1
LEMBAR PERSETUJUAN SKRIPSI
Skripsi ini telah kami setujui untuk disajikan dihadapan tim penguji pada ujian
komprehensif Program Studi Farmasi Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Mandala Waluya
Tim Pembimbing
Pembimbing I Pembimbing II
Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi
ii
ABSTRAK
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Mandala Waluya Kendari
Program Studi S1 Farmasi
Skripsi, Agustus 2019
Kata Kunci : Daun Pandan Wangi, Daun Salam, Diabetes Mellitus, Aloksan
Daftar Pustaka : 60 (1986 – 2019)
iii
ABSTRACT
iv
KATA PENGANTAR
v
6. Seluruh dosen dan staf/karyawan STIKES Mandala Waluya Kendari yang telah banyak
membantu Penulis semasa pendidikan.
7. Kedua orang tua tercinta serta keluarga yang telah memberikan dukungan, kasih
sayang serta motivasi.
8. Seluruh teman – teman khususnya Program Studi Farmasi yang telah memberikan
bantuan dan motivasi kepada penulis hingga selesainya hasil penelitian ini.
Akhirnya kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian hasil
penelitian ini penulis ucapkan banyak terimakasih dan semoga dapat bermanfaat bagi kita
semua. Amin.
Penulis,
vi
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL.............................................................................................................i
LEMBAR PERSETUJUAN SKRIPSI...............................................................................ii
ABSTRAK...........................................................................................................................iii
ABSTRACT.........................................................................................................................iv
KATA PENGANTAR..........................................................................................................v
DAFTAR ISI.......................................................................................................................vii
DAFTAR TABEL.............................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................................x
DAFTAR LAMPIRAN.......................................................................................................xi
ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN...........................................................................xii
BAB I PENDAHULUAN.....................................................................................................1
A. Latar Belakang.........................................................................................................1
B. Rumusan Masalah....................................................................................................3
C. Tujuan Penelitian.....................................................................................................4
D. Manfaat Penelitian...................................................................................................4
E. Keaslian Penelitian..................................................................................................5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA..........................................................................................6
A. Tinjauan Umum Tanaman.......................................................................................6
1. Uraian Tanaman Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.)....................6
2. Uraian Tanaman Salam (Syzygium polyanthum (Wight.)...................................7
B. Uraian Tikus Putih (Rattus norvegicus)..................................................................9
C. Ekstraksi................................................................................................................10
D. Standardisasi..........................................................................................................12
E. Diabetes Melitus....................................................................................................18
F. Insulin Eksogen.....................................................................................................19
G. Uji Antidiabetes dengan Induksi Aloksan.............................................................21
H. Hipotesis................................................................................................................23
BAB III METODE PENELITIAN...................................................................................25
A. Jenis dan Rancangan Penelitian.............................................................................25
B. Lokasi dan Waktu Penelitian.................................................................................25
C. Alat dan Bahan Yang Digunakan..........................................................................25
vii
1. Alat.....................................................................................................................25
2. Bahan.................................................................................................................25
D. Prosedur Penelitian................................................................................................26
1. Pengambilan Sampel..........................................................................................26
2. Determinasi Sampel...........................................................................................26
3. Pengolahan Sampel............................................................................................26
4. Ekstraksi Sampel................................................................................................26
E. Penentuan Parameter – Parameter Standardisasi...................................................27
F. Penyiapan Sampel Bahan Penelitian.....................................................................28
1. Pembuatan larutan koloidal Na CMC 0,5 % b/v................................................28
2. Pembuatan Suspensi Ekstrak.............................................................................28
G. Pengujian...............................................................................................................29
1. Pengkondisian Hewan Coba..............................................................................29
2. Induksi Diabetes Pada Hewan Coba..................................................................29
3. Pengujian Efek Antidiabetes..............................................................................29
H. Analisis Data..........................................................................................................30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................................31
A. Hasil Penelitian......................................................................................................31
1. Hasil Karakterisasi Simplisia.............................................................................31
2. Hasil Pengukuran Kadar Gula Dalam Darah Tikus...........................................31
B. Pembahasan............................................................................................................34
C. Keterbatasan Penelitian..........................................................................................42
BAB V PENUTUP..............................................................................................................43
A. Kesimpulan............................................................................................................43
B. Saran.......................................................................................................................43
DAFTAR PUSTAKA.........................................................................................................44
LAMPIRAN........................................................................................................................49
viii
DAFTAR TABEL
Tabel 4. Hasil Pengukuran Rata-rata Kadar Gula Darah Sebelum dan Sesudah Induksi
Diabetes................................................................................................................................31
ix
DAFTAR GAMBAR
Gambar 4. Hasil Pengukuran Kadar Gula Darah Tikus Putih pada H+3.............................32
Gambar 5. Hasil Pengukuran Kadar Gula Darah Tikus Putih pada H+15...........................33
x
DAFTAR LAMPIRAN
xi
ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN
α = alfa
β = beta
BB = Berat Badan
Bj = Bobot jenis
cm = centimeter
δ = delta
dL = desiliter
DM = Diabetes Mellitus
DNA = Deoxyribo Nucleic Acid
EEDPW = Ekstrak Etanol Daun Pandan Wangi
EEDS = Ekstrak Etanol Daun Salam
g = gram
IV = Intravena
kg = kilogram
KGDP = Kadar Gula Darah Puasa
mg = miligram
ml = mililiter
mm = milimeter
Na CMC = Natriun Carboxymetyl Cellulosa
U = Unit
IUPAC = International Union of Pure and Applied Chemistry
xii
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
melitus terjadi penumpukan gula dalam darah sehingga insulin gagal masuk ke dalam
sel. Peningkatan kadar gula darah dalam darah atau hiperglikemia adalah kondisi
disebabkan oleh penurunan sekresi insulin atau penurunan sensitivitas insulin atau
neuropati (Nurarif dan Kusuma, 2015). Kegagalan tersebut terjadi akibat kurangnya
hormon insulin atau cacat fungsi. Hormon insulin merupakan hormon yang membantu
masuknya gula darah (WHO, 2016). Dalam metabolisme tubuh hormon insulin
bertanggung jawab dalam mengatur kadar glukosa darah. Hormon ini diproduksi
kesehatan yang paling serius yang dihadapi masyarakat di dunia pada abad terakhir
ini. Diabetes melitus (DM) telah membunuh 38 juta orang setiap tahunnya. Indonesia
penderita setelah Cina, India dan Amerika Serikat, Brazil, Rusia, Mexico (IDF, 2015).
Salah satu tujuan terapi bagi penderita Diabetes melitus yaitu pengontrolan kadar gula
darah dengan pemberian obat hipoglikemik oral maupun insulin. Namun, sering kali
terdapat efek samping yang tidak diinginkan. Oleh karena itu, peneliti tertarik untuk
1
melakukan penelitian yang menggunakan sumber bahan alam sebagai salah satu
Telah banyak masyarakat yang menggunakan obat tradisional dari bahan alam
sumberdaya alam di Indonesia dilakukan eksplorasi bahan alam yang akan menjadi
sumber dalam pencarian obat baru. Beberapa tumbuhan yang sering dimanfaatkan
oleh masyarakat secara empiris sebagai obat diabetes melitus yaitu daun pandan wangi
dan daun salam sebagai penurunan kadar gula darah. Penggunaan bersama pada daun
pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan daun salam (Syzygium polyanthum
Wight.) memberikan efek yang sinergis yaitu pada penelitian yang dilakukan oleh
Prasmeswari dan Widjanarko (2014), menunjukkan ekstrak air daun pandan wangi
terdapat pada daun salam diantaranya yaitu alkaloid dan saponin dapat menstimulasi
sekresi insulin dari sel beta pankreas (Patel et al, 2012; Murray et al, 2003), serta
bertindak meniru kerja insulin dan sebagai insulin sensitizer (Lee dan Thuong, 2010).
