Studies on Chemical Compisition and

Antioxidant Activity of Rudbeckia triloba

Muhamad Dafa
11170960000045
Table of Content
Extraction
1 Pengertian ekstraksi, jenis-jenis ekstraksi.

Introduction
2 test

Experimental
3 Easy to change colors, photos and Text.

Results and discussion

4 Easy to change colors, photos and Text.

Conclusion
5 Easy to change colors, photos and Text.
 APA ITU
EKSTRAKSI?
• Ekstraksi adalah penyarian atau pengambilan
sari/inti zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif
dari bagian tanaman obat, hewan dan
beberapa jenis ikan termasuk biota laut.
• Tujuan ekstraksi adalah untuk menarik semua
komponen kimia yang terdapat dalam simplisia.
• Ekstraksi ini didasarkan pada perpindahan massa komponen zat padat
ke dalam pelarut dimana perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar
muka, kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut.
 Jenis-jenis Ekstraksi
Berdasarkan suhu proses

SUHU DINGIN SUHU PANAS

MASERASI PERKOLASI REFLUKS DESTILASI UAP

Cara penyarian sederhana Cara penyarian Ekstraksi ini Menyari simplisia yang
yang dilakukan dengan dengan mengalirkan dilakukan dengan mengandung minyak
cara merendam serbuk Penyari melalui cara melakukan menguap atau mengandung
simplisia dalam cairan serbuk simplisia pemanasan hingga komponen kimia yang
penyari selama beberapa yang telah dibasahi mencapai titik didih mempunyai titik didih tinggi
hari pada temperatur tertentu pada tekanan udara normal
kamar dan terlindung dari
cahaya.
 MASERASI
E Maserasi adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi bah
an nabati yaitu direndam menggunakan pelarut bukan air (pelarut nonpolar
K ) atau setengah air, misalnya etanol encer, selama periode waktu tertentu

INFUSA
S Infusa adalah ekstraksi meng
gunakan pelarut air pada
T temperature penangas air
(bejana infus tercelup dalam
R penangas air mendidih,
temperature terukur 90°C
A selama 15 menit

K DEKOK
Dekok adalah ekstraksi dengan pelarut air pada te
S mperature 90°C selama 30 menit.Campur simplisia
dengan derajat halus yang sesuai dalam panci (wa
dah) dengan airsecukupnya, panaskan diatas tang
I as air selama 30 menit terhitung mulai suhu 90 °Cs
ambil sekali-sekali diaduk
PENDAHULUAN
 PENDAHULUAN
Rudbeckia triloba //
Brown-eyed susan //
Susan bermata hitam
Berasal dari Amerika Utara,
Rudbeckia adalah tanaman
berbunga dari keluarga
Asteraceae, ditemukan di 25
spesies abadi, tahunan, atau
dua tahunan berbeda.
Varietas yang paling umum
dari tanaman ini adalah
Rudbeckia fulgida, Rudbecki
a hirta, Rudbeckia laciniata,
atau Rudbeckia triloba. Yang
terakhir ini dilaporkan di
Austria pada tahun 1970-an,
sementara di Rumania, telah
ditemukan untuk pertama
kalinya di Maramures dan
kabupaten Neamt.
Apa yang mendasari penelitian ini?
Belum adanya penelitian yang melaporkan dalam
literatur tentang komposisi kimia dan aktivitas anti
oksidan dari Rudbeckia triloba.Dalam research ini
bagian aerial yang berbeda dari Rudbeckia triloba
digunakan untuk mendapatkan minyak atsiri denga
n metode infusa, dekok, dan maserasi hidroalkohol
.
Membandingkan metode ekstraksi yang diterapkan
, maserasi ditemukan menjadi yang paling efektif
untuk senyawa fenolik, kemungkinan besar karena
pelarut (etanol 70%). Penggunaan campuran air-
alkohol mengarah pada peningkatan hasil ekstraksi
senyawa fenolik (termasuk yang memiliki berat mol
ekul lebih tinggi) dibandingkan dengan mengguna-
kan air sebagai pelarut ekstraktif, dalam kasus infu
sa dan dekok.
 METODE
PERCOBAAN
METODE PERCOBAAN

