setiap komponen sebelum digunakan.

Definisi unit:
SensiFAST™ cDNA Synthesis Kit Transkriptase Terbalik: Satu unit mengkatalisis penggabungan 1 nmol dTTP ke dalam
bahan yang tidak larut dalam asam dalam 10 menit pada 37 C dalam 50 mM Tris-HCl, pH
8,6, 40 mM KCl, 1 mM MnSO4, 1 mM DTT, dan 0,5 mM [3H]TTP, menggunakan 200 M
Pengiriman: Di atas dry/blue ice Nomor katalog BIO-65053: 50 reaksi oligo(dT)12-18-prima poli(A)n sebagai templat. RNase Inhibitor: Satu unit menghambat 5 ng
RNase A sebesar 50%.
No. Batch: Lihat vial BIO-65054: 250 reaksi
Tindakan pencegahan keamanan:
Berbahaya jika tertelan. Mengiritasi mata, sistem pernapasan dan kulit. Silakan merujuk ke
Simpan pada –20 °C lembar data keamanan material untuk informasi mengenai bahaya dan praktik
penanganan yang aman.

Kata sinyal: PERINGATAN

Catatan:
Deskripsi Untuk penelitian atau penggunaan manufaktur lebih lanjut saja.
Merek Dagang:
Penyimpanan dan stabilitas: SensiFAST™, TransAmp™, TRIsure™ HyperLadder™ adalah merek dagang dari Bioline
SensiFAST cDNA Synthesis Kit dikirimkan pada es kering/biru dan harus disimpan pada Reagents Ltd.
suhu -20 °C setelah diterima. Ketika disimpan dalam kondisi optimal, reagen stabil selama
minimal satu tahun sejak tanggal pembelian. Lelehkan, campur, dan sentrifus sebentar

Kit Sintesis cDNA SensiFAST menyediakan metode yang cepat dan sangat sensitif untuk sintesis cDNA untai pertama untuk digunakan
dalam studi PCR (qPCR) waktu nyata. Buffer 5x TransAmp™ menyediakan komponen yang sangat dioptimalkan untuk transkripsi balik
yang efisien, dan mencakup perpaduan unik dari oligo dT berlabuh dan primer hexamer acak untuk memastikan cakupan 3' dan 5' yang
tidak bias untuk meningkatkan akurasi data. Transkriptase balik yang sangat efisien menghasilkan sintesis untai pertama yang sangat kuat
dan hasil cDNA yang lebih tinggi dari berbagai konsentrasi RNA masukan. Kit Sintesis cDNA SensiFAST menawarkan sensitivitas,
efisiensi, dan reproduktifitas yang ditingkatkan untuk kinerja luar biasa dalam eksperimen qPCR berikutnya.
Penting untuk selalu menyertakan reaksi kontrol 'tanpa RT' atau
'minus RT' yang sesuai dalam desain eksperimen Anda. Karena
Komponen transkriptase balik adalah komponen terpisah dari Kit Sintesis
Nama Produk 50 reaksi 250 reaksi cDNA SensiFAST, dimungkinkan untuk menyertakan kontrol
sintesis cDNA formal yang mencakup semua komponen kecuali
5x Buffer TransAmp 200 L 1 mL transkriptase balik.

Reverse Transcriptase 50 L 250 L

SensiFAST cDNA Synthesis Mix Reaction Guidelines
Template Quality
• Utuh, RNA berkualitas tinggi sangat penting untuk
reaksi transkripsi balik
• Semua reagen untuk digunakan dengan RNA harus
disiapkan menggunakan air tingkat biologi molekuler
bebas nuklease
• RiboSafe RNase Inhibitor disertakan dalam campuran
Reverse Transcriptase untuk membantu mengurangi
degradasi template dan meningkatkan hasil produk
RT-qPCR
• Gen dengan jumlah salinan rendah mungkin memerlukan
peningkatan bahan awal
• Gunakan reagen ekstraksi RNA yang sesuai, misalnya
TRIsure™ atau ISOLATE II RNA Mini Kit
Pencernaan DNase I dari RNA total
Untuk menghilangkan sisa DNA genomik yang mencemari yang
dapat mempengaruhi aplikasi qPCR yang sangat sensitif
(misalnya kuantifikasi berbasis probe dari target dengan
kelimpahan rendah), kami merekomendasikan penggunaan
DNase I bebas RNase berkualitas tinggi selama atau setelah
protokol ekstraksi RNA . Penghapusan DNase I dengan
pengendapan etanol, atau dengan kit pembersihan RNA misalnya
Kit Pembersihan Mikro RNA ISOLATE II diperlukan sebelum
melanjutkan dengan sintesis cDNA untai pertama.
Protokol Kit Sintesis cDNA SensiFAST
1. Siapkan master mix di atas es.
2. Vortex solusi dan centrifuge sebentar sebelum digunakan.
Total RNA atau mRNA (hingga 1 g) nL
5x TransAmp Buffer 4L

