Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352

Daftar isi tersedia diSainsLangsung

Penelitian Ilmu Saraf

halaman utama : www. lain lagi. com/ l oc ate / neu res

Blokade sinyal interleukin-6 menekan respons inflamasi koklea dan meningkatkan

gangguan pendengaran pada koklea tikus yang rusak karena kebisingan
Kenichiro WakabayashiSebuah,B, Masato FujiokaSebuah,B, Sho KanzakiSebuah, Hirotaka James OkanoB, Shinsuke ShibataB,
Daisuke YamashitaSebuah, Masatsugu MasudaSebuah, Masahiko MiharaC, Yoshiyuki OhsugiC, Kaoru OgawaSebuah, Hideyuki
OkanoB,*
SebuahDepartemen Otolaringologi, Bedah Kepala dan Leher, Fakultas Kedokteran Universitas Keio, 35 Shinanomachi, Shinju-ku, Tokyo 160-8582, Jepang
BDepartemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Keio, 35 Shinanomachi, Shinju-ku, Tokyo 160-8582, Jepang
CChugai Pharmaceutical Co. Ltd, 2-1-1 Nihonbashi-muromachi, Chuo-ku, Tokyo 103-8324, Jepang

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Sejarah artikel:
Diterima 17 November 2009 Diterima dalam
bentuk revisi 8 Desember 2009 Diterima 8
Desember 2009
Tersedia online 21 Desember 2009
Gangguan pendengaran dapat menjadi penyebab kerugian sosial-ekonomi yang serius. Studi terbaru menunjukkan
respon inflamasi di telinga bagian dalam terjadi bersamaan dengan berbagai kondisi yang merusak termasuk
gangguan pendengaran akibat kebisingan. Kami melaporkan pro-inflamasi sitokin interleukin-6 (IL-6) diinduksi di
koklea 6 jam setelah paparan kebisingan, tetapi implikasi patofisiologi ini masih belum jelas. Untuk mengatasi
masalah ini, kami menyelidiki efek penghambatan IL-6 menggunakan antibodi reseptor anti-IL-6 (MR16-1).

Kata kunci:
Tikus yang terpapar kebisingan diobati dengan MR16-1 dan dievaluasi. Peningkatan pendengaran pada 4 kHz yang diukur
Bagian dalam telinga

dengan respon batang otak pendengaran (ABR) tercatat pada tikus yang terpapar kebisingan yang diobati dengan MR16-1.
Makrofag
Interleukin-6 Analisis histologis mengungkapkan penurunan neuron ganglion spiral diperbaiki pada kelompok yang diobati dengan
Paparan kebisingan MR16-1, sementara tidak ada perubahan signifikan yang diamati pada organ Corti. Imunohistokimia untuk Iba1 dan CD45
Peradangan menunjukkan pengurangan yang luar biasa dari makrofag koklea teraktivasi di ganglion spiral dibandingkan dengan
ganglion spiral kelompok kontrol ketika diobati dengan MR16-1.
sitokin Dengan demikian, MR16-1 memiliki efek perlindungan baik secara fungsional maupun patologis untuk koklea
yang rusak karena kebisingan terutama karena penekanan hilangnya neuron dan mungkin melalui pengurangan
respons inflamasi. Terapi sitokin anti-inflamasi termasuk blokade IL-6 akan menjadi strategi terapi baru yang layak
untuk gangguan pendengaran saraf sensorik akut.
- 2009 Elsevier Ireland Ltd dan Japan Neuroscience Society. Seluruh hak cipta.

1. Perkenalan Paparan berlebihan terhadap suara yang intens dapat menyebabkan

Koklea adalah organ akhir dari sistem pendengaran yang
mengkodekan rangsangan suara menjadi impuls saraf. Ini terdiri dari
organ mekanosensori, organ Corti, neuron primer, neuron ganglion
spiral, dan kompartemen mesenkim sekitarnya, ligamen spiral, tungkai
dan stria vaskularis, yang secara terkoordinasi menimbulkan potensi
endokoklear yang penting untuk sel-sel rambut di organ Corti untuk
menghasilkan potensial aksi sebagai respons terhadap suara. Ketika
getaran suara mencapai telinga bagian dalam melalui gelombang
material dari rantai tulang pendengaran telinga tengah, saluran ion
bergerbang mekanosensori pada bundel stereosilia sel rambut bagian
dalam dirangsang dan dibuka, diikuti oleh masuknya kalium ke dalam
yang akhirnya mengarah ke potensial aksi. Hal ini dilakukan untuk
impuls saraf koklea melalui sinapsis antara sel-sel rambut dan akson
neuron ganglion spiral,
* Penulis yang sesuai. Telp.: +81 3 5363 3747; faks: +81 3 3357 5445. Alamat
email:hidokano@sc.itc.keio.ac.jp (H.Okano).
kerusakan permanen pada sistem pendengaran dan mengakibatkan
gangguan pendengaran sensorineural.Hirose dan Liberman, 2003; Saunders
dkk., 1985; Wang dkk., 2002). Kerusakan ini melibatkan sebagian besar jenis
sel koklea termasuk ligamen spiral, sel rambut dan ganglion spiral. Sel-sel
rambut mati secara bertahap dalam waktu 2 minggu setelah penghinaan (
Yamashita dkk., 2004), dan neuron ganglion spiral menjadi bengkak (Parker
dkk., 2007; Wang dkk., 2002). Patofisiologi gangguan pendengaran akibat
bising terdiri dari berbagai jenis kerusakan termasuk tidak hanya kerusakan
jaringan mekanis tetapi juga kerusakan sekunder termasuk kerusakan
tertunda eksitotoksik.Puel et al., 1998). Mekanisme molekuler dari kerusakan
tertunda yang disebabkan oleh kebisingan tidak sepenuhnya dipahami,
meskipun kontribusi parsial dari tekanan oksidatif telah ditunjukkan.
Yamashita dkk., 2004).
Sebelumnya, telinga bagian dalam diyakini sebagai organ
kekebalan yang diisolasi oleh penghalang darah-labirin (Juhn dan
Rybak, 1981), mirip dengan sawar darah-otak dari sistem saraf pusat
(SSP) dan sawar darah-mata dari kornea dan retina mata. Namun, baru-
baru ini, induksi respons inflamasi dan peningkatan regulasi sitokin
proinflamasi di