1. Penyiapan 2. Pengumpulan 3. Preparasi 4. Persiapan

Reagen bahan tumbuhan Bahan larutan reagen
Tanaman analitik

4. Analisis 5. Penentuan 6. Penentuan 7. Uji

GC-MS Kadar Total Kadar Total pembersihan
Fenolik (TPC) Flavonoid radikal bebas
(TFC) DPPH
 Penyiapan Reagen

Reagen Folin-Ciocalteu (lithium sulfat 12,2%, di Quercetin, ≥95% (2- (3,4-di

01 sodium wolframate dihydrate 2%, asam klorida
02 hydroxyphenyl) -3,5,7-trihy
9,5%, asam fosfat 6,9%, bromin 0,1%, air 67%, droxy-4H-chromen-4-one)
disodium molibdat dihidrat 2%, dan natrium ti
osulfat 0,3%)
Asam galat,> 99% (asam 3,4,5- DPPH⋅ (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) dibeli dari
03 04 Sigma-Aldrich (Steinheim, Jerman).
trihydroxybenzoic);
Aluminium klorida anhidrat, natrium karbonat,
dan kalium asetat dibeli dari Merck (Jerman).
Etanol 96% diperoleh dari Chemical Company
(Romania).
 Pengumpulan Bahan Tumbuhan
Rudbeckia triloba

TEMPAT

Rudbeckia triloba dikumpulkan pada Agustus 2016 dari kebun

-kebun tertentu yang ditempatkan di daerah pedesaan batas
Bucharest, Rumania. Pabrik itu dikonfirmasi di Kebun Raya
Bukares, tempat spesimen disimpan (406406 / 30.03.2017).
TERKUMPUL
Bahan tanaman dipisahkan menjadi komponen udara
utamanya: perbungaan, kelopak, daun, dan biji yang
dicuci bersih dengan air untuk menghilangkan kotoran

TERPISAHKAN
Bahan nabati tersebut dikeringkan pada suhu
kamar. Komponen kering tanaman dipotong
kecil-kecil dan disimpan dalam paperbag
sampai percobaan lebih lanjut.
.
 Preparasi Bahan Tanaman
Infusa, dekok, dan maserasi diterapkan pada tiga bagian udara tanaman,
yaitu, kelopak, biji, dan daun.

Sebelum infusa dan dekok, jumlah bahan sayuran kering yang ditimbang (1 g) direndam dengan
volume kecil bi-distilled water (air suling rangkap) dingin dan didiamkan selama 10 menit. Prosedur
pendahuluan ini memungkinkan sel-sel tanaman untuk berkembang dan dengan demikian melepas
kan bahan aktifnya ketika menyiapkan infusa atau dekok.

Infusa disiapkan dengan menambahkan 50 mL Dekok dibuat dengan merebus bahan tanaman basah
air bidistilled matang/sudah dididihkan ke dengan 50 mL air selama 10 menit
bahan sayuran basah

campuran dibiarkan selama

15 menit
Campuran ditutup dengan kaca arloji, dibiarkan selama 15 menit.
 Preparasi Bahan Tanaman
Ekstrak hidroalkohol dibuat dengan memaserasi 0,5 g bahan nabati dalam 50
mL etanol 70% selama 7 hari, dalam keadaan gelap, pada suhu kamar.

setiap ekstrak tanaman disaring melalui kertas saring

Ekstrak infusa dan ekstrak dekok Ekstrak maserasi

Filtrat secara kuantitatif dipindahkan ke labu Filtrat secara kuantitatif dipindahkan ke labu
ukur 100 mL dan ditambahkan perlakuan ukur 100 mL dan ditambahkan perlakuan
dengan air bidistilled dengan etanol 70% agar mendapatkan ekstrak encer

Bagian dari ekstrak filtrat yang diperoleh disimpan pada suhu -45 ° C untuk analisis lebih lanjut.
 Preparasi Bahan Tanaman

Minyak atsiri diisolasi dari perbungaan kering, dengan hidrodistilasi dalam

peralatan tipe Clevenger, selama 4 jam, menggunakan prosedur standar

Minyak atsiri dikeringkan pada Na2SO4 anhidrat dan disimpan pada + 4 ° C.

