UJI RESISTENSI

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Mikroorganisme yang berada di sekitar kita bermacam-macam ada yang
menguntungkan dan ada yang merugikan bagi makhluk hidup, khususnya pada
manusia. Mikroorganisme misalnya bakteri ada yang bersifat patogen dan non patogen.
Bakteri patogen adalah bakteri yang dapat menyebabkan penyakit tertentu, sedangkan
bakteri non patogen adalah bakteri yang tidak menyebabkan penyakit. Adanya bakteri
patogen membuat peneliti mulai mengembangkan pengetahuan mengenai resistensi
suatu bakteri dan menemukan zat antimikrobia yang kemudian memudahkan manusia
untuk mengendalikan pertumbuhan suatu bakteri.
Antibiotik merupakan senyawa kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme
(khususnya dihasilkan oleh fungi) atau dihasilkan secara sintetik yang dapat membunuh
atau menghambat perkembangan bakteri dan organisme lain (Chaidir, 1994). Tiap-tiap
antibiotik memiliki efektivitas yang berbeda-beda terhadap mikroorganisme (bakteri).
Beberapa antibiotik dapat bekerja dengan baik pada bakteri gram negatif dan beberapa
antibiotik lainnya ada yang lebih efektif pada bakteri gram positif.
Cara mmengetahui efektivitas suatu antibiotik dengan mengetahui tingkat
resistensi bakteri terhadap antibiotik dapat dilakukan dengan uji Kirby-Bauer. Prinsip
dasarnya adalah dengan meletakkan disk yang telah mengandung antibiotik dengan
konsentrasi dan kadar tertentu pada media agar yang telah ditanam bakteri uji. Zona
hambat/ bening yang dihasilkan disekitar disk inilah yang digunakan sebagai dasar
penentuan tingkat resistensi.tingkat resisntensi bakteri dibedakan menjadi 3 yakni:
sensitif, intermediet, dan resisten. Bakteri bersifat sensitif adalah jika terbentuk zona
bening pada saat diuji Kirby-Bauer, resisten adalah jika tidak terbentuk zona bening
pada saat diuji Kirby-Bauer, sedangkan intermediet adalah jika terbentuk zona bening
pada saat diuji Kirby-Bauer dengan diameter yang kecil.

Berdasarkan hal tersebut, untuk mengetahui resistensi bakteri terhadap antibiotik

(ampisilin) dan mengetahui efektifitas antibiotik tersebut, maka dilakukan percobaan uji
resistensi pada bakteri (sampel air selokan) Fakultas MIPA, Universitas Negeri
Surabaya.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang yang telah dibahas, dapat ditarik rumusan masalah yaitu:
a. Bagaimanakah cara menguji tingkat resistensi suatu bakteri terhadap antibiotik
tertentu?
b. Bagaimanakah efektivitas antibiotik (Ampisilin) terhadap bakteri gram negatif berbentuk
monococcus dari sampel air selokan?
1.3 Tujuan
Tujuan dari praktikum ini adalah :
a. Mengetahui cara menguji tingkat resistensi suatu bakteri terhadap antibiotik tertentu.
b. Mengetahui efektivitas suatu antibiotik terhadap bakteri uji.
1.4 Manfaat
Manfaat dari praktikum uji resistensi ini adalah :
a. Dapat memberikan pengetahuan cara menguji resistensi suatu bakteri.
b. Dapat memberikan pengetahuan mengenai sifat antibiotik yang memiliki efektivitas
berbeda-beda terhadap suatu jenis bakteri.
c. Dapat memberikan pengetahuan bahwa konsentrasi antibiotik mempengaruhi besar
kecilnya zona hambat yang dihasilkan.