0168-0102/$ – lihat materi depan - 2009 Elsevier Ireland Ltd dan Japan Neuroscience Society. Seluruh hak cipta. doi:10.1016/
j.neures.2009.12.008
346 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352
telinga bagian dalam telah dilaporkan dalam berbagai kondisi yang
merusak termasuk stimulasi kebisingan (Hirose dkk., 2005; Keithley
dkk., 2008; Ladrech dkk., 2007; Ma et al., 2000; Satoh dkk., 2002;
Tornabene dkk., 2006). Keberadaan sel-sel inflamasi pada kondisi
mapan dan peningkatannya setelah gangguan pada telinga bagian
dalam telah dilaporkan oleh beberapa kelompok.Hirose dkk., 2005;
Jokay dkk., 2001; Ladrech dkk., 2007; Okano dkk., 2008; Tan et al., 2008).
Salah satu penjelasan dari komponen kerusakan sekunder adalah
peningkatan regulasi lokal dari sitokin pro-inflamasi karena molekul-
molekul ini secara endogen meningkat tahap awal di koklea yang rusak
(dalam 1 hari) dan umumnya menginduksi infiltrasi sel-sel inflamasi,
yang peningkatannya sebenarnya diamati di koklea hingga tingkat
maksimum pada 3-7 hari setelah kerusakan. Faktanya, salah satu
sitokin pro-inflamasi, faktor nekrosis tumor
Sebuah(TNF-Sebuah), menginduksi perekrutan sel pro-inflamasi ke dalam
koklea (Keithley dkk., 2008), dan penekanan infiltrasi sel-sel ini dengan
menghambat TNF-Sebuahsinyal mengurangi gangguan pendengaran
pada model hewan dari labirinitis yang dimediasi kekebalan yang
disebabkan oleh imunisasi dengan hemosianin limpet lubang kunci (Satoh
dkk., 2002; Wang et al., 2003).
Sitokin pro-inflamasi lainnya, IL-6, diproduksi oleh berbagai jenis sel
selama kerusakan jaringan, infeksi dan penyakit inflamasi.Johnston
dkk., 2005; Loddick dkk., 1998; Yang dkk., 2005). Peningkatan kadar IL-6
telah didokumentasikan dalam berbagai kondisi klinis, menunjukkan
bahwa IL-6 diproduksi dalam koordinasi dengan respon penyakit (
Yoshizaki dkk., 1989). Keterlibatan IL-6 dalam kerusakan telinga bagian
dalam juga telah ditunjukkan sebelumnya. Jadi dkk. mengamati
peningkatan sementara IL-6 pada model yang diobati dengan cisplatin,
model koklea umum yang rusak serta satu dengan stimulasi kebisingan
(Jadi dkk., 2007). Kami melaporkan bahwa IL-6 diinduksi dalam ganglion
spiral dan sel-sel dinding lateral pada fase awal trauma koklea yang
diinduksi kebisingan (Fujioka dkk., 2006). Di otak dan korda spiral,
fungsi IL-6 masih kontroversial. Pada cedera tali pusat, blokade IL-6
menekan astrogliosis reaktif dan memperbaiki pemulihan fungsional (
Okada dkk., 2004), sedangkan, sebaliknya, memperburuk kerusakan
otak pada iskemia otak (Yamashita dkk., 2005). Temuan ini dengan jelas
menunjukkan bahwa fungsi IL-6 sebagian besar bergantung pada
konteks, sehingga masuk akal untuk membahas masalah apakah IL-6
bertindak sebagai penginduksi kerusakan koklea akut. Jika ya,
penghambatan pensinyalan IL-6 dapat memperbaiki gangguan fungsi
pendengaran, yang akan bermanfaat secara klinis.
Reseptor IL-6 mewakili kompleks protein yang terdiri dari subunit
reseptor IL-6 (IL-6R) dan transduser sinyal IL-6 (gp130). IL-6R bisa ada
dalam bentuk larut dan berlabuh membran. Ketika ligan mengikat
IL-6R, kompleks ini bergerak ke gp130 yang berlabuh di membran sel,
dan oleh karena itu sinyal IL-6 ditransmisikan. Baru-baru ini, antibodi
penetralisir manusiawi spesifik terhadap reseptor IL-6 terlarut (MRA),
yang secara efisien memblokir pensinyalan IL-6, telah digunakan
secara klinis dengan efek yang menjanjikan pada pasien dengan
rheumatoid arthritis (RA) (Nishimoto dkk., 2004) dan penyakit radang
usus (Ito, 2005).
Dalam penelitian ini, kami menggunakan antibodi penetral reseptor IL-6
tikus anti-tikus (MR16-1) untuk menghambat sinyal IL-6 pada koklea yang
rusak akibat kebisingan. MR16-1 mengikat reseptor IL-6 terlarut dan
memblokir sinyal transmisi ke gp130 (Okazaki dkk., 2002; Tamura dkk., 1993
).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menganalisis efek fungsional
dan patologis dan pengaruh sel inflamasi pada penghambatan sinyal
IL-6 pada koklea yang rusak akibat kebisingan.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Hewan
Tikus C57BL/6J jantan berusia empat hingga enam minggu digunakan (n =60). Hewan-
hewan itu dibeli dari Pusat Hewan Eksperimental Saitama dan dibesarkan di Pusat Hewan
Laboratorium, Fakultas Kedokteran, Universitas Keio di bawah kondisi SPF.
Semua prosedur telah disetujui oleh komite etik Keio University Union tentang
Laboratorium Kedokteran Hewan sesuai dengan Panduan Perawatan dan Penggunaan
Hewan Laboratorium (National Institute of Health, Bethesda, MD).
2.2. noda barat
Untuk western blotting, hewan dibunuh pada saat pra-kebisingan (n =3), 6 jam (n =3)
dan 24 jam (n =3) setelah paparan kebisingan. Koklea bilateral digunakan sebagai sampel
tunggal. Seluruh koklea dengan cepat dibedah, ditempatkan dalam buffer lisat dingin (10
mM Tris-HCl, pH 7,6, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Triton X-100, dan campuran protease
inhibitor), lalu dihaluskan dan dihomogenisasi. Setelah sonikasi, sampel disentrifugasi
pada 15000 rpm selama 4 menit pada suhu 48C dan kemudian disimpan pada -808C
sampai elektroforesis. Sampel masing-masing berisi 10Mprotein g menjadi sasaran 15%
elektroforesis gel SDS PAGE dan dipindahkan ke membran. Kami menggunakan antibodi
interleukin-6 antimouse kelinci (Sigma-Aldrich) sebagai antibodi primer dan antibodi
sekunder yang terkonjugasi dengan biotin. Mereka ditingkatkan dengan kompleks ABC
Elite (Vectastain ABC Elite Kit; Vector Laboratories) dan divisualisasikan dengan ECL
Blotting Analysis System (GE Healthcare).B-Actin (Sigma-Aldrich) digunakan sebagai
antibodi primer (kontrol standar).
2.3. Antibodi monoklonal reseptor IL-6 tikus anti-tikus (MR16-1)
Antibodi monoklonal reseptor IL-6 tikus anti-tikus MR16-1 disiapkan seperti yang
dijelaskan sebelumnya (Tamura dkk., 1993). MR16-1 terbukti mengikat reseptor IL-6 tikus
yang larut, menekan respons seluler yang diinduksi IL-6 dengan cara yang bergantung
pada dosis (Okazaki dkk., 2002). Karakterisasi dasar lain dari antibodi ini telah dilaporkan
sebelumnya (Okazaki dkk., 2002; Tamura dkk., 1993).
2.4. Administrasi MR16-1
Segera setelah paparan kebisingan, tikus disuntik secara intraperitoneal dengan dosis
tunggal MR16-1 (100Mg/g berat badan; kelompok MR16-1) atau dengan volume dan
konsentrasi IgG tikus murni yang sama (ICN/Cappel; kelompok kontrol).
2.5. Paparan kebisingan dan respons batang otak pendengaran (ABR)
Dalam semua percobaan, hewan diekspos selama 2 jam pada oktaf-band noise (OBN) dengan
puncak pada 4 kHz, 124 dBSPL. Untuk menentukan perbesaran gangguan pendengaran akibat
kebisingan di bawah kondisi kebisingan dalam penelitian ini, kami menguji pergeseran ambang
batas untuk kelompok kontrol (n =4) dan kelompok MR16-1 (n =3) menggunakan auditory
brainstem response (ABR). Paparan kebisingan dan pengukuran ABR dilakukan dengan
menggunakan metode dan peralatan yang dilaporkan sebelumnya (Fujioka dkk., 2006; Kanzaki
dkk., 2006). ABR dilakukan pada 3 hari sebelum dan 3 minggu setelah paparan kebisingan pada 4
dan 20 kHz. ABR ditentukan pada sisi bilateral dan dirata-ratakan. Operator yang mengukur ABR
tidak mengetahui identitas hewan.
2.6. Persiapan bagian yang disematkan epon
Bagian plastik yang ditempelkan epon dibuat untuk menyelidiki perubahan patologis.
Hewan dibunuh pada saat pra-kebisingan (n =3) dan 3 minggu setelah paparan
kebisingan (kelompok MR16-1,n =6; kelompok kontrol,n =6). Hewan dibius dan diperfusi
dengan sukrosa 8,6% dalam 0,01 mol/L fosfat-buffered (PB), diikuti oleh 2%
paraformaldehyde (PFA), 2,5% glutaraldehyde dan 5% sukrosa dalam 0,1 mol/L PB secara
transkardial, dan kemudian telinga bagian dalam dibedah dari tulang temporal. Setelah
fiksasi semalaman setelah perfusi perilimfatik dengan PFA 2% dan glutaraldehid 2,5%
dan sukrosa 5% dalam 0,1 mol/L PB, telinga bagian dalam didekalsifikasi dalam 0,1 mol/L
EDTA dan 5% sukrosa dalam 0,1 mol/L PB selama 7 hari. Setelah dekalsifikasi, telinga
bagian dalam difiksasi dengan 1% OsO4dan sukrosa 5% dalam 0,1 mol/L PB selama 20
menit diikuti dengan dehidrasi bertahap, dan kemudian dibenamkan dalam epon. Blok
epon dipotong dengan ultramikrotom (ULTRACUT tipe E, Leica) pada 1Mketebalan m
pada bidang horizontal yang kira-kira sejajar dengan sumbu spiral modiolar, setiap lima
irisan diambil, dan kemudian dilakukan pewarnaan dengan toluidine blue. Akhirnya, tiga
bagian semi-tipis sejajar dengan bidang mid-modiolar (setiap 5Mm) masing-masing
hewan menjadi sasaran evaluasi mikroskopis. Jumlah neuron ganglion spiral dan area
tangen kanal Rosenthal diukur untuk menghitung kepadatan sel (jumlah neuron per
area). Kepadatan sel rata-rata dari tiga bagian per satu hewan ditentukan dan digunakan
untuk evaluasi.
2.7. Imunohistokimia
Hewan dibius dan diberi perfusi, dan telinga bagian dalam difiksasi dan didekalsifikasi
mirip dengan bagian epon. Kami menggunakan phosphate-buffered saline (PBS) untuk
perfusi transkardial, 4% PFA untuk fiksasi, dan 1 mol/L EDTA untuk dekalsifikasi. Setelah
dekalsifikasi, telinga bagian dalam dimasukkan ke dalam Tissue-Tek OCT Compound
(Sakura Finetechnical) dan kemudian dibekukan. Blok beku dipotong dengan cryostat
(MICROM HM550, ZEISS) pada 8Mketebalan m. Bagian mid-modiolar digunakan untuk
imunohistokimia.
2.7.1. IL-6R dan gp130
Hewan dibunuh pada saat pra-kebisingan (n =3). Antibodi anti-IL-6R kelinci (Santa Cruz
Biotechnology) dan antibodi anti-gp130 kelinci (solusi pensinyalan sel bagian atas)
 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352 347