Kuantitas minyak atsiri dari tanaman dinyatakan dalam persentase (v / w),

sebagai rata-rata nilai yang diperoleh.
 Penyiapan Larutan Reagen Analitik
Larutan induk asam galat (GA) 500 μg / mL disiapkan dengan melarutkan 0,01
01
25 g asam galat dalam air suling, dipindahkan ke 25 mL dalam labu volumetrik.

Larutan kerja asam galat 50 μg / mL diperoleh dengan pengenceran dari larutan

02 induk.

Larutan induk quercetin (Q) 1 mg / mL dibuat dengan melarutkan 0,0250 g Quercetin

03
dalam etanol 96% dan dipindahkan ke dalam labu volumetrik 25ml.

Larutan kerja quercetin 100 μg / mL diperoleh dari Larutan induk,

04 dengan pengenceran dengan etanol 96%.

05 Larutan etanol 0,05% dari DPPH⋅ disiapkan sebelum digunakan.

 Analisis GC-MS
1. Analisis GC-MS dilakukan dengan sistem Thermo Electron (kromatografi GC focus digabungkan dengan
detektor massa perangkap ion Quercetin Polaris).
2. Kolom kapiler DB-5MS (25 mx 0,25 mm; ketebalan film 0,25 m) digunakan dengan helium sebagai gas
pembawa (1 mL / menit).
3. Oven GC diprogram pada suhu awal 60 ° C selama 3 menit.
4. Temperatur ditingkatkan hingga 200 ° C pada kecepatan 10 ° C / menit, dijaga konstan selama 2 menit, dan ke
mudian meningkat hingga 240 ° C pada kecepatan 12 ° C / menit dan ditahan pada 240 ° C selama 2 min.
5. Kedua suhu injektor dan detektor dijaga pada 250 ° C.
6. Mode ionisasi dampak elektronik adalah 70 eV, dan deteksi dilakukan dalam kisaran 35-300 amu (mode scan
penuh).
7. Identifikasi komponen dilakukan dengan menggunakan software Xcalibur®, NIST Mass Spectral Library, dan
data literatur MS.
 Analisis GC-MS
8. Indeks retensi (RI) dari senyawa ditentukan relatif terhadap waktu retensi larutan standar n-alkana untuk GC
(C8-C20).
9. Persentase relatif dari masing-masing komponen dihitung berdasarkan area puncak GC tanpa menggunakan
faktor koreksi.
10. Untuk analisis GC-MS, minyak esensial hidrodistilled diencerkan dalam heksana (1: 100) dan 1 μL diinjeksikan.
11. Triplus HS Autosampler (Thermo Electron) digunakan untuk analisis headspace, sejumlah 1 g perbungaan atau
daun dimasukkan dalam botol sampel (ukuran 20 mL) dan disegel dengan septum karet silikon dan tutup
aluminium.
12. Botol headspace yang mengandung bahan tanaman dipanaskan hingga 80 ° C selama 10 menit, dan 500 μL
gas headspace diinjeksikan ke dalam kolom.
13. Analisis GC-MS dilakukan dengan cara yang sama seperti untuk minyak atsiri.
 Penentuan Kadar Fenolik Total(TPC)
Insert the title of your subtitle Here

Semua pengukuran absorbansi Uji spektrofotometri Folin-Ciocalteu (F-C) diguna

dilakukan pada spektrometer kan untuk menentukan kandungan total polifenol.
UV-Vis ( Jasco V-530, Jasco, Aliquot (0,1-0,5 mL) dari larutan kerja asam galat
Jepang ), dilengkapi dengan
sel kuarsa ( panjang jalur cahaya
1 cm).
01 02 (50 μg / mL) dimasukkan ke dalam serangkaian
labu terkalibrasi 5 mL.

