Perkiraan Konsentrasi Low-Density
LipoproteinColesterolin Plasma, Tanpa
Menggunakan PreparativeUltracentrifuge
William T. Friedewald, Robert I. Levy, dan Donald S. Fredrickson
Sebuah metode untuk memperkirakan kandungan
kolesterol fraksi lipoprotein densitas rendah serum
(Sf-0.20) disajikan . Metode ini melibatkan pengukuran
kolesterol total plasma puasa, tri-gliserida, dan
konsentrasi kolesterol lipoprotein densitas tinggi, tidak
ada yang membutuhkan penggunaan ultrasentrifuge
preparatif. Cornparison dari prosedur yang disarankan
ini dengan prosedur yang lebih langsung , di mana
ultrasentrifuge digunakan, menghasilkan koefisien
korelasi 0,94-0,99, tergantung pada populasi pasien
dibandingkan.
Klasifikasi Keyph rases tambahan hyperlipoproteinemia # {149}
penentuan kolesterol total plasma, tri-gliserida, kolesterol
lipoprotein densitas tinggi # {149} protein beta lipo
Suatu persyaratan penting untuk klasifikasi hiperlipidemia
ke dalam berbagai jenis hiperlipoproteinemia (1 , 2) adalah
estimasi konsentrasi LDL1 plasma (Sf 0-20; beta lipo-protein).
Kuantitas ini diperlukan untuk penugasanTipe II pola (1-3),
yang didefinisikan sebagai peningkatan dan LDL di
konsentrasiatas beberapa batas batas yang dipilih secara
sewenang-wenang.
Metode tidak langsung disajikan di sini untuk
memperkirakanplasma LDL konsentrasidalam hal kolesterol
yang terkandung dalam lipoprotein ini (C LD L). Metode ini
membutuhkan pengukuran konsentrasi total kolesterol
plasma, trigliserida, dan CHDL. Informasi ini dapat diperoleh
tanpa ultrasentrifugasi dan hanya membutuhkan analisis lipid
rutin selain curah hujan yang cepat dari semua lipoprotein
plasma selain HDL. Dua pengamatan digunakan dalam
perhitungan. Salah satunya adalah bahwa rasio massa
trigliserida terhadap kolesterol di VLDL tampaknya relatif
Dari Cabang Penelitian Biometrik (WTF) dan Cabang Penyakit Molekuler
(RIL dan DSF), Lembaga Jantung dan Paru Nasional, 9000 Rockville Pike,
Bethesda , Md. 20014.
'Singkatan tidak standar yang digunakan: HDL, lipo- protein berkepadatan
tinggi; LDL, lipoprotein densitas rendah; VLDL, lipoprotein dengan densitas sangat
rendah; ro, trigliserida plasma; konsentrasi kolesterol (mg / l00 ml plasma) dalam
fraksi yang diidentifikasi oleh subskrip; EDTA, asam ethylenediaminetetraacetic.
Menerima 29 Februari 1972; diterima 13 Maret 1972.
konstan dan sekitar 5: 1 pada subjek normal (1, 4) dan pada
pasien dengan semua jenis hiperlipoproteinemia, kecuali Tipe
III yang jarang (1,2). Yang lain adalah bahwa ketika kilomikron
tidak terdeteksi, sebagian besar trigliserida dalam plasma
terkandung dalam VLDL. Dengan demikian, dalam sebagian
besar sampel plasma di mana kilomikron tidak ada, kolestrol
dalam plasma yang disebabkan oleh VLDL dapat diperkirakan
dengan membagi konsentrasi trigliserida plasma dengan lima.
Pembenaran metode ini untuk estimasi CLDL adalah subjek dari
makalah ini.
Metode
Data diperoleh dari analisis lipid dan lipoprotein yang
dilakukan oleh Cabang Penyakit Molekuler National Heart and
Paru Institute, pada sampel dari pasien dengan hiperlipidemia dan