digunakan sebagai antibodi primer. 0,1% Triton-X ditambahkan ke larutan gp130. Slide
divisualisasikan menggunakan antibodi sekunder terkonjugasi dengan Alexa 555 [Alexa
Fluor1555 IgG Anti-kelinci Kambing (A21429): Invitrogen].
2.7.2. MR16-1 terbiotinilasi
MR16-1 dibiotinilasi dengan reagen EZ-Link NHS-Biotin (Thermo Fisher Scientific).
Hewan kelompok kontrol (n =2) dibunuh pada saat pra-kebisingan dan hewan disuntik
dengan MR16-1 terbiotinilasi (n =2) terbunuh pada 6 jam setelah paparan kebisingan.
Setelah pendinginan dengan 1,5% hidrogen peroksida, slide ditingkatkan menggunakan
Elite ABC Kit (Vector Laboratories) dan divisualisasikan dengan larutan diaminobenzidine
(DAB) (Wako Pure Chemical Industries).
2.7.3. Iba1 dan CD45 (termasuk metode penghitungan)
Hewan dibunuh pada saat pra-kebisingan (n =3) dan 3, 7, 14 hari setelah paparan
kebisingan (kelompok MR16-1,n =3; kelompok kontrol,n =3). Antibodi CD45 anti-tikus
terkonjugasi dengan Phycoerythrin (PE) (eBioscience) dan antibodi anti-Iba1 kelinci (Wako
Pure Chemical Industries) digunakan sebagai antibodi primer. Imunostaining Iba1
dilakukan menggunakan antibodi sekunder terkonjugasi dengan Alexa 488 [Alexa Fluor1
488 IgG Anti-kelinci Kambing (A11034): Invitrogen]. Kami juga menggunakan antibodi
sekunder terkonjugasi dengan Alexa 555 [Alexa Fluor1555 Goat Anti-rat IgG (A21434):
Invitrogen] untuk CD45-imunostaining untuk meningkatkan sinyal. CD45 adalah antigen
umum leukosit dan Iba1 spesifik untuk mikroglia/makrofag. Bagian diwarnai setiap lima
irisan, dan tiga bagian dipilih secara acak dari 6 hingga 8 bagian yang diwarnai.
Kepadatan sel sel positif dihitung sama dengan bagian epon.
2.8. Analisis statistik
Analisis statistik dilakukan dengan analisis varians satu arah (ANOVA) diikuti dengan
uji Tukey untuk analisis kepadatan sel ganglion spiral dan kepadatan sel positif Iba1
CD45. Mann–WhitneyU-tes digunakan untuk analisis ambang ABR. p <0,05 dianggap
signifikan secara statistik. Semua data disajikan sebagai mean - SEM.
3. Hasil
3.1. Ekspresi IL-6 dan reseptornya setelah paparan kebisingan
Dalam penelitian ini, pertama-tama kami melakukan analisis Western blot
untuk mengkonfirmasi induksi IL-6 di telinga bagian dalam setelah kebisingan.
eksposur dalam model mouse. IL-6 meningkat pada 6 jam dan kemudian
menurun pada 24 jam setelah paparan kebisingan, menunjukkan peningkatan
regulasi sementara yang konsisten pada model tikus (Gambar 1SEBUAH).
Kami selanjutnya memeriksa ekspresi IL-6R dan gp130 di telinga
bagian dalam dengan imunostaining. Kedua IL-6R- dan gp130-
immunoreactivities (IRs) terdeteksi di ganglion spiral dan dinding
lateral (Gambar 1B, D–F, H dan I). Pada organ Corti, IL-6R-IR diamati
baik pada sel rambut maupun sel pendukung, sedangkan gp130-IR
hanya terdeteksi pada sel rambut.Gambar 1C dan G). Hasil ini
menegaskan bahwa IL-6R (target MR16-1) dan gp130 (transduser sinyal
IL-6) diekspresikan di telinga bagian dalam tikus.
3.2. Pengiriman obat MR16-1 di telinga bagian dalam
Untuk memastikan apakah MR16-1 yang disuntikkan mencapai telinga
bagian dalam, MR16-1 terbiotinilasi disuntikkan secara intraperitoneal dan
distribusinya di telinga bagian dalam dinilai dengan immunostaining. Biotin
IR ditemukan di ganglion spiral, organ Corti dan stria vaskularis, dan dinding
lateral (Gambar 2.A-F), dan tidak ada perbedaan nyata dalam kepadatan
pewarnaan di antara area di semua belokan (dari apikal ke basal). Hasil ini
mengkonfirmasi pengiriman MR16-1 di telinga bagian dalam tikus yang
terpapar kebisingan.
Tingkat STAT3 dan Erk1, yang merupakan kaskade sinyal hilir
reseptor IL-6, tidak berubah antara kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan MR16-1, tetapi tingkat bentuk terfosforilasi STAT3 dan Erk1
menurun dalam sampel setelah pemberian MR16-1 (Gambar
Tambahan 1).
3.3. Peningkatan fungsi pendengaran
Dengan kebisingan yang berpusat pada 4 kHz dalam pita lebar satu oktaf yang
magnitudo puncaknya adalah 124 dB, kami menghasilkan model gangguan
pendengaran yang disebabkan oleh kebisingan dalam percobaan ini. Kita

