University of Groningen

Mengatasi gaya & stressor kerentanan

Veenema, Alexandra Hendrika
CATATAN PENTING: Anda disarankan untuk berkonsultasi versi penerbit (publisher PDF) jika
Anda ingin mengutip dari itu. Silakan periksa versi dokumen di bawah ini.
Dokumen Versi Penerbit PDF, juga dikenal sebagai Versi catatan
Tanggal publikasi: 2003
Link ke publikasi di University of Groningen / UMCGdatabase riset
Citationuntuk versi yang dipublikasikan (APA): Veenema, AH (2003). Mengatasi gaya & stressor
kerentanan: Neuroendokrin dan studi neurokimia dengan garis mouse yang dipilih secara genetik
Groningen: sn
Copyright tidak untuk digunakan secara ketat pribadi lain, itu tidak diizinkan untuk men-download atau untuk
meneruskan / mendistribusikan teks atau bagian dari itu tanpa persetujuan dari penulis ( s) dan / atau pemegang hak
cipta (s), kecuali pekerjaan adalah di bawah lisensi konten terbuka (seperti Creative Commons).
Kebijakan mengambil-down Jika Anda percaya bahwa ini pelanggaran dokumen hak cipta silahkan hubungi kami
memberikan rincian, dan kami akan menghapus akses ke pekerjaan segera dan menyelidiki klaim Anda.
Download dari University of Groningen / UMCG basis data penelitian (Pure): http://www.rug.nl/research/portal. Untuk
alasan teknis jumlah penulis yang ditampilkan pada halaman sampul ini terbatas untuk 10 maksimum.
Tanggal Download: 14-10-2017
suntikan intraperitoneal
suntikan intraperitoneal digunakan dalam bab 5 dan bab 6. Dalam bab 5, LAL dan SAL tikus disuntik dengan BrdU,
yang tergabung dalam DNA sel dalam fase S. Dengan cara ini kami dapat mengukur tingkat proliferasi sel di
hippocampus dengan memvisualisasikan sel BrdU-positif dengan imunohistokimia. Dalam bab 6, LAL dan SAL
tikus disuntik dengan dua jenis 5-HT
1A,

agonis reseptor 8-OH-dpat dan S-15.535, untuk mengukur

efek dari aktivasi5-HT
1A
reseptorpada perubahan perilaku berenang dipaksa .
Bab 5
PERBEDAAN BASAL DAN STRES-induced
hippocampus CELL PEMEKARAN DI DEWASA
RENDAH DAN MICE AGRESIF TINGGI
Neuroscience, disampaikan
AH Veenemaa, PJ Lucassenb, MC de Wildea, AJ Roelofsa, B. Buwaldaa, JM Koolhaasa, ER de
Kloetc
aDepartment Fisiologi Hewan, Pusat Perilaku dan Kognitif ilmu saraf, University of Groningen, Belanda bInstitute
untuk Neurobiologi, Swammerdam Institute for Life Sciences, University of Amsterdam, Belanda cDivision
Kedokteran Farmakologi, Leiden / Amsterdam Pusat Penelitian Obat, Leiden University Medical center, Belanda
100 Bab 5

