Pendahuluan

Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki kemampuan bakteri yang hidup

bebas adat dan / atau eksogen baik budaya individu atau sebagai campuran untuk
dekontaminasi air limbah domestik baku. Tujuh adat dan dua bakteri eksogen
yang dipilih dan diidentifikasi dengan menggunakan karakterisasi tradisional serta
molekul, maka digunakan dalam sistem batch remediasi selama tujuh hari. Hasil
penelitian menunjukkan bahwa air limbah relative sangat tinggi sesuai dengan
semua tingkat parameter yang diuji. Efisiensi pengobatan mencakup waktu dan
spesies bakteri yang ditentukan. Secara umum, campuran bakteri yang diuji
dianggap paling efisien untuk menghilangkan semua parameter yang diuji.
Pseudomonas stutzeri (PS) untuk menghilangkan bahan organik (BOD dan COD),
sedangkan kultur campuran dianggap paling efisien untuk menghapus coliform
fecal (≈100%). Penelitian ini menegaskan kemampuan bakteri yang dipilih untuk
menghilangkan kontaminan sasaran terutama bakteri patogen (coliform) dan
dengan demikian dapat dimanipulasi secara efisien untuk dekontaminasi sistem
tercemar menyediakan kondisi degradasi optimum

Bahan dan metode

1. Sampel
Limbah dikumpulkan dalam botol yang telah disterilkan. Suhu dan pH diukur
di lapangan di tempat pengambilan sampel.
2. Mikroorganisme
Sembilan spesies bakteri, tujuh adat (RZ1-Rz7) diisolasi dari sampel kotoran
dikumpulkan dan dua eksogen (S1 dan PS) yang disediakan yang digunakan
dalam penelitian ini. S1 dan PS sebelumnya diidentifikasi sebagai Bacillus sp.
dan Pseudomonas sp. Keduanya diisolasi dari air limbah, disimpan dalam 4 °
C pada nutrisi agar miring dan ditransfer bulanan.
3. Media kultur
Pengeringan kaldu nutrisi (NB) dan nutrien agar (NA) digunakan sebagai
media umum untuk pencacahan, pemurnian, mentransfer dan pelestarian
bakteri hidup dari sampel limbah.
4. Penentuan bakteri coliform
 Semua tes mikrobiologi dilakukan sesuai dengan teknik standar yang
dijelaskan dalam Metode Standar untuk Pemeriksaan air dan limbah air.
Penentuan kelompok coliform dilakukan dengan menggunakan teknik
membran filter (MF) dari tes hitungan coliform standar. Sebuah volume
spesifik kotoran sampel disaring melalui filter membran polikarbonat (22 m),
diinkubasi pada Chapman TTC medium agar yang mengandung laktosa
selama 24 jam pada 37 ° C. Bakteri coliform yang ditahan pada filter dan
tumbuh sebagai koloni merah dengan metalik (emas) kemilau dihitung
mempertimbangkan faktor pengenceran. Teknik yang sama digunakan untuk
penentuan bakteri coliform fecal setelah inkubasi selama 24 jam pada 45 ° C.
Bakteri coliform fecal terdapat berbagai nuansa biru. Non fecal koloni
koliform abu-abu untuk krim. Semua sampel dianalisis di triplicates.
5. Identifikasi bakteri
Koloni bakteri heterotrofik dimurnikan oleh melesat di NA agar piring,
diinkubasi pada 37 ° C. Dimurnikan dan eksogen isolat diidentifikasi
menggunakan sel dan morfologi koloni, perbedaan Pewarnaan Gram, profil
biokimia menggunakan media dikeringkan di API kit dan karakterisasi
molekuler.
6. Identifikasi molekuler
Karakterisasi molekuler untuk yang paling menjanjikan isolat dan isolat
eksogen dilakukan oleh ekstraksi dan pemurnian total DNA genom dari 5 ml
semalam budaya NB menggunakan DNA kromosom ekstraksi kit (DNA
Genomic Pemurnian Kit, Thermo Scientific). PCR dilakukan dalam cahaya
Mesin pengendara sepeda Eppendorf PCR. Sebuah fragmen 1.300 bp
diperoleh PCR amplifikasi gen 16S rDNA menggunakan primer F-start: 5'
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3 dan R-1387: 5'-CGGGC
GGTGTGTACAAGG-3. Kondisi amplifikasi PCR yang dilakukan oleh
denaturasi langkah awal pada 94 ° C selama 10 menit diikuti dengan 30 siklus
denaturasi pada 94 ° C selama 1 menit, annealing pada 60 ° C selama 1 menit
dan perpanjangan pada 72 ° C selama 1 menit diikuti dengan ekstensi akhir
langkah pada 72 ° C selama 10 menit. Amplikon 16S rDNA dimurnikan
menggunakan PCR pemurnian kit. Masing-masing produk dimurnikan
 dibariskan oleh rantai Metode terminator (model API 3730 xl, bioneer,
Jerman). Itu hasil analisis akan menghasilkan urutan DNA filogenetis
dianalisis menggunakan program pencarian BLAST. Beberapa urutan
keselarasan dan filogeni molekuler dilakukan dengan menggunakan software
5.o MEGA.
7. Perlakuan biologis aliran limbah
Empat isolat yang paling menjanjikan (Rz6, Rz7, S1 dan PS) yang terutama
dipilih sesuai dengan tes skrining visual di mana spesies yang mampu bias
mengurangi kekeruhan (meningkat kejernihan) dari limbah. digunakan untuk
pengobatan kontaminasi limbah domestik. Lima biakan (4 individu dan satu
campuran) masing-masing diaktifkan dalam 100 ml (10%) media NB
(masing-masing 3 replika) dan diinkubasi sampai berat pertumbuhan
diperoleh. Total layak count (TVC) dari semua biakan diperkirakan untuk
menentukan kepadatan awal dari inokulum yang berbeda. Inokulum bakteri
yang individual unggulan ke 900 ml (90%) limbah domestik baku,
sebelumnya ditandai (nol waktu atau bacaan mentah), mencapai final Volume
1 biakan L. Effluent, individu dan dicampur serta kontrol sampel (tidak
diinokulasi satu liter limbah domestik) yang diinkubasi selama 7 hari dengan
kondisi yang disebutkan sebelumnya di mana sampel secara aseptik diambil
pada 24 Interval h. aliran limbah sampel ulang ditandai mana tingkat residu
yang dipilih parameter yang ditentukan pada setiap waktu paparan dan
penghapusan mereka efisiensi dihitung untuk menentukan efektivitas proses
remediasi.
8. Karakterisasi sampel air limbah
Air limbah ditandai sebelum dan setelah dilakukan penanganan. Karakterisasi
air limbah termasuk pH, suhu, kandungan oksigen terlarut (DO), total padatan
terlarut (TDS), total padatan tersuspensi (TSS), kebutuhan oksigen biokimia
(BOD), chemical oxygen demand (COD), lemak, minyak dan lemak (FOG),
semua dari yang ditentukan dengan menggunakan teknik standar yang
dijelaskan dalam Metode standar untuk Pemeriksaan Air dan Air Limbah.
Setelah karakterisasi perlakuan ditentukan tingkat residu dari parameter yang
dipilih pada setiap waktu pemaparan. Efisiensi penghapusan semua parameter
 dihitung untuk menentukan efektivitas proses remediasi menurut persamaan
berikut: Removal Efficiency (RE%) = C0 – RC / C0 × 100

Penjelasan bakteri :

Genus Pseudomonas adalah kelompok yang paling beragam dan ekologis

yang signifikan dari bakteri yang dikenal, dan termasuk Gram negatif batang
aerobik motil yang tersebar luas di seluruh alam dan ditandai dengan fleksibilitas
metabolisme yang tinggi, berkat adanya sistem enzim yang rumit. Kebutuhan
nutrisi Pseudomonas spp. sangat sederhana, dan genus yang ditemukan di habitat
alam seperti tanah, air tawar, lingkungan laut dll, tetapi juga telah diisolasi dari
instrumen klinis, solusi aseptik, kosmetik dan produk medis.