dari subyek normal. Hasil analisis laboratorium sedang dalam
proses transfer ke pita magnetik untuk pengambilan dan analisis
cepat. Pada saat penelitian ini, analisis lipoprotein lengkap dari
448 subjek yang diklasifikasikan sebagainormal, Tipe II, atau
Tipe hiperlipoproteinemia primerIV telah dipindahkan ke kaset
dan data dari semua digunakan. Data mencerminkan kepentingan
penelitian Cabang, dengan sebagian besar data berasal dari pasien
dengan hiperlipoproteinemia keluarga atau kerabat mereka, dan
dengan demikian tidak mewakili sampel yang tidak bias dari
populasi umum. Spesimen dari setiap pasien yang dipilih untuk
analisis dalam makalah ini adalah sampel pertama pada pita
magnetik di mana analisis lipoprotein lengkap telah dilakukan di
National Heart and Paru Institute. Subjek tidak menerima dan segera disimpan pada suhu 4 # {176} Cuntil dianalisis.
pengobatan diet atau obat untuk hiperlipoproteinemia pada Total kolesterol plasma (6) dan tri- gliserida (6) diukur, dan
saat pengambilan sampel ini, kecuali untuk dua pasien yang data CHDL, CLDL, dan CVLDL diperoleh dengan kombinasi
menggunakan pembatasan kalori tetapi yang kemudian prosedur ultrasentrifugasi dan presipitasi (7). Dalam sampel
diklasifikasikan sebagai Tipe IV. bebas dari kilomikron, CVLDL adalah
Sampel plasma asli telah diperoleh 12 hingga 14 jam
setelah makan terakhir, dicampur dengan EDTA (1 mg / ml),
diukur dalam dua cara: (a) secara langsung, dengan mengukur kadar kolesterol fraksi supernatan setelah
ultrasentrifugasi plasma di D.1006 selama 16 jam pada 100.000 X g dalam Spinco 40,3 rotor, dan (b) secara tidak
langsung, dengan mengurangi kandungan kolesterol fraksi infranatant (jumlah CHDL dan CLDL) dari total kolesterol plasma.
Kesalahan metodologis diduga dan plasma dianalisis kembali jika ada perbedaan besar antara hasil kedua metode.
Subjek diklasifikasikan sebagai normal atau memiliki hiperlipoproteinemia tipe I sampai V sesuai dengan kriteria yang
dijelaskan sebelumnya (1, 2).
Resu Ini
Hasillipoprotein lipid dan ultrasentrifuge penentuan pada 232 pria dan 216 wanita- 96 normal, 204 dengan Tipe II, dan
148 dengan Tipe IV-dianalisis. Berbagai statistik yang berasal dari data ini disajikan pada Tabel 1.
CLDL juga dihitung untuk setiap orang berdasarkan rumus berikut:
C LDL = Cpa, ma - CHDL TG / 5
Plot masing-masingmasing-masing individu yang CLDL dihitung dengan metode ini vs. yang diperoleh setelah
ultrasentrifugasi preparatif (7) disajikan pada Gambar 1 sampai 3. Untuk orang normal dan pasien Tipe II, penyebaran
poin tentang garis kesetaraan untuk kedua metode tidak tampak berlebihan, seperti yang tercermin dalam koefisien
korelasi tinggi,. 98 dan .99, masing-masing (8). Namun, pada pasien tipe IV ada banyak nilai terpencil dan korelasinya
agak lebih rendah, yaitu 0,85. Pengamatan lebih dekat terhadap outlier ini mengungkapkan bahwa sebagian besar pasien
memiliki konsentrasi trigliserida plasma yang sangat tinggi, dan dengan demikian plot dibuat hanya dari pasien Tipe IV
dengan trigliserida plasma kurang dari 400 mg / 100 ml (111 dari 148 orang asli). Penyebaran nilai jauh lebih kecil
setelah ini adalah