Abstrak
Pria liar rumah-tikus, dipilih untuk latency panjang serangan (LAL) dan serangan singkat latency
(SAL), menampilkan gaya koping jelas berbeda. Sifat genetik ini dalam menghadapi gaya baru-baru ini
ditemukan terkait dengan regulasi diferensial dari hipotalamus-hipofisis-adrenal (HPA) axis di bawah
kondisi basal dan stres, dengan tikus LAL menunjukkan lebih tinggi HPA reaktivitas. Konsentrasi
glukokortikoid tinggi diinduksi oleh stres menekan laju proliferasi sel baru lahir di dentate gyrus tikus
dewasa. Oleh karena itu, hipotesis diuji bahwa perbedaan aktivasi HPA antara LAL dan SAL tikus
tercermin dalam tingkat proliferasi sel. Proliferasi sel di zona subgranular dari dentate gyrus, dinilai oleh
aplikasi sistemik bromodeoxyuridine (BrdU, satu per hari selama tiga hari), hampir dua kali lipat lebih
rendah pada tikus LAL dari pada tikus SAL. Hal ini, bagaimanapun, disejajarkan dengan tingkat
corticosterone plasma secara signifikan lebih tinggi pada tikus LAL. Untuk memperkirakan proliferasi sel
basal pada tikus ini, endogen proliferasi penanda Ki-67 digunakan. Dalam kondisi basal, LAL tikus
memiliki sedikit lebih rendah (85%) jumlah Ki-67 sel positif dalam SGZ dibanding tikus SAL. Paksa
stres berenang selama 5 menit mengakibatkan 24 jam kemudian di penurunan yang signifikan dalam
jumlah sel BrdU-positif di zona subgranular dari LAL tetapi tidak tikus SAL. Kesimpulannya, hasil ini
menunjukkan bahwa dentate tingkat proliferasi sel gyrus mencerminkan sifat genetik dalam menghadapi
gaya dan stres responsif. Granul proliferasi sel di SAL tikus tahan terhadap stres, sementara itu lebih
ditekan di LAL tikus dengan konsentrasi corticosterone beredar tinggi. Ini menurun proliferasi granul
yang ditampilkan oleh tikus LAL mungkin memiliki implikasi untuk struktur dan fungsi hippocampus
selama stres.
Proliferasi sel hippocampal di LAL dan SAL tikus 101

Pengantar
Pria liar rumah-tikus dipilih untuk diserang panjang latency (LAL) dan serangan singkat latency
(SAL) menunjukkan perbedaan yang mendalam dalam menghadapi gaya saat terkena tantangan
lingkungan. LAL tikus menampilkan 'pasif' mengatasi gaya sedangkan SAL tikus menunjukkan 'aktif'
mengatasi gaya (Benus et al, 1989, 1991a, b;.. Sluyter et al, 1996).
Perbedaan genetik ini dalam menghadapi gaya baru-baru ini ditemukan terkait dengan regulasi
diferensial dari hipotalamus-hipofisis-adrenal (HPA) sistem di bawah kondisi basal dan stres akut
(Veenema et al., 2003a). LAL tikus menunjukkan kurang variasi siang-malam sekresi corticosterone, dan
sensitivitas adrenocortical lebih tinggi untuk ACTH daripada tikus SAL. Ketika mengalami dipaksa
berenang selama 5 menit, LAL tikus menunjukkan peningkatan yang lebih tinggi dan berkepanjangan di
corticosterone plasma dibandingkan dengan SAL tikus (Veenema et al., 2003a).
Ditinggikan tingkat sirkulasi glukokortikoid dan pengalaman stres telah terbukti menghambat
proliferasi berlangsung sel granul dalam dentate gyrus hippocampus dari tikus dewasa (Gould et al, 1997,
1998;. Tanapat et al, 1998.). Dalam penelitian ini, kita hipotesis bahwa diferensial HPA (re) aktivitas di
LAL dibandingkan SAL tikus tercermin dalam perbedaan proliferasi sel hippocampal.
Pada percobaan pertama, proliferasi sel progenitor ditentukan di zona subgranular (SGZ) dari
hippocampal dentate gyrus (DG) di LAL dan SAL tikus, dengan menggunakan aplikasi sistemik dari 5-
bromo-2-deoxyuridine (BrdU) sekali per hari selama tiga hari berturut-turut.
Dalam percobaan kedua, immunocytochemistry untuk endogen proliferasi penanda Ki-67 digunakan
untuk mengukur tingkat proliferasi di SGZ dari LAL naif dan tikus SAL. Ki-67 adalah terkenal mitosis
dan proliferasi penanda hadir di semua fase siklus sel, kecuali G0 (Gerdes et al, 1984;. Endl dan Gerdes,
2000). Juga, Ki-67 nomor sangat sebanding dengan yang diperoleh dengan BrdU ketika ditentukan
setelah kali hidup singkat (Kee et al., 2002).
Dalam percobaan ketiga, tikus disuntik dengan BrdU dan segera dikenakan renang dipaksa selama 5
menit untuk mempelajari pengaruh stres akut pada proliferasi sel. Untuk menyelidiki apakah berenang ini
stressor dipaksa diinduksi perbedaan baris dalam aktivasi HPA, konsentrasi corticosterone plasma juga
diukur di LAL dan SAL tikus dipenggal 15 menit setelah menjadi sasaran berenang paksa.
102 Bab 5