mengandung senyawa kimia flavonoid yang juga mampu menurunkan kadar glukosa
darah pada tikus diabetik dengan cara menghambat kerja dari GLUT2 (Glucose
Transporter Isoform 2), suatu protein transporter glukosa yang terdapat pada membran
usus yang menyebabkan kadar glukosa darah akan turun (Song J, et al, 2002),
flavanoid juga dapat berfungsi sebagai antioksidan alami, sehingga dapat memperbaiki
kerusakan jaringan pankreas yang diakibatkan alkilasi DNA akibat induksi aloksan
2
2014). Penelitian lainnya yang dilakukan oleh Widyawati et al, (2014) menyimpulkan
bahwa kandungan flavonoid yang terkandung di dalam daun salam merupakan salah
Roxb.) dan daun salam (Syzygium polyanthum Wight.) memberikan efek yang sinergis
yaitu pada penelitian yang dilakukan oleh Prasmeswari dan Widjanarko (2014),
menunjukkan ekstrak air daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dapat
sedangkan kandungan senyawa yang terdapat pada daun salam diantaranya yaitu
alkaloid dan saponin dapat menstimulasi sekresi insulin dari sel beta pankreas (Patel et
al, 2012; Murray et al, 2003), serta terpenoid seperti triterpenoid dapat dapat
meningkatkan penyerapan glukosa dengan bertindak meniru kerja insulin dan sebagai
ekstrak etanol daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan daun salam
insulin pada tikus (Rattus norvegicus) putih galur wistar dengan metode induksi
Aloksan. Sehingga hasil penelitian ini dapat menjadi referensi dalam penemuan
B. Rumusan Masalah
sebagai berikut:
3
penurunan kadar gula darah pada tikus (Rattus norvegicus) putih galur wistar
C. Tujuan Penelitian
memberikan efek dalam penurunan kadar gula darah pada tikus (Rattus
kelompok negatif.
memberikan hasil yang optimal dalam penurunan kadar gula darah dibandingkan
kelompok positif.
D. Manfaat Penelitian
4
3. Bagi peneliti, menambah pengetahuan dan keahlian dalam pengujian efek
amaryllifolius Roxb.) dan daun salam (Syzygium polyanthum Wight.) pada tikus
E. Keaslian Penelitian
ekstrak etanol daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan daun salam
(Syzygium polyanthum Wight.) pada tikus (Syzygium polyanthum Wight.) putih galur
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
a. Klasifikasi
Regnum : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Classis : Monocotyledonae
Ordo : Pandanales
Familia : Pandanaceae
Genus : Pandanus
b. Morfologi
Pandan wangi dapat tumbuh secara liar ataupun ditanam di halaman rumah atau
kebun. Bentuk pohon atau perdu pandan wangi bercabang lebar dan kadang-
bercabang dan berwarna coklat. Pandan wangi berdaun tunggal, berbentuk pita
denan ujung runcing dan tepi rata. Panjang daun ± 2 m dan lebar ± 10 cm, licin
dan berwarna hijau. Bunga dari tumbuhan ini termasuk dalam bunga majemuk,
berbentuk bongkol, dan berumah dua. Sedangkan buahnya termasuk dalam buah
dan memiliki akar tunggang berwarna putih kekuningan (Van Steenis, 2008).
6
Gambar 1. Daun Pandan Wangi (Dokumentasi Pribadi)
c. Kandungan Kimia
pada ekstrak air, antioksidan pada ekstrak air dan metanol, antikanker pada
ekstrak etanol dan metanol, dan antibakteri pada ekstrak etanol dan etil asetat.
a. Klasifikasi
Regnum : Plantae
Divisio : Spermatophyta
Class : Dicotyledoneae
Orde : Myrtales
Family : Myrtaceae
Genus : Syzygium
b. Morfologi
7
Daun salam tumbuh subur di atas tanah dataran rendah sampai ketinggian
1400 meter di atas permukaan laut di Pulau Jawa. Daun salam mempunyai
pohon yang besar dan tingginya bisa mencapai 20-25 meter (Winarto, 2004).
Simplisia daun salam berwarna kecoklatan, bau aromatik lemah, dan rasa kelat.
Daun tunggal bertangkai pendek, panjang tangkai daun 5-10 mm. Helai daun
berbentuk lonjong memanjang yang panjangnya 7-15 cm dengan lebar 5-10 cm,
ujung pangkal daun meruncing (FHI, 2009). Bunga majemuk tersusun dalam
malai yang keluar dari ujung ranting, berwarna putih, dan berbau harum,
buahnya buni, bulat, berdiameter 8-9 mm, buah muda berwarna hijau, setelah
c. Kandungan Kimia
8
sebagai sistem pertahanan tubuh (Harismah dan Chusniatun, 2016). Flavonoid
yang terkandung dalam daun salam yaitu kuersetin dan fluoretin (Prahastuti et
al, 2011). Flavonoid yang terkandung di dalam daun salam merupakan salah satu
golongan senyawa yang dapat menurunkan kadar glukosa darah (Nublah, 2011).
niacin, dan asam folat. Beberapa mineral yang terkandung di dalam daun salam
yaitu zat besi, fosfor, kalsium, magnesium, selenium, seng, natrium dan kalium
Tikus putih merupakan hewan pengerat dan sering digunakan sebagai hewan
percobaan atau digunakan untuk penelitian dikarenakan tikus merupakan hewan yang
mewakili dari kelas mamalia, yang mana manusia juga merupakan dari golongan
menyerupai manusia. Tikus putih jantan umumnya memiliki berat badan 450 – 520 g.
Kebutuhan makan setiap hari adalah 5 – 10 g/100 g berat badan dan minum 10 ml/100
g berat badan. Kadar kolesterol normal berkisar antara 40 – 130 mg/dl serta kadar
Tikus putih (Rattus norvegicus) atau disebut juga disebut juga tikus norwegia
adalah salah satu hewan yang umum digunakan dalam eksperimental laboratorium.
Taksonomi tikus putih (Rattus norvegicus) adalah sebagai berikut (Sharp dan Villano,
2012) :
Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
9
Kelas : Mamalia
Ordo : Rodentia
Subordo : Myomorpha
Famili : Muridae
Genus : Rattus
C. Ekstraksi
Ekstraksi yaitu penarikan zat pokok yang diinginkan dari bahan mentah obat
dengan menggunakan pelarut yang dipilih dimana zat yang diinginkan akan larut.
dengan cara melepaskan zat aktif dari masing-masing bahan obat, menggunakan
menstrum yang cocok, uapkan semua atau hampir semua dari pelarutnya dan sisa
beberapa senyawa memiliki kelarutan terbatas dalam pelarut ekstraksi pada suhu
kamar. Sedangkan metode ekstraksi cara panas merupakan metode ekstraksi terbaik
untuk memperoleh hasil ekstrak yang banyak dan juga pelarut yang digunakan lebih
sedikit (efisiensi bahan) waktu yang digunakan lebih cepat, sampel yang diekstraksi
kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan disebut maserasi (Tiwari
et al, 2011). Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana, dilakukan dengan
cara merendam bahan simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus
dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan
larut, karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan di
10
luar sel, maka larutan yang terpekat didesak keluar. Peristiwa tersebut berulang
sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel.
kehalusan yang cocok dari material awal. Dengan meningkatnya tingkat kehalusan,
maka luas permukaanya yang dikenai cairan ekstraksi semakin besar. Serbuk dengan
tingkat penghalusan yang tinggi kemungkinan sel-sel yang rusak juga semakin besar,
Meskipun demikian, tingkat penghalusan yang tinggi dari simplisia malah tidak
menguntungkan sebab bahan pengekstraksi akan sulit dipisahkan dari sisanya setelah
diekstraksi. Difusi cairan pengekstraksi mungkin terjadi jika lapisan sebelah luar dari
Adapun kelebihan dari maserasi yaitu sederhana, mudah, dan biaya yang
murah (Ginting, 2013). Keuntungan lain dari metode maserasi adalah cocok untuk
yang lama, membutuhkan pelarut yang cukup besar, secara teoritis proses ekstraksi
a. Digesti adalah cara maserasi dengan menggunakan pemanasan lemah, yaitu pada
suhu antara 40-50oC. Cara maserasi ini hanya dapat dilakukan untuk simplisia yang
11
c. Remaserasi adalah penyarian dimana cairan penyari dibagi menjadi 2. Seluruh
tuangkan dan diperas, ampas dimaserasi lagi dengan cairan penyari yang kedua.
peralatan yang hampir sama dengan maserasi melingkar, tetapi dengan jumlah
POM, 1986).
D. Standardisasi
prosedur dan cara pengukuran yang hasilnya merupakan unsur - unsur terkait
paradigma mutu kefarmasian, mutu dalam artian memenuhi syarat standard (kimia,
standar umum dan parameter standar spesifik. Pengertian standardisasi juga berarti
proses menjamin bahwa produk akhir obat (obat, ekstrak atau produk ekstrak)
mempunyai nilai parameter tertentu yang konstan dan ditetapkan terlebih dahulu
sebagai bahan dan penetapan nilai berbagai parameter dari suatu produk. Standardisasi
simplisia juga mempunyai pengertian bahwa simplisia yang akan digunakan untuk
obat sebagai bahan baku harus memenuhi persyaratan yang tercantum dalam
12
monografi terbitan resmi Departemen Kesehatan (Materia Medika Indonesia) (Depkes
RI, 2000).
