediaan injeksi adalah y = 0,74021 - 0,01094x
dengan koefisien korelasi (r) sebesar r = -0,9974. Hasil selengkapnya dapat dilihat
pada Gambar 4.8; Gambar 4.10 dan Tabel 4.6.
Uji presisi atau keseksamaan dilakukan untuk mengetahui keterulangan
metode analisis jika dilakukan berulangkali pada kondisi yang sama dan dalam
interval waktu yang pendek. Kriteria seksama diberikan jika memberikan
simpangan baku relatif atau koefisien variasi 2% atau kurang (Harmita, 2004).
Berdasarkan hasil percobaan nilai standar deviasi (SD) pada 30,00; 40,00; dan
50,00 ppm larutan sampel berturut-turut adalah 0,00241, 0,0045 dan 0,00230;
dengan koefisien variasi 0,50%, 0,91%; dan 1,27%. Hasil tersebut memenuhi
kriteria presisi. Hasil selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 4.7.
Kecermatan atau akurasi adalah ukuran yang menunjukkan derajat
kedekatan hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Kecermatan
dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan
(Harmita, 2004). Pada uji perolehan kembali vitamin C yang dilakukan dengan
menggunakan metode placebo, yaitu dengan mengetahui terlebih dahulu jumlah
zat aktif yang ada dalam sampel yang diukur. Lalu dibuat matriks atau placebo
sediaan injeksi tanpa adanya vitamin C. Matriks ditimbang sesuai dengan
perbandingan vitamin C yang akan ditambahkan. Kemudian dilakukan
pengukuran seperti pada preparasi sampel. Hasil perhitungan memberikan nilai
rata-rata 99,39 % dengan koefisien variasi sebesar 0,40%. Hal ini memenuhi
syarat akurasi yaitu 98 – 102 %. Data akurasi dapat dilihat pada Tabel 4.8.

BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
1. Stabilitas vitamin C dalam sediaan yang dibuat pada metode sterilisasi
secara filtrasi dengan kadar vitamin C sebesar 84,37 + 0,27% lebih baik
dibandingkan metode sterilisasi secara pemanasan suhu 98 – 100°C
selama 30 menit dengan kadar sebesar 82,01 + 0,40%; dalam otoklaf
suhu 115 – 116°C selama 30 menit dengan kadar sebesar 77,52 + 0,24 %;
dan dalam otoklaf suhu 120 – 121°C selama 15 menit dengan kadar
sebesar 58,32 + 0,21%.
2. Penggunaan antioksidan sodium metabisulfit dapat meningkatkan
stabilitas vitamin C dalam sediaan injeksi sebesar 4,42% dibandingkan
tanpa penambahan antioksidan.
5.2. Saran
Dalam analisis kuantitatif kandungan vitamin C suatu sediaan larutan
mudah mengalami degradasi menjadi asam dehidroaskorbat maupun asam
oksalat, sehingga untuk memisahkan masing-masing zat tersebut sebaiknya
digunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi.
25

26
DAFTAR ACUAN
Anief, M. (2003). Ilmu Meracik Obat Teori dan Praktik. Yogyakarta : Gadjah
Mada University Press. 190, 193
Ansel, Howard C. (1989). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, edisi ke-4. Jakarta :
UI Press. 399, 400, 401, 411
Akers, Michael J., & Larrimore, Daniel S. (2002). Parenteral Quality
Control: Sterility, Pyrogen, Particulate, and Package Integrity Testing
(3rd ed.) [computer software]. New York : Marcel Dekker Inc.
Barus Pina. (1995). Pemanfaatan Bahan Pengawet dan Antioksidan Alami pada
Industri Bahan Makanan. Diunduh dari http://www.usu.ac.id/id/pidato
pengukuhan guru besar tetap/pdf pada tanggal 9 April 2010 pukul 13.00
wib
Connors, K.A., Gordon L.A., & Valentino J.S. (1979). Chemical Stability of
Pharmaceuticals, a Handbook for Pharmacists. USA: John Wiley &
Sons, Inc.138-140
Collet Diana.M., & Aulton Michael.E. (1990). Pharmaceutical Practice. New
York : Churchill Livingstone Inc. 173
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1995). Farmakope Indonesia Edisi
IV. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1979). Farmakope Indonesia Edisi
III. Jakarta : Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Hadioetomo, Ratna S. (1985). Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek, Teknik dan
Prosedur Dasar Laboratorium. Jakarta: Gramedia. 53-58
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara
Perhitungannya. Depok : Majalah Ilmu Kefarmasian (Vol.1) 3. 117-135
Hashmi, M. (1973). Assay of Vitamins in Pharmaceutical Preparations. New
York : Interscience Publishers. 293-321
Jiang, Q., Reitz, R., & Chan, Sum. (2010). Methods for Detecting Vitamin C by
Mass Spectrometry. Diunduh dari www.freepatentsonline.com/US
0084545A1 pada tanggal 26 November 2010 pukul 14.00 wib