Metode
Tikus
Dalam studi ini, laki-laki LAL dan SAL tikus digunakan pada usia 18 minggu (+/- 2 minggu). Tikus-tikus ini,
yang dipilih secara genetik untuk serangan latency, berasal dari sebuah koloni tikus rumah-liar (Mus musculus
domesticus) dipertahankan di Universitas Groningen, Belanda, sejak 1971. LAL laki-laki datang dari generasi 38-
40th seleksi dan SAL laki-laki datang dari generasi 66-68th. Tikus-tikus tersebut bertempat di kandang perspex (17
x 11 x 13 cm) di sebuah ruangan dengan cahaya / siklus gelap 00:12 (lampu pada 0030-1230). Standar laboratorium
chow dan air tersedia ad libitum. Tikus-tikus tersebut disapih pada 3-4 minggu usia, dan dipasangkan pria-wanita
pada usia 6-8 minggu. Pada usia 14 minggu tikus jantan menjadi sasaran tes serangan latency (Van Oortmerssen dan
Bakker, 1981). Secara singkat, laki-laki dihadapkan dengan lawan laki-laki non-agresif standar dalam kandang
netral pada tiga hari berturut-turut. Skor serangan latency adalah mean ini skor sehari-hari. Baik LAL atau SAL
tikus mengalami kekalahan sosial. Hanya non-menyerang LAL tikus dan tikus SAL dengan latency serangan kurang
dari 50 s digunakan untuk percobaan. Semua eksperimen yang sesuai dengan peraturan Panitia Penggunaan Hewan
Eksperimental dari University of Groningen (DEC nr. 2326).
Percobaan 1: proliferasi sel di LAL dan SAL tikus menggunakan BrdU
BrdU (5-bromo-2-deoxyuridine, Sigma, St Louis, Missouri) adalah analog timidin yang akan dimasukkan
dalam DNA sel dalam fase S. Dengan demikian, itu adalah penanda sel berkembang biak dan keturunan mereka
(Nowakowski et al., 1989). BrdU dilarutkan dalam steril 0,9% NaCL. LAL dan SAL tikus (n = 9 per baris)
menerima suntikan ip dari 10 mg / ml BrdU (dosis harian: 50mg / kg berat badan) sekali per hari selama tiga hari
berturut-turut. Dua puluh empat jam setelah tikus injeksi terakhir yang perfusi seperti yang dijelaskan di bawah ini.
Percobaan 2: proliferasi sel di LAL dan SAL tikus menggunakan Ki-67
LAL dan tikus SAL (n = 8 per baris) yang tersisa terganggu di kandang rumah mereka untuk setidaknya satu
minggu. Setelah itu, tikus perfusi dan jumlah sel berkembang biak ditentukan dengan Ki-67 immunocytochemistry
seperti yang dijelaskan di bawah ini. Ki-67 adalah protein nuklir dinyatakan dalam semua fase siklus sel kecuali G0
dan digunakan sebagai penanda endogen untuk proliferasi dewasa, yang independen dari perbedaan izin hati atau
darah otak-penghalang bagian, yang dapat mempengaruhi penggabungan BrdU di otak ( Scholtzen dan Gerdes,
2000).
Percobaan 3: Pengaruh berenang dipaksakan pada proliferasi sel di LAL dan SAL tikus
Semua tikus menerima suntikan ip tunggal 20mg / ml BrdU (dosis: 100mg / kg berat badan, dilarutkan dalam
steril 0,9% NaCl). Kontrol LAL dan SAL tikus (n = 8 per baris) kemudian dibiarkan tak terganggu, sedangkan yang
lain 8 SAL tikus dan 10 tikus LAL adalah, segera setelah injeksi BrdU, dipaksa untuk berenang di sebuah plexiglass
silinder sempit (diameter 10 cm) diisi dengan air dari 25oC selama 5 menit sebelum mereka kembali ke kandang
rumah mereka. Dua puluh empat jam kemudian, tikus perfusi seperti yang dijelaskan di bawah ini. Untuk lebih
menentukan peran berenang memaksa stres akibat peningkatan corticosterone plasma pada proliferasi sel dalam
desain eksperimental ini, LAL dan SAL tikus menerima suntikan ip tunggal dengan steril 0,9% NaCl setelah mereka
baik kiri terganggu di kandang mereka (kontrol tikus, n = 7 per baris) atau segera dikenakan renang dipaksa selama
5 menit (tikus stres, n = 8
proliferasi sel hippocampal di LAL dan SAL tikus 103
per baris). Untuk pengukuran corticosterone plasma, darah batang diperoleh dengan pemenggalan kepala, 15 menit
setelah berenang paksa.
Pengolahan jaringan
Untuk semua percobaan, tikus menerima overdosis CO
2

