Garuda 461945
Garuda 461945
RESEARCH ARTICLE
UCAO (UNILATERAL CEREBRAL ARTERY OCCLUSSION) METHOD INCREASES THE LEVEL OF MMP-
9 BRAIN TISSUE IN RATS MODEL OF ISCHEMIC STROKE
ABSTRAK
Latar belakang. UCAO (Unilateral Cerebral Artery Occlusion) adalah metode penginduksian stroke dengan
mengikat arteri carotid selama 45 menit yang akan membuat kondisi hipoksia di jaringan otak sama
seperti stroke pada manusia. Prosedur ini tidak rumit dan lebih ekonomis dibandingkan dengan metode
yang ada lainnya. MMP-9 adalah marker stroke yang dapat dideteksi menggunakan ELISA melalui serum
darah hewan coba.
Tujuan. Membuktikan bahwa metode UCAO yang dilakukan selama 45 menit dapat meningkatkan kadar
MMP-9 tikus model stroke iskemik.
Metode. Eksperimen murni di laboratorium secara in vivo dengan metode randomized post test
controlled group design. 8 tikus wistar jantan umur 8-10 minggu dibagi menjadi 2 kelompok. Sehari
setelah induksi stroke dilakukan, kadar MMP-9 diukur dengan mengambil darah ekor melalui ELISA.
Hasil. Dalam penelitian ini, metode UCAO mampu meningkatkan kadar MMP-9 darah tikus kelompok
perlakuan dibandingankan dengan kelompok kontrol. Hal ini dibuktikan dengan hasil uji statistik Mann-
Whitney dan Kruskal-Wallis yang signifikan (p < 0.05).
Simpulan. Metode induksi stroke UCAO dapat dilakukan sebagai metode untuk membuat tikus model
stroke iskemik.
Kata kunci: Stroke iskemik, tikus model stroke iskemik, metode induksi stroke iskemik, UCAO, MMP-9
ABSTRACT
Background. UCAO (Unilateral Cerebral Artery Occlusion) is a stroke induction method by ligating mice’s
carotid artery for 45 minutes. Thus giving a hypoxic condition similar to stroke attacks to human. This
method is less complicated and far more efficient. MMP-9 is a stroke marker which is assayed by ELISA
from the blood of test animal.
Objective. To prove UCAO method is capable to raise MMP-9 concentration in mice’s blood.
Methods. This research was an experimental laboratory research with post-test only controlled group
design. 8 male rats (8-10 weeks) were divided into 2 groups. A day after the treatment group had been
induced to stroke, both group were tested to measure the MMP-9 blood concentration through ELISA.
Results. In this research, UCAO method had increased MMP-9 blood concentration in treatment group,
compared to the control group. It is proved by the statistic tests, Mann-Whitney and Kruskal-Wallis, which
showed a significant increase in treatment group (p < 0.05).
Conclusion. UCAO method is accepted as a method to create an ischemic stroke mice model.
Keywords: Ischemic stroke, ischemic stroke mice model, ischemic stroke induction method, UCAO, MMP-9
