Diterjemahkan dari bahasa Jepang ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Reumatologi 2021; 60: 5224–5232

Reumatologi doi: 10.1093 / reumatologi / keab327

Publikasi Advance Access 2 April 2021

Artikel asli
Efek anti asam urat substansial yang diberikan oleh varian
disfungsional yang umum dan langka dari URAT1 / SLC22A12
2,,
Yu Toyoda 1,2,, Yusuke Kawamura2,, Akiyoshi Nakayama
Hirofumi Nakaoka3,4, Toshihide Higashino2, Seiko Shimizu2, Hiroshi OoyamaLima,
Keito Morimoto1, Naohiro Uchida1, Ryuichiro Shigesawa1, Kenji Takeuchi6, Ituro

Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021

Inoue3, Kimiyoshi Ichida7,8, Hiroshi Suzuki1, Nariyoshi Shinomiya Tappei Takada2,1,*
2,*
dan Hirotaka Matsuo

Abstrak
Tujuan. Asam urat, yang disebabkan oleh peningkatan kronis kadar asam urat serum, adalah bentuk paling umum dari
radang sendi. Pengangkut kaset pengikat ATP G2 (ABCG2 / BCRP)pada risiko asam urat telah dipelajari, tetapi sedikit
perhatian telah diberikan pada efek varian umum (rs121907892, p.W258X) dan langka pengangkut urat 1 (URAT1 /
SLC22A12) pada asam urat, meskipun varian disfungsional dari URAT1 telah diidentifikasi sebagai penyebab patofisiologi
hipourisemia ginjal.
Metode. Untuk mengatasi masalah penting tetapi diabaikan ini, kami menyelidiki efek dari ini URAT1 varian pada kerentanan
gout, menggunakan sekuensing ekson yang ditargetkan pada 480 kasus gout yang didefinisikan secara klinis dan 480 kontrol
pria Jepang dalam kombinasi dengan serangkaian analisis fungsional yang baru diidentifikasi URAT1 varian.
Hasil. Hasil kami menunjukkan bahwa varian disfungsional yang umum dan langka dari URAT1 nyata menurunkan risiko gout
(OR 0,0338, timbal balik OR 29,6, P ¼ 7.66-10-8). Menariknya, kami juga menemukan bahwa URAT1-efek perlindungan terkait
pada asam urat melampaui ABCG2-efek penyebab terkait (OR 2.30-3.32).Temuan kami mengungkapkan hanya satu varian
disfungsional dari URAT1 memiliki efek anti asam urat yang substansial, bahkan dengan adanya varian penyebabABCG2, 'gen
asam urat'.
Kesimpulan. Temuan kami memberikan pemahaman yang lebih baik tentang asam urat / hiperurisemia dan
etiologinya yang sangat relevan dengan perawatan kesehatan yang dipersonalisasi. URAT1 diidentifikasi dalam
penelitian ini mendukung konsep genetik dari model 'Penyakit Umum, Varian Umum Ganda dan Varian Langka'.

Kata kunci: transporter reabsorpsi urat, kerentanan gout, faktor risiko genetik, hipotesis Common Disease
CL INICAL

Common Variant, Common Disease Multiple Rare Variant hipotesis

SAINS

Pesan kunci reumatologi

.. Varian disfungsional yang umum dan langka dari URAT1 / SLC22A12 memiliki efek anti gout yang substansial.
.. Efek anti asam urat dari URAT1 melebihi efek gout-promotive dari ABCG2, gen asam urat.
.. Kami menunjukkan model 'Penyakit Umum, Beberapa Varian Umum dan Langka' baru dengan dua gen.

pengantar telah dilakukan untuk mengidentifikasi lokus genetik yang

mempengaruhi kadar asam urat serum (SUA).1, 2] dan/atau
Asam urat adalah bentuk radang sendi yang disebabkan risiko asam urat [3– –7] Ini mengungkapkan pentingnya
oleh hiperurisemia.Beberapa studi asosiasi genome patofisiologi transporter urat pada penyakit terkait urat [8]
Studi terbaru terutama berfokus pada variasi yang
1Departemen Farmasi, Rumah Sakit Universitas Tokyo, Tokyo,
2Departemen Fisiologi Integratif dan Kedokteran Bio-Nano, Fakultas
Kedokteran Pertahanan Nasional, Tokorozawa, Saitama, 3Divisi Genetika
Dikirim 26 Januari 2021; diterima 28 Maret 2021
Manusia, Departemen Genetika Terpadu, Institut Genetika Nasional,
Mishima, Shizuoka, EmpatDepartemen Penelitian Genom Kanker, Institut Korespondensi ke: Hirotaka Matsuo, Departemen Fisiologi Integratif dan
Sasaki, Yayasan Sasaki, LimaKlinik Gerbang Timur Ryougoku, Tokyo, 6 Kedokteran Bio-Nano, Sekolah Tinggi Kedokteran Pertahanan Nasional,
Departemen Kedokteran Pencegahan, Sekolah Pascasarjana Kedokteran Tokorozawa, Saitama, Jepang E-mail: hmatsuo.ndmc@gmail.com
Universitas Nagoya, Nagoya, Aichi,
YT, YK dan AN memberikan kontribusi yang sama.
7Departemen Patofisiologi, Tokyo University of Pharmacy and Life
kan

Sciences and 8Divisi Ginjal dan Hipertensi, Fakultas Kedokteran

Universitas Jikei, Tokyo, Jepang * TT dan HM berbagi kepengarangan senior.

