Metabolisme jaringan ikat pada pasien CHIKungunya abstrak Latar Belakang : CHIKungunya ( CHIK ) demam adalah penyakit virus

yang ditularkan kepada manusia oleh gigitan Virus CHIKungunya ( virus CHIK ) terinfeksi nyamuk Aedes . Virus CHIK adalah anggota dari Alphavirus genus dari keluarga Togaviridae . Laporan sebelumnya telah menunjukkan bahwa infeksi dengan CHIK virus menghasilkan arthritis akut pada host manusia dengan luas nekrosis dan collagenosis atau fibrosis . Hasil : Kami melakukan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh CHIKungunya pada kolagen dan metabolisme jaringan ikat pada 75 orang - CHIKungunya terpengaruh. Pertama, kami diperiksa untuk mucopolysaccharides dalam urin oleh Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide ( CTAB ) tes . Penampilan endapan berat menunjukkan adanya tingkat yang lebih tinggi dari mucopolysaccharides dan kemudian dihitung dengan metode DMB dye . The mukopolisakarida kemih pada pasien CHIK adalah 342 45 mg / l dibandingkan dengan kontrol yang sehat ( 45 5,6 mg / l ) . Blok bangunan kolagen , prolin dan hidroksiprolin juga diukur pada pasien CHIK dan mengamati ekskresi yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol yang sehat . Ekskresi urin hidroksiprolin lebih besar dari tingkat prolin . Kesimpulan : Hasil ini menunjukkan bahwa infeksi virus CHIK mempengaruhi dan merusak tulang rawan dan metabolisme ikat dan melepaskan produk terdegradasi dari jaringan dan bertanggung jawab untuk meningkatkan kadar prolin , hidroksiprolin dan mucopolysaccharides di CHIK mempengaruhi pasien . Latar belakang CHIKungunya ( CHIK ) demam adalah penyakit virus yang ditularkan kepada manusia oleh gigitan virus CHIKungunya ( virus CHIK ) terinfeksi nyamuk Aedes . Virus CHIK adalah anggota dari Alphavirus genus dari keluarga Togaviridae . Virus CHIK adalah pertama kali diisolasi dari serum pasien demam selama epidemi dengue yang terjadi di Kabupaten Newala , Tanzania pada tahun 1953 [ 1 ] . The alphavirus diselimuti partikel dan genom mereka terdiri dari beruntai tunggal - , positif - molekul RNA rasa sekitar 12000 nukleotida . Virus CHIK adalah patogen manusia penting yang menyebabkan sindrom penyakit yang ditandai dengan demam , sakit kepala , ruam , mual , muntah , mialgia dan arthralgia [ 2-8 ] . Hubungannya dengan kondisi perdarahan yang fatal dilaporkan di India [ 9 ] . Virus CHIK secara geografis didistribusikan dari Afrika melalui Asia Tenggara , dan yang transmisi ke manusia terutama melalui spesies Aedes nyamuk [ 1 ] . Sejak 1953, CHIK viurs telah menyebabkan berbagai wabah terdokumentasi dengan baik dan epidemi di Afrika dan Asia Tenggara , yang melibatkan ratusan ribuan orang [ 10-12 ] . Laporan terbaru memiliki dijelaskan wabah besar penyakit CHIK terjadi di pulau-pulau di Samudra Hindia , lepas pantai timur Afrika [ 5,8,13 ] . Timbulnya kembali CHIK juga telah dilaporkan dari Indonesia [ 14 ] dan sangat baru-baru ini wabah besar-besaran di India . Tidak ada pengobatan atau vaksin

yang tersedia , dan relative . Penelitian kecil telah dilakukan ke dalam patogenesis , dibandingkan dengan Arboviruses lainnya , seperti demam berdarah . Laporan sebelumnya telah menunjukkan bahwa infeksi dengan CHIK virus menghasilkan arthritis akut pada host manusia [ 7,15,16 ] dengan luas nekrosis dan collagenosis atau fibrosis [ 17 ] . Arthritis adalah peradangan sendi dan sekitarnya yang jaringan , termasuk tulang rawan , ligamen , dan tendon . Jaringan ikat terutama terdiri dari mucopolysaccharides , zat protein - kolagen dengan asam amino prolin utama , hidroksiprolin dll , kalsium , belerang , dan kolagen . Mukopolisakarida , prolin dan pengukuran hidroksiprolin dalam urin digunakan dalam diagnosis dan pengobatan berbagai gangguan diwariskan yang mempengaruhi tulang dan jaringan ikat . Kehadiran mereka di urin berasal dari substansi dasar kolagen , dan tulang [ 18-20 ] . Meskipun banyak laporan menyatakan bahwa CHIK virus menghasilkan arthritis pada manusia . biokimia mekanisme dan perubahan mucopolysaccharides , prolin dan hidroksiprolin dalam nyeri sendi akut ini memiliki belum dilaporkan dalam literatur masa lalu . Selama tahun lalu wabah demam CHIK di bagian selatan India telah mendorong kami untuk carryout percobaan pada efek Virus CHIK pada kolagen dan jaringan ikat . dalam hal ini studi yang kami mengumpulkan sampel darah dan urin dari pasien demam CHIK kronis dan mempelajari biokimia parameter yang terkait dengan jaringan ikat , yang bertanggung jawab untuk nyeri sendi akut dan arthritis . hasil CHIK pasien telah melaporkan nyeri sendi melumpuhkan, atau arthritis, yang bisa berlangsung selama beberapa minggu atau bulan. Umum parameter biokimia pasien CHIK dan sehat control yang digambarkan pada Tabel 1. Serum albumin dan kreatinin yang menunjukkan variasi yang signifikan dengan kontrol. Kami melakukan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh CHIK pada kolagen dan metabolisme jaringan ikat oleh mengukur tingkat mukopolisakarida , hidroksiprolin dan prolin dalam sampel urin pasien CHIK . air seni dari 75 pasien yang berbeda menderita CHIK dievaluasi untuk kehadiran mucopolysaccharides oleh skrining setil trimetil amonium bromida ( CTAB ) uji urin . Penampilan endapan berat menunjukkan kehadiran dari mucopolysaccharides dalam sampel . jumlah tersebut endapan tergantung pada konsentrasi mucopolysaccharides . Tergantung pada konsentrasi mereka , sampel diklasifikasikan sebagai negatif , ringan, sedang , dan parah . Dalam studi ini , kami mengamati sedang sampai parah kasus . Kontrol yang sehat tidak menunjukkan endapan dengan CTAB . Kami juga diukur secara kuantitatif mucopolysaccharides kemih tingkat dalam spesimen urin pagi pertama dengan metode DMB sederhana dan cepat dan digunakan dalam pemahaman patofisiologi arthritis pada penyakit CHIK . Mucopolysaccharides kemih ( GAG ) ekskresi dalam pasien meningkat secara signifikan dibandingkan dengan kontrol yang sehat . Kami juga mengamati variasi signifikan pada tingkat dari ekskresi urin hidroksiprolin dan prolin

dengan kontrol yang sehat ( Tabel 2 ) . Para pasien yang menderita dengan CHIK diekskresikan tingkat yang lebih tinggi daripada hydroxylproline prolin . Kami juga melakukan tindak lanjut studi selama 10 pasien dengan persetujuan mereka hingga satu minggu yang memiliki nyeri rematik kronis . Kemih diekskresikan mucopolysaccharides yang terus-menerus tinggi dalam dua hari pertama dan tingkat perlahan-lahan menurun pada hari kemudian , tetapi pada akhir satu minggu (sampai 10 hari ) kami menemukan masih pasien buang air nilai yang lebih tinggi dibandingkan dengan control ( Tabel 3 ) . Perubahan tingkat hidroksiprolin urin dan prolin juga diukur dan mengamati signifikan perbedaan dengan kontrol sehat . diskusi Proteoglikan, sebuah blok bangunan mukopolisakarida tulang rawan di dalam ruang sendi, digunakan oleh kondrosit (sel tulang rawan-building) untuk menciptakan lebih banyak tulang rawan. Setelah infeksi patogen, sendi biasanya menunjukkan respon inflamasi alami yang terutama mempengaruhi sinovium (sinovitis). Proses ini diperlukan untuk perbaikan bawaan dari jaringan yang rusak, yang memungkinkan sendi untuk menutup fungsi