PEMERIKSAAN

MIKROSKOPIK
PEWARNAAN GRAM

RUMAH SAKIT SARI ASIH

SEPTEMBER 2019

ANGKY BUDIANTI
 TUJUAN

• Terampil melakukan pemeriksaan pewarnaan Gram

• Mengetahui bahwa pemeriksaan pewarnaan Gram
dapat membantu diagnosis infeksi
 BIOHAZARDS
• Agen biologi (mikroorganisme pathogen) atau suatu kondisi (misalnya
laboratorium yang tidak aman) yang membahayakan manusia atau
lingkungannya

• Agen infeksius, bahan atau limbah infeksius, yang ketika terpapar, memiliki
risiko keamanan dan kesehatan untuk manusia, hewan dan lingkungan.

• Biohazard, terdiri dari 2 kategori:

1. Agen
2. Prosedur laboratorium
BIOHAZARDS
Agen
• Patogenisitas dan dosis infeksi
• Akibat dari paparan
• Rute penyebaran
• Konsentrasi dan volume
• Adanya inang yang cocok
Prosedur laboratorium
• Manipulasi genetik  Inokulasi parenteral dengan jarum suntik atau benda

tajam yang terkontaminasi

 Tumpahan dan percikan di kulit dan membrane

mukosa
 Tertelan karena pippeting dengan mulut

 Gigitan dan cakaran binatang

 Terpapar melalui inhalasi aerosol infeksius

GOOD MICROBIOLOGICAL PRACTICES

• Standard operating procedure (SOP)

• Personel protective equipments (PPE)

PERSIAPAN PREPARAT PEWARNAAN GRAM
• Membersihkan object glass
• Menandai bagian bawah object glass dengan bentuk oval menggunakan
spidol permanen/pensil kaca.
• Tuliskan nomer lab dan inisial spesimen di pinggir object glass bagian atas.
• Dengan menggunakan teknik steril dan ose yang telah disterilkan dengan api,
siapkan preparat dari spesimen, dengan mengambil spesimen dan
memindahkan ke object glass atau siapkan preparat dari bakteri hasil kultur,
dengan cara meneteskan NaCl steril pada kaca objek dan memindahkan isolat
bakteri ke dalam tetesan tersebut, kemudian dicampurkan dan disebarkan
dengan gerakan memutar menggunakan jarum inokulasi.
• Membiarkan apusan mengering sebentar di udara, kemudian fiksasi preparat
dengan cara melewatkan object glass di atas api bunsen.
 PERSIAPAN PREPARAT
PEWARNAAN GRAM
From liquid media From solid media
 PROSEDUR PEWARNAAN GRAM

Tuangkan crystal violet/gentian Bilas dengan air mengalir

violet, diamkan selama 1 menit

Tuangkan larutan
lugol/iodin.
Diamkan selama 1
menit

Bilas dengan air mengalir

 PROSEDUR PEWARNAAN GRAM

Tuangkan ethyl alcohol 95% sampai Bilas dengan air mengalir

warna ungu tidak lagi mengalir dari
preparat

Bilas dengan air mengalir Tuangkan safranin, diamkan selama 1

menit
 PROSEDUR PEWARNAAN GRAM

Biarkan mengering di
udara bebas
HASIL :
a. Bakteri Gram
Teteskan 1 tetes minyak emersi positif:
tepat di atas preparat terwarnai ungu
b. Bakteri Gram
negatif:
terwarnai
merah/pink

Amati menggunakan mikroskop dengan pembesaran 10 x

10 untuk menghitung leukosit dan epitel, serta pembesaran
10 x 100 untuk melihat dan menghitung bakteri
HASIL PENGAMATAN/PEMBACAAN

Batang gram positif, Batang pendek (coccobasil) gram negative,

Contoh: B. subtilis contoh: Escherichia coli
HASIL PENGAMATAN/PEMBACAAN

Coccus gram positif berantai, Coccus gram positif berkelompok,

contoh: Streptococcus sp. contoh: Staphylococcus sp.
 OBSERVATION RESULT…..

Batang bengkok gram negative, Yeast, contoh: Candida sp.

contoh: Vibrio sp.
PEMBACAAN HASIL
Skor Deskripsi Jumlah bakteri per lapang pandang minyak emersi (100x lensa obyektif)
Jumlah epitel dan leukosit per lapang pandang besar/LPB (10x lensa obyektif)
+1 Jarang <10 dalam semua lapang pandang
+2 Sedikit >10 dalam semua lapang pandang, namun <1 per lapang pandang
+3 Sedang 1-25 per lapang pandang
+4 Banyak >25 per lapang pandang
SKOR Bakterial Vaginosis dari Swab Vagina
(Skala Nugent)
Jenis Bakteri Jumlah Bakteri per lapang pandang minyak emersi (100x lensa obyektif)
  0 <1 1-4 5-30 >30

Batang Gram Positif Ukuran 4 3 2 1 0

Besar (Lactobacillus sp.)

Batang Gram Negatif Pendek 0 1 2 3 4

(Gardnerella sp. dan anaerob)

Batang Gram Negatif Bengkok 0 1 1 2 2

dan tipis (Mobiluncus spp.)

Skor BV (Nugent) Interpretasi

1-3 Flora vagina normal
4-6 Intermediate
7-10 Bacterial Vaginosis
Yang dilaporkan pada hasil pembacaan Gram swab vagina:
• Leukosit, Epitel, Yeast, Clue cell, Trichomonas, Bakteri: Batang Gram positif,
Batang Gram negatif, Coccus Gram Positif dan Coccus/diplococcus Gram
Negatif, Skor BV (Nugent)
 
Yang dilaporkan pada hasil pembacaan Gram spesimen lain, misalnya swab
mata, dll:
• Leukosit, Epitel, Bakteri: Batang Gram positif, Batang Gram negatif, Coccus
Gram Positif dan Coccus/diplococcus Gram Negatif, Jamur: Yeast, hifa,
pseudohifa.
 Crystal violet Alkohol 95%

Lugol Safranin
Iritatif dan merusak mukosa Basa kuat
 TERIMA KASIH
JAZAKUMULLAHI KHAIRAN KATSIRA