VC Penulis (s) 2021. Diterbitkan oleh Oxford University Press atas nama British Society for Rheumatology.
Ini adalah artikel Akses Terbuka yang didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Non-Komersial Atribusi Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/), yang mengizinkan penggunaan kembali, distribusi, dan
reproduksi dalam media apa pun, asalkan karya aslinya dikutip dengan benar. Untuk penggunaan kembali secara komersial, silakan hubungi journals.permissions@oup.com

meningkatkan kerentanan genetik: misalnya, mengenai
Pengangkut kaset pengikat ATP G2 (ABCG2), pengekspor urat
mengeluarkan urat dari tubuh yang disfungsinya ditandai
dengan baik sebagai faktor risiko genetik untuk hiperurisemia
dan asam urat [9– –12], tidak hanya umum tetapi juga varian
langka dari 'gen asam urat' ini telah diperiksa [9, 13, 14
Dibandingkan dengan kasus-kasus seperti itu, ada sedikit
informasi tentang hubungan antara efek perlindungan asam
urat yang diharapkan dan variasi genetik dalam proses
penanganan asam urat yang berkontribusi terhadap
penurunan kadar SUA.
Pada manusia, selain produksi asam urat endogen,
reabsorpsi urat ginjal memberikan kontribusi yang
signifikan terhadap pengaturan kadar SUA. Proses
terakhir dalam penanganan urat dimediasi oleh
reabsorber urat ginjal yang dikodekan oleh pengangkut
urat 1 (URAT1,juga dikenal sebagai SLC22A12) gen, yang
merupakan target molekul obat penurun urat [15Varian
disfungsionalnya juga dikenal sebagai penyebab
patofisiologis hipourisemia ginjal (RHUC).15– –17] Namun,
meskipun prevalensi gout yang tinggi [8], sedikit
perhatian telah diberikan pada efek variasi genetik dari
URAT1 pada risiko gout. Kami di sini mengatasi masalah
ini menggunakan pendekatan genetika klinis untuk gout
dalam kombinasi dengan analisis fungsional dari
transporter urat URAT1. Temuan penelitian ini
menjelaskan signifikansi genetik varian umum dan langka
dari asam urat. URAT1 sebagai faktor anti asam urat.
Metode
Pasien dan analisis genetik
Penelitian ini telah disetujui oleh Komite Etika institusional
(National Defense Medical College dan Nagoya University,
Jepang), dan persetujuan tertulis diperoleh dari semua
pesertanya. Semua prosedur dilakukan sesuai dengan
Deklarasi Helsinki. Kasus kami adalah 480 orang Jepang
laki-laki dengan gout, direkrut dari Ryougoku East Gate
Clinic (Tokyo, Jepang).Semua telah didiagnosis secara
klinis dengan gout primer sesuai dengan kriteria yang
ditetapkan oleh American College of Rheumatology [18]
Sebagai kontrol, 480 pria Jepang tanpa hiperurisemia
(tingkat SUA)
> 7,0 mg/dl) atau riwayat asam urat direkrut dari
partisipan di wilayah Shizuoka dari Japan Multi-
Institutional Collaborative Cohort Study (J-MICC Study)[19,
20].Karakteristik klinis ditunjukkan pada Tabel 1Selain itu,
kelompok kontrol [mean (SD) usia,
53,0 (7,9) tahun] lebih tua dibandingkan dengan kelompok kasus [46,2
(9,8) tahun] Karena penuaan adalah salah satu faktor penting untuk
meningkatkan SUA dan / atau risiko asam urat, untuk menghindari bias
penyesuaian berlebihan, kami melakukan tidak melakukan standarisasi
usia dalam penelitian ini.
Untuk menjelajahi varian non-sinonim dari URAT1, kami
melakukan pengurutan ekson yang ditargetkan dari URAT1.
Metode pengurutan target serta pemanggilan varian dan anotasi
dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya [13]. Untuk
mengkonfirmasi satu umum (W258X) dan 10 langka non-
https://academic.oup.com/rheumatology
Efek perlindungan asam urat URAT1 varian
TMAMPU 1 Karakteristik peserta
Kasus Kontrol
Nomor 480 480
Usia (tahun) 46.2 (9.8) 53.0 (7.9)
Indeks massa tubuh (kg / m)2) 25.3 (3.7) 23.2 (2.6)
480 kasus gout dan 480 kontrol normouricaemic laki-laki
Jepang dianalisis Data dinyatakan sebagai sarana (S..D.).
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021
varian sinonim, pengurutan langsung menggunakan Penganalisis
Genetik 3130xl (Biosistem Terapan, Foster City, CA, USA) dilakukan
sesuai dengan penelitian kami sebelumnya [dua puluh satu].
Fraksi ekskresi asam urat (FEUA, dihitung sebagai rasio
bersihan urat / kreatinin) dan SUA diukur untuk 480
kontrol pria Jepang. URAT1 varian di FEUA dan SUA juga
diselidiki.
Bahan:
Bahan kritis dan sumber daya yang digunakan dalam penelitian ini
dirangkum dalam Tabel Tambahan S1, Tersedia diReumatologi
online Semua bahan kimia lain yang digunakan tersedia secara
komersial dan memiliki tingkat analitis.
Konstruksi plasmid
Kerangka baca terbuka (ORF) URAT1 manusia panjang penuh
(aksesi NCBI; NM_144585.3) di pcDNA3.1 (th) plasmid
diamplifikasi dengan Xho saya situs dan Xba Saya situs
terlampir di 50--dan 30-end, masing-masing, oleh PCR, dan
kemudian dimasukkan ke dalam plasmid vektor pEGFP-C1
(Clontech Laboratories, Palo Alto, CA, USA) untuk ekspresi
yang digerakkan oleh CMV dari protein fluoresen hijau yang
ditingkatkan (EGFP) -URAT1 dalam sel mamalia seperti pada
penelitian sebelumnya [dua puluh dua] Menggunakan teknik
mutagenesis terarah-situs, delapan mutan URAT1 (P79L,
R90H, Y180X, A227T, W258X, Q297X, F379L dan Q533K)
dibangun dengan vektor pEGFP-C1 dengan cara yang sama
seperti pada penelitian kami sebelumnya [13].
Pengenalan semua mutasi dikonfirmasi oleh pengurutan
R
penuh menggunakan BigDyeV Terminator v3.1 (Biosistem
Terapan) dengan Biosistem TerapanV R 3130 Genetika
Analyzer (Biosistem Terapan) mengikuti protokol pabrikan
Sebelum eksperimen lebih lanjut dijelaskan di bawah,
semua plasmid diperoleh dari lot yang sama.
Budaya sel
Sel 293A yang diturunkan dari ginjal embrionik manusia
disimpan dalam Medium Elang Modifikasi Dulbecco
(Nacalai Tesque, Kyoto, Jepang) yang dilengkapi dengan
10% serum janin sapi (Biowest, Nuaillé, Prancis), dan 1%
penisilin-streptomisin (Nacalai Tesque ) ), 2 mM L-
glutamine (Nacalai Tesque), dan 1-Non-Essential
5225
Yu Toyoda dkk.