BAB II
KAJIAN PUSTAKA
Mikroorganisme dapat ditemukan hampir di setiap lingkungan, termasuk
lingkungan-lingkungan dimana tidak ada kehidupan lain yang dapat bertahan hidup.
Mikroorganisme mampu bertahan hidup di berbagai kondisi lingkungan yang berbedabeda. Mereka juga mampu beradaptasi dengan perubahan-perubahan lingkungan yang
sangat ekstrim. Jenis-jenis mikroorganisme yang ditemukan di suatu lingkungan
mempunyai pertumbuhan yang berbeda-beda pula. Pertumbuhan mikroorganisme
sangat dipengaruhi oleh faktor fisik dan kimiawi. Selayaknya mahluk hidup,
mikroorganisme juga membutuhkan zat-zat tertentu untuk tumbuh dan juga
memberikan respon terhadap zat-zat yang merusak mereka. Bahan- bahan kimia baik
organik maupun anorganik bersifat racun bagi mikroorganisme. Bahan-bahan ini dapat
menghambat atau mematikan mikroba yang bersifat patogen dan merugikan manusia.
Senyawa yang dapat menghambat mikroba disebut senyawa antiseptik, sedangkan
senyawa yang bisa mematikan mikroba disebut senayawa desinfektan.
Salah satu senyawa antiseptik yang dapat menghambat pertumbuhan salah satu
jenis mikroba misalnya bakteri adalah antibiotik. Antibiotik atau dikenal juga sebagai
obat anti bakteri merupakan obat yang digunakan untuk mengobati penyakit infeksi
yang disebabkan oleh bakteri. Alexander Fleming pada tahun 1927 menemukan
antibiotika yang pertama yaitu penisilin. Pada tahun 1940, antibiotika dapat dikatakan
merubah dunia pengobatan serta mengurangi angka kesakitan & kematian yang
disebabkan oleh penyakit infeksi secara dramatis (Ganiswarna, 1995).
Pengertian dari antibiotika pada awalnya merujuk pada senyawa yang dihasilkan
oleh jamur atau mikroorganisme yang dapat membunuh bakteri penyebab penyakit
pada hewan & manusia. Saat ini beberapa jenis antibiotika merupakan senyawa sintetis
(tidak dihasilkan dari mikororganisme) tetapi juga dapat membunuh atau menghambat
pertumbuhan bakteri. Secara teknis, zat yang dapat membunuh bakteri baik berupa
senyawa sintetis atau alami disebut dengan zat antimikroba, akan tetapi banyak orang
yang menyebutnya dengan antibiotika. Antibiotika mempunyai manfaat yang sangat

banyak, penggunaan antibiotika secara berlebihan juga dapat memicu terjadinya

resistensi antibiotika (Wasitaningrum, 2009).
Resistensi antibiotika ialah kemampuan dari bakteri atau mikroorganisme lain
untuk menahan efek antibiotika. Resistensi antibiotika terjadi ketika bakteri dapat
merubah diri sedemikian rupa hingga dapat mengurangi efektifitas dari suatu obat,
bahan kimia ataupun zat lain yang sebelumnya dimaksudkan untuk menyembuhkan
atau mencegah penyakit infeksi sehingga mengakibatkan bakeri tersebut tetap dapat
bertahan hidup. Bakteri dapat membentuk ketahanan khusus terhadap suatu jenis
antibiotika tertentu, sehingga membahayakan orang yang terkena penyakit tersebut.
Kesalahpahaman yang sering terjadi di masyarakat yaitu adanya anggapan bahwa
yang resisten terhadap obat tertentu ialah tubuh seseorang, padahal sebenarnya
bakteri yang ada di dalam tubuh itulah yang menjadi resisten terhadap pengobatan,
bukan tubuhnya (Stainier, et al., 1986).
Cara pengujian resistensi mikroba terhadap suatu jenis antibiotik dapat dilakukan
dengan uji resistensi. Teknik ini menggunakan zat kimia untuk mengurangi dan
membunuh mikroorganisme, terutama mikroba yang patogen. Metode yang biasa
dipakai adalah metode Metode Kirby-Bauer yang merupakan cara untuk menentukan
sensitifitas antibiotik untuk bakteri. Sensitifitas suatu bakteri terhadap antibiotik
ditentukan oleh diameter zona hambat terbentuk. Semakin besar diameternya maka
semakin terhambat pertumbuhannya.
Faktor-faktor yang berpengaruh pada metode Kirby-Bauer adalah:
a. Ketebalan media agar
Dapat mempengaruhi penyebaran dan difusi antibiotik yang digunakan.
b. Umur bakteri
Bakteri yang berumur tua (fase stationer) tidak efektif untuk diuji karena mendekati
kematian dan tidak terjadi pertumbuhan lagi sehingga yang dipakai bekteri berumur
sedang (fase eksponential) karena aktivitas metabolitnya tinggi, pertumbuhan cepat
sehingga lebih peka terhadapa daya kerja obat dan hasilnya lebih akurat.
c. Waktu inkubasi
Waktu yang cukup supaya bakteri dapat berkembang biak dengan optimal dan
cepat. Waktunya minimal 16 jam.
d. pH, temperature
Bakteri memiliki pH dan temperature optimal untuk tumbuh yang berbeda-beda
sehingga sebaiknya dilakukan saat pH dan temperature yang optimal.

e. Konsentrasi antibiotik
Semakin besar konsentrasinya semakin besar diameter hambatannya..
f. Jenis antibiotik
setiap bakteri memiliki respon yang berbeda-beda terhadap antibiotiknya, tergantung
sifat antibiotik tersebut (berspektrum luas/berspektrum sempit).
Bakteri dapat membentuk ketahanan khusus terhadap suatu jenis antibiotika
tertentu,

sehingga

membahayakan

orang

yang

terkena

penyakit

tersebut.

