Analisis HPLC-MSn dari fenolik Senyawa dan Purin Alkaloid di Green dan Black Tea

Teh adalah campuran kompleks yang mengandung berbagai senyawa dari fenolat sederhana
untuk thearubigins kompleks, banyak yang memiliki baik diakui sifat antioksidan. Makalah
ini menjelaskan penerapan (HPLC-MSn) metode kinerja tinggi kromatografi cair-spektrometri
massa untuk analisis cepat dan rutin lebih dari 30 fenolat dalam teh. Hijau dan hitam infus
teh yang disuntikkan langsung ke kolom HPLC fase terbalik, dan fenolat dielusi
menggunakan dua gradien fase gerak yang berbeda, satu dioptimalkan untuk
menyelesaikan derivatif catechin dan lainnya, flavonol dan theaflavin. Senyawa,
diidentifikasi berdasarkan waktu retensi mereka, spektrum serapan, dan pola fragmentasi
MS, termasuk (+) - katekin, (-) - epicatechin, theaflavin dan mereka berbagai turunannya
gallate, quercetin dan kaempferol mono-, di-, dan triglycosides , ester asam quinic asam
gallic

2. BAHAN-BAHAN DAN METODE-METODE

2.1. Bahan. Tetley GB Ltd (Greenford, Middlesex, Inggris) disediakan sampel teh hijau dan
hitam Indonesia. (+) - Katekin, (-) gallocatechin, (-) - epicatechin, (-) - gallate epicatechin, (-)
- epigallocatechin, (-) - epigallocatechin gallate, asam galat, kafein, gallocatechin; 4,
theobromine; 5, 3-caffeoylquinic asam; 6, (-) epigallocatechin; 7, (+) - katekin; 8, 5-caffeoylquinic asam; 9,
kafein; 10, (-) - epicatechin; 11, (-) - epigallocatechin gallate; asam 12, 4-p-coumaroylquinic;

2.2. Persiapan Teh. solusi stok infus teh yang dibuat dengan menambahkan 18 mL air
mendidih untuk 1 g daun. Setelah 3 menit, minuman disaring untuk menghilangkan partikel
sebelum analisis dari filtrat.

2.3. LC-Diode Array dan Analisis MSn. analisis awal sampel teh menyoroti kebutuhan untuk
menggunakan dua metode HPLC terpisah untuk memisahkan pertama senyawa katekin yang
diturunkan dan yang kedua flavonols dan theaflavin. Meskipun ini meningkatkan waktu analisis,
itu sangat meningkatkan resolusi kromatografi senyawa yang diteliti.

2.4. Pengukuran Jumlah Polifenol dan thearubigins. Untuk mengukur total polyphenol dalam
infus teh hitam, metode FolinCiocalteu diterapkan dan data yang disajikan dalam setara asam
galat (21). tingkat thearubigin diperkirakan dengan menambahkan tingkat keseluruhan fenolat
individu ditentukan oleh HPLC dan mengurangkan angka ini dari perkiraan total polifenol yang
diperoleh dengan uji Folin-Ciocalteu (9).

3. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1. Fenolik Profil Teh.
Dua sistem elusi gradien digunakan untuk analisis HPLC fase terbalik fenolat di infus teh.
Meskipun kebanyakan studi yang dilaporkan dalam literatur memanfaatkan gradien panjang
tunggal, pendekatan ini dapat mengakibatkan resolusi lengkap dari beberapa komponen fenolik
dengan puncak minor seringkali tertutup oleh komponen yang lebih menonjol yang terelusi di
dekatnya.
Tabel 1. Retensi Waktu, Mass spektral Karakteristik, dan Identitas Flavan-3-ols, Hydroxycinammates, dan Purin Alkaloid Hadir di Tea Sebuah

puncak t R ( min) senyawa [M - H] - ( m / z) NONA 2 ( m / z)

1 5.8 asam galat 169 125

2 6.2 5-galloylquinic asam 343 191 (asam quinic; [M - H] - galloyl), 169

3 9.4 ( -) - gallocatechin 305 261 , 221, 219, 179
4 10.7 theobromine 181 b

5 13.2 3-caffeoylquinic asam 353 191 (asam quinic; [M - H] - caffeoyl), 179

6 15,9 ( -) - epigallocatechin 305 261 , 221, 219, 179
7 18.4 (+) - Katekin 289 245 , 205
8 21.3 5-caffeoylquinic asam 353 191 (asam quinic; [M - H] - caffeoyl)
9 22.1 kafein 195 b

10 25,5 ( -) - epicatechin 289 245 , 205, 179

11 26,8 ( -) - epigallocatechin-3-gallate 457 331 , 305, 169
12 27.6 4- p- asam coumaroylquinic 337 173 (asam quinic; [M - H] - coumaroyl)
13 38,8 ( -) - epicatechin-3-gallate 441 331 , 289, 169

Sebuah nomor puncak dan waktu retensi merujuk Gambar 1. b [ M + H] +.

3.2. Identifikasi Mayor fenolik dan Purin Alkaloid di Green dan Black Tea.

dalam teh hijau dan hitam diidentifikasi atas dasar waktu retensi mereka, spektrum serapan, dan pola
fragmentasi MS dan, jika mungkin, oleh cochromatography dengan standar otentik. Perlu dicatat bahwa
sejumlah fenolik ditemukan dalam teh tidak tersedia dalam bentuk murni. Namun, dalam
kebanyakan kasus, senyawa dapat diidentifikasi berdasarkan data fragmentasi MS ditambah
dengan penokohan dalam studi sebelumnya yang dipublikasikan

3.3. Perbedaan di Tingkat fenolik dan Purin Alkaloid di Infus Teh Hijau dan Hitam. Selama
HPLC analisis, perkiraan kuantitatif dari fenolat individu dan alkaloid purin dalam infus teh
hijau dan hitam diperoleh dari respon array detektor diode sementara puncak identitas dan
kemurnian ditentukan oleh analisis MSn. Informasi yang diperoleh disajikan pada Tabel 3.

Gambar 3. persentil komposisi kelas yang berbeda dari fenolat dalam teh hijau dan hitam.
nformasi tentang posisi kelompok substituen dan identifikasi positif dari beberapa flavonol
terdeteksi dalam teh akan memerlukan penggunaan NMR sebagaimana dicontohkan oleh
studi elegan Engelhardt dan rekan (5, 8). Namun, ini akan melibatkan tidak hanya
pemurnian sampel luas tetapi juga persyaratan untuk beberapa kali lipat lebih analit dari
jumlah nanogram rendah yang dibutuhkan untuk HPLC-MSn dan, sebagai akibatnya, akan
sangat memakan waktu dan tidak pendekatan yang cocok untuk analisis kuantitatif rutin.
\