///
/
280
240

g200.20 S-J0z-J0-J
40
Normals
0,98
40 80 120 ISO 200 240 280
LDLE-KOLESTEROL (/ I00 ml>m

Fig.1.Comparison oftheplasmalow-density lipoprotein konsentrasikolesterolpada individu normal seperti calcu- lated

bythe metode estimasi (LELE) dengan yang diperoleh dengan metode ultrasentrifus (LDLU)

:: TYPE

760/720 1 FE! 4e
 ./ LDLcCHOLESTEROL lmg / lOOmil kolesterol Fig.2.Comparison konsentrasi dari plasma dalam Jenis low.density pasien II

lipoprotein sebagai calcu- lated oleh bythe ultrasentrifus estimasimetode metode (LDLE) (LDLu) dengan yang diperoleh
Tabel 1. mean, Standar Deviasi, dan Kisaran
Jumlah kolesterol plasma total plasma trigliserida HDL kolesterol
LDL kolesterol
VLDL kolesterol
No. pasien.
500 KLINIK CHEMISTRY, Vol. 18, No. 6, 1972
dikecualikan (Gambar 4), koefisien korelasi kemudian menjadi 0,94. Lipid Plasma dan Lipoproteinkuantitatif lebih
lanjut Ekspresiuntuk dis- Normal (%) Tipe II (2O4) Tipe IV (14 $ ) kesepakatan antara C LD L yang diperoleh oleh dua
mg / ioml metodedisajikan pada Tabel 2. Karena masing-masing 189 ± 33 359 ± 100 241 57 interval kepercayaan (9)

mengandung nol, ada (166-270) (217488) (138-436) tidak ada alasan kuat berdasarkan data ini percaya
73 ± 7 126 ± 16 347 ± 61 bahwa estimasi CLDL akan menjadi bias. Interval toleransi (20-184) (25-656) (90-2502) (10)

memberikan kisaran nilai 53 ± 13 45 ± 13 38 ± 11 yang dengan probabilitas 0,95 akan mencakup 95% dari (29-77 ) (18-82)

(15-74) perbedaan antara kedua metode pengukuran- 122 ± 28 291 ± 99 135 ± 38 ment. Kesalahan persen mengasumsikan

bahwa CLDL (62-185) (173-840) (28-231) diukur dengan metode ultrasentrifuge adalah standar 14 ± 9 24 ± 19 68 ± 55
dengan mana CLDL estimasidiperoleh (0-40) ) (0-78) (6-356) dengan perhitungan sedang dibandingkan. Distribusi
nilai dengan masing-masing metode diperiksa untuk setiap _________________________________________
kelompok, dengan menggunakan grafik probabilitas normal
TYPE 280
280
TYPE
(No SIICIUSIO8I)
(dengan TO a400)
240
- > 60
-J
120

O 80 -844-

“.7 . -.4 / -. -J 40 - 116+

// r85

II # {149} I I # {149} 40 80 120 160 200 240 280

t # {149} -7 LDLECHOLESTEROL - (m9 / lOOml)

Gbr. 3. Perbandingan plasma low-density lipoprotein yang ditandai oleh kolesterol oleh ultrasentrifuge konsentrasi metode

metode estimasi dalam Tipe (lJrmu); (LIThE) IV tidak ada pasien dengan pengecualian
yang # {149} 0,94 sebagai diperoleh kertas yang. Nilai-nilai biasanya terdistribusi secara wajar. Hanya pada pasien Tipe IV
ada bukti kemiringan; ini hanya minimal, dan ke arah negatif.
Kami tidak mencoba untuk menghitung kesalahan rata-rata keseluruhan atau untuk memperkirakan probabilitas
kesalahan klasifikasi oleh prosedur estimasi ini karena jumlah pasien tipe II dan tipe IV yang luar biasa besar relatif
terhadap orang normal dalam sampel.
Sub-sampel dari 46 pasien Tipe II dipilih secara acak, linear kuadrat-terkecil (11) dari TG ke CVLDL dilakukan, dan
persamaan yang diperoleh digunakan dalam subset terpisah dari 55 pasien Tipe II untuk memperkirakanmereka CVLDL.
Analisis menunjukkan bahwa pembagian sederhana TG oleh lima memberikan akurat estimasi CvLDL seperti yang
 dilakukan estimasi regresi yang lebih rumit ini.
Tabel 2. Statistik Pengukuran CLOL Memanfaatkan Ultrasentrifuge
vs. Prosedur Estimasi
(LDLV-LDLE) 6
Normal Tipe II Tipe IV
KIMIA KLINIS, Vol. 18, No. 6, 1972 501 200