Asam Amino (Life Technologies, Tokyo, Jepang) pada 37 C
dalam atmosfer yang dilembabkan 5% (v / v) CO2 di udara
Dua puluh empat jam setelah sel disemai (0,92-10)Lima
sel / cm2), Setiap plasmid vektor ditransfusikan ke dalam sel 293A
menggunakan polyethylene'MAX' (PEI-MAX) (Polysciences,
Warrington, PA, USA) seperti yang dijelaskan sebelumnya [dua
puluh tiga].
Persiapan protein lisat dan imunoblotting
Setelah persiapan lisat sel utuh, untuk memeriksaN-
terkait status glikosilasi dari setiap protein URAT1, sampel
lisat seluruh sel diperlakukan dengan Peptida N-
glikosidase F (PNGase F) (New England Biolabs, Ipswich,
MA, USA) seperti yang dijelaskan sebelumnya [dua puluh
tiga].Konsentrasi protein ditentukan dengan
menggunakan PierceTM BCA Protein Assay Kit (Thermo
Fisher Scientific, Kanagawa, Japan) dengan BSA sebagai
standar sesuai dengan protokol pabrikan. USA) dengan
elektroblotting pada 15 V selama 60 menit Menggunakan
assay yang sesuai (Tabel Tambahan S1, Tersedia di
Reumatologi online), deteksi imunoblot dilakukan seperti
yang dijelaskan dalam penelitian kami sebelumnya [dua
puluh tiga].
Pengamatan mikroskopis confocal
Pengamatan mikroskopis pemindaian laser confocal
dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya [dua puluh
tigaSingkatnya, 48 jam setelah transfeksi, sel 293A
difiksasi dengan paraformaldehyde 4% selama 15 menit
pada suhu kamar. Sel-sel tersebut kemudian diperlakukan
dengan konjugat aglutinin bibit gandum fluoresen (WGA,
R
Alexa Fluor)V 594 konjugat; Thermo Fisher Scientific)
Setelah 0,02% (b / v) perlakuan Triton-X100, inti sel
divisualisasikan dengan TO-PRO-3 Iodide (Molecular
Probe, Eugene, OR, USA). Sel yang diwarnai dipasang
dengan Media Pemasangan VECTASHIELD (Vector
Laboratories, Burlingame, CA, USA), setelah itu fluoresensi
dideteksi menggunakan Mikroskop Pemindaian Laser
Confocal FV10i (Olympus, Tokyo, Jepang).
Uji serapan urat menggunakan sel 293 A yang mengekspresikan
URAT1
Uji serapan urat menggunakan sel 293A yang mengekspresikan URAT1
dilakukan dengan cara yang sama seperti pada penelitian kami
sebelumnya [dua puluh tiga] Singkatnya, 48 jam setelah transfeksi
plasmid, sel-sel dicuci dua kali dengan Cl----penyangga transpor bebas
(Buffer T2: 125 mM Na-glukonat, 4,8 mM K-glukonat, 1,2 mM KH2PO
Empat, 1,2 mM DDLEmpat, 1,3 mM Ca-glukonat, 25 mM HEPES, 5,6 mM D-
glukosa dan pH 7,4) dan diinkubasi dalam Buffer T2 selama 15 menit
pada 37 C. Sel-sel tersebut kemudian digunakan lebih lanjut selama 20
detik dalam Buffer T2 segar yang telah dipanaskan sebelumnya yang
mengandung 5 akuM [8-14C]-urat Dengan demikian, sel-sel dicuci dua
kali dengan Buffer T2 dingin dan kemudian dilisiskan dengan 500 akuL
0,2 M NaOH, kemudian dinetralkan dengan 100 akuL HCl 1 M Kami
mengukur radioaktivitas dalam lisat menggunakan sintilator cair (Tri-
Carb 3110TR;
5226
PerkinElmer, Waltham, MA, USA).Konsentrasi protein
ditentukan menggunakan PierceTM Kit Uji Protein BCA
seperti dijelaskan di atas.
Aktivitas pengangkutan urat dihitung sebagai klirens yang
tergabung (akuL / mg protein / menit): [kadar asam urat
(DPM / mg protein / menit) / kadar asam urat dalam
campuran inkubasi (DPM /akuL)] Aktivitas pengangkutan urat
yang bergantung pada URAT1 dihitung dengan
mengurangkan aktivitas pengangkutan urat dari sel tiruan
dari aktivitas sel yang mengekspresikan URAT1.
Analisis statistik
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021
Uji statistik yang berbeda digunakan untuk eksperimen
yang berbeda seperti yang dijelaskan dalam legenda
Gambar, yang mencakup jumlah ulangan biologis (n).
Semua analisis statistik dilakukan menggunakan Excel
2019 (Microsoft, Redmond, WA, USA) dalam analisis
fungsional Perangkat lunak R (versi 4.0.1) (http://www.r-
project.org/) Digunakan untuk perhitungan uji eksak
Fisher.Analisis regresi lainnya dilakukan dengan SPSS
v.22.0J (IBM Jepang, Tokyo, Jepang).Analisis regresi logistik
dengan seleksi maju (rasio kemungkinan) dilakukan untuk
menyelidiki kerentanan gout yang terkait dengan
disfungsional varian dari URAT1 dan ABCG2. Analisis
regresi linier dilakukan untuk mengevaluasi efek
disfungsional URAT1 varian di FEUA dan SUA. Signifikansi
statistik didefinisikan dalam hal P-nilai di bawah 0,05 atau
0,01.
Hasil
Varian umum dan langka dari URAT1 terdeteksi oleh
pengurutan ekson yang ditargetkan
Untuk mengeksplorasi URAT1 varian yang terkait dengan asam
urat, pengurutan ekson yang ditargetkan dari URAT1 dilakukan
dengan 480 kasus gout yang terdefinisi secara klinis dan 480
kontrol normouricaemic laki-laki Jepang.Kami mengidentifikasi
satu varian umum (W258X) dan 10 varian non-sinonim langka
URAT1 (Meja 2). Karena tiga varian (Q382L, L418R dan V547fsL)
dilaporkan tidak berfungsi [16, dua puluh empat], kami melakukan
serangkaian ekspresi, lokalisasi, dan analisis fungsional dari enam
varian langka yang tidak ditandai (P79L, Y180X, A227T, Q297X,
F379L, dan Q533K) selain varian W258X (umum) dan R90H (jarang)
yang sering diamati pada pasien RHUC Jepang, seperti yang
dijelaskan di bawah ini.
Karakterisasi fungsional varian URAT1
Untuk menguji efek dari delapan varian yang ditemukan dalam
analisis genetik kami pada fungsi URAT1 sebagai pengangkut urat,
kami mengekspresikan setiap varian URAT1 yang ditandai dengan
EGFP dalam sel 293A, garis sel ginjal manusia.Pertama, untuk
mengkonfirmasi ekspresi protein, kami melakukan analisis
imunoblot sampel lisat sel utuh menggunakan antibodi anti-EGFP (
Gambar 1A). Seperti yang diharapkan, URAT1 WT dimatangkan
sebagai glikoprotein yang dibuktikan dengan adanya pita
imunoreaktif sensitif PNGase F pada kisaran berat molekul tinggi.
Hasil kami mengungkapkan hanya tiga
https://academic.oup.com/rheumatology
 TMAMPU 2 Semua varian non-sinonim yang umum dan langka dari URAT1 diidentifikasi dalam penelitian ini dan fungsi transportasi uratnya