anestesi dan perfusi transcardially dengan 4%

paraformaldehyde dalam buffer fosfat dingin (pH 7,4). Darah diperoleh dari hati hanya sebelum perfusi dan
dikumpulkan dalam tabung dingin yang mengandung EDTA untuk penentuan tingkat kortikosteron. Otak yang
pasca-tetap semalam dan kemudian ditransfer ke 30% sukrosa dan disimpan pada suhu 4oC. Setelah tambahan 24-
48 jam, bagian koronal dari 40 pM ketebalan dipotong pada mikrotom beku. Bagian disimpan pada suhu -20oC di
krioprotektan yang mengandung 25% etilena glikol, 25% gliserin, dan penyangga 0,5 M fosfat.
Immunocytochemistry
BrdU immunocytochemistry dilakukan menurut Kuhn et al. (1997). Secara singkat, mengambang bebas bagian
diobati dengan 0,6% H
2
O
2

di TBS (pH 7,6) selama 30 menit, setelah inkubasi pada 50%

formamida / 2xSSC (0,3 M NaCl dan 0,03 M natrium sitrat) selama 2 jam pada 65oC, pengasaman dengan 2M HCl
selama 30 menit pada suhu 37 ° C dan inkubasi dalam 0,1 M asam borat pH 8,5 selama 10 menit pada suhu kamar.
Bagian kemudian diinkubasi semalam pada suhu 4oC dengan mouse anti-BrdU (Novocastra, New Castle, UK 1:
200) di TBS-plus (TBS / 0,1% Triton X 100/3% serum kuda normal). Setelah mencuci dengan TBS-plus selama 30
menit, bagian diinkubasi dengan kuda terbiotinilasi anti-tikus (1: 200) selama 45 menit, diikuti dengan streptavidin-
HRP dan DAB (0,25 mg / ml DAB, 0,01% H2O2) metode visualisasi.
Ki-67 antigen adalah hadiah yang kompleks 345-395 kDa non-histone protein hanya dalam mitosis dan sel
berkembang biak dan proliferasi penanda diterima dengan baik dalam biologi tumor. Jumlah sel Ki-67-positif sangat
sebanding dengan nomor BrdU setelah kali hidup singkat (Kee et al., 2002). Ki-67 immunocytochemistry dilakukan
seperti yang dijelaskan oleh Heine et al. (2003a). Secara singkat, dipasang bagian dibilas dengan 0,1 M Tris buffer
saline pH 7,6 (TBS). Bagian ditempatkan di 2 botol plastik yang diisi dengan penyangga sitrat (0,01 M, pH 6,0) dan
pra-perawatan dalam oven microwave domestik (Samsung M 6235, 800 W). Pengobatan microwave mengambil 15
menit secara total, mulai dari 800 W selama 5 menit sampai mendidih tercapai, setelah pengaturan diturunkan
menjadi 260 W. Setelah 30 menit pendinginan pada suhu kamar, a-spesifik mengikat diblokir dengan menginkubasi
di TBS + susu bubuk 2% (Campina Melkunie, Eindhoven, Belanda) selama 30 menit. Bagian kemudian diinkubasi
semalam pada suhu 4oC dengan poliklonal anti-Ki-67 (Novocastra, New Castle, UK, 1: 2000) di SUPERMIX (TBS
/ 0,25% gelatin / 0,5% Triton X-100). Berikut membilas di TBS, bagian diinkubasi dengan terbiotinilasi domba anti-
kelinci (Amersham Life Sciences, Den Bosch, Belanda, 1: 200) di SUPERMIX selama 1,5 jam, setelah itu sinyal
diamplifikasi dengan ABC Elite (Vector, 1: 800) di TBS / BSA 1% selama 2 jam. Sinyal ABC selanjutnya diperkuat
dengan tyramide terbiotinilasi (1: 500, diproduksi dan ramah disediakan oleh Dr I. Huitinga, Belanda Institute untuk
penelitian otak, Amsterdam) dan 0,01% H
2
O
2
 selama 30 menit diikuti oleh
inkubasi 1,5 jam dengan ABC (1: 1000). Pengembangan warna dilakukan dengan diaminobenzidin (0,50 mg / ml
DAB, Sigma, 0,01% H
2
O
2)