27
Kim, Chul-Hwan., & Yoon, Hyun-Nam. (2008). Composition for Stabilizing

Vitamin C in Water Phase and Method for Stabilizing using thereof.
Diunduh dari www.freepatentsonline.com/US0058410A1 26 November
2010 pukul 13.52 wib
Lachman, L., H.A. Lieberman, & J.L. Kanig. (1994). The Theory and Practice
of Industrial Pharmacy, diterjemahankan oleh Siti Suyatmi. Jakarta : UI
Press. 1263,1266,1275-1277,1286
Linder, Maria C. (1992). Nutritional biochemistry and metabolism.

diterjemahkan oleh Aminuddin Parakkasi. UI Press. Jakarta : 165-168
Lund, Walter. (1994). The Pharmaceutical Codex Principles and Practice of

Pharmaceutics (12th ed.). London : The Pharmaceutical Press. 100
Muchtadi, Deddy. (2009). Gizi Anti Penuaan Dini. Bandung: CV Alfabeta .
163-164, 171
McEvoy, G.K (Ed). (2002). AHFS Drug Information. American Society of

Health-System Pharmacists. The United States of America : 3544-3548
Noroozifar, M., & Khorasani-Motlagh, M. (2003). Application of Potassium

Chromate-Diphenylcarbazide in the Quantitative Determination of
Ascorbic acid by Spectrophotometri. Journal Chemical 27: 717-722
Noordam, Bertus., & Edens, Luppo. (2001). Stable vitamin C concentrates.
Diunduh dari www.freepatentsonline.com/US6183729B1 pada tanggal
26 November 2010 pukul 13.35 wib
Rahman et al. (2006). A simple UV-spectrophotometric Methods for the
Determination of Vitamin C Content in Various Fruits and Vegetables at
Sylhet Area in Bangladesh. Journal of Biological Sciences 6(2): 388-392
Remington, Joseph P. (2006). Remingtone’s The Science and Practice of
Pharmacy ( 21th ed.). Philadelpia: Lippincott Williams & Wilkins. 1693-
1702
Reynolds, James E.F.(Ed.). (1982). Martindale The Extra Pharmacopoeia (28th
ed.). London : The Pharmaceutical Press.

28
Sari Rafika. (2010). Penetapan Kadar Vitamin C dan Turunannya dalam Larutan
Topikal secara Kromatografi Lapis Tipis Densitometri. Depok : Skripsi
Departemen Farmasi Universitas Indonesia
Siong, T.E., & Khor S.C. (1996). Simultaneous determination of B-vitamins and
ascorbic acid in multi-vitamin preparations by reversed-phase HPLC. Mal
J Nutr . (2): 176-194.
The United States Pharmacopoeia. (2005). The United States Pharmacopoeia
(28th ed.). United States of America: 1191, 2243, 2251-2252
Trissel, Lawrence A. (1983). Handbook on Injectable Drugs (3rd ed.). The
United States of America: American Society of Hospital Pharmacists Inc.
44-47
Wade, Ainley., & Weller, Paul.J.(Ed.). (1994). Handbook of Pharmaceutical
Excipients (2nd ed.). London : The Pharmaceutical Press. 176-178, 436-
473, 451-452

30
Formula A Formula B Formulla A Formu

ula B
(Seebelum sterrilisasi) (Sterrilisasi mingggu ke-0)
Formula A Formula B Formulla A Formulla B

(Sterilisasi mingggu ke-2) (Steriilisasi mingggu ke-4)
Formula A Formula B Formulla A Formu

ula B
(Sterilisasi mingggu ke-6) (Steriilisasi mingggu ke-8)
Gambarr 4.1 Hasil Pengamatan