https://academic.oup.com/rheumatology
Jenis varian nomor rs PosisiA urutan DNA perubahan AA KasusC (n) MAF di KontrolC (n) MAF di Mengangkut MAF di
mengubahb b kasus kasus kontrol fungsi (%) JepangD
(%) (%) (%)

Varian umum rs121907892 64361219 G774A W258X 0 0 16 1.77 b b0 2.28

Varian langka rs757926758 64359264 C236T P79L 1 0.104 0 0 108.8 tidak

rs121907896 64359297 G269A R90H 0 0 2 0.208 0F 0,339

rs1286450383 64360910 C540A Y180X 0 0 2 0.208 0F tidak

rs201136391 64361124 G679A A227T 0 0 2 0.208 48.3 0.248

tidak 64366046 C889T Q297X 0 0 1 0.104 0F 0,0558
tidak 64367214 C1137G F379L 0 0 1 0.104 3.5 tidak

rs765990518 64367222 A1145T Q382L 0 0 2 0.208 3.8G tidak

rs121907895 64367330 T1253G L418R 0 0 1 0.104 1.9G 0,167

tidak 64368409 C1597A Q533K 1 0.104 0 0 57.2 0,0418
tidak 64368997 1639_1643del V547fsL 0 0 1 0.104 5.7G tidak

Jumlah langka 2 12
pembawa variane

Jumlah total 480 480

peserta

APosisi SNP didasarkan pada perakitan GRCh37. b bPenomoran nukleotida didasarkan pada urutan referensi DNA dari GenBank (kode aksesi NM_144585). CRingkasan jumlah peserta
pembawa homozigot dan heterozigot. Kecuali untuk satu peserta homozigot W258X, hanya pembawa heterozigot atau tipe liar yang diamati. Tidak ada individu dengan lebih dari satu
varian langka. DMAF dalam bahasa Jepang mengacu pada Basis Data Variasi Genetik Manusia (ver. 2.30) [33]. eJumlah pembawa varian langka dari URAT1. Hanya P79L yang dikeluarkan
dari varian disfungsional dalam analisis selanjutnya (lihat Tabel 3). FNilai dihitung sebagai di bawah 0. GNilai berasal dari Wakida dkk.[16].AA: asam amino; ATAU: rasio odds; MAF:
frekuensi alel minor; NA: tidak ditetapkan.
Efek perlindungan asam urat URAT1 varian

5227
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021
Yu Toyoda dkk.

FAKU G1 Karakterisasi fungsional dari varian umum dan langka dari URAT1 diidentifikasi dalam penelitian ini

Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021

(A) Deteksi imunoblot Arrowhead, URAT1 matang sebagai glikoprotein; A-Tubulin, kontrol pemuatan Tiga varian yang
dicirikan oleh kodon stop yang didapat (Y180X, W258X dan Q297X) menghasilkan produksi protein terpotong; dua varian
(R90H dan F379L) tidak matang; tipe liar (WT) dan tiga varian (P79L ), A227T dan Q533K) dinyatakan sebagai bentuk
matang. (B) Mikroskop confocal Inti diwarnai dengan TO-PRO-3 iodida (abu-abu); membran plasma (PM) diberi label
dengan Alexa FluorV WGA terkonjugasi 594 (merah). Batang, 5 akum. Lima varian
R

(R90H, Y180X, W258X, Q297X dan F379L) hanya sedikit terlokalisasi pada PM. (C) Uji fungsional. Penggabungan urat
berlabel radio ke dalam sel yang mengekspresikan setiap varian URAT1 diukur dan aktivitas transportasi urat yang
bergantung pada URAT1 dihitung. Data ditampilkan sebagai% dari WT dan dinyatakan sebagai sarana (S..D.), n ¼ 3. , P <
0,01; ,P < 0,05 vs Kontrol WT (satu sampel T-tes).