Gambar 1.Ekspresi interleukin-6, gp130 dan interleukin-6R. (A) Hasil Western blotting untuk IL-6 pada tiga titik waktu yang berbeda. Perbedaan signifikan dalam ekspresi IL-6 diamati
antara pra-kebisingan, 6 dan 24 jam setelah paparan kebisingan. Bilah vertikal mewakili rasio relatif IL-6 versusB-aktin (pengendalian internal). (B–I) Ekspresi gp130 (B–E) dan IL-6R (F–I).
gp130 dan IL-6R diekspresikan dalam ganglion spiral (E dan I), dinding lateral (D dan H) dan organ Corti (C dan G). Merah adalah IL-6R dan biru adalah hoechst (B–E); merah adalah
gp130 dan biru adalah hoechst (F–I). C–E dan G–I masing-masing adalah perbesaran tinggi kotak di B dan F. Baik sel rambut (panah putih) dan sel pendukung (panah putih)
mengekspresikan gp130 dan IL-6R (C dan G). Neuron ganglion spiral mengekspresikan gp130 dan IL-6R (panah putih) (D dan H) (bar skala: B dan F, 50MM; C–E dan G–I, 20MM).
348 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352

Gambar 2.Pengiriman obat MR16-1 di telinga bagian dalam: (A, C dan E) kelompok kontrol; (B, D dan F) kelompok MR16-1 terbiotinilasi. Akumulasi di organ Corti, stria vaskularis dan
ganglion spiral dan pewarnaan jerawatan di dinding lateral diamati (panah merah). Bilah skala = A–F, 20MM.

dilakukan ABR untuk mengevaluasi fungsi pendengaran. Setelah paparan

kebisingan, pergeseran ambang batas kelompok kontrol yang disuntik IgG
adalah 49,4 - 2,1 dB dan 55,6 - 3,3 dB, dan kelompok yang disuntik MR16-1
adalah 33,3 - 5,8 dB dan 50,8 - 7,1 dB pada 4 dan 20 kHz, masing-masing.
Kami mengamati peningkatan pendengaran yang signifikan pada kelompok
MR16-1 dibandingkan dengan kelompok kontrol pada 4 kHz (p <0,05), tetapi
tidak pada 20 kHz, pada 3 minggu setelah paparan kebisingan (Gambar 3).
Khususnya, fungsi pendengaran ditingkatkan pada bagian apikal oleh
pemberian MR16-1.

3.4. Perlindungan ganglion spiral diobati dengan MR16-1

Kerusakan yang disebabkan oleh paparan kebisingan terlihat pada

berbagai jenis sel di telinga bagian dalam termasuk neuron ganglion spiral.
Studi sebelumnya mengungkapkan bahwa tingkat dan intensitas kerusakan
tergantung pada tingkat, frekuensi dan durasi paparan. Secara khusus,
tingkat keparahan vakuola atau pembengkakan yang diamati pada neuron
ganglion spiral bervariasi tergantung pada kekuatan kebisingan (Parker
dkk., 2007; Wang dkk., 2002). Dalam penelitian ini, kami menemukan
penurunan kepadatan sel di ganglion spiral karena hilangnya neuron
ganglion pada hewan yang terpapar kebisingan. Sebaliknya, kepadatan sel
neuron ganglion spiral pada kelompok yang diobati dengan MR16-1
dipertahankan dengan baik. Meskipun efek perlindungan yang signifikan
diamati pada bagian apikal neuron ganglion spiral dengan pemberian
MR16-1, neuron ganglion spiral di bagian tengah atau basal rusak dengan
cara yang mirip dengan kelompok kontrol non-pengobatan (Gambar 4).
Gambar 3.Fungsi pendengaran (respons batang otak auditori). Peningkatan fungsional dengan
MR16-1 diukur dengan auditory brainstem response (ABR). Kami memberikan stimulus suara
nada burst, menurunkan volume, merekam bentuk gelombang ABR, dan kemudian menentukan
ambang batas. Peningkatan pendengaran yang signifikan diamati pada 4 kHz dengan
pengobatan MR16-1 3 minggu setelah paparan kebisingan (p <0,05).
Untuk mengevaluasi kerusakan sel rambut setelah paparan kebisingan,
kami melakukan persiapan permukaan telinga bagian dalam. Sel rambut
dalam dan luar berkurang oleh paparan kebisingan, tetapi tidak ada
perbedaan signifikan yang diamati antara kelompok perlakuan MR16-1 dan
kelompok kontrol di semua putaran (Gambar Tambahan 2).