Beberapa anggota dari genus Pseudomonas dianggap penting phyto-

patogen dan agen atau pembawa infeksi manusia, sedangkan jenis lainnya dan
kegiatan spesies pameran bioremediasi dan biokontrol. Pseudomonad baik
disesuaikan dengan kelangsungan hidup dalam pusaran air, bak air panas dan
kolam renang indoor karena suhu air hangat. Perairan ini sangat rentan terhadap
kontaminasi selama periode penggunaan tinggi ketika sulit untuk
mempertahankan tingkat disinfeksi yang memadai.Organisme ini mampu tumbuh
dan multipl di berbagai sumber air termasuk air sungai, air laut, air limbah dan air
mineral kemasan. Pseudomonas aeruginosa merupakan agen penting dari infeksi
oportunistik pada pasien, terutama pada mereka dengan komplikasi pernapasan
dan luka bakar. spp pseudomonas adalah salah satu yang paling sering
diidentifikasi agen yang terkait dengan wabah yang ditularkan melalui air
dermatitis (ruam atau folikulitis), serta konjungtivitis, otitis eksterna dan gejala
lainnya, di dalam air rekreasi di Amerika Serikat (14%).

Bacillus yang Gram-positif, aerobik, berbentuk batang dan endospora

bakteri pembentuk umum ditemukan di alam. Dengan cara spora mereka mereka
tahan terhadap kondisi lingkungan yang merugikan dan dapat menyebabkan
makanan pembusukan. Tali yang merupakan salah satu penyakit yang paling
penting dalam roti, mengakibatkan kerugian ekonomi serta kemungkinan resiko
penyakit bawaan makanan, dan disebabkan oleh tali spesies Bacillus adalah jenis
pembusukan terlihat pada roti terutama di daerah di mana iklim yang hangat dan
lembab. pembusukan ini dianggap penyakit roti. Faktor penyakit umumnya B.
subtilis (sebelumnya disebut sebagai B. mesentericus), namun B. licheniformis, B.
megaterium, B. pumilus dan B. cereus juga dapat menjadi agen penyebab bakteri
ini berasal dari tanah dan dapat mencemari roti melalui bahan baku dan peralatan
bakery digunakan, berkembang biak di bawah kondisi produksi yang tidak pantas
dan mempertahankan kelangsungan hidup mereka dengan bersporulasi selama
baking. Karena kesamaan fenotipik antara alunan spesies Bacillus dan kebutuhan
untuk kondisi ketat dikontrol selama identifikasi, sulit untuk mengkarakterisasi
spesies yang terkait erat dengan metode klasik. Penggunaan API identifikasi strip
telah terbukti memberikan hasil yang lebih handal dan direproduksi dari metode
klasik.

Daftar Pustaka :

Ebtesam El Bestawy, AL-Hejin Ahmed, Amer Ranya and Kashmeri Rzaz

Abdulrazaq, 2014, Decontamination of Domestic Wastewater Using
Suspended Individual and Mixed Bacteria in Batch System, J Bioremed
Biodeg, ISSN:2155-6199 JBRBD, an open access journal Volume 5.
Issue 5. 1000231

Erem Fundagul, Certel Muharrem, Karakas Barcın. 2009. Identification Of

Bacillus Species Isolated From Ropey Breads Both With Classical
Methods And Api Identification Kits. Akadeniz University Ziraat Faculty
Dergisi, 22 (2), 201-210

Ugur1 Aysel, Ceylan Ozgur and Aslım Belma. 2012. Characterization of

Pseudomonas spp. from seawater of the southwest coast of Turkey. J.
BIOL. ENVIRON. SCI. 6(16), 15-23