Kemudian, 2,5 mL dari 10% reagen Folin-Ciocalteu

ditambahkan. Campuran diinkubasi dalam
keadaan gelap selama 5 menit.
03 04 Kemudian, 2 mL larutan
natrium karbonat 7,8%
ditambahkan ke setiap
sampel, dan volume total
ditambahklan 5 mL air
suling.
 Penentuan Kadar Fenolik Total(TPC)
Insert the title of your subtitle Here

Setelah dihomogenkan, campuran

diinkubasi dalam keadaan gelap
selama 30 menit sebelum meng- Kurva kalibrasi standar disiapkan dalam kisaran k
ukur absorbansi pada 760 nm ter- onsentrasi 1-5 μg / mL asam galat.
hadap larutan kosong (diperoleh
tanpa ditambahkan asam galat).
05 06 Kadar fenolik total dihitung
dalam hal setara asam galat /
gram bahan sayuran kering
(mg GAE / g), dengan menera
pkan persamaan regresi dari
kurva kalibrasi A = 0,0968CGA
Untuk menentukan kadar fenolik total dalam ekstrak,
alikuot dari masing-masing ekstrak encer digunakan
sebagai pengganti asam galat, dan prosedur F-C
07 08 + 0,0197 dengan R2 = 0,9998,
di mana A adalah absorbansi
dan CGA adalah konsentrasi
diterapkan. larutan asam galat (μg / mL).
Pengukuran spektrofotometri
untuk setiap sampel dilakukan
dalam rangkap tiga.
 Penentuan Kadar Flavonoid Total (TFC)

1. Kadar flavonoid ditentukan secara spektrofotometri, berdasarkan pembentukan kompleks

Al (III) -flavonoid.

2. Quercetin digunakan sebagai flavonoid standar, dan prosedur yang dikutip diterapkan deng
an sedikit modifikasi.

3. Aliquot (0,1-0,5 mL) dari larutan kerja quercetin (100 μg / mL) atau sampel ekstrak yang di
encerkan dan etanol (hingga 2 mL campuran alkohol) ditambahkan dalam serangkaian labu
terkalibrasi 5 mL.

4. Selanjutnya, 0,1 mL aluminium klorida 10%, 0,1 mL larutan kalium asetat 1M, dan air di
tambahkan ke setiap sampel untuk membuat volume total 5 mL.
 Penentuan Kadar Flavonoid Total (TFC)

5. Campuran dihomogenkan dan didiamkan selama 30 menit pada suhu kamar.

6. Kemudian, absorbansi diukur pada 427 nm terhadap reagen kosong (untuk setiap sampel,
campuran kosong disiapkan, tanpa penambahan AlCl3).

7. Kadar flavonoid total dari bahan nabati dihitung dalam hal setara kuersetin per gram bahan
nabati kering (mg QE / g), dengan menerapkan persamaan regresi dari kurva kalibrasi A = 0,06
52CQ + 0,0804 dengan R2 = 0,9992, di mana CQ adalah konsentrasi larutan kuersetin (μg / ml)

8. Pengukuran spektrofotometri untuk setiap sampel dilakukan dalam rangkap tiga.

 Uji Pembersihan Radikal DPPH
Aktivitas pembersihan radikal bebas DPPH⋅ dari ekstrak herbal yang diperoleh
01
ditentukan.

Aliquot dari ekstrak filtrat (0,01-0,3 mL) dicampur dengan etanol hingga 1,
02
9 mL.

Kemudian, 0,1 mL larutan etanol 0,05% dari DPPH⋅ ditambahkan ke masing-

03
masing sampel hingga total volume 2 mL.

Larutan standar yang mengandung 0,1 mL 0,05% DPPH⋅ dan 1,9 mL etanol
04
juga disiapkan

Campuran dihomogenkan dan disimpan dalam keadaan gelap selama 30

05
menit, pada suhu kamar.
 Uji Pembersihan Radikal DPPH
Kemudian, pengukuran absorbansi dilakukan pada 517 nm terhadap reagen
06
kosong (untuk setiap sampel, campuran kosong disiapkan tanpa menambahk
an DPPH⋅).

07 Larutan DPPH⋅ baru disiapkan dan disimpan di lemari es sampai digunakan.

Nilai EC50 diperoleh dengan mengatur atau menempatkan absorbansi pada 51

08
7 nm dibandingkan konsentrasi larutan ekstrak. Konsentrasi (%, v / v) larutan s
ampel yang menurunkan absorbansi awal DPPH⋅ sebesar 50% mewakili EC50.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Yield Minyak Essensial

Kandungan rata-rata dalam minyak esensial

perbungaan Rudbeckia triloba adalah 0,300%
(mL minyak atsiri / 100 g tanaman).
Minyak esensial berwarna kuning muda
dengan bau tertentu.
 HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Analisis GC-MS

Analisis GC-MS mengungkapkan bahwa jumlah komponen volatil dari minyak esensial
hydrodistilled dari perbungaan adalah berbeda dari bahan tanaman kering (daun dan
perbungaan) yang mengalami ekstraksi headspace. Dengan demikian, menggunakan
headspace, dua puluh dua senyawa yang diidentifikasi dalam daun menyumbang 99,0
% dari total komponen yang diidentifikasi, dengan α-pinene (46,0%), β-phellandrene
(24,6%), sabinene (9,6%), dan germacrene D ( 6.1%) sebagai komponen utama.
Bunga-bunga Rudbeckia triloba mengandung tiga puluh tiga komponen (98,6%),
dengan konstituen utama yang sama, tetapi dalam persentase yang berbeda: α-pinene
(40,1%), germacrene D (24,0%), β-phellandrene (13,9%), dan sabinene (9,7%). Jumlah
total komponen yang diidentifikasi dari minyak esensial perbungaan adalah empat pulu
h satu, mewakili 95,9% dari total area. Kandungan arau kompenen yang sama adalah
senyawa volatil utama dari minyak atsiri, dengan β-phellandrene (26,09%), germacrene
D (21,6%), α-pinene (16,3%), dan sabinene (12,0%).
 HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar total Fenolik dan Flavonoid
Total phenolic content (TPC) and total flavonoid content (TFC) of extracts obtained from
different aerial parts of Rudbeckia triloba.
Vegetable TFC (QE, mg/g dry vegetable) TPC (GAE, mg/g dry vegetable)
material Infusion Decoct Macerate Infusaion Decoct Macerate

Petals 8.66 ± 0.52 12.69 ± 0.52 30.72 ± 1.35 40.51 ± 2.11 73.53 ± 3.51 130.29 ± 5.58

Leaves 3.22 ± 0.22 2.37 ± 0.11 21.72 ± 1.22 15.02 ± 0.82 62.06 ± 3.12 93.43 ± 4.85
Seeds 0.64 ± 0.06 2.82 ± 0.23 6.65 ± 0.34 5.51 ± 0.32 70.64 ± 3.25 70.14 ± 3.45

Membandingkan tiga prosedur ekstraksi yang diterapkan (infusa, dekok, dan maserasi), maserasi
tampaknya lebih efisien daripada infusa dan dekok untuk mengekstraksi polifenol (etanol 70% dipilih
untuk maserasi, menjadi pelarut yang paling sering digunakan untuk mengekstraksi senyawa fenolik
dari tanaman). Perilaku ini dapat disebabkan oleh kemungkinan pembentukan kompleks beberapa
senyawa fenolik, memiliki lebih banyak gugus fenol atau memiliki ketinggian molekul yang lebih
tinggi daripada fenolik dalam air
 HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas Pembersihan Radikal Bebas

Total antioxidant capacity of extracts obtained from different aerial parts of Rudbeckia triloba
EC50 (% (v/v))
Vegetable material
Infusion Decoct Macerate

Petals 0.51 ± 0.03 0.61 ± 0.03 0.32 ± 0.02

Leaves 1.01 ± 0.05 2.52 ± 0.13 0.62 ± 0.03
Seeds 2.22 ± 0.11 3.41 ± 0.17 0.88 ± 0.04

Total reaksi antioksidan-DPPH⋅ mengarah ke larutan berwarna kuning. Nilai EC50 yang
rendah menunjukkan aktivitas pembersihan yang tinggi. Seperti yang diamati pada Tabel ,
ekstrak yang diperoleh dari kelopak menyajikan nilai terendah EC50 dengan minimum
dalam kasus ekstrak maserasi.
Kesimpulan

Hasil yang diperoleh pada ekstrak Rudbeckia

triloba menunjukkan aktivitas antioksidan yang
signifikan, terutama maserasi kelopak (dihasilkan
dengan menerapkan Folin-Ciocalteu, total flavonoi
d, dan tes DPPH⋅). Juga, daun, perbungaan, dan
minyak esensial perbungaan Rudbeckia triloba
ditemukan kaya akan hidrokarbon monoterpen
(terutama, α-pinena dalam daun dan perbungaan
dan β-phellandrene dan germacrene D, dalam
minyak esensial perbungaan).
thank u, next.
Any question?