Gambar 4.Perubahan patologis pada ganglion spiral. Neuron ganglion spiral di bagian apikal menurun pada kelompok kontrol setelah paparan kebisingan (C: panah hitam), tidak pada
kelompok perlakuan MR16-1 (D: panah hitam): A dan C, kelompok kontrol; B dan D, kelompok perlakuan MR16-1; C dan D adalah perbesaran tinggi dari kotak di A dan B. Batang skala =
A dan B, 100MM; C dan D, 50MM. Penurunan kepadatan neuron ganglion spiral melemah secara signifikan pada kelompok perlakuan MR16-1 (p <0,01) (E).
 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352 349

Gambar 5.Sel-sel inflamasi di ganglion spiral. Beberapa sel positif ganda diamati pada pra-kebisingan (A-C). Tiga hari setelah paparan kebisingan, sel positif ganda meningkat pada kelompok kontrol (D-
F), tetapi tidak begitu banyak meningkat pada kelompok perlakuan MR16-1 (G-I). Sel positif ganda ditunjukkan oleh panah putih. Biru adalah hoechst, dan merah adalah CD45 (A, D dan G), Iba-1 (B, E dan
H); C, F dan I adalah gambar yang digabungkan. Bilah skala = 20MM. Perbedaan yang signifikan diamati antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan MR16-1 pada semua giliran pada hari ke-3,
dan pada giliran tengah pada hari ke-7 (J-L). Kepadatan sel dari kelompok perlakuan MR16-1 diturunkan pada semua titik waktu dan putaran dibandingkan dengan kelompok kontrol di apikal (J), tengah
(K), dan basal (L), masing-masing.