68200
E

> 60 -J0S 20 S-J0

80
-J0-J

40

I # {149} IIII “ 40 80 120 ISO 200 240 280 LOL6-CHOLESTEROL (mg / lOOmI) Gbr. 4. Perbandingan kadar plasma low.densitylipoprotein kolesterol

kolesterolpada pasien Tipe IV sebagaimana dihitung dengan metode estimasi (LDLE) dengan yang diperoleh dengan
metode ultrasentrifuge (LDLU), tidak termasuk individu dengan trigliserida serum 400 mg / 100 ml
Diskusi
Metode yang disajikan di sini untuk memperkirakanplasma LDL konsentrasimemberikan perkiraan yang masuk akal
yang berguna untuk banyak tujuan. Namun, ada tiga batasan penting dalam penggunaannya. Pertama, itu tidak
berlaku untuk sampel plasma yang mengandung kilomikron. Namun, sampel tersebut dicirikan oleh lapisan "krim" di
atas plasma yang telah disimpan pada suhu 4 # {176} C selama 18 jam atau lebih. Chylomicron adalah karakteristik
dari pola lipo-protein yang diklasifikasikan sebagai Tipe I dan V, di mana CLDL konsentrasitidak meningkat secara tidak
normal. Partikel yang memiliki penampilan serupa juga kadang-kadang terlihat pada Tipe III.
Kedua, teknik untuk memperkirakan CLDL memberikan hasil yang sangat tinggi pada pasien langka dengan
hiperlipoproteinemia tipe III. Dalam gangguan ini,
ILDLu-LDLg 'Nomor Standar nilai,
-penyimpangan,
kepercayaan 95% (n) Mean, CX) (SD)
int.rvald
Mean % errorf

96 .3 5.9 [-.9, 1.4] 204

1.3 11.9

[-.4, 2.9] lila

.4 12.9
[-2.0, 2.9)
95% int.rval toleransi [-13.0, 13.5) [-24.3, 26.8] [-27.6, 28.61 a Hanya orang dengan trigliserida plasma kurang dari 400mg / 100 ml sudah
termasuk.
LDLu = CLDL dihitung dengan ultrasentrifuge preparatif (lihat teks). LDLE = CLDL dihitung dengan prosedur estimasi (lihat teks). 'I1DLu - LDLEI =

nilai absolut dari (LDLE, -LDLE). d ± [t.value (.025, ni)) SD / n. ' ± [toleransi-nilai # {176}kesalahan - - [rata-rata (ratarata -(.95, .95, n))

LDLU-LDLEIJ dari LDL # {252}) SD. x 100 4,8

4% 8,8 3%9.8 7%
yang VLDL ada dua macam (12). Salah satunya adalah varietas normal yang memiliki rasio trigliserida terhadap
kolesterol sekitar lima. Bentuk lain adalah unik dalam memiliki mobilitas beta pada elektroforesis dan kandungan kolesterol
tinggi yang abnormal terhadap trigliserida. Pembagian total konsentrasi tri-gliserida plasma dengan faktor lima
menghasilkan nilai yang sangat rendah untuk “VLDL” dan nilai yang sangat palsu untuk “LDL” kontribusiterhadap total
kolesterol plasma. Jadi, ketika formula ini digunakan, pasien Tipe III dapat secara keliru diklasifikasikan sebagai Tipe II.
Lipoprotein anomali pada Tipe III dapat dideteksi dengan pasti hanya dengan isolasi ultra-sentrifugal dari VLDL dan
penentuan baik mobilitas elektroforesisnya atau kadar kolesterol dan trigliserida (1-3).
 Ketiga, CLDL tidak selalu dapat diperkirakan secara akurat ketika konsentrasi trigliserida plasma melebihi 400 mg /
100 ml. Perlu dicatat, bagaimanapun, bahwa hanya dua dari 204 pasien Tipe II dalam seri ini memiliki konsentrasi
trigliserida 400 mg / 100 ml atau lebih besar. Ini menunjukkan bahwa beberapa kesalahan dalam klasifikasi akan terjadi jika
pasien dengan trigliserida plasma melebihi 400 mg / 100 ml, tanpa adanya kilomikron, secara langsung diklasifikasikan
sebagai Tipe IV. Frekuensi kesalahan klasifikasi ini tidak diragukan lagi akan tergantung sebagian pada batas batas yang
digunakan dalam menentukanabnormal LDL yang konsentrasi.
Perlu dicatat bahwa meskipun ada kesepakatan yang baik antara estimasi dan pengukuransebenarnya CLDL yang,
pembagian sederhana trigliserida plasma oleh lima tidak memberikan estimasi yang sangat akurat dari VLDL kolesterolsaja,
bahkan pada normals atau pasien dengan Tipe II atau Tipe IV. Pada normals dan pasien dengan Tipe II rata-rata VLDL
konsentrasi kolesterolrendah (lihat Tabel 1), dan bahkan kesalahan absolut kecil sekalipun menghasilkan kesalahan
persentase besar. Pada Tipe IVrata-rata VLDL konsentrasi kolesterollebih tinggi, tetapi kesalahan persentase besar masih
terjadi. Namun, ketika estimasi CVLDL digunakan untuk menghitung CLDL , persentase kesalahan menurun ke tingkat yang
dapat diterima karena kesalahan terlarut dalam CVLDL estimasikecil relatif terhadap konsentrasi CLDL.
Yang menjadi perhatian adalah jumlah pasien Tipe IV dengan nilai yang relatif besar untuk ILDLU-