Mengingat obat herbal dan berbagai tanaman memiliki peran penting dalam
bidang kesehatan bahkan bisa menjadi produk andalan Indonesia maka perlu
dilakukan upaya penetapan standar mutu dan keamanan ekstrak tanaman obat
(Saifudin, 2011).
dan aspek kuantitatif kadar senyawa kima yang bertanggung jawab langsung
botani), bagian tumbuhan yang digunakan (rimpang, daun dsb) dan nama
Indonesia tumbuhan.
13
jumlah senyawa kandungan (Depkes RI, 2000).
cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara. Lalu residu dipanaskan
pada suhu 105oC hingga bobot tetap. Kadar dalam persen senyawa
yang larut air dihitung terhadap ekstrak awal (Saifudin, Rahayu, &
Teruna, 2011).
A 1−Ao
% Kadar senyawa terlarut air = x 100 %
B
Keterangan : A1 = Bobot cawan + Residu setelah pemanasan (g)
A0 = Bobot cawan kosong (g)
B = Bobot sampel awal (g)
hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara.
Residu dipanaskan pada suhu 105oC hingga bobot tetap. Kadar dalam
14
persen senyawa yang larut etanol (95%) dihitung terhadap ekstrak
awal
A 1−Ao
% Kadar senyawa terlarut etanol = x 100 %
B
Parameter non spesifik adalah segala aspek yang tidak terkait dengan
ekstrak meliputi:
konstan yang dinyatakan sebagai nilai persen. Dalam hal khusus (jika
organik menguap) identik dengan kadar air, yaitu kandungan air karena
Parameter bobot jenis adalah masa per satuan volume pada suhu
atau alat lainnya. Adapun tujuan menentukan bobot jenis ekstrak yaitu
15
memberikan batasan tentang besarnya masa per satuan volume yang
terlarut.
2. Kadar air
bahan, dilakukan dengan cara yang tepat diantara cara titrasi, destilasi atau
bahan.
3. Kadar abu
tinggal unsur mineral dan anorganik. Tujuan menentukan kadar abu untuk
4. Sisa pelarut
16
2. Manfaat Standardisasi
Uji klinik adalah uji senyawa kimia obat, obat herbal, ekstrak dan
berbagai sediaan pada dosis tertentu dengan target biologis manusia agar
dari kondisi patologis yang terkait dengan penyakit tertentu. Untuk itu semua
aspek dituntut terdesain dan di kontrol dengan baik (Saefudin et al, 2011).
Jika jumlah zat aktif yang diberikan tidak konsisten maka interpretasinya
menjadi bias dan justru merugikan. Di sinilah peran besar standardisasi untuk
penentuan dosis senyawa marker untuk uji klinik ekstrak atau obat herbal
Sediaan
17
keamanan terhadap pemakai misal keberadaan logam berat (Pb, Cd, dan As),
pestisida dalam tanah, udara dan air, jenis dan jumlah mikroorganisme dan
untuk menentukan batas minimal kadar air, zat dan jumlah pencemar mikroba
sebagai produk unggulan. Belum tingginya upaya lintas sektoral dan terpadu
herbal yang berdaya tawar rendah. Standardisasi adalah upaya penting untuk
E. Diabetes Melitus
ditandai dengan kadar glukosa darah yang tinggi karena kurangnya sekresi insulin oleh
pankreas, penggunaan insulin yang tidak tepat oleh sel target atau karena keduanya.
Komplikasi semacam itu timbul karena adanya gangguan pada sistem pengaturan
penyimpanan dan metabolisme karbohidrat, lipid dan protein yang berubah (Suresha et
terjadinya kerusakan sel β-Langerhans pankreas yang mengarah pada defisiensi insulin
secara absolut. DM tipe 2 merupakan tipe DM yang terjadi karena adanya gangguan
sekresi insulin disertai resistensi insulin yang menyebabkan insulin tidak dapat
membawa glukosa masuk ke dalam jaringan. DM tipe lain meliputi kerusakan fungsi
18
pada sel β-Langerhans pankreas akibat kelainan genetik. DM Gestasional adalah
kondisi DM yang dialami sementara selama masa kehamilan (Piero et al, 2015).
non farmakologis, yang keduanya bertujuan mengontrol kadar glukosa darah dan
mencegah komplikasi (Chang et al, 2013; Dipiro et al, 2011). Terapi non farmakologis
berupa pengaturan pola makan dan olahraga secara teratur, sedangkan terapi
farmakologis meliputi pemberian insulin dan obat antidiabetes oral (Dipiro et al,
2011).
F. Insulin Eksogen
utama dalam protein, karbohidrat, dan lemak metabolisme. Diproduksi secara endogen
insulin dibelah dari peptida proinsulin yang lebih besar dalam sel β menjadi peptida
aktif dari insulin dan C-peptida, yang dapat digunakan sebagai suatu penanda untuk
produksi insulin endogen. Semua tersedia secara komersial sediaan insulin hanya
dikategorikan insulin termasuk sumber, kekuatan, onset, dan durasi aksi. Selain itu,
insulin dapat dicirikan sebagai analog, didefinisikan sebagai insulin yang memiliki
asam amino dalam molekul insulin dimodifikasi untuk memberikan fisiokimia dan
Secara historis, insulin berasal dari sumber daging sapi atau babi. Daging sapi
insulin berbeda oleh tiga asam amino dan babi oleh satu asam amino bila
menghentikan produksi sumber daging dan babi insulin pada Desember 2003, dan
memproduksi insulin. Eli Lilly, Pfizer, dan Sanofi-Aventis saat ini menggunakan jenis
19
non-penyakit yang menghasilkan Escherichia coli untuk sintesis insulin, sedangkan
Novo Nordisk menggunakan Saccharomyces cerevisiae, atau ragi roti, untuk sintesis
Waktu paruh dari suntikan insulin reguler intravena (IV) adalah sekitar 9
menit. Dengan demikian durasi efektif aksi sebuah injeksi IV tunggal pendek, dan
perubahan tingkat insulin IV akan mencapai kondisi stabil dalam waktu sekitar 45
menit. Farmakokinetik intravena dari insulin larut lainnya (lispro, aspart, glulisine, dan
bahkan glargine) tampak mirip dengan insulin reguler IV, tetapi tidak kelebihan
dibandingkan insulin reguler IV dan lebih mahal. Insulin terdegradasi di hati, otot, dan
ginjal. Penonaktifan hati adalah 20% hingga 50% dalam satu bagian. Sekitar 15%
persyaratan dosis insulin yang lebih rendah pada pasien dengan endstage penyakit
Tabel 2. Sediaan Suntik dan Insulin yang Tersedia (Dipiro et al, 2011)
20
Intermediate-acting
insulins NPH
Humulin N® Lilly No Vial, prefilled pen Vial : 28 days
Novolin R® Novo-Nordisk No Vial, prefilled Vial : 30 days;
pen,and innoLet others; 14 days
Long-acting insulins
Lantus® ( insulin Sanofi-Aventis Yes Vial, 3 ml, Opticlick 28 days
glargine) pen catridge
Levemir® (insulin Novo-Nordisk Yes Vial, 3 ml pen 42 days
determir) catridge and pen,
innoLet
Pre-mixed insulins
Premixed insulin
analog
Humalog mix® 75/25 Lilly Yes Vial, prefilled pen Vial: 28 days;
(75% neutral pen: 10 days
protamine lispro, 25%
lispro)
Novolog mix® 70/30 Novo-Nordisk Yes Vial, prefilled pen, 3 Vial: 29 days;
(70% aspart protamine mL pen cartridge others: 14 dys
suspension, 30%
aspart)
Humalog mix® 50/50 Lilly Yes 3 mL pen 10 days
(50% neutral
protamine lispro®/
50% lispro)
NPH-regular
combinations
Humulin® 70/30 Lilly No Vial, prefilled pen Vial: 28 days;
pen: 10 days
Novolin® 70/30 Novo-Nordisk No Vial, pen cartridge, Vial: 30 days;
InnoLet others; 10 days
Humulin® 50/50 Lilly No Vial 28 days
Other injectables
Byetta® (exenatide) Amylin/Lilly No 5 mcg and 10 mcg Pen in use can
pen, ̴ 60 injections be used at
(doses)/ pen room
temperature (<
25oC [< 77 oC
F])
Symlin® (pramlintide) Amylin Yes 5 mLvial 28 days
Dosis yang digunakan untuk manusia dengan berat rata-rata 50 kg kadar gula
darah puasa > 180 mg/dl adalah 6 U novomix, 13 maka dosis yang digunakan pada
manusia ialah : 6 U/50 kg = 0,12 U/kg BB. Digunakan rumus Human Equivalent Dose
21
(HED) base on Body Surface Area (BSA), 14 maka didapatkan hasil: Dosis manusia x
Km faktor manusia/ Km faktor tikus. 0,12 x 37/6 = 0,74 U dibulatkan 0,7/kg BB tikus.