normal. Mediator inflamasi dilepaskan ke dalam sendi dari sumber seperti saraf, immunocytes, synoviocytes, dan pembuluh darah endotelium membantu untuk mengatur ini respon penyembuhan . Ini mediator inflamasi yang sama juga bertindak pada saraf sensorik bersama, mengarah ke salah eksitasi atau sensitisasi [ 21 ] . Ketika orang menderita arthritis , mereka mengalami kehancuran selektif kolagen dalam tulang rawan sendi mereka . Kolagen adalah protein struktural yang paling melimpah dalam tulang rawan . Ini membantu memberikan elastisitas sendi dan bekerja sebagai " lem" yang menyatukan berbagai komponen tulang rawan . Hal ini juga berisi mayoritas mucopolysaccharides yang memberikan tulang rawan kekuatan penyembuhannya . Mucopolysaccharides besar - molekul polimer linear massa karbohidrat terdiri dari asam glukuronat atau iduronic dan N - acetylglycosamine atau N unit acetylgalactosamine . Kondroitin sulfat dan heparan sulfat yang berasal dari proteoglikan yang glycosaminoglycans ini ( GAG ) yang kovalen dihubungkan pada akhir mengurangi ke gugus hidroksil residu serin [ 22 ] . Proteoglikan mengandung GAG terikat hyaluronic bentuk asam agregat besar yang terperangkap dalam jaringan kolagen sebagai konstituen struktural utama dari tulang rawan . Kehilangan proteoglikan merupakan gambaran awal dari matriks resorpsi . Erosi tulang rawan yang melapisi sendi merupakan ciri dari osteoarthritis . Sebuah peningkatan yang sesuai dalam GAG telah dilaporkan dalam cairan sinovial , serum , urin dan pasien dengan penyakit rematik rematik [ 23,24 ] . Konsisten dengan hal ini , kami mengamati dalam studi kami ekskresi yang lebih tinggi mucopolysaccharides melalui urin ( Tabel 2 ) . Pengukuran ekskresi hidroksiprolin urin digunakan untuk memperkirakan kolagen katabolisme . Degradasi rilis kolagen tulang gratis 4 hidroksiprolin dan peptida yang mengandung 4 - hidroksiprolin dalam plasma . Pengukuran hidroksiprolin urin sangat berguna dalam pengobatan pemantauan dan kemajuan dalam

penyakit tulang metabolik seperti osteomalasia dan osteoporosis dan penyakit Paget . Hydroxyprolme muncul dalam urin setelah degradasi kolagen ( collagenosis ) , yang mungkin berasal dari berbagai jaringan [ 25 ] . Mengukur hidroksiprolin urin telah terutama digunakan untuk menunjukkan omset kolagen tulang dalam kondisi normal dan patologis . Kolagen , yang merupakan > 90 % dari matriks organik bebas lemak tulang , adalah penting dalam integritas struktural dan merupakan elemen sentral dari struktur jaringan ikat di mana fase mineral mengkristal selama pembentukan tulang [ 20,26 ] . Hidroksiprolin urin mencerminkan omset kolagen sehari-hari dan pada manusia telah menunjukkan potensi besar sebagai indeks status gizi dan tingkat pertumbuhan [ 27,28 ] . Para pasien CHIK menunjukkan tingkat terekskresi lebih tinggi daripada hidroksiprolin prolin menunjukkan peningkatan omset kolagen ( Tabel 2 ) . Pada studi lanjutan pada pasien CHIK yang dipilih , peningkatan kadar mucopolysacchariedes , prolin dan hidroksiprolin menunjukkan omset highermetabolic di awal hari dan surut secara progresif di hari kemudian ( Tabel 3 ) . kesimpulan Pada pasien CHIK kolagen dan jaringan ikat metabolisme sangat dipengaruhi dan peningkatan metabolisme menyebabkan peningkatan ekskresi prolin , hidroksiprolin dan mucopolysaccharides dalam urin dibandingkan dengan kontrol yang sehat . Hal ini menunjukkan bahwa infeksi virus CHIK , jaringan ikat biasanya menunjukkan respon inflamasi dan menyebabkan kerusakan tulang rawan dan jaringan ikat , meningkatkan metabolisme dan melepaskan terdegradasi produk dalam