502 CLINICAL CHEMISTRY, Vol. 18, Tidak. 6, 1972

LDLEJ (lihatTabel 2 dan Gambar 3), yang tentu saja sangat memengaruhi kesalahan persen seluruh kelompok. Untuk
memeriksa masalah ini lebih dekat, kami mengidentifikasi semua pasien Tipe IV dengan nilai ILDLU- LDLEI lebih besar dari 20
mg / 100 ml dan seluruh profil laboratorium mereka pada tape dievaluasi kembali. Dari 16 orang yang diperiksa, 13 memiliki
bukti kesalahan metodologi yang tidak terdeteksi diidentifikasi oleh perbedaan besar antara pengukuran langsung dan tidak
langsung CVLDL yang sebenarnya (lihat Metode). Hal ini menunjukkan kemungkinan bahwa kesalahan persentase yang lebih besar
terlihat pada pasien Tipe IV mungkin sebagian disebabkan oleh kesalahan laboratorium dalam perhitungan ultrasentrifuge
LDL kolesteroldaripada ketidaktepatan prosedur estimasi yang lebih besar.

Referensi

1. Fredrickson, DS, Levy, RI, dan Lees, RS, lemak Trans- portdi lipoprotein-terpadu pendekatanuntuk mekanisme dan gangguan. Engi Baru. J. Med. 276, 32,
94, 148, 215, 273 (1967). 2. Fredrickson, DS, dan Levy, RI, hiperlipoproteinemia familial. Bab. 28 dalam The Metabolic Basis of Inherited Disease, edisi ke-3,
McGraw-Hill, New York, NY 1972, p 531. 3. Beaumont, JL, Carlson, LA, Cooper, GR, Fejfar, Z., Fredrickson, DS, dan Strasser, T., Klasifikasi hyperlipi- daemias dan
hyperlypoproteinemias. Banteng. WHO 43, 891 (1970). 4. Menetas, FT, dan Lees, RS, Metode praktis untuk analisis lipoprotein plasma. Advan. Lipid Res. 6, 1 (1968).
5.kolesterol total Prosedur N-24b.Auto-Analyzer Manual, Technicon Instruments Corp, Tarrytown, NY, 1964. 6. Kessler, G., dan Lederer, H., Pengukuran
fluorometri trigliserida. Dalam Otomasi dalam Analitik Kimia, Technicon Symposic 1965, LT Skeggs, Jr., et al., Eds. Mediad, New York, 1966, p 341. 7. Fredrickson,
DS, Levy, RI, dan Lindgren, FT, Sebuah perbandingan pola lipoprotein abnormal yang diwariskan sebagaimana didefinisikan oleh dua teknik yang berbeda. J. Clin.
Menginvestasikan. 47, 2446 (1968).

8. Draper, NR, dan Smith, H., Analisis Regresi Terapan, John Wiley and Sons, Inc., New York, NY, 1966, hal 33. 9. Dixon, WJ, dan Massey, F. J., Jr. ,
PengantarStatistik Analisis, McGraw-Hill, New York, NY, 1957, p 127. 10. Dixon, W. J., dan Massey, FJ, Jr., Pengantar Analisis Statistik, McGraw-Hill, New York , NY,
1957, hal 130.

11. Draper, NR, dan Smith, H., Analisis Regresi Terapan, John Wiley and Sons, Inc., New York, NY, 1966, p 7.

12. Quarfordt, S., Levy , RI, dan Fredrickson, DS, Tentang kelainan lipoprotein pada hiperlipoproteinemia tipe III. J. Clin. Menginvestasikan. 50, 754 (1971).