P n secara visu
ual warna sediaan
s injekksi vitamin C
selam
ma 8 mingguu pada suhuu ruang
Keterangaan :
Formula A menggunaakan antiokksidan sodiu um metabisuulfit :
Formula A (A1) denggan sterilisaasi secara filltrasi
Formula A (A2) denggan sterilisaasi secara peemanasan 98 – 100°C sselama 30 menit
m
Formula A (A3) denggan sterilisaasi dalam otoklaf 115 – 116°C selaama 30 mennit
Formula A (A4) denggan sterilisaasi dalam otoklaf 120 – 121°C selaama 15 mennit
Formula B tanpa mennggunakan antioksidan

a n sodium meetabisulfit :
Formula B (B1) denggan sterilisasi secara filltrasi
Formula B (B2) denggan sterilisasi secara peemanasan 988 – 100°C selama 30 menit
m
Formula B (B3) denggan sterilisasi dalam oto oklaf 115 – 116°C selaama 30 meniit
Formula B (B4) denggan sterilisasi dalam oto oklaf 120 – 121°C selaama 15 men
nit

31
Forrmula A Formula B
Gambar 4.2 Hasil peengamatan uji

u sterilitas sediaan injeksi vitaminn C dalam
mediumm Thioglikollat cair selam
ma 2 mingggu
Foormula A Formulaa B
Gambar 4.3 Hasil peengamatan uji

u sterilitas sediaan injeksi vitaminn C dalam
mediumm Sabouraudd Dektrose cair
c selama 2 minggu
Gambar 4.4 Hasil peengamatan ujiu sterilitas indikator positif

p dalam
m medium
Thioglikkolat cair (aa) dan mediium Sabouraud Dektrose cair (b)

32
8
7
Filtrasi
6
5
Pemanasan suhu 98 –
pH
4
100°C selama 30 menit
3
2 Otoklaf suhu 115 –
1
ss 0 2 4 6 8 121°C selama 15 menit
MInggu ke‐
Gambar 4.5 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap pH pada formula A

selama 8 minggu pada suhu ruang
9
8
7 Filtrasi
6
5
pH
Pemanasan suhu 98 –
4
3
1 116°C selama 30 menit
ss 0 2 4 6 8 121°C selama 15 menit
Minggu ke‐
Gambar 4.6 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap pH pada formula B

Keterangan :
ss adalah sebelum sterilisasi

33
Gambar 4.7 Spektrum serapan komplek Cr-DPC pada panjang gelombang

543 nm
Gambar 4.8 Spektrum serapan standar vitamin C konsentrasi 40 ppm

34
Gambar 4.9 Spektrum serapan sampel vitamin C konsentrasi 40 ppm
0.8
0.7
0.6
Serapan (Abs)
0.5 y = ‐0.010x + 0.740
R² = 0.994
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80
Konsentrasi (ppm)
Gambar 4.10 Kurva kalibrasi standar vitamin C dengan berbagai konsentrasi

35
100
90
80
70 Filtrasi
60
Kadar (%)
50 Pemanasan 98 – 100°C
40 selama 30 menit
30 Otoklaf 115 – 116°C
selama 30 menit
20
Otoklaf 120 – 121°C
10 selama 15 menit
0
0 4 8
Minggu ke‐
Gambar 4.11 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap kadar vitamin C
formula A selama 8 minggu pada suhu ruang
100
90
80
70 Filtrasi
Kadar (%)
60
pemanasan 98 – 100°C
50
selama 30 menit
40
30
selama 30 menit
20
10
selama 15 menit
0
0 4 8
Minggu ke‐
Gambar 4.12 Grafik hubungan waktu penyimpanan terhadap kadar vitamin C

formula B selama 8 minggu pada suhu ruang

37
Tabel 4.1
Hasil pengamatan secara visual warna sediaan injeksi vitamin C
Minggu Formula A Formula B

ke- Filtrasi 98 – 115 – 120 – Filtrasi 98 – 115 – 120 –
100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
selama selama selama selama selama selama
30 30 15 30 30 15
menit menit menit menit menit menit
SS TB TB TB TB TB TB TB TB
0 TB TB TB KMT TB KMT KMT KM
2 TB TB TB KM TB KM KM K
4 KMT KM KM K KM K K K
6 KM K K KT KM K K KT
8 K K K JM K KT KT J
Keterangan :
SS = Sebelum Sterilisasi K = Kuning
TB =Tidak Berwarna KT = Kuning Tua
KMT = Kuning Muda Tipis JM = Jingga Muda
KM = Kuning Muda J = Jingga
Tabel 4.2
Hasil pengamatan uji kejernihan sediaan injeksi vitamin C

100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
30 30 15 30 30 15
SS Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih
0 Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih Jernih
Keterangan : ss adalah Sebelum Sterilisasi