Kesalahpahaman yang sering terjadi di masyarakat yaitu adanya anggapan bahwa

yang resisten terhadap obat tertentu ialah tubuh seseorang, padahal sebenarnya
bakteri yang ada di dalam tubuh itulah yang menjadi resisten terhadap pengobatan,
bukan tubuhnya (Sinaga, 2005).
Setiap bakteri memiliki respon yang berbeda-beda terhadap antibiotiknya,
tergantung sifat antibiotik tersebut (berspektrum luas/berspektrum sempit). Ampicillin
merupakan salah satu antibiotik yang termasuk golongan penisilin semi-sintetik yang
berasal dari inti penisilin yaitu asam 6-amino penisilat (6-APA) dan merupakan antibiotik
spektrum luas yang bersifat bakterisid. Secara klinis, ampicillin efektif terhadap bakteri
gram-positif seperti
menghasilkan

S. pneumonia, enterokokus

penisilinase,

sedangkan

pada

dan

bakteri

stafilokokus yang
gram-negatif,

tidak

diantaranya

gonokokus, H. influenza, beberapa jenis E.coli, Shigella, Salmonella dan P. mirabilis.

Seperti golongan penicillin lainnya, ampicillin bekerja dengan menghambat sintesis
dinding sel yaitu dengan menyerang peptidoglikan dan mampu melakukan penetrasi
pada bakteri gram positif dan gram negatif. Keberadaan gugus amino pada Ampicillin
membuatnya mampu menembus membran terluar (outer membran) pada bakteri
(Brander, et al., 1991).
Ampisilin termasuk antibiotik yang bersifat bakterisidal dan memiliki mekanisme
kerja yang secara umum menyebabkan kerusakan dinding sel bakteri. Mekanisme kerja
ampicilin antara lain:
1. Penghambatan sintesis dinding sel bakteri dengan menghambat transpeptidasi sintesis
peptidoglikan pada aksi enzim transpeptidase bakteri. Transpeptidase merupakan
enzim yang bekerja dalam proses cross-linking dari rantai peptida dalam membentuk
senyawa peptidoglikan yang terjadi pada tahap akhir pembentukan dinding sel (Essack,

2001; Chamber, 2004). Proses Cross linking tersebut digunakan dalam integritas
struktur dinding sel bakteri.
2. Perlekatan obat pada protein spesifik pengikat penisilin atau Penicillin-Binding Protein
(PBP) yang berlaku sebagai reseptor obat pada bakteri.
3. Aktivasi enzim autolitik pada dinding sel akibat perlekatan obat pada PBP. Aktivasi
tersebut menyebabkan lisis dinding sel bakteri (Jawetz, 1997; Dzen et. al., 2003).

BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 WAKTU DAN TEMPAT PENELITIAN
Praktikan melaksanakan praktikum uji resitensi bakteri pada hari kamis tanggal 4
april 2013. Praktikan melaksanakan praktikum tersebut di Laboratorium Mikrobiologi
Dasar, Gedung C9, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Negeri Surabaya.
3.2 ALAT DAN BAHAN
A.

Alat
Cawan petri 2 buah
Kertas hisap (paper disc) 12 buah

B.

Bahan
Media taoge agar
Media taoge cair
Bakteri uji 2 ml
Antibiotik amphicillin 500 mg

3.3 PROSEDUR KERJA

a.
b.
c.

Dilakukan peremajaan/ sub culture bakteri uji yang akan digunakan pada media taoge cair.
Diinkubasi pada suhu 28-30C selama 24 jam.
Diambil 1 ml kultur bakteri, kemudian dimasukkan ke dalam cawan petri steril (dilakukan

d.
e.

secara duplo).
Media taoge agar dituangkan ke dalam cawan petri, kemudian dihomogenkan.
Membuat paper disc dari kertas hisap berbentuk lingkaran dengan diameter kurang dari 1 cm,
kemudian direndam dalam antibiotik dengan konsentrasi 50 mg/ml, 25 mg/ml, dan 5 mg/ml (tiap

f.

konsentrasi 3-4 paper disc).