darah dan akhirnya diekskresikan melalui urin . Bahan dan metode subyek Selama tahun Juli lalu - Oktober 2006 , CHIK keluar istirahat di Andhra Pradesh , India , total 75 ( 45 laki-laki + 30 perempuan ) pasien dipilih berdasarkan gejala penyakit untuk penelitian ini . Kami juga mengambil 20 usia-cocok orang sehat yang dipilih dari masyarakat dan digunakan sebagai subyek kontrol . Sampel darah dan urin dikumpulkan dari masing-masing subjek dengan persetujuan tertulis mereka untuk studi lebih lanjut . Dari semua mata pelajaran , 5 ml darah dikumpulkan dalam tabung heparinized dan disentrifugasi pada 1500 g selama 15 menit pada 4 C. Plasma dan pellet RBC dipisahkan disimpan dalam tabung Eppendorf dan disimpan pada 80 C sampai analisis . Kit tersedia secara komersial diukur analisis darah dan parameter umum lainnya . Analisis urin Sampel urin dikumpulkan dari pasien dan digunakan untuk estimasi mucopolysaccharides , prolin dan hidroksiprolin . Jumlah penentuan hidroksiprolin urin dilakukan menggunakan metode yang dijelaskan oleh Cleary dan Saunders ( 1974 ) [ 29 ] . Secara singkat , urin melewati kolom resin retardasi ion untuk menghilangkan asam , garam , dan pigmen . Dari kolom eluat , urine penentuan hidroksiprolin dilakukan oleh dioksidasi menjadi pirol asam 2 - karboksilat dan kemudian pyrole . Warna diproduksi dengan dimetil amino - benzaldehida yang masured pada 560 nm [ 30 ] . Tingkat prolin dalam sampel urin diukur dengan metode Bates et al ( 1973) [ 31 ] . Dua sampel ml urine dicampur dengan 2 ml

asam ninhidrin reagen dan disimpan dalam bak air mendidih selama 1 jam . Tabung ditransfer ke penangas es untuk mengakhiri reaksi . 5 ml toluena ditambahkan dan dicampur dan membaca pada 520 nm terhadap toluena kosong . Tes skrining untuk mucopolysaccharides dalam urin diuji oleh Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide ( CTAB ) tes . Lima ml urin segar ditambahkan ke 1 ml CTAB ( cetavilon ) solusi ( 50 g / l dalam buffer sitrat ( 1 M ) pH 6,0 ) . Endapan berat menunjukkan adanya mucopolysaccharides ( Varley et al 1990) . Uji DMB dilakukan pada dasarnya untuk pengukuran mucopolysaccharides sesuai dengan metode Whitley et al . ( 1989) [ 32 ] . Secara singkat, DMB larutan zat warna ( biru 1,9 dimethylmethylene ) dibuat dengan melarutkan 16 mg DMB , 3.04 g glisin , 2,37 g natrium klorida , dan 0,5 mL dari 0,1 mol / l asam klorida dalam 1 l air suling . PH larutan diatur sampai 3 . Untuk setiap uji , spesimen urin pasien adalah dicampur dengan 1 ml larutan zat warna pada suhu kamar , dan diukur absorbansi pada 525 nm tanpa penundaan setelah pencampuran sampel dan pewarna solusi . Uji ini dikalibrasi ayat kurva standar kondroitin sulfat ( 5-100 mg / l ) . Hasilnya dinyatakan sebagai mg / l . Semua estimasi kolorimetri parameter biokimia di atas dalam sampel diukur dengan menggunakan ELISA Biotek Reader. analisis statistik Analisis statistik dilakukan oleh perangkat lunak GraphPad InStat . Subyek dengan CHIK dibandingkan dengan kontrol sehat . Sarana dan standard error sarana dihitung dan perbedaan antara cara yang t -test siswa . Penulis Kontribusi SL merancang dan melakukan percobaan dengan darah , sampel urin pasien . SL juga dilakukan final statistic analisis data dan memberikan kontribusi untuk menulis kertas . SV ( dia spesialis penyakit menular ) panduan kepada kami untuk memilih pasien CHIKungunya untuk penelitian selama selama waktu pengumpulan darah dan urin. RV mengawasi proyek secara keseluruhan, dirancang percobaan, menganalisis data dan menulis kertas. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.