38
Tabel 4.3
Hasil pengamatan pH sediaan injeksi vitamin C selama 8 minggu

100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
30 30 15 30 30 15
SS 5,48 5,48 5,48 5,48 5,70 5,70 5,70 5,70
0 5,49 5,53 5,58 6,10 5,71 5,75 5,78 6,34
2 5,51 5,64 5,67 6,22 5,74 5,79 5,82 6,98
4 5,56 5,72 5,81 6,53 5,81 5,86 5,91 7,23
6 5,58 5,78 5,92 6,83 5,88 5,94 5,97 7,41
8 5,62 5,82 5,96 7,15 5,94 6,11 6,15 7,68
Keterangan : ss adalah sebelum sterilisasi
Tabel 4.4
Hasil pengamatan uji sterilisitas sediaan injeksi vitamin C dalam medium
Thioglikolat cair selama 2 minggu
100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
30 30 15 30 30 15
1 Steril Steril Steril Steril Steril Steril Steril Steril
Tabel 4.5
Hasil pengamatan sterilisitas sediaan injeksi vitamin C dalam medium Sabouraud
Dektrose cair selama 2 minggu
100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
30 30 15 30 30 15

39
Tabel 4.6 Data kurva kalibrasi vitamin C pada panjang gelombang 543 nm
Konsentrasi (ppm) Serapan (Abs)

0,00 0,745
10,00 0,617
20,00 0,543
30,00 0,388
40,00 0,322
50,00 0,182
60,00 0,088
Persamaan garis kurva kalibrasi y= 0,74021 – 0,01094x

dengan koefisien korelasi r = -0.9974
Tabel 4.7 Hasil perhitungan uji presisi
Konsentrasi Serapan Serapan rata-rata Standar Koefisien

Deviasi Variasi
(ppm) (Abs) (Abs) (SD) (KV) (%)
0,485
0,481
30,00 0,482 0,4836 0,00241 0,50
0,487
0,483
0,358
0,357
40,00 0,355 0,3530 0,0045 1,27
0,347
0,348
0,251
0,252
50,00 0,254 0,2534 0,00230 0,91
0,253
0,257

40
Tabel 4.8 Hasil perhitungan uji perolehan kembali analisis (% recovery)

Persentase kadar Persentase kadar UPK Rata-rata + KV
Formula Serapan
sebenarnya (%) (Abs) terukur (%) (%) (%)
A 87,34 0,359 87,11 99,74 99,39 + 0,40
0,360 86,89 99,48
0,362 86,43 98,86
Tabel 4.9
Hasil penetapan kadar vitamin C secara filtrasi pada minggu ke-4
Formula Massa vitamin C dalam Massa vitamin C Kadar
Vitamin C
sediaan 5 ml (mg) (mg) (%)
A 436,7116 500,05 87,33
437,8543 87,56
440,1394 88,02
88,64 + 0,43
Tabel 4.10
Data hasil penetapan kadar vitamin C selama penyimpanan 8 minggu
pada suhu ruang

ke- (%) (%)
Filtrasi 98- 115 – 120 – Filtrasi 98 – 115 – 120 –
100°C 116°C 121°C 100°C 116°C 121°C
30 menit 30 menit 15 30 menit 30 15
menit menit menit
0 92,90 90,77 89,02 87,27 91,07 89,32 87,65 85,82

+0,49 ±0,29 ±0,44 ±0,44 ±0,45 ±0,44 ±0,43 ±0,42
4 88,64 86,66 84,07 78,66 85,97 83,69 80,79 74,24
±0,43 ±0,23 ±0,68 ±0,64 ±0,73 ±0,53 ±0,39 ±0,85
8 84,37 82,01 77,52 58,32 79,95 78,43 71,80 49,89
±0,27 ±0,40 ±0,24 ±0,21 ±0,65 ±0,25 ±0,23 ±0,29