Korespondensi: cakraparindra@gmail.com
47
48 Indra, et al.
UCAO Method Increases the Level of MMP-9 Brain Tissue
standard deviasi dari hasil pengukuran MMP-9 terjadilah stroke akibat penyumbatan atau disebut
darah tikus, dijelaskan di tabel 1. juga stroke iskemik. Setelah melakukan
Tabel 1. Rerata Kadar MMP-9 Darah Tikus Masing-
penginduksian stroke, dilakukan pengecekan kadar
masing Kelompok Perlakuan (dalam ng/ml). marker MMP-9 dari serum darah yang diambil dari
ekor tikus. Marker MMP-9 merupakan biomarker
petunjuk stroke, dan kadarnya akan meningkat
setelah periode stroke iskemik.13
Penelitian ini hendak menilai efektivitas metode
UCAO (Unilateral Cerebral Artery Occlusion)
Rata-rata kadar MMP-9 darah tikus dari tiap sebagai metode untuk membuat tikus model
kelompok perlakuan dinyatakan sebagai mean ± stroke iskemik. Marker MMP-9 darah tikus diukur
standard deviasi. Dari data yang telah didapatkan, untuk melihat apakah tikus yang diinduksi stroke
diketahui bahwa pada kelompok K (kelompok dengan metode tersebut mengalami hipoksia
kontrol) rata-rata dari kadar MMP-9 darah tikus jaringan otak. Hipoksia pada jaringan otak
adalah 0.582 ± 0.124. Untuk kelompok P menyebabkan kerusakan jaringan dan
(kelompok perlakuan) memiliki rata-rata 0.747 ± meningkatkan kadar marker MMP-9.9 Mekanisme
0.028. Perbandingan rata-rata kadar MMP-9 darah transkripsi MMP-9 dalam sel neuron dimulai dari
tikus dari tiap kelompok perlakuan dapat dilihat diekspresikannya faktor inflamatori seperti IL-1β,
dari gambar 1. TNF-α, FGF dan EGF dalam kondisi iskemik 10.
Faktor-faktor inflamatori tersebut menstimulasi
ekspresi MMP-9 dengan mengaktifkan sinyal
pathway protein kinase MEK1-Erk, P38, PI3K-Akt.
Kemudian, protein kinase tersebut meregulasi
transkripsi dari MMP-9 dengan mengaktivasi AP-1
dan NF-κB yang akan berikatan dengan elemen cis.
Hal ini akan membentuk chromatin remodeling
complexes, co-activator, dan memicu transkripsi
dari MMP-9.11
Hasil dari pengukuran kadar marker MMP-9
Gambar 1. Perbandingan Rata-rata Kadar MMP-9 Darah menunjukkan kelompok kontrol (K) dengan rata-
Tikus dari Tiap Kelompok Perlakuan. rata 0.582 ng/ml ± 0.124. Untuk kelompok
Pada gambar 1 dapat dilihat rata-rata kadar MMP- perlakuan (P), menunjukkan nilai rata-rata 0.747
9 darah tikus dari kelompok K (kelompok kontrol) ng/ml ± 0.028. Dari hasil yang didapat
adalah 0.582 ± 0.124. Untuk kelompok P diperkirakan metode induksi stroke UCAO dapat
(kelompok perlakuan) memiliki rata-rata 0.747 ± menyebabkan kerusakan jaringan otak tikus
0.028. Gambar 5.1 juga menunjukkan peningkatan seperti stroke iskemik. Hal ini didasari oleh kadar
kadar marker MMP-9 dalam darah tikus kelompok marker MMP-9 yang tinggi pada pemeriksaan
perlakuan. Hasil penghitungan kadar MMP-9 darah darah tikus kelompok perlakuan (P) dengan rata-
tikus yang telah didapat dianalisis dengan tes non- rata 0.747 ng/ml ± 0.028 dibandingkan dengan
parametrik, Mann-Whitney dan Kruskall-Wallis, kadar MMP-9 pada pemeriksaan darah tikus
menggunakan software SPSS 21. kelompok kontrol (K).
Pada uji normalitas data Shapiro-Wilk, sebaran
DISKUSI data kadar marker MMP-9 dari 2 kelompok
Stroke iskemik adalah suatu keadaan patologi, di perlakuan dinyatakan normal (p > 0.05). Lalu data
mana otak mengalami kekurangan pasukan diuji menggunakan metode Independent T-test
oksigen dan nutrisi.12 Penelitian ini menggunakan dan ditemukan data tidak homogen, sehingga
subjek penelitian tikus model stroke, yaitu galur analisis dilanjutkan dengan metode Mann-Whitney
Wistar (Rattus norvegicus). Tikus ini diinduksi dan Kruskal-Wallis. Uji Mann-Whitney dilakukan
stroke dengan menggunakan metode Unilateral untuk melihat hubungan antar kelompok
Carotid Artery Occlusion. Dengan metode ini, perlakuan. Hasilnya didapatkan perbedaan yang
pasokan darah ke otak akan terhambat dan signifikan di antara kelompok kontrol (K) dan
kelompok perlakuan (P) dengan p = 0.021 (p < 7. Mayo Clinic. 2012. Stroke: Treatment and
0.05). Uji Kruskal-Wallis dilakukan untuk melihat Drug.