(P79L, A227T dan Q533K) varian akan diekspresikan Menurunkan efek disfungsional URAT1 varian pada
sebagai glikoprotein matang selain protein WT, level SUA
sementara yang lain (R90H, Y180X, W258X, Q297X dan
Kami selanjutnya menyelidiki lebih lanjut dampak patofisiologis
F379L) menunjukkan sedikit sinyal yang sesuai dengan
dari varian yang diidentifikasi dari URAT1 dengan fokus pada
bentuk matang. dengan mikroskop laser confocal, kami
penanganan urat ginjal pada manusia (Gambar 2.Dalam kohort
memeriksa lokalisasi intraseluler dari setiap varian URAT1
kami, 15 pembawa heterozigot dan satu pembawa homozigot dari
dalam sel 293A (Gambar 1B). Lima varian (R90H, Y180X,
varian disfungsional umum W258X ditemukan pada 480 kontrol
W258X, Q297X dan F379L), yang tidak dimatangkan
(3,33%); tidak ada pembawa yang ditemukan pada 480 kasus gout.
sebagai glikoprotein, hampir tidak terlokalisasi pada
Dari sembilan varian disfungsional (R90H, Y180X, A227T, Q297X,
membran plasma, bertentangan dengan WT.
F379L, Q382L, L418R, Q533K dan V547fsL), 12 subjek kontrol
Terakhir, kami menyelidiki aktivitas pengangkutan urat
adalah pembawa heterozigot untuk salah satu varian langka
dari setiap varian URAT1 dalam uji serapan berbasis sel (
(2,50%, 12 heterozigot di antara 480 kontrol).Hanya satu pasien
Gambar 1CSeperti yang diharapkan, lima varian URAT1
asam urat adalah pembawa heterozigot Q533K (0,208% dari 480 )
yang belum matang (R90H, Y180X, W258X, Q297X dan
kasus asam urat). Operator dengan varian disfungsional ini
F379L) secara fungsional tidak berfungsi sebagai
memiliki FE . yang lebih tinggi secara signifikanUA (Gambar 2A) dan
transporter urat.Aktivitas transportasi urat A227T dan
tingkat SUA yang lebih rendah (Gambar 2B) dibandingkan kontrol
Q533K kira-kira setengah dari mutasi URAT1 WT hampir
tanpa varian ini (P ¼ 6.14-10-8 dan 2.98-10-20, masing-masing). Hasil
tidak mempengaruhi URAT1 fungsi; oleh karena itu kami
kami menunjukkan bahwa varian disfungsional heterozigot yang
mengecualikan varian ini dari analisis asosiasi berikutnya.
umum dan langka ini URAT1

5228 https://academic.oup.com/rheumatology

FAKU G.2 Dampak fisiologis dari varian umum dan langka dari URAT1 diidentifikasi dalam penelitian ini
Varian disfungsional dari URAT1 meningkatkan FE secara signifikanUA (A) dan penurunan SUA (B) di antara 480 kontrol pria
Jepang.*P < 0,001. Bar menunjukkan berarti (S..E.).
secara drastis mengurangi jumlah bersih urat yang diserap
kembali dari urin ke dalam darah, menghasilkan penurunan
tingkat SUA yang nyata yang akan memberikan efek pelindung
asam urat yang substansial.
Efek anti asam urat yang diberikan oleh varian umum dan
langka dari URAT1
Akhirnya, kami membahas efek dari URAT1 varian pada risiko
gout Analisis asosiasi bertingkat (Tabel 3) menunjukkan
sembilan varian disfungsional langka untuk secara signifikan
mengurangi risiko asam urat (OR 0,0788, timbal balik OR
12,7,) P ¼ 1.47-10-3). Semua varian disfungsional yang umum
dan langka dari URAT1 secara drastis menurunkan risiko
asam urat (OR 0,0338, timbal balik OR 29,6, P ¼
7.66-10-8). Selanjutnya, untuk mendapatkan wawasan
kuantitatif tentang efek anti-asam urat yang diberikan oleh
varian disfungsional dari URAT1 terhadap efek promosi asam
urat yang disebabkan oleh ABCG2 (gen gout), kami melakukan
analisis regresi logistik multivariat gout dengan varian
disfungsional dari URAT1 dan ABCG2. Hasilnya
mengungkapkan varian disfungsional dari URAT1 memiliki
efek perlindungan dan manfaat yang substansial (OR 0,0339,
timbal balik OR 29,5) yang melebihi efek goutpromotive dari
ABCG2 (ATAU 2.30–3.32) (Tabel 4). Temuan ini menunjukkan
bahwa varian yang umum dan langka dari URAT1 memiliki
efek anti-asam urat yang substansial terhadap penyakit asam
urat yang umum.
Diskusi
Dalam penelitian ini, menggunakan kohort Jepang dari 480 pasien
dengan gout yang didefinisikan secara klinis dan jumlah kontrol
yang sama tanpa hiperurisemia atau riwayat gout, kami
mengeksplorasi varian eksonik non-sinonim dariURAT1 (Meja 2).
Serangkaian uji fungsional, bersama dengan penelitian
sebelumnya, mengungkapkan bahwa semua varian, kecuali varian
P79L yang ditemukan dalam penelitian ini, adalah
https://academic.oup.com/rheumatology
Efek perlindungan asam urat URAT1 varian
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021
secara fungsional nol atau dikurangi (Gambar 1); varian
seperti itu dariURAT1 memiliki efek anti asam urat yang cukup
signifikan untuk membatalkan risiko asam urat yang
diberikan oleh varian disfungsional dari ABCG2 (Tabel 4).
Selain itu, karena kami membahas populasi Jepang, kami
berhasil mengidentifikasi beberapa novel dan varian langka
yang penting secara patofisiologis dari URAT1 yang tidak
ditemukan pada populasi Eropa dan Afrika Amerika dalam
penelitian sebelumnya [dua puluh limaSebuah studi baru-
baru ini membahas kohort gout / hiperurisemia di Republik
Ceko juga tidak menemukan URAT1 varian [26], yang
mendukung pentingnya melakukan studi genetik di berbagai
populasi etnis. Sejauh pengetahuan kami, ini adalah studi
pertama yang membuat perbandingan kuantitatif efek
genetik varian umum dan langka antara URAT1dan ABCG2
dalam kombinasi dengan validasi fungsional.
Kami sebelumnya melaporkan varian disfungsional
umum dan beberapa langka dari ABCG2 Menjadi
kontributor utama gout sebagai penyakit umum,
mendukung hipotesis 'Penyakit Umum, Varian Umum
(CDCV)' dan 'Penyakit Umum, Varian Langka Ganda
(CDMRV)'. , Model Beberapa Varian Umum dan Langka
(CDMCRV)' [13] Perjalanan, varian langka disfungsional
dari URAT1 telah dilaporkan menjadi penyebab
patofisiologis RHUC, gangguan herediter [27Melalui
analisis asosiasi bertingkat dan analisis regresi logistik
multivariat kerentanan asam urat dengan varian
disfungsional URAT1 dan ABCG2,penelitian ini
mengungkapkan bahwa varian disfungsional yang umum
dan banyak yang langka dari URAT1 secara signifikan
mengurangi kerentanan asam urat, dan bahwa efek
perlindungannya secara independen mengalahkan efek
penyebab umum (Q126X dan Q141K) dan beberapa varian
langka dari asam urat. ABCG2. Selain studi terbaru yang
melaporkan varian pelindung umum terhadap beberapa
penyakit umum [28, 29], penelitian ini adalah yang
pertama mengungkapkan beberapa varian pelindung
langka dari URAT1 terhadap penyakit umum
5229
5230
Yu Toyoda dkk.