42
Lampiran 1
Perhitungan penetapan kadar vitamin C pada minggu ke-4
Formula Massa vitamin C dalam Massa vitamin C Kadar
Vitamin C
sediaan 5 ml (mg) (mg) (%)
A 436,7116088 500,05 87,33
Diketahui:
Persamaan kurva kalibrasi; y = 0,74021 – 0,01094 x
a. Serapan (Abs) = 0,358

y = 0,74021 – 0,01094 x
0,358 = 0,74021 – 0,01094 x
x = 0,358 – 0,74021
– 0,01094
= 34,9369287 ppm
Faktor pengenceran = 2500 kali
Jadi konsentrasi sampel = 2500 x 34,9369287 ppm
= 87342,32175 ppm
= 87342,32175µg/ml
= 87,34232175mg/ml
Volume total larutan injeksi vitamin C adalah 5,0 ml
Jadi, bobot vitamin C dalam larutan injeksi = 87,34232175mg/ml x 5,0 ml
= 436,7116088 mg
Diketahui bobot vitamin C = 500,05 mg, jadi
% kadar vitamin C = 436,7116088mg x 100%
500,05 mg
= 87,33%

43
Lampiran 2
Alat Otoklaf (a), Alat Oven (b), Spektrofotometer UV-Vis UV-1800 (c)
dan Alat inkubator (d)
(a) (b)
(c) (d)

44
Lampiran 3
Komposisi medium uji sterilitas
1. Medium Thioglikolat Cair (Fluid Thioglikolat Medium)

Komposisi dalam 1 liter :
Kasein 15,0 gram
Ekstrak ragi 5,0 gram
Dektrosa 5,5 gram
Sodium klorida 2,5 gram
L-sistin 0,5 gram
Sodium Thioglikolat 0,5 gram
Agar 0,75 gram
Resazurin 0,001gram

2. Medium Sabouraud Dektrose (Sabouraud Dextrose Broth)
Komposisi dalam 1 liter :
Kasein 15,0 gram
Dektrosa 5,5 gram


45
Lampiraan 4
Sertiffikat analisiis vitamin C

20181189-S33175-Yuli Daswiyah

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

20181189-S33175-Yuli Daswiyah

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UNIVERSITAS INDONESIA

PENGARUH METODE STERILISASI TERHADAP

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

PENGARUH METODE STERILISASI TERHADAP

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Syukur Alhamdulillah, penulis panjatkan kepada Allah subhanallahu ta’ala,

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Nama : Yuli Daswiyah

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Name : Yuli Daswiyah

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................3

BAB 3. METODE PENELITIAN .......................................................................14

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN ...............................................................21

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ...............................................................25

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

1. Perhitungan penetapan kadar vitamin C ......................................................... 42

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

1.1 Latar Belakang

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Pemberian injeksi vitamin C dilakukan secara intramuskular, subkutan atau

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Nama lain vitamin C adalah asam askorbat, acidum ascorbicum, asam L-

Gambar 2.1 Rumus bangun vitamin C [Sumber : FI III, 1979]

Secara farmakologi vitamin C berperan sebagai kofaktor dalam sejumlah

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

antioksidan. Potensial oksidasi Eo adalah -0,115 V pada pH 5,2 suhu 30°C

Secara Farmakokinetik vitamin C mudah diabsorbsi dalam saluran cerna.

2.1.3 Stabilitas Vitamin C

Vitamin C sangat tidak stabil dalam bentuk larutan. Larutan vitamin C

Asam askorbat Asam dehidroaskorbat Asam 2,3-diketogulonat

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Degradasi vitamin C pada kondisi aerob menyebabkan vitamin C akan

Asam askorbat Asam dehidroaskorbat

2.1.4 Analisis Kandungan Vitamin C

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

vitamin C teroksidasi, kelebihan 2,6-diklorofenol indofenol akan

2 CrO42- + 3 C6H8O6 + 10 H+ → 2 Cr3+ + 3 C6H6O6 + 8H2O

CrO42- yang tidak bereaksi + Sym-DPC → kompleks Cr-DPC

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

menjadi asam diketogulonat, yang akan dikopling dengan 2,4-

Antioksidan adalah molekul yang dapat menetralkan radikal bebas dengan

Tahap-tahap reaksi pembentukan radikal bebas adalah sebagai berikut (Muchtadi,

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

Reaksi : ROO* + ROO* → ROO – ROO

Antioksidan berdasarkan sumbernya diklasifikasikan menjadi dua yaitu

2.2.1 Sodium metabisulfit

Sodium metabisulfit atau Natrium metabisulfit mempunyai rumus molekul

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

2.3 Disodium edetat

Disodium edetat atau Dinatrium edetat merupakan serbuk kristal putih

2.4 Sodium bikarbonat

Sodium Bikarbonat dikenal dengan nama lain sebagai natrium bikarbonat,

Pengaruh metode..., Yuli Daswiyah, FMIPA UI, 2011

2.5 Metode Sterilisasi

Sterilisasi merupakan proses yang dirancang untuk menciptakan suatu