perbedaan antar kelompok. Dan dari hasil uji http://mayoclinic.com/health/stroke/DS00150
dinyatakan signifikan dengan p = 0.021 (p < 0.05). /DSECTION=treatments-and-drugs. Diakses
Saran untuk penelitian ini adalah dilakukannya pada tanggal 13 Oktober 2012.
pengukuran kadar marker MMP-9 sebelum dan 8. Kuraoka, M., Furuta, T., Matsuwaki, T.,
sesudah induksi stroke (pre-post test design). Omatsu, T., Ishii, Y., Kyuwa, S., Yoshikawa, Y.
Direct Experimental Occlusion of the Distal
SIMPULAN Middle Cerebral Artery Induces High
Reproducibility of Brain Ischemia in Mice. Exp.
Metode UCAO (Unilateral Cerebral Artery
Anim. 2009. 58(1):19-29.
Occlusion) dapat meningkatkan kadar MMP-9
9. Justicia, C., Panes, J., Sole, S., Cervera, A.,
serum tikus.
Delofeu, R., Chamorro, A., Planas, A.M.
Neurotrophil Infiltration Increase Matrix
DAFTAR PUSTAKA
Metalloproteinase-9 in the Ischemic Brain
1. Cruz-Flores, S., et al. Racial-ethnic disparities in After Occlusion/Reperfusion of the Middle
stroke care: the American experience: a Cerebral Artery in Rats. J Cereb Blood Flow
statement for healthcare professionals from Metab.2003. 23(12):1430-1440.
the American Heart Association. American 10. Ruhul Amin AR, Senga T, Oo ML, Thant AA,
Stroke Association.Stroke. 2011 42(7) : 2091- Hamaguchi M. Secretion of matrix
116 metalloproteinase-9 by the proinflammatory
2. Yayasan Stroke Indonesia. 2011. Jakarta, cytokine, IL-1beta: a role for the dual signalling
Republik Indonesia. pathways, Akt and Erk. Genes Cells. 2003 Jun;
3. World Health Organization. 2011. The 8(6):515-23.
International Agenda for Stroke Marc Fisher, 11. Ma Z, Shah RC, Chang MJ, Benveniste EN.
MD, University of Massachussets. Stroke AHA/ Coordination of cell signaling, chromatin
ASA. Norrving B. 1st Global Conferences on remodeling, histone modifications, and
Healthy Lifestyles and Noncommunicable regulator recruitment in human matrix
Diseases Control. Moscow. metalloproteinase 9 gene transcription. Mol
4. Zieve, D. 2011. Stroke.Neurosurgery, Cedars- Cell Biol. 2004 Jun; 24(12):5496-509.
Sinai Medical Center.National Library of 12. Sjahrir, H. 2003. Stroke Iskemik, Yandira
Medicine. Los Angeles. Agung, Medan, p. 1-3.
5. Caplan, A. 2007.Adult mesenchymal stem cells 13. Reynolds, M.A., Kirchick, H.J., Dahlen, J.R.,
for tissue engineering versus regenerative Anderberg, J.M., Mcpherson, P.H., Nakamura,
medicine.J cell physiol. 213(2): 341-347. K.K., Laskowitz, D.T., Valkirs, G.E., Buechler,
6. Soyuer, F. 2005. Ischemic Stroke: Motor K.F. Early Biomarkers of Stroke.Clinical
Impairment And Disability With Relation To Chemistry.2003. 49(10):1733-1739.
Age And Lesion Location. The Internet Journal
of Neurology. 3(2): DOI: 10.5580/9b4.