Kertas hisap yang telah direndam diletakkan pada media Taoge Agar yang telah ditanami bakteri

g.
h.

uji (langkah no.4), diberi tanda pada bagian luar cawan supaya tidak tertukar.
Diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 28-30C.
Diamati zona hambat/zona bening yang terbentuk, kemudian diukur diameternya.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil
Tabel 4.1. Pengamatan Uji Resistensi Pada Cawan Petri
Identifikasi
Gambar

Uji Resistensi Cawan A

25
mg/ml
50
mg/
ml
5
mg/
ml

Mikroorganisme

Morfologi

Bentuk sel
Susunan sel
Gram positif (+)
atau negatif (-)
Diameter zona
hambat

Uji Resistensi Cawan B

25
mg/ml
50
mg/
ml
5
mg/
ml

Bakteri
(sampel air selokan depan gedung

Bakteri
(sampel air selokan depan gedung

C3- FMIPA)
Karakteristik optik: Opaque

C3- FMIPA)
Karakteristik optik: Opaque

Bentuk: punctiform

Bentuk: punctiform

Elevasi: raised

Elevasi: raised

Bentuk tepian: entire

Coccus (bulat)
Monococcus

Bentuk tepian: entire

Coccus (bulat)
Monococcus

Negatif (-)

Negatif (-)

Konsentrasi 50 mg/mL: 1,6 cm

Konsentrasi 50 mg/mL: 1,5 cm

Konsentrasi 25 mg/mL: 1,3 cm

Konsentrasi 25 mg/mL: 1,2 cm

Konsentrasi 5 mg/mL: 1,1 cm

Keterangan: diameter paper disk = 0,5 cm

Konsentrasi 5 mg/mL: 1,1cm

Hasil yang kami dapatkan dari uji resistensi berupa reaksi dari bakteri terhadap
antibiotik, sensitif atau resisten, dapat dilihat dari zona inhibitor yang terbentuk.

Terdapat perbedaan besar zona hambat/ zona bening yang terbentuk sebagai respon
terhadap perbedaan pengenceran antibiotik. Dari tabel diatas dapat dilihat bahwa
besarnya pengenceran berbanding lurus dengan besarnya zona hambat/zona yang
terbentuk. Semakin besar pengenceran (50 mg/ml) maka semakin besar diameter zona
hambat/ zona bening yang terbentuk.
4.2 Pembahasan
Percobaan ini bertujuan agar mahasiswa dapat melakukan uji sensitifitas mikroba
terhadap antibiotik dengan metode Kirby-Bauer dan menentukan mikroba uji termasuk
sensitif atau resisten terhadap antibiotik yang diujikan.
Pada percobaan ini kadar antibiotik ditentukan dengan metode Kirby-Bauer,
yaitu pengukuran sensitifitas antibiotik dengan metode paper disk yang berisi agen
antimikroba pada media yang telah ditanami mikroba dan akan berdifusi pada media
agar. Daerah jernih disekitar paper disk merupakan hambatan mikroba oleh antibiotik
pada permukaan agar. Metode Kirby-Bauer merupakan cara untuk menentukan
sensitifitas antibiotik untuk bakteri. Sensitifitas suatu bakteri terhadap antibiotik
ditentukan oleh diameter zona hambat terbentuk. Semakin besar diameternya maka
semakin terhambat pertumbuhannya.
Dalam percobaan uji resistensi ini, antibiotik yang digunakan adalah ampicillin
500 gram yang didapatkan zona hambat/zona bening. Hal tersebut menunjukan bahwa
bakteri sensitif terhadap antibiotik ampicilin 500 gram, dapat dilihat dengan adanya
zona jernih/zona hambat yang mengindikasikan bahwa bakteri sensitif terhadap
antibiotik ampicilin. Ampicillin bekerja dengan menghambat sintesis dinding sel yaitu
dengan menyerang peptidoglikan dan mampu melakukan penetrasi pada bakteri gram
positif dan gram negatif. Hal ini disebabkan keberadaan gugus amino pada Ampicillin,
sehingga membuatnya mampu menembus membran terluar (outer membran) pada
bakteri. Percobaan yang dilakukan telah sesuai dengan teori yang menyebutkan bahwa
semakin tinggi konsentrasi dari antibiotika maka akan semakin besar zona jernih yang
terbentuk (Dwidjoseputro., 2003).
Ampisilin termasuk antibiotik yang bersifat bakterisidal dan memiliki mekanisme
kerja yang secara umum menyebabkan kerusakan dinding sel bakteri. Mekanisme kerja
antibiotik tersebut antara lain:

