SINGKATNYA,

Alur kerja yang dilakukan dalam penelitian ini adalah :

1. Study Cytologis
Kapsul dikumpulkan dan difiksasi. Setelah fiksasi, bahan didehidrasi dan ditanam
dalam resin Spurr. Beberapa jaringan mengalami dehidrasi, jaringan ini kemudian disusupi
dengan Historesin dan ditanamkan dalam resin Spurr. Pewarnaan histokimia protein dan
karbohidrat total dilakukan, perlakuan ini diperiksa dan difoto dengan mikroskop cahaya
Nikon E-600. Jika kutikula terdeteksi menggunakan Nile merah maka jaringan diwarnai
dengan Nile red. Pola fluoresensi diperiksa menggunakan mikroskop Nikon E-600
epifluorescence.

2. Koleksi Bibit
Lima kapsul dikumpulkan pada interval 15 hari, 60-240 DAP dari tahun 1999 hingga
2001. Kapsul dibawa ke laboratorium dan disterilisasi.

3. Media Germinasi In Vitro

Empat media germinasi in vitro yang digunakan dalam penelitian ini adalah media
Harvais, media MS yang dimodifikasi, media Norstog termodifikasi dan Thomale GD
medium.

4. Persiapan Biji dan Pewarnaan

Lima kapsul dikumpulkan untuk setiap pretreatment dan pewarnaan TTC. Setelah
sterilisasi permukaan, kapsul dibedah dan biji diambil. Metode kimia termasuk merendam
benih dalam tiga larutan berbeda, 1% NaOCl, 1 N NaOH, dan 1 N HCl, dengan dua tetes
agen pembasah (Tween 20; Sigma Chemical Co.) Pretreatment ultrasonik adalah metode fisik
yang digunakan.

5. Kondisi Kultur dan Inokulasi untuk Germinasi

Kapsul disterilkan permukaannya dan dibedah untuk diambil bijinya. Kapsul dibagi
untuk semua perlakuan. Ada ≈100 biji per tabung. Setelah disemai, tabung kultur
ditempatkan di ruang pertumbuhan pada 25 ± 1 ° C, dalam kegelapan konstan.

6. Perhitungan Rasio Germinasi dan Analisis Data

Setiap tabung diperiksa dan direkam pada interval 15-d selama 120 d, menggunakan
mikroskop stereo Nikon (pembesaran 10x). Rasio perkecambahan dihitung sebagai
persentase dari jumlah benih yang berkecambah, dari total jumlah biji. Lima kapsul dipanen
untuk inokulasi pada setiap tanggal pengambilan sampel. Data dianalisis secara statistik
dengan menggunakan metode analisis varians (ANOVA) diikuti oleh uji rentang berganda.