Aloksan adalah suatu substrat yang secara struktural adalah derivat pirimidin
sederhana. 1-3 Aloksan diperkenalkan sebagai hidrasi aloksan pada larutan encer.
Nama aloksan diperoleh dari penggabungan kata allantoin dan oksalurea (asam
oxobarbiturat. Rumus kimia aloksan adalah C4H2N2O4. Aloksan murni diperoleh dari
oksidasi asam urat oleh asam nitrat. Aloksan adalah senyawa kimia tidak stabil dan
senyawa hidrofilik. Waktu paruh aloksan pada pH 7,4 dan suhu 37oC adalah 1,5 menit
(Lenzen, 2008).
pada binatang percobaan. Pemberian aloksan adalah cara yang cepat untuk
karakteristik mirip dengan DM tipe 1 pada manusia. Aloksan bersifat toksik selektif
terhadap sel beta pankreas yang memproduksi insulin karena terakumulasinya aloksan
secara khusus melalui transporter glukosa. Oleh sebab itu, aloksan sering digunakan
untuk menginduksi penyakit diabetes mellitus pada hewan uji coba. Dosis intravena
yang digunakan biasanya 65 mg/kg BB, sedangkan dosis untuk intraperitoneal dan
subkutan adalah 2-3 kalinya (Szkudelski, 2001). Berdasarkan penelitian terdahulu, rute
22
intraperitoneal merupakan rute yang paling banyak digunakan pada hewan coba tikus
dengan kisaran dosis 120 mg/kg BB 200 mg/kg BB (Swastini, 2018). Hewan uji harus
dipuasakan sebelum diinjeksi aloksan karena hewan yang puasa akan lebih rentan
diberikan dalam larutan konsentrasi 5% b/v untuk merusak pankreas dan diinjeksikan
secara intraperitonial untuk tikus (Etuk, 2010). Aloksan adalah senyawa kimia tidak
stabil dan senyawa hidrofilik. Aloksan merupakan bahan kimia yang digunakan untuk
aloksan ke dalam sel-sel β-pankreas dan kecepatan ambilan ini akan menentukan sifat
diabetogenik aloksan. Ambilan ini juga dapat terjadi pada hati atau jaringan lain, tetapi
jaringan tersebut relatif lebih resisten dibanding pada sel-sel β-pankreas. Sel beta
untuk mensekresikan insulin. Aloksan juga secara selektif menghambat sekresi insulin
pada sel beta pankreas melalui penghambatan pada glukokinase, yang merupakan
sensor adanya glukosa pada sel beta pankreas, melalui oksidasi thiol pada enzim
sehingga merusak metabolisme oksidatif dan fungsi sensor glukosa pada sel beta
23
Gambar 3. Struktur Kimia Aloksan.
H. Hipotesis
Keterangan :
penurunan kadar gula darah pada tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar
kadar gula darah pada tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar yang
diinduksi diabetes.
Keterangan :
Roxb.) dan Daun Salam (Syzygium polyanthum Wight.) tidak dapat memberikan
hasil yang optimal dalam penurunan kadar gula darah dibandingkan kelompok
positif.
24
Ha = Kelompok kombinasi Ekstrak Daun Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius
Roxb.) dan Daun Salam (Syzygium polyanthum Wight.) dapat memberikan hasil
yang optimal dalam penurunan kadar gula darah dibandingkan kelompok positif.
25
BAB III
METODE PENELITIAN
untuk mengetahui efek antidiabetes kombinasi ekstrak etanol daun pandan wangi
(Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan daun salam (Syzygium polyanthum Wight.) pada
tikus (Rattus norvegicus) putih galur wistar dengan metode induksi aloksan..
1. Alat
air (Intralab Instrument), kertas saring (Hario V60), spoit (Onemed), jarum oral
seperangkat alat untuk uji kadar gula darah : glukometer (Nesco), strip glukometer
(Nesco).
2. Bahan
monohidrat, hewan coba, pakan hewan coba, Daun Pandan Wangi (Pandanus
26
D. Prosedur Penelitian
1. Pengambilan Sampel
2. Determinasi Sampel
3. Pengolahan Sampel
4. Ekstraksi Sampel
filtratnya dan ampasnya diremaserasi kembali dengan cairan penyari yang baru
sampai pelarutnya menjadi bening dan disatukan, ekstrak lalu diuapkan dengan
rotary evaporator.
27
E. Penentuan Parameter – Parameter Standardisasi
1. Parameter spesifik
a. Identitas Ekstrak
Deskripsi tata nama meliputi : nama ekstrak, nama latin tumbuhan, bagian
tumbuhan yang digunakan, dan nama Indonesia tumbuhan (Depkes RI, 2000).
b. Organoleptik Ekstrak
dengan pelarut (alkohol atau air) untuk ditentukan jumlah solut yang identik
dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri. Dalam hal tertentu dapat
dalam labu ukur 1000 mL dan ditambahkan air hingga tanda batas).
jam pertama dan dibiarkan selama 18 jam lalu disaring. Sebanyak 5,0 mL
filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang
telah ditara. Lalu residu dipanaskan pada suhu 105oC hingga bobot tetap.
28
Kadar dalam persen senyawa yang larut air dihitung terhadap ekstrak awal
berdasar rata yang telah ditara. Residu dipanaskan pada suhu 105oC hingga
bobot tetap. Kadar dalam persen senyawa yang larut etanol (95%) dihitung
kedalam lumpang. Natrium CMC sebanyak 0,5 g dimasukkan sedikit demi sedikit
berikut: sebanyak 12 mg/ml EEDPW dan 12,5 mg/ml EEDS dimasukkan kedalam
vial yang berbeda, kemudian diukur suspensi Na CMC 0,5% dalam gelas ukur 10
ml, setelah itu dimasukkan kedalam masing-masing vial yang berisi EEDPW dan
29
G. Pengujian
Hewan coba yang digunakan pada penelitian ini adalah tikus jantan galur
Wistar yang berusia 8 minggu dengan berat badan antara 200-300 g dan
masing-masing 12 jam. Hewan coba diberi pakan pelet diet standar dan air minum
diperiksa kadar gula darah puasanya. Induksi diabetes pada hewan coba dilakukan
Kadar gula darah tikus diperiksa kembali pada hari kedua, 24 jam setelah
glukosa darah puasa yang melebihi 125 mg/dL (Anitha et al, 2012; Sornalakshmi
Pada pengujian ini hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok pada uji toleransi
glukosa oral pada tikus yang diinduksi diabetes. Tiap kelompok terdiri dari 3
tikus.
30
Kelompok III : Kombinasi ekstrak ekstrak etanol daun pandan wangi (600
mg/kg BB) dan daun salam (625 mg/kg BB) per oral.
dan pemeriksaan kadar gula darah tikus hingga hari ke 15, setelah itu diukur
kembali kadar gula darah pada semua kelompok tikus pada jam ke-0, 6, 12, 18,
dan 24. Semua sampel darah diambil melalui pemotongan ujung ekor tikus dan
H. Analisis Data
dengan One-way Analysis of Variance (ANOVA) (program SPSS 20.0) dengan post
hoc LSD's test. Data dianggap signifikan jika nilai p kurang dari 0,05.
31
BAB IV
A. Hasil Penelitian
No
Karakterisasi Hasil
.
1. Penetapan kadar senyawa larut air 11%
2. Penetapan kadar senyawa larut etanol 9%
2) Daun Salam
No
Karakterisasi Hasil
.
1. Penetapan kadar senyawa larut air 11%
2. Penetapan kadar senyawa larut etanol 11%
32
Hasil pengukuran rata-rata kadar gula darah Tikus (Rattus norvegicus) H+3
Grafik hasil pengkuran kadar gula dalam darah tikus putih pada H+3 dapat
140
120 110.3
103.6
99.3 100.6
100 100.6 95 91.3 92.3
8782.3
94.3
88.3 88.3 K. Negatif
80 K. Positif
K. Perlakuan
60
40
20
0
KGDP KGDA H+3(0) H+3(6) H+3(12) H+3(18) H+3(24)
Hasil Perlakuan
Gambar 4. Hasil Pengukuran Kadar Gula Darah Tikus Putih pada H+3
33
H+3(12) : Kadar Gula Darah H+3 Perlakuan jam ke- 12 (mg/dL)
H+3(18) : Kadar Gula Darah H+3 Perlakuan jam ke- 18 (mg/dL)
H+3(24) : Kadar Gula Darah H+3 Perlakuan jam ke- 24 (mg/dL)
Hasil pengkuran kadar gula dalam darah tikus putih pada H+15 dapat dilihat
200 185
176.3 177.6 180
180 172
Kadar Gula Dalam Darah (mg/dL)
160
140 128 129.3
120 111 105.6 105.3 110
100 106.3 90 91.3
81.6 K. Negatif
80
K. Positif
60 K. Perlakuan
40
20
0
H+15(0) H+15(6) H+15(12) H+15(18) H+15(24)
Hasil Perlakuan
Gambar 5. Hasil Pengukuran Kadar Gula Darah Tikus Putih pada H+15
Ket : H+15(0) : Kadar Gula Darah H+15 Perlakuan jam ke- 0 (mg/dL)
H+15(6) : Kadar Gula Darah H+15 Perlakuan jam ke- 6 (mg/dL)
H+15(12) : Kadar Gula Darah H+15 Perlakuan jam ke- 12 (mg/dL)
H+15(18) : Kadar Gula Darah H+15 Perlakuan jam ke- 18 (mg/dL)
H+15(24) : Kadar Gula Darah H+15 Perlakuan jam ke- 24 (mg/dL)
34
Tabel 8. Hasil Analisis Pengukuran Kadar Gula Darah pada H+15:
Statistik Uji
No. Hasil Pengamatan
Perlakuan P
Positif vs Negatif 0,05
1. Perlakuan Jam Ke- 0 Positif vs Ekstrak 0,07
Ekstrak vs Negatif 0,05
Positif vs Negatif 0,05
2. Perlakuan Jam Ke- 6 Positif vs Ekstrak 0,18
Ekstrak vs Negatif 0,04
Positif vs Negatif 0,05
3. Perlakuan Jam Ke- 12 Positif vs Ekstrak 0,82
Ekstrak vs Negatif 0,04
Positif vs Negatif 0,05
4. Perlakuan Jam Ke- 18 Positif vs Ekstrak 0,51
Ekstrak vs Negatif 0,05
Positif vs Negatif 0,04
5. Perlakuan Jam Ke- 24 Positif vs Ekstrak 0,18
Ekstrak vs Negatif 0,04
Ket : p < 0,05 Berbeda Signifikan
B. Pembahasan
sebagai bahan dan penetapan nilai berbagai parameter dari suatu produk. Standardisasi
simplisia juga mempunyai pengertian bahwa simplisia yang akan digunakan untuk
obat sebagai bahan baku harus memenuhi persyaratan yang tercantum dalam
RI, 2000). Salah satu tujuan dari standardisasi adalah menjaga konsistensi dan
senyawa aktif farmakologis melalui analisis kuantitatif metabolit sekunder yang akan
pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan daun salam (Syzygium polyanthum
Wight.) yang dilakukan di dalam penelitian ini adalah karakterisasi ekstrak berupa
parameter spesifik sesuai acuan dari PPOMN (Depkes RI, 2000) meliputi kadar
senyawa yang larut dalam air dan kadar senyawa yang larut dalam etanol. Penentuan
kadar senyawa larut dalam air bertujuan untuk menunjukkan jumlah kandungan
35
senyawa yang bersifat polar (memiliki sifat kepolaran sama dengan air). Penetapan
senyawa yang bersifat semi polar (memiliki sifat kepolaran sama dengan etanol).
Etanol yang digunakan sebagai pelarut adalah etanol 96% yang kemudian diuapkan di
atas titik didih etanol (80oC). Hasil karakterisasi simplisia daun pandan wangi dan
daun salam yaitu penetapan kadar senyawa larut dalam air berturut-turut yaitu sebesar
11% ±0,11 dan 9% ±0,09, sedangkan kadar senyawa larut dalam etanol sebanyak
11% ± 0,11 dan 11% ± 0,11. Berdasarkan hasil yang diperoleh, dapat diketahui bahwa
kadar senyawa larut dalam etanol lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa larut
dalam air, artinya kadar senyawa semi polar lebih tinggi dibandingkan dengan kadar
senyawa polarnya. Hal ini disebabkan karena pelarut dalam proses maserasi yang
digunakan adalah etanol yang mana bersifat semi polar. Hasil yang diperoleh pada
penetapan kadar senyawa larut air dan kadar senyawa larut etanol sudah sesuai
senyawa larut air yaitu < 24% dan kadar senyawa larut etanol > 6%. Penetapan kadar
senyawa larut dalam air dan etanol ini merupakan dugaan secara umum banyaknya
senyawa yang bersifat polar (yang larut air) maupun bersifat semi polar (terlarut dalam
etanol). Penetapan senyawa larut dalam air maupun etanol ini tidak secara langsung
diantaranya faktor genetik, infeksi oleh kuman, faktor nutrisi, zat diabetogenik, dan
radikal bebas (stres oksidatif). Senyawa aloksan merupakan salah satu zat
diabetogenik yang bersifat toksik, terutama terhadap sel beta pankreas, dan apabila
diberikan kepada hewan coba seperti tikus maka dapat menyebabkan hewan coba tikus
36
dalam sel-sel beta pankreas dan kecepatan pengambilan akan menentukan sifat
diabetogenik aloksan. Induksi aloksan pada dosis 150 mg/kgBB secara intraperotoneal
mampu meningkatkan kadar glukosa darah dan kerusakan pada sel β pankreas tikus.
Tikus dinyatakan hiperglikemia bila kadar glukosa darah > 135 mg/dL (Giri, 2008).
Senyawa dalam daun pandan wangi yang diduga berperan dalam menurunkan
kadar glukosa darah adalah flavonoid. Sampai saat ini mengenai mekanisme flavonoid
dalam menurunkan kadar glukosa darah belum diketahui secara pasti, namun dari
menangkap radikal bebas atau dapat berfungsi sebagai antioksidan alami. Aktivitas
radikal bebas, sehingga dapat memperbaiki keadaan jaringan yang rusak. Flavonoid
dapat berperan dalam kerusakan jaringan pankreas yang diakibatkan oleh alkilasi
DNA akibat induksi aloksan sebagai akibatnya dapat memperbaiki morfologi pankreas
sel pada pulau Langerhans (Prameswari, 2014). Flavonoid dapat mencegah komplikasi
atau progresifitas diabetes mellitus dengan cara membersihkan radikal bebas yang
berlebihan, memutuskan rantai reaksi radikal bebas, mengikat ion logam (chelating),
dan memblokade jalur poliol dengan menghambat enzim aldose reduktase. Flavonoid
juga memiliki efek penghambatan terhadap enzim alfa glukosidase melalui ikatan
hidroksilasi dan substitusi pada cincin β. Prinsip penghambatan ini serupa dengan
acarbose yang selama ini digunakan sebagai obat untuk penanganan diabetes mellitus,
fruktosa (Soewonto, H. 2001; Mills, S dan K, Bone. 2002; Ho, E dan T.M. Bray.
1999). Kandungan senyawa yang terdapat pada daun salam diantaranya yaitu alkaloid
37
dan saponin yang dapat menstimulasi sekresi insulin dari sel beta pankreas (Patel et al,
2012; Murray et al, 2003), serta terpenoid seperti triterpenoid dapat dapat
meningkatkan penyerapan glukosa dengan bertindak meniru kerja insulin dan sebagai
dengan lingkungan selama 7 hari untuk menghindari terjadinya stres pada saat
jam agar terjadi pengosongan lambung oleh makanan yang dapat mempengaruhi hasil
Pada pengujian diabetes mellitus , 9 ekor tikus putih (Rattus norvegicus) dibagi
menjadi 3 kelompok perlakuan. Masing – masing kelompok terdiri dari 3 ekor tikus.
Kelompok yang diberi Insulin Pen dengan dosis 0,7 mg/kg BB tikus, kelompok diberi
Na CMC 0,5 %, dan Kelompok yang diberi suspensi kombinasi ekstrak daun pandan
wangi dengan dosis 600 mg/KgBB tikus dan daun salam 625 mg/kgBB tikus.
Diberikan selama 15 hari dan diukur kadar gula darah tikus putih pada hari ke 3 dan
hari ke 15. Sebelumnya terlebih dahulu diukur kadar gula darah puasa dan kadar gula
darah setelah induksi aloksan. Diukur kadar gula darah tikus putih menggunakan alat
glukometer.
Berdasarkan data penelitian pada tabel 4, rata-rata kadar gula darah hewan uji
bermakna. Kadar gula darah tikus sebelum induksi belum mengalami hiperglikemi
ditandai dengan kadar gula darah masih terlihat normal dengan nilai <125 mg/dL,
namun setelah diinduksi diabetes mengalami peningkatan kadar gula darah sehingga
menyebabkan hiperglikemi dengan nilai >125 mg/dL. Pada H+3 dan H+15 jam ke- 0,
6, 12, 18, dan 24 setelah pemberian perlakuan, diperoleh hasil pengukuran rata-rata
38
kadar gula darah pada kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan ekstrak
mengalami penurunan kadar gula darah, namun tidak terjadi penurunan pada
sebelum induksi diabetes dan sesudah induksi diabetes diperoleh hasil yang berbeda
nyata tiap kelompoknya yaitu p<0,05. Hal ini membuktikan bahwa induksi aloksan
dapat merusak sel beta pankreas yang menyebabkan produksi insulin menurun
hingga H+15 kemudian diukur kembali kadar gula darah tikus pada H+3 dan H+15.
Pada penelitian ini data-data yang terkumpul dianalisis menggunakan program SPSS
Kolmogorov-Smirnov terhadap data kadar gula darah. Jika hasil uji menunjukan
distribusi data adalah normal dan homogen yang masing-masing hasil uji ditunjukan
oleh nilai p (sig) > 0,05. Kemudian dilanjutkan dengan uji one way ANOVA
memberikan nilai p (sig) < 0,05 artinya ada efek penurunan kadar gula darah terhadap
pemberian kombinasi ekstrak daun pandan wangi dan daun salam, kemudian
dilakukan analisis Uji Post Hoc apabila dari hasil uji one way ANOVA diketahui
adanya perbedaan signifikan, maka dilanjutkan uji Post Hoc yaitu untuk mengetahui
Data kadar gula darah sesudah perlakuan diolah menggunakan metode Uji
pengolahan data tidak dapat dilanjutkan menggunakan analisis varians satu arah (One
Way ANOVA) untuk menentukan perbedaan antar kelompok perlakuan. Oleh karena
39
Wallis Test kemudian dilanjutkan dengan metode Mann-Whitney Test untuk
mengetahui antar kelompok mana yang terdapat perbedaan bermakna kadar gula darah
tikus (Rattus norvegicus). Pada H+3 menunjukkan perlakuan jam ke- 0, 6, 12, 18, dan
jam ke- 0, 6, 12, 18, dan 24 dengan nilai signifikansi juga didapatkan yaitu p<0,05
yang menunjukkan bahwa adanya perbedaan bermakna pada kadar gula dalam darah
perlakuan jam ke-0, 6, 12, 18 dan 24 diperoleh hasil bahwa terdapat perbedaan yang
dibandingkan kelompok kontrol negatif dengan nilai signifikan (p<0,05). Tidak ada
perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol positif dan perlakuan ekstrak
dengan nilai signifikan (p>0,05). Selanjutnya hasil analisis statistik pada H+15
perlakuan jam ke- 0, 6, 12, 18, dan 24 juga menunjukkan adanya perbedaan bermakna
pada kelompok perlakuan ekstrak dan kelompok kontrol positif dibandingkan dengan
perlakuan ekstrak, sedangkan asil analisis pada kelompok kontrol positif dibandingkan
perlakuan ekstrak menunjukkan tidak ada perbedaan yang bermakna baik pada jam ke-
seperti penelitian yang dilakukan Prasmeswari, (2014) bahwa ekstrak daun pandan
wangi dapat menurunkan kadar gula darah tikus yang diinduksi diabetes selama 4
minggu, dibandingkan penelitian saat ini lebih cepat efeknya dalam menurunkan kadar
glukosa darah tikus disebabkan karena menggunakan kombinasi ekstrak daun pandan
40
wangi dan daun salam yang efeknya saling sinergis dalam penurunan kadar gula darah
dapat dilihat pada pengukuran H+3 telah terjadi penurunan kadar gula darah hingga
H+15. Penelitian ini juga sejalan dengan penelitian Lolok et al. (2019) yang
menggunakan kombinasi ekstrak kulit bawang merah dan kulit bawang putih dengan
metode induksi aloksan terhadap tikus yang menyatakan bahwa ekstrak tanaman yang
dikombinasi mempercepat penurunan kadar gula darah pada hewan coba tikus.
Senyawa yang terkandung dalam daun pandan wangi dan daun salam mempunyai
wangi antara lain, tanin, alkaloid, flavonoid, dan polifenol. Flavonoid diketahui
mampu berperan menangkap radikal bebas atau berfungsi sebagai antioksidan alami
(Lugasi et al., 2003). Flavonoid dapat berperan dalam kerusakan jaringan pankreas
yang diakibatkan oleh alkilasi DNA akibat induksi aloksan sebagai akibatnya dapat
antidiabetes yang mampu meregenerasi sel pada pulau Langerhans (Sandhar et al.,
2011). Alkaloid terbukti mempunyai kemampuan regenerasi sel β pankreas yang rusak
(Arjadi, 2010). Aktivitas antioksidan yang dimiliki ekstrak air daun pandan wangi juga
tinggi yaitu 66.82% sehingga diduga mampu memperbaiki sel β pankreas yang rusak.
perbaikan pada jaringan pankreas, maka terjadi peningkatan jumlah insulin didalam
tubuh sehingga glukosa darah akan masuk kedalam sel sehingga terjadi penurunan
glukosa darah dalam tubuh (Prasmeswai, 2014), dan senyawa kimia yang terdapat
dalam daun salam yaitu flavanoid dimana kandungan flavonoid utama pada ekstrak
etanol daun salam berupa kuersitrin dan fluoretin yang berfungsi sebagai antioksidan
(Badan POM RI, 2004). Flavonoid bekerja dengan cara menghambat reabsorbsi
41
glukosa dari ginjal (Lukacinova et al, 2008), mengatur kerja enzim yang terlibat pada
Data dari uji Kruskal-Wallis Test dan Mann-Whitney Test menunjukkan pada
H+3 perlakuan jam ke- 0, 6, 12, 18, dan 24 dengan nilai signifikansi (p<0,05) dan
untuk H+15 perlakuan jam ke- 0, 6, 12, 18, dan 24 dengan nilai signifikansi juga
terdapat perbedaan bermakna dari uji kadar gula darah tikus (Rattus norvegicus). Hasil
uji Mann-Whitney Test pengukuran kadar gula darah menunjukkan bahwa perbedaan
bermakna terdapat pada kontrol positif dan kelompok perlakuan ekstrak dibandingkan
kelompok kontol negatif. Hal tersebut menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak etanol
daun pandan wangi dan daun salam memiliki efek penurunan kadar gula darah tikus
putih (Rattus norvergicus) pada dosis 600 mg/KgBB tikus dan 625 mg/KgBB tikus.
ekstrak etanol daun pandan wangi dosis 600 mg/kgBB dan daun salam 625 mg/kgBB
dapat menurunkan kadar gula darah pada tikus (Rattus norvegicus) putih galur wistar
yang diinduksi diabetes. Menurut Wolfenshon dan Lloyd (2013) kadar gula darah
normal 50–135 mg/dl. Penurunan kadar gula darah pada tikus yang terjadi masih
dalam kategori normal, artinya tidak terjadi hipoglikemik. Pengaruh ekstrak etanol
daun pandan wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dalam menurunkan kadar gula
darah terjadi karena dalam ekstrak etanol daun pandan wangi terdapat kandungan
tannin, alkaloid dan flavonoid. Tannin yang terdapat didalam daun pandan wangi akan
memicu metabolisme glukosa dan lemak, yang nantinya digunakan untuk mencegah
adanya timbunan glukosa dan lemak di darah (Dalimartha, 2005). Alkaloid akan
42
fruktosa 1,6-biofosfatase yang berfungsi menurunkan pembentukan glukosa dari
substrat selain karbohidrat sehingga kadar glukosa darah turun (Arjadi, 2010).
Isoform 2), suatu protein transporter glukosa pada membran usus (Song J et al, 2002)
yang merupakan kendaraan pengangkut glukosa dari saluran cerna kemudian masuk
ke dalam darah melewati membran menuju ke dalam sel (Sudoyo et al, 2006).
Sehingga kadar gula darah tidak meningkat. Sedangkan kandungan senyawa yang
terdapat pada daun salam diantaranya yaitu alkaloid dan saponin dapat menstimulasi
sekresi insulin dari sel beta pankreas (Patel et al, 2012; Murray et al, 2003), serta
bertindak meniru kerja insulin dan sebagai insulin sensitizer (Lee dan Thuong, 2010).
C. Keterbatasan Penelitian
Dalam proses penelitian ini, terdapat beberapa kendala yang dialami oleh
peneliti yaitu :
2. Selain itu juga tidak dilakukan perbandingan ekstrak dengan dosis yang berbeda,
43
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
1. Kombinasi ekstrak Daun Pandan Wangi (Pandanus amaryllifolius Roxb.) dan Daun
gula darah pada tikus putih (Rattus norvegicus) galur wistar yang diinduksi
diabetes dibuktikan dengan adanya perbedaan yang nyata dengan nilai signifikan p
< 0,05
Roxb.) dan Daun Salam (Syzygium polyanthum Wight.) memberikan hasil optimal
yang hampir sama dengan kelompok positif dalam penurunan kadar gula darah
dibuktikan dengan nilai signifikan yang tidak berbeda nyata p > 0,05.
B. Saran
2. Perlu dilakukan isolasi senyawa aktif dari daun pandan wangi dan daun salam yang
3. Perlu dilakukan uji toksisitas yang mungkin timbul akibat pemberian ekstrak daun
44
DAFTAR PUSTAKA
Anitha, M., Sakthidevi, G., Muthukumarasamy, S., dan Mohan, V.R., 2012. Effect of
Cynoglossum zeylanicum (Vehl ex Hornem) Thunb. Ex Lehm on Oral Glucose
Tolerance in rats.
Arjadi, F., dan Susatyo, P., 2010, Regenerasi Sel Pulau Langerhans Pada Tikus Putih
(Rattus norvegicus) Diabetes yang Diberi Rebusan Daging Mahkota Dewa
(Phaleria macrocarp (scheff.) Boerl.),Efek Anti Diabetes Rebusan Buah Mahkota
Dewa, 2 (2): 117-26.
Chang, C.L.T., Y. Lin, A.P. Bartolome, Y.C. Chen, S.C. Chiu, & W.C. Yang. 2013.
Departemen Kesehatan RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.
Dirjen Pengawasan Obat dan Makanan.Volume 1 : Jakarta
Etuk, 2010. Animals Models for Studying Diabetes mellitus. Agriculture and Biology
Journal of North America 1:2, 130-134.
Ginting, E. (2013) Carotenoid extraction of orange-fleshed sweet potato and its application
as natural food colorant, J. Teknol. dan Industri Pangan, 24.
45
Giri, L.N. 2008. Potensi Antioksidasi Daun Salam : Kajian In Vivo Pada Tikus
Hiperkolesterolemia dan Hiperglikemia. Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam. Bogor
Harbone, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan,
Terbitan II. ITB : Bandung.
Ho, E and T.M. Bray. 1999. Antioxidants, NFKB Activation, and Diabetogenesis. Proc
Soc Exp Biol Med. 1999 Dec: 222(3): 205-13
International Diabetes Federation. 2015. IDF Diabetes Atlas 7th Edition. Brussels:
International Diabetes Federation. http://www.diabetes atlas.org/. [Sitasi: 9 Februari
2017]. [Sitasi pada 18 November 2016].
Lee, M. S., dan Thuong, P. T. 2010. Stimulation of Glucose Uptake by Triterpenoids From
Weigela Subsessilis. Phytotherapy research, 24, 49-53.
Lolok et al. 2019. Antidiabetic Effect Of The Combination Of Garlic Peel Extract (Allium
sativum) And Onion Peel (Allium cepa) In Rats WithOral-Glucose Tolerance
Method. Research Joournal of Pharmacy and Technology. Fakultas Farmasi
STIKES Mandala Waluya, Kendari.
Lucacinova, A., Mojzis, J., Benacka, R., Keller, J., Maguth, T., Kurila, P., et, al., 2008,
Preventive Effect Of Flavonoids On Alloxan- Induced Diabetes Mellitus In Rats,
Acta Vet, brno, 77: 175-182.
Lugasi, A., J. Hovari, K.V. Sagi and L. Biro. The Role of Antioxidant Phytonutrients In
The Prevention of Disease. Acta Biologica Szegediensis. 2003; 47: 119-125
Mills, S and K. Bone. 2002. Principles and Practice of Phytotherapy : Modern Herbal
Medicine. Edinburgh, Scotland, Churral Livingstone
46
Murray, R. K., Granner, D. K., Mayes, P. A., & Rodwel, V. W. (2003). Biokimia Harper
(Vol. 25). Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Nublah., 2011, Identifikasi Golongan Senyawa Penurun Kadar Glukosa Darah Tikus Putih
(Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) Hiperglikemia pada Daun Sukun
(Artocarpus altilis (park.) fosberg ), Tesis, Universitas Gajah Mada.
Nurarif, H.A & Kusuma, H. (2015). Aplikasi Asyhan Keperawatan Berdasarkan Diagnosa
Medis Nanda dan NIC-NOC. Yogyakarta : Medi Action
Nurhasnawati, H., Sukarmi dan Fitri H., 2017, Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi
dan Sokletasi Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Jambu Bol
(Syzygium malaccense L.), Jurnal Ilmiah ManuntungVol.3 No.1 : 3
Octavia, D.R., 2009, Uji Aktivitas Penangkap Radikal Ekstrak Petroleum Eter, Etil Asetat
dan Etanol Daun Binahong (Anredera Corfolia (Tenore) Steen) dengan metode
DPPH (2,2-difenil-1- pikrihidrasil), Skripsi. Universitas Muhamadiyah, Surakarta.
Patel, D., Kumar, R., Laloo, D., & Hemalatha, S. (2012). Natural Medicines From Plant
Source Used For Therapy of Diabetes Mellitus: An Overview of Its
Pharmacological Aspects. Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 239-250.
Piero, M.N., Nzaro, G.M., dan Njagi, J.M., 2015. Diabetes mellitus-a devastating
metabolic disorder. Asian journal of biomedical and pharmaceutical sciences, 5: 1.
Prahastuti, S., Tjahjani, S. dan Hartini, E., 2011. The Effect Of Bay Leaf Infusion
(Syzygium Polyanthum (Wight) Walp) To Decrease Blood Total Cholesterol Level
In Dyslipidemia Model Wistar Rats. Jurnal Medika Planta, P. Vol. 1 No.4.
Prasmeswari, O. M., dan Widjanarko, S. B., 2014. Uji Efek Ekstrak Daun Pandan Wangi,
Jurnal Pangan dan Agroindustri, No. 2, Vol. 2, FTP Universitas Brawijaya,
Malang, hal. 16 – 27.
Pourcel, L., Routaboul, J,M et al., 2006, Flavonoid Oxidation In Plants: From Biochemical
Properties To Physiological, Elsevier.
Radenkovic, et al. 2015. Experimental diabetes induced by alloxan and streptozotocin: The
current state of the art. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods.
Saifudin, A., Rahayu, V., & Teruna, H. Y. (2011). Standardisasi Bahan Obat Alam.
Yogyakarta: Graha Ilmu.
47
Sandhar, H.K., B. Kumar, S. Prashes, P. Tiwari, M. Salhan, P. Sharma. 2011. A Review Of
Phytochemistry And Pharmacology Of Flavonoids. Internationale Pharmaceutica
Scienca Jan-Mar 2011 Vol 1 Issue 1
Sharp, P., dan Villano, J., 2013, The Laboratory Rat, Edisi 2, 9-11, CRC Press, California.
Song J, Kwon O, Cheng S, Daruwala R, Eck P and Park JB, 2002, Flavonoid inhibition of
sodium-dependent vitamin c transporter 1 (svctl) and glucose transporter isoform 2
(glut2), intestinal transporters for vitamin c and glucose, J Biol Chem.
Sornalakshmi, V., Tresina Soris, P., Paulpriya, K., Packia Lincy, M., dan Mohan, V.R.,
n.d. Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) in Normal Control and Glucose Induced
Hyperglycemic Rats with Hedyotis leschenaultiana DC. Group, 1: 0–9.
Sumono, A. & A. Wulan.2009. Kemampuan Air Rebusan Daun Salam (Eugenia polyantha
W) dalam Menurunkan Jumlah Koloni Bakteri Spectroccocus sp. Majalah Farmasi
Indonesia. 20 (3), 112-117.
Suresha, R.N., Sushma, V.N., Ashwini, V., Kalabharathi, H.L., Jayanthi, M.K., dan
Prathima, C., 2012. The effect of nifedipine on oral glucose induced glycaemic
changes in normal albino rats. pancreas, 10: 13.
Suryani, N., T. Endang dan Aulanni’am. 2013. Pengaruh Ekstrak Metanol Biji Mahoni
Terhadap Peningkatan Kadar Insulin, Penurunan Ekspresi TNF-α dan Perbaikan
Jaringan Pankreas Tikus Diabetes. Jurnal Kedokteran Brawijaya, Vol. 27, No. 3,
Februari 2013
Swastini, Dewa Ayu. 2018. Penurunan Kadar Glukosa Darah dan Gambaran Histopatologi
Pankreas dengan Pemberian Gula Aren (Arenga pinnata) pada Tikus Jantan Galur
Wistar yang Diinduksi Aloksan. Indonesia Medicus Veterinus. 7(2): 94-105.
Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur G. & Kaur H., 2011, Phytochemical Screening And
Extraction: A Review, International Pharmaceutica Sciencia, 1 (1), 98-106.
48
Udia, P.M., Ogbonna, O.J., Antai, A.B., Mbatutung, I.F., dan Eyo, S.E., 2013. Oral glucose
tolerance test and some haematological effects of aqueous leaf extract of
Rothmannia hispida (K Schunn) Fargel on normoglycaemic albino rats. J.
Pharmacog. Phytochemistry, 5: 300–305.
Van Steenis, C.G.G.J., 2003, Flora, hal 233-236, P.T. Pradya Paramita, Jakarta.
Van Steenis CGGJ. 2008. Flora, Cetakan ke-7. Jakarta: PT Pradnya Paramita
Van Steenis. 2008. Flora, Cetakan ke-12. Jakarta: PT. Pradnya Paramita
Winarto WP, Tim Karyasari. Mememanfaatkan bumbu dapur untuk mengatasi aneka
penyakit. Jakarta: Agromedia Pustaka; 2004.p.50
Wolfensohn, S. dan Lloyd, M., 2013. Handbook of Laboratory Animal Management and
Welfare., 4th Edition. ed. John Wiley & Sons, Ltd.
World Health Organization. 2016. Global Report on Diabetes. France: World Health
Organization. http://www.who.int/diabetes/global-report/en/. [Sitasi: 29 Mei 2017].
49
LAMPIRAN
50
Lampiran 1. Determinasi Sampel
51
52
53
54
Lampiran 2. Surat Keterangan Pembelian dan Kesehatan Hewan
55
Lampiran 3. Prosedur Kerja
Simplisia
56
Lampiran 4. Perhitungan
1) Perhitungan Dosis
1. Perhitungan Na.CMC 0,5% (Kontrol Negatif)
0,5
= x 100 gr = 0,5 gr
100
57
1) Perhitungan standardisasi
1. Uji kadar senyawa terlarut dalam air
A 1−Ao
= x 100 %
B
a. Daun pandan wangi
35,25 gr −35,10 gr
= x 100 %
1 gr
= 11 %
b. Daun Salam
36,64 gr −36,55 gr
= x 100 %
1 gr
=9%
58
Lampiran 5. Dokumentasi
1. Pengambilan sampel
Perajangan dan
2.
pengeringan sampel
Penimbangan simplisia
3.
kering
59
Pemekatan sampel
5.
menggunakan evaporator
7. Pengujian standardisasi
60
10. Penyiapan hewan uji
61
Lampiran 6. Hasil Analisis SPSS
NPar Tests
Descriptive Statistics
Kruskal-Wallis Test
Ranks
KGDPP 3 6.00
KGDPKE 3 3.83
KGDPN 3 5.17
SIAE 3 14.00
SIAN 3 14.00
Total 18
Test Statisticsa,b
KGD
Chi-Square 13.068
df 5
Asymp. Sig. .023
62
2) Hasil analisis pengukuran kadar gula darah H+3 dan H+15
Kruskal-Wallis Test
Ranks
Total 9
Kontrol Positif 3 3.00
Kombinasi Ekstrak 3 4.00
H3PerlakuanJamke6
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 3.33
Kombinasi Ekstrak 3 3.67
H3PerlakuanJamke12
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 3.67
Kombinasi Ekstrak 3 3.33
H3PerlakuanJamke18
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 3.83
Kombinasi Ekstrak 3 3.17
H3PerlakuanJamke24
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 2.17
Kombinasi Ekstrak 3 4.83
H15PerlakuanJamke0
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 4.50
Kombinasi Ekstrak 3 2.50
H15PerlakuanJamke6
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 3.33
Kombinasi Ekstrak 3 3.67
H15PerlakuanJamke12
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
Kontrol Positif 3 4.00
Kombinasi Ekstrak 3 3.00
H15PerlakuanJamke18
Kontrol Negatif 3 8.00
Total 9
63
Kontrol Positif 3 4.50
Total 9
Test Statisticsa,b
H3Perl H3Perl H3Perl H3Perl H3Perl H15Perl H15Perl H15Perl H15Perl H15Perl
akuanJ akuanJ akuanJ akuanJ akuanJ akuanJa akuanJa akuanJa akuanJa akuanJa
amke0 amke6 amke1 amke1 amke2 mke0 mke6 mke12 mke18 mke24
2 8 4
Chi-Square 5.422 5.647 5.468 5.468 5.535 6.880 6.252 5.468 5.600 6.305
df 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
Asymp. Sig. .066 .059 .065 .065 .063 .032 .044 .065 .061 .043
64
3) Hasil analisis kadar gula darah tikus H+3 dan H+15
- Kontrol Positif vs Kontrol Negatif
Test Statisticsa
H3PerlakuanJ H3Perlakua H3Perlakua H3PerlakuanJ H3PerlakuanJ H15PerlakuanJ H15Perlakuan H15Perlakua H15Perlakuan H15Perlaku
amke0 nJamke6 nJamke12 amke18 amke24 amke0 Jamke6 nJamke12 Jamke18 anJamke24
Mann-Whitney U .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000
Wilcoxon W 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000
Z -1.964 -1.964 -1.993 -1.964 -1.964 -1.964 -1.964 -1.964 -1.964 -1.993
Asymp. Sig. (2-tailed) .050 .050 .046 .050 .050 .050 .050 .050 .050 .046
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100b
Test Statisticsa
H3PerlakuanJ H3Perlakua H3Perlakua H3Perlakua H3Perlakua H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan
amke0 nJamke6 nJamke12 nJamke18 nJamke24 Jamke0 Jamke6 Jamke12 Jamke18 Jamke24
Mann-Whitney U .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000
Wilcoxon W 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000 6.000
Z -1.964 -1.993 -1.993 -1.993 -1.964 -1.964 -1.964 -1.993 -1.964 -1.993
Asymp. Sig. (2-tailed) .050 .046 .046 .046 .050 .050 .050 .046 .050 .046
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100 b
.100b
65
- Kontrol Positif vs Perlakuan Ekstrak
Test Statisticsa
H3PerlakuanJ H3Perlakua H3Perlakua H3Perlakua H3Perlakua H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan H15Perlakuan
amke0 nJamke6 nJamke12 nJamke18 nJamke24 Jamke0 Jamke6 Jamke12 Jamke18 Jamke24
Mann-Whitney U 4.000 3.000 4.000 4.000 3.500 .500 1.500 4.000 3.000 1.500
Wilcoxon W 10.000 9.000 10.000 10.000 9.500 6.500 7.500 10.000 9.000 7.500
Z -.218 -.664 -.218 -.221 -.443 -1.771 -1.328 -.221 -.655 -1.328
Asymp. Sig. (2-tailed) .827 .507 .827 .825 .658 .077 .184 .825 .513 .184
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] 1.000 b
.700 b
1.000 b
1.000 b
.700 b
.100 b
.200 b
1.000 b
.700 b
.200b
66
DAFTAR RIWAYAT HIDUP
67