1. Penghambatan sintesis dinding sel bakteri dengan menghambat transpeptidasi sintesis

peptidoglikan pada aksi enzim transpeptidase bakteri. Transpeptidase merupakan
enzim yang bekerja dalam proses cross-linking dari rantai peptida dalam membentuk
senyawa peptidoglikan yang terjadi pada tahap akhir pembentukan dinding sel (Essack,
2001; Chamber, 2004). Proses Cross linking tersebut digunakan dalam integritas
struktur dinding sel bakteri.
2. Perlekatan obat pada protein spesifik pengikat penisilin atau Penicillin-Binding Protein
(PBP) yang berlaku sebagai reseptor obat pada bakteri.
3. Aktivasi enzim autolitik pada dinding sel akibat perlekatan obat pada PBP. Aktivasi
tersebut menyebabkan lisis dinding sel bakteri (Jawetz, 1997; Dzen et. al., 2003).
Perbedaan luas/lebar diameter zona hambat pada cawan A dengan cawan B
disebabkan oleh beberapa faktor, antara lain kurang halusnya dalam proses
penggerusan antibiotik, konsentrasi antibiotik yang diserap oleh paper disk pada cawan
A berbeda dengan paper disk pada cawan B karena larutan antibiotik pada tiap
konsentrasi kurang homogen, volume spet yang disediakan tidak sesuai dengan
volume yang dibutuhkan serta adanya media Taoge Agar (TA) yang menggumpal ketika
di tuangkan pada cawan petri.

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Bakteri memiliki tingkat resistensi yang berbeda-beda terhadap antibiotik yang
diberikan tergantung dari sifat/karakteristik bakteri uji serta jenis dan konsentrasi
antibiotik. Bakteri bersifat sensitif apabila menghasilkan zona hambat/zona bening
ketika

diuji

dengan

antibiotik. Antibiotik

semakin

efektif

dalam

menghambat

pertumbuhan bakteri apabila semakin luas/lebar zona hambat yang terbentuk yang
terjadi akibat semakin tinggi konsentrasi antibiotik yang digunakan.
5.2. Saran
Agar zona hambat yang dihasilkan membentuk struktur yang bulat sempurna
(diameter tiap sisinya sama atau hampir sama) supaya mudah diamati praktikan harus
berhati-hati ketika meletakkan paper disc (yang telah dicelupkan ke larutan antibiotik)
dalam suspensi bakteri pada cawan petri. Pemilihan kertas yang digunakan sebagai
disc harus dipilih jenis kertas yang dapat menyerap sempurna larutan antibiotik,
misalnya kertas saring.

DAFTAR PUSTAKA

Brander, G.C., Pugh, D.M., Bywater, R.J. and Jenkins, W.L. 1991. Veterinary Applied
Pharmacology and Therapeutics, 5th ed. The English Language Book Society, Bailliere
Tindal, London.
Chaidir J, Munaf S. 1994. Obat antimikroba. In : Munaf S, eds. Farmakologi Unsri. Jakarta :
EGC.
Chambers, H. F. 2004. Farmakologi Dasar dan Klinik. 8th ed. Jakarta: Salemba Medika.
Dwijaseputro. 1987. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Universitas Brawijaya. Djambatan :
Malang.Hadioetomo, Ratna Siri. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. PT
Gramedia PustakaUtama : Jakarta
Dzen, Sjoekoer M; Roekistiningsih; Santoso, Sanarto; Winarsih, Sri; Sumarno; Islam,
Samsul, A.S. Noorhamdani; Murwani, Sri; Santosaningsih, Dewi. 2003. Bakteri
Bentuk Batang. Bakteriologi Medik. Malang: Bayumedia. Pp 189
Essack, S.Y., 2001. The Development of Beta-Lactam Antibiotics in Response to the
Evolution of-Lactamases. Pharmaceutical Research. 18(10): 1391-99.
Fleming, Alexander (1980). On the antibacterial action of cultures of a penicillium, with
special reference to their use in the isolation of B. influenza.. Clin Infect Dis 2 (1):12939.
Jawet, Melnik dan Adelberg. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: EGC.
Jawet E. 1998. Prinsip kerja obat antimikroba. In : Katzung B, eds. Farmakologi dasar dan
klinik. Jakarta : EGC.

Wasitaningrum, I. D. A., 2009. Uji Resistensi Bakteri Staphylococcus Aureus dan Escherichia
Coli Dari Isolat Susu Sapi Segar Terhadap Beberapa Antibiotik. Skripsi. Tidak
dipublikasikan. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta.