PEMERIKSAAN SPERMA

MIKROKOPIS

Kelompok 2
1. Rihannesa Diana Putri P1337434319008
2. Rieke R. Ardianty P1337434319009
3. M. Naufal Nurfadhilah P1337434319010
4. Deny Prasetyo P13374343190
5. Arzaq Nurhadi P133743431901
6. Friska Anisa P P133743431901

http://www.free-powerpoint-templates-design.com
Pendahuluan
Sperma normal adalah campuran dari spermatozoa yang
tersuspensi dalam sekresi dari testis dan epididimis yang,
pada saat ejakulasi, digabungkan dengan sekresi dari
prostat, vesikula seminalis, dan kelenjar bulbourethral.
Komposisi terakhir adalah cairan kental yang terdiri
ejakulasi.

Analisis sperma memberikan informasi penting tentang

status klinis individu. Pengumpulan dan analisis semen
harus dilakukan dengan standar yang benar prosedur
jika hasilnya memberikan informasi yang valid.
 Analisis Sperma
Analisis semen dibagi menjadi pemeriksaan makroskopis dan mi
kroskopis dari sampel.
1. pencairan
2. penampilan
Pemeriksaan makroskopis
3. volume
4. viskositas
5. pH

1. penilaian motilitas sperma

2. penilaian konsentrasi sperma
3. vitalitas sperma dengan eksklusi
Pemeriksaan Mikroskopis
pewarna (tes eosin)
4. penilaian morfologi sperma
5. penilaian elemen seluler selain
spermatozoa
 K3 di Laboratorium
K3 laboratorium antara lain :

1. Cairan manusia seperti air mani dan darah harus dianggap berpotensi menularkan dan
oleh karena itu harus ditangani dan dibuang dengan perawatan khusus.

2. Tindakan pencegahan yang ketat harus dilakukan untuk menghindari luka yang tidak disengaja dari
instrumen tajam terkontaminasi dengan semen dan kontak semen dengan kulit terbuka, luka, lecet,
atau lesi. Infeksi juga dapat terjadi setelah tumpahan atau percikan sampel air mani yang terinfeksi.
Langkah-langkah harus diambil untuk mencegah dan terjadinya tumpahan

3. Semua barang sekali pakai (sarung tangan, wadah semen, slide) harus dikumpulkan untuk dibuang
di wadah bertanda.

4. Sarung tangan karet atau plastik sekali pakai harus dipakai saat menangani semen atau plasma
mani dan setiap wadah yang bersentuhan dengan air mani atau plasma mani. Sarung tangan
harus dilepas dan dibuang saat meninggalkan kelas atau saat menangani gagang telepon dan pintu.
Sarung tangan tidak boleh digunakan kembali.

5. Jas laboratorium harus dipakai selama kelas. Mantel ini harus dilepas saat meninggalkan
kelas. Pakaian seperti itu sebaiknya tidak dikenakan terutama di ruang sosial atau kafetaria.
6. Pelajar wajib mencuci tangan secara teratur menggunakan sabun desinfektan atau pembersih kulit
antiseptik,terutama sebelum meninggalkan kelas, setelah menangani spesimen dan setelah melepas
pelindung dan sarung tangan

7. Jika bagian luar wadah penampung semen terkontaminasi, maka harus dicuci dengan
larutan desinfektan.

8. Permukaan kerja laboratorium. harus didekontaminasi dengan desinfektan segera setelahnya

setiap tumpahan terjadi dan juga saat menyelesaikan kelas.

9. Perangkat pipet mekanis harus digunakan untuk manipulasi cairan selama kelas. Penggunaan pipet
melalui mulut tidak pernah diizinkan.

10. Makan, minum. merokok, memakai kosmetik, dll. tidak diizinkan di dalam kelas!
 Pra Analitik

1. untuk mempersiapkan sediaan mikroskopis untuk penyelidikan

mikroskopis awal dan vitalitas sperma
2. Melakukan pemeriksaan mikroskopis awal untuk estimasi awal
sperma konsentrasi, dan kemerataan penyebaran spermatozoa
pada kaca objek
3. untuk menyiapkan pengenceran sampel untuk penilaian
konsentrasi sperma
4. untuk menilai konsentrasi sperma menggunakan peningkatan
haemositometer Neubauer
5. untuk menilai vitalitas sperma menggunakan tes eosin
6. untuk menilai morfologi sperma dari piring tertentu dengan
fotomikrograf
7. menafsirkan formulir rekaman sampel semen terlampir sesuai
dengan nilai referensi variabel semen dan nomenklatur untuk
beberapa variabel semen.
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS
Persiapan untuk analisis semen rutin

Sebelum mengeluarkan air mani untuk penilaian, campurkan sampel dengan baik dengan di wadah, tetapi jangan terlalu kuat
agar tidak menimbulkan gelembung udara. Ini dapat dicapai dengan aspirasi sampel 10 kali ke dalam pipet sekali pakai
plastik berdiameter lebar (kira-kira 1,5 mm).

10 mikron air mani dikirim ke slide kaca bersih dengan pipet otomatis dan ditutupi dengan penutup kaca berukuran 22 mm x
22 mm.

Evaluasi awal pada perbesaran 100x total (yaitu, 10x objektif dan 10x okuler) memberikan gambaran umum untuk
menentukan pembentukan untai lendir, aglutinasi dan agregasi sperma, dan kemerataan penyebaran spermatozoa pada slide.

Sediaan kemudian diperiksa pada perbesaran 400x pembesaran total (mis.40x obyektif dan 10x okuler).

Syarat pemeriksaan sperma analisis:

1. Keadaan pria hari pemeriksaan hendaknya cukup sehat, tidak dalam keadaan lelah, lapar dan cukup beristirahat
sebelumnya.
2. Sperma dikeluarkan setelah didahului oleh abstinensia seksual (tidak ejakulasi dengan cara apapun) selama 3 – 4 hari
(rekomendasi WHO abstinensia 2 sampai 7 hari).
3. Sperma dikeluarkan secara mastrurbasi di Laboratorium, dan harus di tampung secara utuh.
 PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS
Membuat preparasi

1. Mencampurkan sperma dengan baik

2. Keluarkan aliquot air mani segera setelah pencampuran, tidak memberikan waktu untuk spermatozoa
untuk menyelesaikan suspensi.
3. Mempipet 10 ul ke slide kaca
4. tutupi dengan coverlip, pastikan coverslip menyebar ke sampel
5. Hindari terbentuknya gelembung dalam coverslip
 Pemeriksaan Mikroskopik

pada × 200 atau × 400 total pembesaran kation (yaitu.

Pemeriksaan awal mikroskopik kombinasi dari × 20 atau × 40 tujuan dengan × 10 okular)
dengan pembesaran total 100

1. penilaian motilitas sperma

1. Aggregasi dan aglutinasi 2. Vitalitas dengan tes eosin
2. elemen selain spermatozoa seperti epitel dan leukosit
3. Konsentrasi.
4. Morfologi

Jika sampel tidak dicampur dengan baik, analisis dua aliquot terpisah dapat menunjukkan
perbedaan yang nyata dalam motilitas sperma, vitalitas, konsentrasi dan morfologi. Untuk
memastikan mendapatkan data yang dapat direproduksi,sampel harus benar-benar dicampur
sebelum aliquots diambil untuk penilaian.
 Agregasi dan Aglutinasi

1. Aggregasi

merupakan pelekatan spermatozoa yang immotile satu sama lain atau spermatozoa motil dengan helai lendir, sel-sel non-
sperma atau puing-puing dianggap sebagai agregasi nonspesifik
2. Aglutinasi

Aglutinasi diartikan sebagai menempelnya spermatozoa yang motil satu dengan yang lainnya baik antara kepala dengan
kepala, ekor dengan ekor atau gabungannya.Keadaan aglutinasi positif sebaiknya dilakukan pemeriksaan lanjutan karena
penyebab aglutinasi dapat disebabkan oleh antibodi anti-sperma atau infeksi terutama infeksi pada saluran reproduksi
oleh E.Coli.Setiap spermatozoa motil yang menempel satu sama lain oleh mereka kepala, ekor atau midpieces harus
dicatat.
 Motilitas

Motilitas sperma harus dinilai sesegera mungkin setelah sampel dicairkan, sebaiknya pada 30
menit, tetapi dalam kasus apapun dalam 1 jam, setelah ejakulasi, untuk membatasi efek merusak
dari dehidrasi, pH atau perubahan suhu pada motilitas. Pemeriksaan ini untuk mengatahui
pergerakan sperma (motil) seperti apa.

Pergerakan sperma dibagi menjadi empat yaitu gerak cepat (a), gerak lambat (b), gerak di tempat
(c) dan tidak bergerak (d).

Dikatakan normal apabila a (gerak cepat) ≥ 25% atau a (gerak cepat) +b(gerak lambat) ≥ 50%.
Batas nilai terendah untuk total motilitas (PR + NP) adalah 40% dan nilai terendah untuk motil
progresif (PR) adalah 32%.

Gangguan motilitas sperma dipengaruhi oleh beberapa hal antara lain kesalahan
pengeluaran,kesalahan penempatan sampel, abnormalitas maturasi, varikokel, abnormalitas
kromosom, infeksi, dan riwayat perokok berat.17 PCB (polychlorinated biphenyl) juga diketahui
merusak motilitas sperma.
 Prosedur

1. Siapkan sediaan basah 20 ul pada slide

2. Periksa slide pada pembesaran × 200 atau × 400. Tunggu sampel berhenti melayang.
3. Cari spermatozoa di area setidaknya 5 mm dari tepi penutup penutup, untuk mencegah
pengamatan efek pengeringan pada motilitas.
4. Pindai slide secara sistematis untuk menghindari pengulangan area.Hindari memilih bidang
berdasarkan jumlah sperma motil yang terlihat (pilihan bidang harus acak).
5. Mulai menilai bidang tertentu secara acak. Jangan menunggu spermatozoa berenang ke
lapangan atau grid
6.Kaji motilitas semua spermatozoa dimulai bergerak kurang baik, lalu yang bargerak baik
7. Jika perbedaannya terlalu tinggi, ambil dua alikuot baru dari sampel semen, buat dua
sediaan baru dan ulangi penilaian
8. Laporkan persentase rata-rata untuk setiap tingkat motilitas ke bilangan bulat terdekat.
 Prosedur

Motilitas progresif (PR): spermatozoa bergerak aktif, baik secara linier maupun dalam lingkaran
besar, berapa pun kecepatannya.

Motilitas non-progresif (NP): semua pola motilitas lainnya tanpa adanya perkembangan,
misalnya berenang dalam lingkaran kecil, gaya flagela hampir tidak menggeser kepala, atau
ketika hanya hentakan flagela yang dapat diamati.

Imotilitas (IM): tidak ada gerakan.

Jika sperma yang tidak bergerak > 50% maka perlu dilakukan pemeriksaan lebih lanjut guna
mengetahui viabilitas sperma (banyaknya sperma yang hidup) sebab sprermatozoa yang tidak
bergerakpun kemungkinan masih hidup.
 Konsentrasi Sperma

Perhitungan konsentrasi sperma dilakukan dengan mengunakan metode hemositometer atau ”electronic coulter counter”.
Metode hemositometer lebih sering digunakan untuk sperma yang mempunyai perkiraan spermatozoa yang sangat rendah
(misalnya 10 juta/ml) atau pemeriksaan sperma yang memerlukan penentuan jumlah dengan segera. Untuk melakukan tes
ini
dilakukan pengenceran dari sperma yang konstrasi.

Haemositometer Neubauer yang ditingkatkan memiliki dua ruang hitung terpisah, yang masing-masing
memiliki pola garis kisi mikroskopis 3 mm × 3 mm yang terukir pada permukaan kaca. Setiap area penghitungan dibagi
menjadi sembilan kisi berukuran 1 mm × 1 mm. Dilakukan pemeriksaan dengan perbesaran 200 x 400

konsentrasi sperma adalah jumlah spermatozoa/ml sperma. Sedangkan jumlah spermatozoa total ialah jumlah spermatozoa
dalam ejakulat.
Prosedur

1. Periksa diperbesaran 200 x 400

2. Hitung setidaknya 200 spermatozoa di setiap ulangan, untuk menerima kesalahan sampling
yang dapat diterima
3. perkirakan grid ke tengah (no.5) dari sisi ruang Neubauer yang lebih baik, baris ke baris
4. Melanjutkan menjumlah sampai selesai 200 spermatozoa di grid 5. Perhitungan harus selsai
satu baris, jangan berhenti di tengah-tengah. Jika tidak sampai 200 di grid pindah sisi
berikutnya ke sisi 4 dan 6
5. buat catatan jumlah baris yang dinilai 200 spermatozoa, jumlah baris yang sama akan
dihitung di kamar hitung lain
6. Pindah ke kamar hitung kedua lakukan seperti replikasi pertama, walaupun tidak sampai
200 spermatozoa
7. hitung jumlah dan perbedaan dari dua angka ( 2 kamar hitung)
8. Perhitungan tidak usah semua kamar, bisa sampai 3 kamar hitung saja
Konsentrasi spermatozoa (C) dalam air mani adalah jumlah (N) dibagi dengan
volume di mana mereka ditemukan, yaitu volume jumlah total (n) grid yang diperiksa
untuk ulangan (di mana volume kisi adalah 100 nl), dikalikan dengan faktor pengenceran.

Yaitu, C = (N / n) x (1/100) x faktor pengenceran

 Vitalitas dengan Eosin

Penilaian untuk mengetahui spermatozoa yang imotil apakah hidup atau tidak, Vitalitas bisa
dilakukan dengan hasil motilitas dari sampel yang sama sangat penting untuk sampel dengan
spermatozoa yang bergerak secara progresif kurang dari 40%.
Tes ini dapat memberikan pemeriksaan pada evaluasi motilitas, karena persentase sel mati
tidak boleh melebihi (dalam kesalahan pengambilan sampel) persentase spermatozoa imotil.
Persentase sel yang hidup biasanya melebihi persentase sel motil.

Metode eksklusi zat warna didasarkan pada prinsip bahwa membran plasma yang rusak,
seperti yang ditemukan pada sel
non-vital (mati), memungkinkan masuknya noda membran-impermeant. yang hidup yang
akan hipotonik. Vitalitas sperma tercermin dalam proporsi spermatozoa yang 'hidup' seperti
yang ditentukan dengan pengecualian pewarna (uji eosin).
 Prosedur

1. campur sampel air mani dengan baik

2. keluarkan alikuot 5 ul semen dan gabungkan dengan 5 ul pada larutan eosin pada
kaca objek mikroskopis, tutup dengan kaca penutup dan biarkan selama 30 detik.
3. periksa setiap slide pada perbesaran 200 x400
4. hitung jumlah spermatozoa bernoda (mati) dan tidak ternoda (vital)
5. hitung rata-rata dan perbedaan dari dua persentase sel vital dari mengulangi
6. tentukan akseptabilitas perbedaan
- jika perbedaannya dapat diterima, hitung konsentrasinya. Jika perbedaannya juga
tinggi, siapkan dua pengenceran baru seperti dijelaskan di atas dan ulangi hitungan ulangan
- laporkan persentase rata-rata spermatozoa hidup dan mati ke keseluruhan terdekat
jumlah
 Hasil

- Spermatozoa hidup memiliki kepala berwarna putih atau merah muda terang dan
spermatozoa mati memiliki kepala yang diwarnai merah atau merah muda tua.
- Jika noda terbatas hanya pada sebagian daerah leher, dan sisa daerah kepala tidak ternoda,
ini dianggap sebagai “membran leher bocor”, bukan tanda kematian sel dan disintegrasi
membran total.
- Sel-sel ini harus dinilai sebagai sel hidup. Jika sulit untuk membedakan kepala yang diwarnai
dengan warna pink pucat, gunakan nigrosin untuk meningkatkan kontras latar belakang

The lower reference limit for vitality (membrane-intact spermatozoa) is 58%

(5th centile, 95% CI 55–63).
 Morfologi Sperma

Kriteria di bawah ini harus diterapkan saat menilai normalitas morfologi spermatozoa.
- Spermatozoa terdiri atas kepala, leher, bagian tengah (bagian tengah), bagian utama dan
benda akhir.
- Karena bagian ujungnya sulit dilihat, sel dapat dianggap terdiri dari kepala
(dan leher) dan ekor (bagian tengah dan bagian utama).
-Agar spermatozoa dianggap normal,
kepala dan ekornya harus normal. Semua bentuk garis batas harus dianggap abnormal

dikatakan normal apabila persentase sperma dengan morfologi normal pada analisa sperma
lebih besar atau sama dengan 25% sedangkan di WHO menyebutkan batas nilai terendah
adalah 4%.
Abnormal spermatozoa biasanya memiliki potensi rendah untuk membuahi. Gangguan bentuk
dihubungakan dengan peningkatan fragmentasi DNA, imatur kromatin, aberasi struktur
kromosos, keganasan pada testis, aneuploidi dan infeksi
 Kepala harus halus, berkontur teratur dan umumnya berbentuk oval.
Harus ada wilayah akrosom yang terdefinisi dengan baik yang terdiri dari 40-70%
area kepala. Daerah akrosom seharusnya tidak mengandung vakuola besar, dan tidak
lebih dari dua vakuola kecil, yang seharusnya tidak menempati lebih dari 20% dari
kepala sperma. Wilayah pasca akrosom tidak boleh mengandung vakuola.

 Bagian tengah harus ramping, teratur dan kira-kira sama panjangnya dengan
kepala sperma. Sumbu mayor dari bagian tengah harus sejajar dengan sumbu utama
sumbu kepala sperma. Sitoplasma sisa hanya dianggap sebagai anomali
bila berlebihan, yaitu bila melebihi sepertiga dari ukuran kepala sperma.

 Potongan utama harus memiliki kaliber seragam sepanjang panjangnya, lebih tipis
dari bagian tengah dan panjangnya kira-kira 45 µm (sekitar 10 kali kepala
panjangnya). Ini dapat dililitkan kembali, asalkan tidak ada sudut yang tajam
indikasi kerusakan flagela.
Prosedur:
1. periksa dengan cermat spermatozoa yang sesuai
2. tuliskan klasifikasi: normal / abnormal
3. bila perlu jelaskan cacatnya: mis. kepala tanpa akrosme, kepala amorf,
bagian tengah tebal, ekor melingkar dll
 Leukosit

- Leukosit di laporkan per lapang pandang seperti dalam sedimen urin, misalnya 3 – 8
perlapang pandang.Jumlah lekosit yang besar erat hubunganya dengan infeksi organ –
organ spermiogenesis.Dapat diidentifikasi dengan memeriksa apusan yang diwarnai pada
pembesaran 1000x menggunakan preparat basah yang sama

- kriteria yang terdapat pada guideline WHO dimana jika terdapat leukosit diatas 1 jt/mL
dinyatakan sebagai leukocytospermia atau leukospermia. Jumlah leukosit yang terdapat
pada sampel terkait dengan adanya infeksi dan dapat merefleksikan tingkat keparahan
inflamasi yang menyebabkan penurunan kualitas sperma.Leukosit dapat mempengaruhi
motilitas sperma dan integritas DNA melalui serangan oksidatif.
 Sumber referensi

Putra, Cokorda Bagus Nurparma & I.B.G. Fajar Manuaba. “GAMBARAN ANALISA SPERMA
DI KLINIK BAYI TABUNG RUMAH SAKIT UMUM PUSAT SANGLAH TAHUN 2013”. E-
JURNAL MEDIKA, VOL. 6 NO.5, MEI, 2017. Program Studi Pendidikan Dokter, Fa kultas
Kedokteran Universitas Udayana

WHO laboratory manual for the Examination and processing of human semen. /Fifth edition