selama 10 menit.
Kuantifikasi Stereological proliferasi
Ki-67 dan sel BrdU-label dihitung menggunakan mikroskop cahaya (400 ×) oleh seorang peneliti buta untuk
kode studi. Dalam percobaan 1 dan 3, jumlah total BrdU-
104 Bab 5
sel positif di SGZ yang (didefinisikan sebagai zona dua sel tubuh-lebar di sepanjang perbatasan lapisan sel granul
dengan hilus) ditentukan secara sepihak (exp 1) atau bilateral (exp 3) menggunakan pendekatan stereological
seluruh rostro-to-ekor sejauh mana seluruh DG di koronal bagian 40-m, 200 m terpisah. Sebagai kontrol, dalam
percobaan 1, luas permukaan lapisan sel granul diperkirakan pada bagian yang sama di mana jumlah sel BrdU telah
dinilai dengan menggunakan sistem analisis gambar otomatis (Quantimet 500, Leica, Cambridge). Daerah
permukaan bagian otak itu dijumlahkan per mouse dan dinyatakan sebagai mm2. Dalam percobaan 2, nomor profil
nuklir Ki-67-positif mencetak gol di SGZ secara sepihak di koronal bagian 40-m, 400 m terpisah.
Radioimmunoassay untukkortikosteron
sampel darahdisentrifugasi pada 2600g selama 10 menit pada suhu 4oC. Sampel plasma disimpan pada suhu -
20oC sampai diuji. Kortikosteron Plasma ditentukan dalam duplo menggunakan kit radioimmunoassay tersedia
secara komersial (mouse kortikosteron RIA Kit, ICN Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA). Batas deteksi pengujian
adalah 3 ng kortikosteron / ml dengan varians intra-assay dari 4,4% dan antar-assay varian 6,5%.
analisis statistik
T-testSebuah berpasangan Mahasiswa digunakan untuk menentukan perbedaan garis dalam sel BrdU-label, luas
permukaan dan konsentrasi corticosterone dalam percobaan 1, dan Ki-67 sel positif dalam percobaan 2. univariat
analisis varians (ANOVA) digunakan untuk menentukan line dan pengobatan efek berenang dipaksakan pada sel
BrdU-label dan konsentrasi corticosterone dalam percobaan 3. Ketika makna terungkap dalam percobaan 3,
perbandingan berpasangan yang sesuai (uji LSD) dilakukan berdasarkan cara marginal diperkirakan. Untuk semua
tes paket software SPSS (versi 11) digunakan. Data disajikan sebagai mean ± SEM Signifikansi diambil pada P
<0,05.

Hasil
Percobaan 1: proliferasi sel di LAL dan SAL tikus menggunakan BrdU
Dua puluh empat jam setelah tiga suntikan BrdU harian, LAL tikus menunjukkan hampir dua kali
lipat jumlah yang lebih rendah dari sel BrdU-positif di SGZ dibandingkan dengan SAL tikus (P <0,001 ,
Gambar. 1A). Tidak ada perbedaan garis ditemukan untuk luas permukaan lapisan sel granul (LAL: 976 ±
35 mm2; SAL 1013 ± 16 mm2). Konsentrasi kortikosteron Plasma, diperoleh 24 jam setelah suntikan
terakhir, secara signifikan lebih tinggi pada tikus LAL daripada di SAL tikus (P <0,05, Gambar. 1B).
Sebuah contoh khas dari label BrdU dalam DG hippocampus dari LAL dan SAL tikus digambarkan pada
Gambar.
2.BrdU-positif sel B kortikosteron
300 sllecforebmu N
200
100

**
0
LAL SAL

*
Gambar. 1. Jumlah BrdU-positif sel-sel di zona subgranular dari dentate gyrus (A) dan konsentrasi corticosterone
plasma (B) dari LAL dan SAL tikus, 24 jam setelah injeksi ip ketiga dengan BrdU (satu suntikan pada tiga hari
berturut-turut). * P <0,05, ** P <0,001, tes t.