RNA Priming Reverse Transcriptase 1L

Campuran unik dari hexamer acak dan primer oligo dT berlabuh
dalam Campuran Sintesis cDNA SensiFAST memberikan DNase/RNase free-water* Hingga 20 L
sensitivitas dan akurasi optimal untuk sintesis cDNA untai
pertama. Primer oligo dT berlabuh anil tepat ke persimpangan
ekor poli-A (ditemukan di ujung 3' dari sebagian besar mRNA
eukariotik) dan gen yang diinginkan. Ini memastikan bahwa ujung * Tidak disediakan
pengkodean 3' dari mRNA selalu terwakili. Transkriptase terbalik
3. Campur perlahan dengan pipet.
juga dapat diprioritaskan dari heksamer acak, untuk memberikan
cakupan yang luas dari semua wilayah RNA dan dengan demikian 4. Atur program berikut dalam siklus termal:
perwakilan kumpulan cDNA dari transkript. Manfaat gabungan dari • 25 °C selama 10 menit (primer annealing)
kedua strategi priming menawarkan peningkatan kualitas data.
• 42 °C selama 15 menit (transkripsi terbalik)
Transkripsi Terbalik Transkripsi • Langkah Opsional: 48 °C selama 15 menit (untuk RNA yang
balik yang efisien biasanya dapat dicapai pada 42 °C selama 15 sangat terstruktur ) • 85 °C selama 5 menit (inaktivasi)
menit, karena Buffer TransAmp mengandung peningkat • 4 °C tahan (atau dinginkan di atas es)
transkriptase balik yang mengurangi struktur sekunder RNA yang
kompleks. Untuk templat yang memiliki struktur tingkat tinggi, 5. Gunakan hingga 4 L (1/5 volume) produk reaksi sintesis cDNA dalam
seperti RNA virus dan beberapa RNA tanaman, kami sarankan qPCR volume 20 L. Jika diinginkan, produk reaksi dapat diencerkan
menggunakan °langkah inkubasi dalam 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 0,1 mM EDTA sebelum digunakan.

6. Sebagai alternatif, simpan produk reaksi atau cDNA encer pada 4 °C

Tidak Ada Kontrol RT
 selama 1 minggu atau -20 °C untuk penyimpanan jangka panjang. akan bervariasi dari reaksi ke reaksi dan mungkin perlu optimasi.

Protokol ini dimaksudkan untuk digunakan sebagai panduan saja; kondisi

PI-50476 V9 Situs web: www.bioline.com/ email: info@meridianlifescience.com

Pemecahan
Masalah Kemungkinan Penyebab Rekomendasi
Masalah

Tidak ada sintesis RNA terdegradasi Analisis RNA pada gel denaturasi untuk memverifikasi integritas.
cDNA Pastikan semua reagen bebas RNase.

RNA mengandung inhibitor Hapus inhibitor, seperti SDS, EDTA, formamida dan pirofosfat, dengan
RT pengendapan etanol RNA, termasuk langkah pencucian etanol 70%.

Kondisi reaksi tidak optimal Tingkatkan langkah annealing primer dari 10 menit hingga 15 menit. Tingkatkan
langkah transkripsi terbalik dari 15 menit hingga 30 menit.

Tidak cukup RNA awal Meningkatkan jumlah RNA awal, ini bisa menjadi faktor penting ketika mengamplifikasi
gen salinan rendah dari RNA total.

Spesifisitas non-spesifik primer ke Meningkatkan suhu anil di qPCR.

buruk dalam template Periksa keberadaan pseudogen.
qPCR Anil

Primer dimers Mendesain ulang primer untuk mencegah self-annealing. Mengatur reaksi di atas es.

Kontaminasi DNA genom Perlakukan RNA dengan DNase I dan pemurnian ulang. Jika memungkinkan, gunakan
primer intron-spanning di qPCR.

Produk dalam yang terkontaminasi dengan Perlakukan sampel dengan DNase I dan pemurnian ulang. Gunakan primer intron-spanning
kontrol 'tidak ada DNA genomik jika memungkinkan.
RT'

Dukungan Teknis: II RNA Mini Kit BIO-52072 ISOLATE

Jika panduan pemecahan masalah tidak menyelesaikan

kesulitan yang Anda alami, silakan hubungi Dukungan Teknis II RNA Micro Kit BIO-52075
dengan rincian pengaturan reaksi, kondisi bersepeda, dan data
yang relevan. TRIsure™ BIO-38032

Email: mbi.tech@meridianlifescience.com
HyperLadder™ 1kb BIO-33025
Produk terkait:
Nama Produk Cat. No.

SensiFAST™ SYBR No-ROX Kit BIO-98002

SensiFAST™ Probe No-ROX Kit BIO-86005 ISOLATE

________________________________________________________________________________________________________________
Meridian Life Science Inc. Bioline GmbH Bioline (Aust) Pty.Ltd
Bioline Ltd USA JERMAN AUSTRALIA
INGGRIS INGGRIS
Telp: +1 Telp: + 49 (0)3371 60222 Telp: +61 (0)2 9209
Telp: +44 (0)20 8830 901.382.8716 Faks: 03 Faks: +49 (0)3371 4180 Faks: +61 (0)2
5300 Faks: +44 (0)20 +1 901.382.0027 60222 01 9209 4763
8452 2822

Situs web: www.bioline .com/ email: info@meridianlifescience.com