TMAMPU 3 Varian disfungsional yang umum dan langka dari URAT1 / SLC22A12 sangat mengurangi kerentanan asam urat

Varian disfungsional dari URAT1 Kasus Kontrol

Nomor PembawaA frekuensib b (%) Nomor PembawaA frekuensib b (%) P-nilai ATAU (95% CI) Timbal Balik ATAU (95% CI)

Semua varian langka 480 1 0.208 464 12 2.59 1.47-10–3 0,0788 (0,00184, 0,536) 12,7 (1,86, 543,4)
Semua varian umum dan langka 480 1 0.208 480 28 5.83 7.66-10–8 0,0338 (0,000827, 0,206) 29,6 (4,85, 1209.0)

Satu varian umum W258X dan sembilan varian langka (R90H, Y180X, A227T, Q297X, F379L, Q382L, L418R, Q533K dan V547fsL) diidentifikasi sebagai varian disfungsional dariURAT1 /
SLC22A12 (detail ada di Meja 2). Sebuah varian non-sinonim P79L dari URAT1 Uji eksak Fisher digunakan untuk perhitungan untuk dikecualikan di sini karena fungsinya yang tidak diubah.
P-nilai-nilai. AJumlah operator dengan varian non-sinonim disfungsional di URAT1. b bPersentase pembawa dalam populasi kasus atau kontrol Freq: frekuensi, ATAU: rasio odds.

TMAMPU Empat Analisis regresi logistik multivariat kerentanan asam urat dengan varian disfungsional URAT1 dan ABCG2

Variabel bb ATAU (95% CI) P-nilai

Varian disfungsional dari URAT1 --3.39 0,0339A (0,00454, 0,253) 9.68-10-Empat

Q126X (Varian umum dari ABCG2) 1.20 3,32 (1,97, 5,59) 6.20-10–6
Q141K (Varian umum dari ABCG2) 0.83 2,30 (1,88, 2,82) 1.26-10–15
Varian langka dari ABCG2 0,90 2,47 (1,29, 4,73) 6.62-10–3

AOR timbal balik (rasio odds) dari varian disfungsional umum dan langka dari URAT1 adalah 29,5. b b adalah untuk per salinan alel.

https://academic.oup.com/rheumatology
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021