B
Gambar. Pelabelan 2. BrdU di bagian jaringan dari dentate gyrus hippocampus dari tikus LAL (A) dan mouse SAL
(B). Inti BrdU-positif secara jelas hadir dalam zona subgranular (panah). GCL, lapisan sel granul dari dentate gyrus.
H, daerah hilus dari dentate gyrus.
Percobaan 2: Proliferasi sel di LAL dan SAL tikus menggunakan Ki-67
Ki-67 immunocytochemistry mengungkapkan sel-sel dengan pola pewarnaan nuklir jelas, terutama di
SGZ dan DG hilus (Gambar 3A.) Tetapi juga di subregional hippocampus lain seperti radiatum CA1
stratum , umumnya pada frekuensi yang lebih rendah (Gambar. 3A). Pada perbesaran yang lebih tinggi,
cluster dan doublet sel yang jelas adalah

A
H
GCL
proliferasi selHippocampal di LAL dan SAL tikus 105
15
10
5
0
GCL
H
106 Bab 5
diamati, jelas mewakili sel-sel membagi (Gambar. 3B, C). Kuantifikasi mengungkapkan jumlah
signifikan lebih rendah dari sel-sel di zona subgranular pada tikus LAL dibandingkan dengan SAL tikus
(P <0,05, Gambar 3D). Kuantifikasi daerah hipokampus lainnya mengungkapkan bahwa LAL tikus
memiliki sel Ki-67-positif secara signifikan lebih banyak di radiatum CA1 stratum daripada tikus SAL (P
<0,05, Tabel 1).

Sebuah
DCB
Gambar. 3. Ki-67 label di bagian jaringan dari hippocampus mengungkapkan dengan jelas sel-sel terutama di hilus
dentate gyrus (H) dan zona subgranular (SGZ) (panah) (A). Juga di dinding subventricular, sel berkembang biak
yang berlimpah hadir (panah). Hanya kadang-kadang yang positif sel ditemukan di cornu ammonis (CA) strata
radiatum lapisan. Rincian cluster Ki-67-positif (B) atau doublet (C) jelas merupakan membagi sel. Jumlah Ki-67 sel
secara signifikan lebih rendah pada tikus LAL daripada di SAL tikus (D). * P <0,05, tes t.
Sel Ki-67-positif
100 sllecforebmu N
80
60
40
*
20
0
LAL SAL
Hippocampal proliferasi sel di LAL dan SAL tikus 107
Tabel 1. Jumlah sel Ki-67-positif di beberapa daerah di hippocampus dari LAL naif dan tikus SAL. Sel Ki-67-positif
dihitung dalam sel lapisan molekul dentate gyrus (lapisan sel Mol), di dentate gyrus (termasuk zona subgranular,
lapisan sel granul, hilus dan lapisan sel molekul), di CA1 strata radiatum (Radiatum) dan di hippocampus (termasuk
dentate gyrus, lapisan sel piramidal CA1-2, CA1 strata radiatum.
lapisan sel Mol dentate gyrus radiatum hippocampus
LAL (n = 8) 27,5 ± 3,3 88,5 ± 2,9 49,5 ± 4,7 * 138,4 ± 6,0
SAL (n = 8) 24,6 ± 2,4 95,4 ± 5,8 36,6 ± 3,3 133,1 ± 6,8
* P <0,05 vs SAL, tes t

percobaan 3: pengaruh berenang dipaksakan pada proliferasi sel di LAL dan SAL tikus
univariat ANOVA mengungkapkan efek garis yang signifikan (F
1,30

= 7,834, P <0,01) dan garis interaksi *

pengobatan (F
1,30

= 5,130, P <0,05) untuk sel BrdU-positif di zona subgranular dari

dentate gyrus. tikus LAL mengalami stres berenang dipaksa menunjukkan penurunan yang signifikan
dalam sel BrdU-positif dibandingkan dengan kontrol LAL (P <0,05) dan dibandingkan dengan tikus SAL
sasaran berenang memaksa (P <0,005, Gambar. 4A). Konsentrasi kortikosteron Plasma 24 jam pasca-
stres, mengungkapkan efek pengobatan yang signifikan (F

1,
29

= 4,442, P <0,05).
Sebuah BrdU-positif sel
B kortikosteron
C kortikosteron
300
** *
30
24 jam setelah FST
60
15 menit setelah FST
*
0,053
200
20
* 0,064
0
0
0
LAL kontrol LAL menekankan
Gambar. 4. Pengaruh stres berenang paksa di LAL dan SAL tikus pada jumlah sel BrdU-positif di zona subgranular
dari dentate gyrus (A) dan konsentrasi corticosterone plasma (B) 24 jam pasca-stres. Pengaruh renang dipaksa
mengikuti suntikan ip tunggal pada konsentrasi corticosterone plasma di LAL dan SAL tikus 15 menit setelah
dipaksa berenang (C). * P <0,05; ** P <0,005, # P = 0,053, perbandingan berpasangan (uji LSD) berikut univariat
ANOVA.
40
100
10
20
SAL stres kontrol SAL
108 Bab 5
konsentrasi kortikosteron lebih tinggi pada tikus LAL sasaran renang dipaksa dibandingkan dengan
kontrol LAL (P <0,05), namun gagal mencapai perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan tikus
SAL sasaran dipaksa berenang (P = 0,064, Gambar. 2B). Sebuah efek pengobatan juga ditemukan untuk
corticosterone plasma bila diukur 15 menit setelah dipaksa berenang (F