3.5. MR16-1 menekan peradangan di telinga bagian dalam
Kami menilai jumlah sel positif ganda Iba1/CD45 dengan
imunostaining untuk memeriksa apakah MR16-1 mempengaruhi sel
inflamasi di telinga bagian dalam. Setelah paparan kebisingan, sel
positif ganda Iba1/CD45 di ganglion spiral meningkat ke puncaknya
pada hari ke 3, kemudian menurun pada hari ke 7 dan 14 setelah
paparan kebisingan pada putaran apikal, tengah dan basal.
Pengobatan dengan MR16-1 secara signifikan menurunkan jumlah sel
positif ganda Iba1/CD45 pada hari ke 3 setelah paparan kebisingan di
semua putaran (Gambar 5). Pada ganglion spiral semua kelompok, Iba1
terdeteksi pada 99,1 - 0,7% sel CD45 positif, dan CD45 positif pada
99,1 - 0,8% dari sel Iba1-positif. Hampir semua sel positif
mengekspresikan CD45 dan Iba1, dengan sangat sedikit sel yang hanya
mengekspresikan CD45 atau Iba1. Hasil ini menunjukkan bahwa
MR16-1 efektif menekan infiltrasi makrofag koklea di ganglion spiral
setelah paparan kebisingan.
Demikian pula, dinding lateral juga menunjukkan infiltrasi makrofag
koklea setelah paparan kebisingan. Imunostaining ganda Iba1/CD45
terdeteksi terutama di daerah inferior dan berdekatan dengan
sambungan ligamen dengan kapsul koklea tulang di antara fibrosit tipe
III. Setelah paparan kebisingan, makrofag koklea ditemukan di seluruh
ligamen spiral. Di sisi lain, pengobatan MR16-1 tidak secara signifikan
mengurangi jumlah sel positif ganda Iba1/CD45 di dinding lateral
dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar Tambahan 3).
350 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352
4. Diskusi
4.1. Efek perlindungan MR16-1 di NIHL
Data kami saat ini dengan jelas menunjukkan bahwa blokade IL-6
melemahkan reaksi inflamasi di dalam koklea. Secara umum,
patofisiologi gangguan pendengaran akibat kebisingan beragam,
termasuk tidak hanya kerusakan jaringan fisik primer, tetapi juga
kerusakan sekunder termasuk kerusakan tertunda eksitotoksik pada
sel rambut, sel ganglion spiral dan dinding lateral.Hirose dan Liberman,
2003; Wang dkk., 2002). Infiltrasi sel inflamasi, terutama makrofag, juga
dapat menjadi sumber patofisiologis kerusakan sekunder lainnya. Kami
telah menunjukkan di sini bahwa MR16-1 memberikan efek
perlindungan baik secara fungsional maupun patologis di area paparan
suara paling intens (4 kHz). Namun, kami tidak mengamati adanya
perubahan dalam jumlah sel rambut (Gambar Tambahan 2),
menunjukkan bahwa MR16-1 tidak dapat mencegah kerontokan sel
rambut yang tertunda; asumsi ini juga didukung oleh hasil in vitro
bahwa protein IL-6 rekombinan tidak mempengaruhi viabilitas sel ke
organ garis sel turunan Corti, HEI-OCI, yang telah digunakan untuk
skrining ototoksisitas selama bertahun-tahun (data tidak ditampilkan).
Selama beberapa tahun terakhir, Liberman dan rekan telah
mengungkapkan bahwa kerusakan koklea, setidaknya sebagian,
terutama oleh hilangnya sel ganglion spiral terlepas dari kerusakan sel
rambut (Kujawa dan Liberman, 2006). Dalam penelitian ini, satu-
satunya daerah di mana perubahan histopatologi yang signifikan
diamati adalah di ganglion spiral, yang disertai dengan penurunan
yang signifikan dari sel-sel positif ganda Iba1/CD45 khususnya di kanal
Rosenthal di mana neuron yang diawetkan berada. Perubahan halus
dari fibrosit dinding lateral di area tipe II juga diamati, tetapi
perbedaannya tidak signifikan. Sebagai akibatnya, kami menyimpulkan
bahwa efek MR16-1 terhadap paparan noise-over mungkin disebabkan
oleh pelemahan kehilangan neuron terutama di koklea melalui
penekanan kuat rekrutmen sel imun, yang terlihat jelas di kanal
Rosenthal.
4.2. Keterlibatan makrofag koklea dalam pengobatan MR16-1
Beberapa kelompok telah melaporkan infiltrasi sel-sel inflamasi ke
telinga bagian dalam pada periode puncak 3-7 hari setelah beberapa jenis
kerusakan termasuk paparan kebisingan, obat-obatan, dan stres bedah.
Fujioka dkk., 2006; Hirose dkk., 2005; Ma et al., 2000; Okano dkk., 2008; Sato
dkk., 2008; Satoh dkk., 2002; Tan et al., 2008; Tornabene dkk., 2006). Hasil
kami sesuai dengan laporan tersebut, meskipun tidak satu pun dari laporan
tersebut yang melaporkan penekanan kuat terhadap infiltrasi makrofag.
Hirose dkk. melaporkan bahwa peningkatan sel inflamasi dengan CD45 atau
Iba1 di telinga bagian dalam setelah paparan kebisingan muncul dari
migrasi dari sirkulasi (Hirose dkk., 2005), dan mereka mengusulkan bahwa
sel-sel ini adalah ''makrofag koklea''. Lang dkk. pertama kali melaporkan
bahwa sel-sel itu direkrut dari sumsum tulang dengan eksperimen pelabelan
prospektif (Lang et al., 2006), dan Tan dkk. mengamati bahwa sel-sel itu
mengekspresikan CD45 (Tan et al., 2008). Oleh karena itu, kami
menganggap bahwa CD45 dan Iba1 adalah penanda terbaik untuk makrofag
koklea dan menilai jumlah sel positif ganda Iba1 dan CD45. Dalam model
hewan yang kami gunakan dalam penelitian ini, kepadatannya meningkat
empat hingga lima kali dibandingkan dengan sebelum bising, dan
berkurang lebih dari 90% dengan perlakuan MR16-1. Pada cedera medula
spinalis, beberapa penelitian telah melaporkan bahwa makrofag hematogen
bersifat sitotoksik, dan infiltrasinya yang berlebihan ke dalam lesi agak
merugikan.Gris dkk., 2004; Popovich dkk., 1999; Saville dkk., 2004). Temuan
terbaru menunjukkan bahwa infiltrasi makrofag hematogen yang
berlebihan di koklea mengakibatkan kerusakan yang lebih parah di koklea
setelah penghinaan ototoksik, diungkapkan oleh transplantasi sumsum
tulang dari tikus knock-out CX3CR1 (Sato dkk., 2009). Mengambil kesuksesan
kami
memperhitungkan pelemahan gangguan pendengaran, kami berasumsi
bahwa pengurangan makrofag koklea mungkin sitotoksik untuk neuron
ganglion spiral dan bahwa blokade sinyal IL-6 oleh MR16-1 mengurangi
infiltrasi makrofag hematogen yang memburuk, menghasilkan peningkatan
gangguan pendengaran yang disebabkan oleh kebisingan. secara
fungsional dan patologis.
Mekanisme yang mendasari bagaimana MR16-1 mengurangi
jumlah makrofag masih harus dijelaskan. IL-6 dikenal luas sebagai
sitokin pro-inflamasi multifungsi yang memiliki berbagai peran dalam
respon imun dan inflamasi, seperti produksi antibodi melalui aktivasi
sel B, diferensiasi sel T dan infiltrasi makrofag ke area lokal yang rusak.
Kishimoto, 1989; Muraguchi dkk., 1988). Beberapa laporan mengenai
SSP menunjukkan dampak yang kuat dari IL-6 pada respon inflamasi,
yang mengarah ke aplikasi translasi dalam pengaturan klinis: pada
cedera tulang belakang, penyumbatan IL-6 menggunakan MR16-1, sel
inflamasi berkurang dan astrogliosis reaktif, mengakibatkan fungsional
pemulihan (Okada dkk., 2004). Tikus IL-6-null kurang rentan terhadap
trauma otak dengan cryo-ablation (Morganti-Kossmann dkk., 2002) dan
resisten terhadap ensefalomielitis autoimun eksperimental karena
penurunan yang signifikan dalam reaksi inflamasi (Mendel et al., 1998).