gout Temuan kami juga dapat memperkuat hipotesis
CDCV dan CDMRV serta model CDMCRV.ABCG2 dan asam
urat [13], penelitian ini menunjukkan bahwa beberapa
varian umum dan langka tidak hanya ABCG2tetapi juga
URAT1 sangat terkait dengan asam urat, menunjukkan
model CDMCRV baru oleh dua gen(ABCG2 dan URAT1).
Selain itu, hasil penelitian ini akan memperdalam
pemahaman tentang variasi genetik yang terkait dengan
risiko RHUC. Sedangkan frekuensi RHUC relatif tinggi di
Asia Timur, terutama di Jepang (0,3%) [27], kelainan
herediter ini juga dilaporkan dalam bahasa Yahudi [30]
dan Roma Eropa [31Selain itu, pasien RHUC telah
dijelaskan dalam berbagai kelompok etnis termasuk Arab
Israel, Yahudi Irak, Kaukasia, dan Roma Eropa dan di
negara-negara yang secara geografis tidak berdekatan [
32] Selain risiko RHUC, dalam konteks ini, temuan kami
juga akan bermakna untuk mengevaluasi risiko gout pada
populasi non-Asia.
Keterbatasan penelitian ini adalah sebagai berikut: Untuk
mengkonfirmasi model CDMCRV lebih kuat, identifikasi varian
yang lebih langka dari URAT1 akan dibutuhkan Efek
perlindungan yang diharapkan dari varian disfungsional
langka dari URAT1 terhadap asam urat juga harus dinilai
dalam studi masa depan, yang akan membantu
pengembangan obat genom yang dipersonalisasi untuk
subjek dengan:URAT1 varian langka terhadap asam urat.
Kesimpulannya, varian disfungsional umum dan
multipel langka dari URAT1 temuan kami memberikan
wawasan yang signifikan ke dalam faktor genetik yang
protektif dan secara substansial mempengaruhi risiko
asam urat.
Ucapan Terima Kasih
Kami ingin menyampaikan penghargaan kami kepada semua
yang mengambil bagian dalam penelitian ini. Kami berhutang
budi kepada M. Miyazawa, K. Morichika, dan M. Seki (Sekolah
Tinggi Kedokteran Pertahanan Nasional) untuk analisis
genetik. Kami terutama berterima kasih kepada anggota J-
Studi MICC Wilayah Shizuoka yang telah mendukung
penelitian ini dan juga berterima kasih kepada M. Hamamura,
M. Senda, K. Ooyama (Klinik Gerbang Timur Ryougoku) dan N.
Hamajima (Universitas Nagaya) untuk pengumpulan sampel
kasus dan kontrol YT, HN, TT dan HM menyusun dan
merancang penelitian ini.YK, AN, HN, TH, SS dan HM
melakukan analisis genetik dan statistik.YT,
KM, NU, RS dan TT melakukan analisis fungsional HO, KW
dan HM mengumpulkan dan menganalisis data klinis
peserta TH, II, HS, KI dan NS memberikan masukan
intelektual dan membantu penyusunan naskah YT, YK ,
AN, TT dan HM menulis naskahnya. YT, YK dan AN
berkontribusi sama untuk pekerjaan ini. TT dan HM
menyelenggarakan studi kolaboratif ini sebagai penulis
yang sesuai. Semua penulis telah membaca dan
menyetujui versi akhir naskah.
https://academic.oup.com/rheumatology
Efek perlindungan asam urat URAT1 varian
Pendanaan: Studi ini didukung oleh hibah dari
Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Olahraga, Sains
dan Teknologi (MEXT) Jepang, termasuk MEXT KAKENHI
(No. 17H04128, 17K19864 dan 19K22786) dan Area
Prioritas (No. 17015018) dan Area Inovatif (No. .221S0001
dan 221S0002) dan Japan Society for the Promotion of
Science (JSPS) Hibah KAKENHI (No. 16H01808, 16H06277,
16H06279, 18KK0247, 19K16441, 20K23152, 20H00566
dan 20H00568) serta Yayasan Asam Urat dan Asam Urat
Jepang, Takeda Science Foundation, Kawano Masanori
Memorial Foundation untuk Promosi Pediatri, Suzuken
Memorial Foundation, dan Mochida Memorial Foundation
Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021
for Medical and Pharmaceutical Research.
Pernyataan pengungkapan: Para penulis telah menyatakan tidak ada
konflik kepentingan.
Pernyataan ketersediaan data
Data tersedia atas permintaan yang wajar.
data pelengkap
data pelengkap tersedia di Reumatologion line.
Referensi
1 Tin A, Marten J, Halperin Kuhns VL dkk.; Program Jutaan
Veteran VA. Gen target, varian, jaringan, dan jalur
transkripsi yang memengaruhi kadar urat serum
manusia. Nat Genet 2019; 51: 1459–74.
2 Nakatochi M, Kanai M, Nakayama A dkk. Meta-analisis genom
mengidentifikasi beberapa lokus baru yang terkait dengan
kadar asam urat serum pada individu Jepang Commun Biol
2019; 2: 115.
3 Matsuo H, Yamamoto K, Nakaoka H dkk. Studi asosiasi genome dari
gout yang didefinisikan secara klinis mengidentifikasi beberapa
lokus risiko dan hubungannya dengan subtipe klinis Ann Rheum
Dis 2016; 75: 652–9.
Empat Li C, Li Z, Liu S dkk. Analisis asosiasi genome
mengidentifikasi tiga lokus risiko baru untuk artritis gout
di Han Cina.Nat Commun 2015; 6: 7041.
Lima
Nakayama A, Nakaoka H, Yamamoto K dkk. GWAS gout dan
subtipe yang didefinisikan secara klinis mengidentifikasi
beberapa lokus kerentanan yang mencakup gen pengangkut
urat Ann Rheum Dis 2017; 76: 869–77.
6 Kawamura Y, Nakaoka H, Nakayama A dkk. Studi asosiasi
genome mengungkapkan lokus baru yang memperburuk
hiperurisemia asimtomatik menjadi gout Ann Rheum Dis
2019; 78: 1430–7.
7 Nakayama A, Nakatochi M, Kawamura Y dkk.Lokus
kerentanan gout subtipe spesifik dan pengayaan tekanan
seleksi pada ABCG2 dan ALDH2 yang diidentifikasi oleh
meta-analisis subtipe genom pasien gout yang
didefinisikan secara klinis Ann Rheum Dis 2020; 79: 657–
65.
5231
Yu Toyoda dkk.