Mekanisme yang mendasari banyak dari fenomena tersebut belum
sepenuhnya dipahami, meskipun peningkatan pengetahuan tentang
sitokin klasik ini secara bertahap mengarah ke konseptualisasi baru:
sitokin pro-inflamasi penting IL-6 membawa sistem kekebalan dari
"kondisi stabil" ke ''fase inflamasi'', dan sel T CD4-positif dari status
''menahan'' menjadi sel T inflamasi ''bersenjata'', yang disebut Th17 (
Chen dan O'Shea, 2008), yang meningkatkan beberapa reaksi inflamasi
termasuk sekresi kemokin. Sel B juga terpengaruh, sehingga produksi
antibodi akan meningkat. Hasil kami dengan jelas menunjukkan bahwa
penyumbatan pensinyalan IL-6 secara dramatis menekan reaksi
inflamasi pada koklea yang rusak. Meskipun kami kekurangan bukti,
fenomena serupa tampaknya telah terjadi pada model kami,
menunjukkan bahwa MR16-1 bekerja sebagai agen ''anti-inflamasi''
terkait dengan kerusakan kebisingan. Penyelidikan lebih lanjut
diperlukan untuk mengatasi masalah ini.
Dalam model kami, peningkatan fungsional dan patologis diamati hanya
pada bagian apikal. Umumnya, ketika suara pita dipilih untuk merusak
koklea, hilangnya sel pada neuron ganglion spiral diamati di bagian yang
sesuai dengan frekuensi (Wang dkk., 2002). Dalam penelitian ini, kami
menggunakan noise pita oktaf 4 kHz, di mana kerusakan yang diperkirakan
mungkin terjadi pada tingkat maksimum pada putaran apikal. Kerusakan
yang lebih parah pada giliran apikal dapat mengubah ekspresi sitokin dan
mengakibatkan bahaya makrofag hematogen menjadi lebih kuat daripada
pada giliran lainnya. Kami mengusulkan bahwa MR16-1 menghambat
bahaya yang lebih kuat ini dan meningkatkan fungsi pendengaran dan
perubahan patologis.
Sel-sel positif Iba1 dan CD45 yang ditunjukkan di dinding lateral
berasal dari terutama daerah inferior dan berdekatan dengan
persimpangan ligamen dengan kapsul koklea bertulang di antara
fibrosit tipe III pada pra-kebisingan. Setelah paparan kebisingan, sel
positif ganda ditemukan di seluruh ligamen spiral (Gambar Tambahan
3). Temuan ini kompatibel dengan laporan sebelumnya (Hirose dkk.,
2005; Tan et al., 2008). Di dinding lateral, penekanan sel infiltrasi yang
signifikan tidak ditemukan setelah pengobatan dengan MR16-1. Hal ini
menunjukkan bahwa pengobatan MR16-1 tidak efektif dalam
menghambat perekrutan makrofag tetapi setidaknya mungkin ada
beberapa pengaruh pada tingkat sitokin.
4.3. Pengantar obat
Hasil kami menunjukkan bahwa aplikasi sistemik berhasil
mengirimkan MR16-1 ke dalam membran sel di seluruh koklea dan
memblokir induksi pensinyalan IL-6 di koklea yang rusak, meskipun
tingkat IgG endogen di labirin sangat rendah.
 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352
konsentrasi. Laporan sebelumnya menunjukkan bahwa kontusio atau
gangguan vaskular sering terjadi setelah kerusakan akibat kebisingan yang
intens, dan dengan demikian kami berasumsi bahwa masuknya obat ini
dimediasi oleh gangguan penghalang labirin darah. Saat ini, lebih dari 20
antibodi monoklonal digunakan di klinik atau sedang menjalani uji klinis.
Temuan kami menunjukkan bahwa pengobatan antibodi monoklonal akan
menjadi pilihan yang layak untuk gangguan telinga bagian dalam akut
termasuk gangguan pendengaran akibat kebisingan.
4.4. Relevansi klinis—studi terjemahan
Salah satu keuntungan dari pengobatan antibodi reseptor anti-IL-6
adalah bahwa antibodi anti-IL-6R yang dimanusiakan (MRA; Atlizumab) telah
digunakan di klinik dan menunjukkan kemanjuran yang tinggi pada penyakit
Castleman dan rheumatoid arthritis (Nishimoto dkk., 2004). Hasil penelitian
kami mungkin bisa membantu dalam pengembangan pengobatan antibodi
reseptor anti-IL-6 untuk pengaturan klinis, menghadirkan kemungkinan
meminimalkan risiko gangguan pendengaran sensorineural.
5. Kesimpulan
Sebagai kesimpulan, kami telah berhasil menunjukkan pentingnya
pengobatan anti-IL-6 sebagai strategi baru untuk gangguan
pendengaran sensorineural akut. Pengobatan ini akan disertai dengan
penurunan infiltrasi makrofag melalui respon anti inflamasi nonsteroid.
Berbeda dari berbagai efek samping kortikosteroid, agen pengobatan
antibodi IL-6 memiliki efek samping yang lebih sedikit, sehingga
berpotensi menawarkan pilihan yang lebih disukai secara klinis.
ucapan terima kasih
Kami berterima kasih kepada Dr. T. Nagai atas instruksi dan saran
terperinci mengenai bagian epon. Kami berterima kasih kepada semua
anggota laboratorium Okano, terutama kepada Dr. T. Yamashita atas
saran kritis mengenai studi Western blot, dan kepada rekan
departemen THT kami atas diskusi terbuka yang berharga. Kami
berterima kasih kepada Takayuki Okano (Universitas Kyoto, NIH/
NIDCD) untuk meninjau naskah dan diskusi. Pekerjaan ini didukung
oleh program Grant-in-Aid untuk Global Center of Excellence (G-COE) ke
Universitas Keio dari Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Olahraga,
Sains dan Teknologi Jepang (MEXT), dan Grant-in- Bantuan untuk
Ilmuwan Muda (B) untuk MF dan KW dari MEXT.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan yang terkait dengan artikel ini dapat ditemukan,
dalam versi online, didoi:10.1016/j.neures.2009.12.008.
Referensi
Chen, Z., O'Shea, JJ, 2008. Sel Th17: nasib baru untuk membedakan sel T pembantu.
kekebalan. Res. 41, 87-102.
Fujioka, M., Kanzaki, S., Okano, HJ, Masuda, M., Ogawa, K., Okano, H., 2006.
Ekspresi sitokin proinflamasi pada koklea yang rusak akibat kebisingan. J. Neurosci.
Res. 83, 575–583.
Gris, D., Marsh, DR, Oatway, MA, Chen, Y., Hamilton, EF, Dekaban, GA, Weaver,
LC, 2004. Blokade sementara integrin CD11d/CD18 mengurangi kerusakan sekunder
setelah cedera tulang belakang, meningkatkan fungsi sensorik, otonom, dan
motorik. J. Neurosci. 24, 4043–4051.
Hirose, K., Discolo, CM, Keasler, JR, Ransohoff, R., 2005. Fagosit mononuklear
bermigrasi ke koklea murine setelah trauma akustik. J. Komp. saraf. 489, 180-194.
Hirose, K., Liberman, MC, 2003. Histopatologi dinding lateral dan endokoklea
potensial di koklea tikus yang rusak karena kebisingan. J. Assoc. Res. Otolaringol. 4,
339–352.
Ito, H., 2005. Pengobatan penyakit Crohn dengan antibodi reseptor anti-IL-6. J.
Gastroenterol. 40, 32–34.
351
Johnston, SC, Zhang, H., Messina, LM, Lawton, MT, Dekan, D., 2005. Klamidia
beban pneumoniae di arteri karotis dikaitkan dengan upregulasi plak interleukin-6
dan peningkatan protein C-reaktif dalam serum. Arterioskler. berdenyut. Vask. Biol.
25, 2648–2653.
Jokay, I., Papp, Z., Soos, G., Sziklai, I., Dezso, B., 2001. Efek otitis kronis
media pada imunoreaktivitas telinga bagian dalam manusia. eur. Lengkungan.
Otorhinolaringol. 258, 529–532.
Juhn, SK, Rybak, LP, 1981. Hambatan labirin dan homeostasis koklea. Akta
Otolaringol. 91, 529–534.
Kanzaki, S., Ito, M., Takada, Y., Ogawa, K., Matsuo, K., 2006. Resorpsi pendengaran
ossicles dan gangguan pendengaran pada tikus kekurangan osteoprotegerin. Tulang 39,
414–419. Keithley, EM, Wang, X., Barkdull, GC, 2008. Faktor nekrosis tumor alfa dapat
menginduksi perekrutan sel inflamasi ke koklea. Oto. Neurotol. 29, 854–859.
Kishimoto, T., 1989. Biologi interleukin-6. Darah 74, 1–10.
Kujawa, SG, Liberman, MC, 2006. Percepatan gangguan pendengaran terkait usia sejak dini
paparan kebisingan: bukti pemuda yang disalahgunakan. J. Neurosci. 26, 2115–2123.
Ladrech, S., Wang, J., Simonneau, L., Puel, JL, Lenoir, M., 2007. Makrofag
kontribusi terhadap respon organ tikus Corti terhadap amikasin. J. Neurosci. Res. 85,
1970–1979.
Lang, H., Ebihara, Y., Schmiedt, RA, Minamiguchi, H., Zhou, D., Smythe, N., Liu, L.,
Ogawa, M., Schulte, BA, 2006. Kontribusi sel induk hematopoietik sumsum tulang ke
telinga bagian dalam tikus dewasa: sel mesenkim dan fibrosit. J. Komp. saraf. 496,
187–201.
Loddick, SA, Turnbull, AV, Rothwell, NJ, 1998. Interleukin-6 serebral adalah neuro-
protektif selama iskemia serebral fokal permanen pada tikus. J. Cereb. Metabolisme
Aliran Darah. 18, 176–179.
Ma, C., Billings, P., Harris, JP, Keithley, EM, 2000. Karakterisasi sebuah eksperimen
respon imun telinga bagian dalam yang diinduksi secara mental. Laringoskop 110, 451–456.
Mendel, I., Katz, A., Kozak, N., Ben-Nun, A., Revel, M., 1998. Fungsi interleukin-6
di ensefalomielitis autoimun: sebuah studi pada tikus yang ditargetkan gen. eur. J.
Imun. 28, 1727–1737.
Morganti-Kossmann, MC, Rancan, M., Stahel, PF, Kossmann, T., 2002. Peradangan
respon tory pada cedera otak traumatis akut: pedang bermata dua. Curr. pendapat
Kritis. Perawatan 8, 101–105.
Muraguchi, A., Hirano, T., Tang, B., Matsuda, T., Horii, Y., Nakajima, K., Kishimoto, T.,
1988. Peran penting faktor stimulasi sel B 2 (BSF-2/IL-6) untuk diferensiasi terminal
sel B. J. Eks. Med. 167, 332–344.
Nishimoto, N., Yoshizaki, K., Miyasaka, N., Yamamoto, K., Kawai, S., Takeuchi, T.,
Hashimoto, J., Azuma, J., Kishimoto, T., 2004. Pengobatan rheumatoid arthritis
dengan antibodi reseptor anti-interleukin-6 manusiawi: percobaan multicenter,
doubleblind, terkontrol plasebo. Rematik Arthritis. 50, 1761–1769.
Okada, S., Nakamura, M., Mikami, Y., Shimazaki, T., Mihara, M., Ohsugi, Y., Iwamoto,
Y., Yoshizaki, K., Kishimoto, T., Toyama, Y., Okano, H., 2004. Blokade reseptor
interleukin-6 menekan astrogliosis reaktif dan memperbaiki pemulihan fungsional
pada cedera tulang belakang eksperimental. J. Neurosci. Res. 76, 265–276. Okano, T.,
Nakagawa, T., Kita, T., Kada, S., Yoshimoto, M., Nakahata, T., Ito, J., 2008.
Sel-sel yang diturunkan dari sumsum tulang yang mengekspresikan Iba1 secara konstitutif
hadir sebagai makrofag jaringan residen di koklea tikus. J. Neurosci. Res. 86, 1758–1767.
Okazaki, M., Yamada, Y., Nishimoto, N., Yoshizaki, K., Mihara, M., 2002. Karakter-
pembentukan antibodi reseptor interleukin-6 anti-tikus. kekebalan. Lett. 84, 231–
240.
Parker, MA, Corliss, DA, Gray, B., Anderson, JK, Bobbin, RP, Snyder, EY,
Cotanche, DA, 2007. Sel induk saraf yang disuntikkan ke dalam koklea yang rusak
karena suara bermigrasi ke seluruh koklea dan mengekspresikan penanda sel
rambut, sel pendukung, dan sel ganglion spiral. Mendengar. Res. 232, 29–43.
Popovich, PG, Guan, Z., Wei, P., Huitinga, I., van Rooijen, N., Stokes, BT, 1999.
Penipisan makrofag hematogen mendorong pemulihan kaki belakang parsial dan perbaikan
neuroanatomi setelah cedera sumsum tulang belakang eksperimental. Eks. saraf. 158, 351–
365.
Puel, JL, Ruel, J., Gervais, d'Aldin, C., Pujol, R., 1998. Excitotoxicity dan perbaikan
sinapsis koklea setelah gangguan pendengaran akibat trauma kebisingan. Neuroreport 9,
2109–2114.
Sato, E., Shick, HE, Ransohoff, RM, Hirose, K., 2008. Repopulasi koklea
makrofag dalam chimera sel progenitor hematopoietik murine: peran CX3CR1. J.
Komp. saraf. 506, 930–942.
Sato, E., Shick, HE, Ransohoff, RM, Hirose, K., 2009. Ekspresi fraktalkin
reseptor CXCR1 pada makrofag cochear mempengaruhi kelangsungan hidup sel-sel rambut
setelah cedera ototoksik. J. Assoc. Res. Otolaringol.
Satoh, H., Firestein, GS, Billings, PB, Harris, JP, Keithley, EM, 2002. Tumor
faktor nekrosis-alpha, inisiator, dan etanercept, penghambat peradangan koklea.
Laringoskop 112, 1627–1634.
Saunders, JC, Dear, SP, Schneider, ME, 1985. Konsekuensi anatomi dari
cedera akustik: review dan tutorial. J. Akus. Perkumpulan Saya. 78, 833–860. Saville,
LR, Pospisil, CH, Mawhinney, LA, Bao, F., Simedrea, FC, Peters, AA,
O'Connell, PJ, Weaver, LC, Dekaban, GA, 2004. Antibodi monoklonal untuk CD11d
mengurangi infiltrat inflamasi ke dalam sumsum tulang belakang yang terluka:
pengobatan neuroprotektif potensial. J. Neuroimunol. 156, 42–57.
Jadi, H., Kim, H., Lee, JH, Park, C., Kim, Y., Kim, E., Kim, JK, Yun, KJ, Lee, KM, Lee,
HY, Moon, SK, Lim, DJ, Park, R., 2007. Sitotoksisitas cisplatin sel pendengaran
membutuhkan sekresi sitokin proinflamasi melalui aktivasi ERK dan NFkappaB. J.
Assoc. Res. Otolaringol. 8, 338–355.
Tamura, T., Udagawa, N., Takahashi, N., Miyaura, C., Tanaka, S., Yamada, Y., Koishi-
hara, Y., Ohsugi, Y., Kumaki, K., Taga, T., 1993. Reseptor interleukin-6 yang larut
memicu pembentukan osteoklas oleh interleukin 6. Proc. Natal akad. Sci. AS 90,
11924–11928.
352 K. Wakabayashi dkk. / Penelitian Ilmu Saraf 66 (2010) 345–352
Tan, BT, Lee, MM, Ruan, R., 2008. Sel-sel yang diturunkan dari sumsum tulang yang menjadi rumah bagi akustik
koklea tuli mempertahankan identitas hematopoietik mereka. J. Komp. saraf. 509,
167–179.
Tornabene, SV, Sato, K., Pham, L., Billings, P., Keithley, EM, 2006. Sel kekebalan
perekrutan setelah trauma akustik. Mendengar. Res. 222, 115–124.
Wang, X., Truong, T., Billings, PB, Harris, JP, Keithley, EM, 2003. Penyumbatan
kerusakan telinga bagian dalam yang dimediasi kekebalan oleh etanercept. Oto. Neurotol.
24, 52–57. Wang, Y., Hirose, K., Liberman, MC, 2002. Dinamika seluler yang diinduksi kebisingan
cedera dan perbaikan di koklea tikus. J. Assoc. Res. Otolaringol. 3, 248–268.
Yamashita, D., Jiang, HY, Schacht, J., Miller, JM, 2004. Penundaan produksi gratis
radikal setelah paparan kebisingan. Otak Res. 1019, 2001–209.
Yamashita, T., Sawamoto, K., Suzuki, S., Suzuki, N., Adachi, K., Kawase, T., Mihara,
M., Ohsugi, Y., Abe, K., Okano, H., 2005. Blokade sinyal interleukin-6 memperburuk
kerusakan otak iskemik pada tikus: kemungkinan keterlibatan aktivasi Stat3 dalam
perlindungan neuron. J. Neurokimia. 94, 459– 468.
Yang, J., Li, W., Duan, M., Zhou, Z., Lin, N., Wang, Z., Sun, J., Xu, J., 2005. Dosis besar
ketamin menghambat cedera paru akut yang diinduksi lipopolisakarida pada tikus.
radang. Res. 54, 133–137.
Yoshizaki, K., Matsuda, T., Nishimoto, N., Kuritani, T., Taeho, L., Aozasa, K., Nakahata,
T., Kawai, H., Tagoh, H., Komori, T., 1989. Patogen signifikansi interleukin-6 (IL-6/
BSF-2) pada penyakit Castleman. Darah 74, 1360–1367.