8 Dalbeth N, Choi HK, Joosten LAB dkk. Gout Nat Rev Dis
Primers 2019; 5:69.
9 Matsuo H, Takada T, Ichida K dkk. Cacat umum ABCG2,
pengekspor urat berkapasitas tinggi, menyebabkan asam
urat: analisis genetik berbasis fungsi pada populasi Jepang Sci
Transl Med 2009; 1: 5ra11.
10 Woodward OM, Kottgen A, Coresh J dkk. Identifikasi
dari transporter urat, ABCG2, dengan polimorfisme fungsional
umum yang menyebabkan asam urat Proc Natl Acad Sci USA
2009; 106: 10338–42.
11 Ichida K, Matsuo H, Takada T dkk. Penurunan ekstra-
ekskresi urat ginjal adalah penyebab umum
22 Miyata H, Takada T, Toyoda Y dkk. Identifikasi
febuxostat sebagai penghambat ABCG2 kuat baru: aplikasi
potensial dan risiko dalam situasi klinis Front Pharmacol
2016; 7:518.
23 Toyoda Y, Takada T, Saito H dkk. Efek penghambatan
flavonoid jeruk pada aktivitas transportasi in vitro
transporter urat manusia 1 (URAT1 / SLC22A12), re-
absorber urat ginjal NPJ Sci Food 2020; 4: 3.
24 Ichida K, Hosoyamada M, Hisatome I dkk. Klinis dan
analisis molekuler pasien dengan hipourisemia ginjal di
Jepang-pengaruh gen URAT1 pada ekskresi urat urin J Am
Soc Nephrol 2004, 15: 164-73.

Diunduh dari https://academic.oup.com/rheumatology/article/60/11/5224/6208889 oleh tamu pada 04 November 2021

hiperurisemia Nat Commun 2012; 3:764. 25 Tin A, Li Y, Brody JA dkk. Seluruh exome skala besar
studi asosiasi sekuensing mengidentifikasi varian fungsional
12 Stiburkova B, Miyata H, Zavada J dkk. Novel
langka yang memengaruhi kadar urat serum Nat Commun
varian disfungsional di ABCG2 sebagai penyebab gout
2018; 9: 4228.
tophaceous parah: biokimia, genetika molekuler dan analisis
fungsional Rheumatology (Oxford) 2016; 55: 191–4. 26 Pavelcova K, Bohata J, Pavlikova M dkk. Evaluasi
pengaruh varian genetik SLC2A9 (GLUT9) dan SLC22A12
13 Higashino T, Takada T, Nakaoka H dkk. Beberapa
(URAT1) terhadap perkembangan hiperurisemia dan
varian umum dan langka dari ABCG2 menyebabkan asam urat RMD
asam urat J Clin Med 2020; 9:25 10.
Open 2017; 3: e000464.
27 Nakayama A, Matsuo H, Ohtahara A dkk. Klinis
14 Toyoda Y, Manc --ı ková A, Krylov V dkk. Fungsional
pedoman praktek untuk hipourisemia ginjal (edisi 1)
karakterisasi varian langka yang relevan secara klinis dalam
Hum Cell 2019; 32: 83–7.
ABCG2 diidentifikasi dalam kohort asam urat dan hiperurisemia
Sel 2019; 8: 363. 28 Butler JM, Hall N, Narendran N, Yang YC, Paraoan L.
Identifikasi kandidat varian pelindung untuk penyakit
15 Enomoto A, Kimura H, Chairyoungdua A dkk. Molekuler
umum dan evaluasi potensi perlindungannya BMC
identifikasi pertukaran anion urat ginjal yang mengatur
Genomics 2017; 18:575.
kadar urat darah Sifat 2002; 417: 447–52.
29 Chiba T, Matsuo H, Kawamura Y dkk. NPT1 / SLC17A1
16 Wakida N, Tuyen DG, Adachi M dkk. Mutasi di
adalah pengekspor urat ginjal pada manusia dan varian
gen pengangkut urat manusia 1 dalam tipe defek
gain-of-fungsinya yang umum menurunkan risiko gout
reabsorpsi presekretori hipourisemia ginjal familial J Clin
underexcretion ginjal Arthritis Rheumatol 2015; 67: 281–7.
Endocrinol Metab 2005, 90: 2169–74.
17 Kawamura Y, Toyoda Y, Ohnishi T dkk. Identifikasi
30 Suzuki T, Kidoguchi K, Hayashi A. Genetika
mutasi splicing disfungsional pada gen SLC22A12 / URAT1
heterogenitas hipourisemia familial karena defek
menyebabkan hipourisemia ginjal tipe 1: laporan pada dua
tubulus ginjal terisolasi Jinrui Idengaku Zasshi 1981; 26:
keluarga Rheumatology (Oxford) 2020; 59: 3988–90.
243–8.
18 Wallace SL, Robinson H, Masi AT dkk. Pendahuluan
31 Gabrikova D, Bernasovska J, Sokolova J, Stburkova B.
kriteria klasifikasi artritis akut gout primer Arthritis
Frekuensi tinggi varian SLC22A12 yang menyebabkan
Rheum 1977, 20:895-900.
hipourisemia ginjal 1 pada populasi Roma Ceko dan Slovakia;
19 Hamajima N, Kelompok Studi J-MICC. metode deteksi sederhana dan cepat dengan reaksi berantai
Institutional Collaborative Cohort Study (Studi J-MICC) untuk polimerase spesifik alel. Urolitiasis 2015; 43: 441–5.
mendeteksi interaksi gen-lingkungan untuk kanker Asian
Pac J Cancer Prev 2007; 8: 317–23.
32 Stiburkova B, Gabrikova D, C --epek P dkk. Prevalensi
20 Asai Y, Naito M, Suzuki M dkk. Data dasar dari varian alel URAT1 dalam populasi Roma Nukleosida
Daerah Shizuoka dalam Studi Kohort Kolaborasi Multi- Nukleotida Asam Nukleat 2016; 35: 529–35.
Institusional Jepang (Studi J-MICC) Nagoya J Med Sci
2009; 71: 137–44.
33 Higasa K, Miyake N, Yoshimura J dkk. Genetika manusia
21 Matsuo H, Chiba T, Nagamori S dkk. Mutasi di database variasi, database referensi variasi genetik
transporter glukosa 9 gen SLC2A9 menyebabkan dalam populasi Jepang J Hum Genet 2016; 61: 547–53.
hipourisemia ginjal Am J Hum Genet 2008; 83: 744–51.

5232 https://academic.oup.com/rheumatology