1,
26

= 10,811, P <0,005). Di sini, konsentrasi corticosterone secara

signifikan lebih tinggi pada tikus LAL mengalami dipaksa stres berenang dibandingkan dengan kontrol
LAL tikus (P <0,05, Gambar. 2C). Tikus SAL mengalami stres berenang dipaksa menunjukkan kadar
juga lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol SAL tikus, namun perbedaan ini hanya gagal mencapai
signifikansi (P = 0.053, Gambar. 2C).
Diskusi
Penelitian ini menunjukkan bahwa sifat genetik dalam gaya mengatasi dikaitkan dengan perbedaan
dalam tingkat proliferasi sel hippocampal. LAL tikus menunjukkan sel-sel kurang berkembang biak di
SGZ dari DG dari SAL tikus, seperti diungkapkan baik oleh BrdU dan Ki-67 immunolabelling. Dalam
menanggapi stres berenang paksa, sejumlah signifikan mengurangi sel granul baru diamati pada LAL
tetapi tidak tikus SAL. Proliferasi sel yang lebih rendah ini ditemukan harus disertai dengan tingkat
kortikosteron pasca-stres yang lebih tinggi pada tikus LAL.
Dalam rangka untuk mempelajari perbedaan baris dalam proliferasi sel hippocampal, LAL dan SAL
tikus menerima tiga suntikan setiap hari dengan BrdU. Hal ini mengakibatkan jumlah hampir dua kali
lipat lebih rendah dari berkembang biak sel dalam SGZ dari DG pada tikus LAL dibandingkan dengan
tikus SAL. Namun, LAL tikus menunjukkan konsentrasi corticosterone signifikan lebih tinggi 24 jam
setelah suntikan terakhir dari tikus SAL. Perbedaan respon ini mungkin memiliki terkena tingkat
proliferasi sel. Oleh karena itu, percobaan selanjutnya dilakukan di LAL naif dan tikus SAL
menggunakan penanda endogen Ki-67, untuk menentukan apakah perbedaan ini dalam proliferasi sel
adalah sifat atau karakteristik negara. Jumlah total Ki-67 sel positif adalah sedikit lebih rendah (85%) di
SGZ dari DG di LAL dibandingkan dengan tikus SAL. Dalam radiatum CA1 strata yang lebih Ki-67 sel
yang ditemukan pada tikus LAL dari pada tikus SAL, tetapi sel-sel ini kemungkinan besar mewakili
berkembang biak glia. Bersama-sama, data ini menunjukkan bahwa perbedaan dalam basal proliferasi sel
hippocampal antara LAL dan SAL tikus semakin diperkuat setelah suntikan berulang.
Paparan hewan untuk stressor berulang dapat menyebabkan habituasi dan penindasan berikutnya dari
respon stres (De Boer et al, 1990;. Pitman et al, 1990.). Sebaliknya, konsentrasi kortikosteron yang lebih
tinggi di LAL tikus diamati 24 jam setelah ketiga tetapi tidak setelah injeksi tunggal menunjukkan bahwa
bukan peningkatan sensitivitas terhadap stres injeksi telah dikembangkan. Perbedaan ini baris dalam
pembiasaan stres, bagaimanapun, konsisten dengan temuan sebelumnya yang Lal tikus menunjukkan
kerentanan tahan lama untuk stressor kontak sensorik, sedangkan SAL tikus menunjukkan pembiasaan
untuk stressor ini (Veenema et al., 2003b, c). Hal ini konsisten dengan penelitian lain, di mana dua strain
tikus inbrida menunjukkan perbedaan dalammereka
proliferasi sel hippocampaldi LAL dan SAL tikus 109
kemampuan untuk beradaptasi dengan stres injeksi. Dalam C57BL / 6J tikus, stres injeksi berulang
menyebabkan habituasi dalam respon dari Fos immunoreactivity, yang efeknya tidak hadir dalam DBA /
2J tikus (Ryabinin et al., 1999). Studi lain pada tikus menunjukkan bahwa perbedaan ketegangan di
responsivitas dari sumbu HPA terhadap stres akut disejajarkan dengan perbedaan pembiasaan stres
berulang (Dhabhar et al., 1997). Studi-studi ini, termasuk satu ini, menunjukkan bahwa perbedaan dalam
pembiasaan stres antara garis tikus tertentu dan strain mungkin memiliki efek yang tidak diinginkan,
khususnya ketika menggunakan suntikan.
Paksa stres berenang selama 5 menit diinduksi penurunan yang signifikan dalam proliferasi sel
hippocampal di LAL tikus ketika dinilai 24 jam kemudian. Inhibisi stress akut proliferasi sel telah
ditemukan oleh orang lain juga (Gould et al, 1997, 1998, Tanapat et al, 1998;... Heine et al, 2003b) dan
kemungkinan dimediasi oleh tingkat glukokortikoid tinggi (Gould et al, 1992;.. Tanapat et al, 2001;
Ambrogini et al, 2002).. Memang, dalam penelitian ini, berenang penindasan stres akibat proliferasi sel
dikaitkan dengan konsentrasi corticosterone plasma lebih tinggi 15 menit dan 24 jam pasca-stres pada
tikus LAL dibandingkan dengan kontrol LAL tikus. Hal ini menunjukkan lebih tinggi dan
berkepanjangan berenang stres akibat aktivasi HPA pada tikus LAL yang mungkin mendasari down-
regulasi proliferasi sel dalam menanggapi berenang paksa.
Berbeda dengan LAL, SAL tikus gagal menunjukkan penurunan stres akibat berenang di proliferasi
sel. Namun, konsentrasi corticosterone antara LAL dan SAL tikus tidak berbeda tak lama setelah mereka
mengalami berenang paksa. Hal ini menunjukkan sensitivitas penurunan sel-sel prekursor hippocampal
berkembang biak, atau struktur mereka berada di, stres dan corticosterone pada tikus SAL. Meskipun ada
perbedaan garis ditemukan untuk GR atau MR mRNA ekspresi dalam hippocampus (Veenema et al.,
2003a, b), itu akan menarik untuk mempelajari kemungkinan perbedaan khususnya di tingkat protein GR
atau mengikat pada tikus tersebut. Efek langsung dari corticosterone pada tingkat proliferasi sel,
bagaimanapun, agak tidak mungkin karena tidak adanya MR dan GR di sebagian progenitor cell granul
(Cameron et al., 1993). Atau, kortikosteron dapat mempengaruhi proliferasi sel dengan bertindak melalui
faktor-faktor lain, seperti NMDA reseptor-mediated jalur rangsang (Cameron et al., 1998). Perbedaan
antara LAL dan SAL tikus, misalnya, reseptor NMDA mengikat mungkin bisa memperjelas sensitivitas
diferensial berkembang biak sel untuk kortikosteron. Namun, mengikat reseptor NMDA ditemukan untuk
menjadi serupa dengan LAL naif dan SAL tikus (Veenema, tidak dipublikasikan). Atau, diusulkan bahwa
efek negatif dari stres dan kortikosteroid pada proliferasi sel dapat dicegah dengan aktivasi simultan dari
regulator positif neurogenesis dewasa. Hal ini dikenal, misalnya, bahwa aktivasi sistem 5-HT melalui5-
HT
reseptor 1Adikaitkan
dengan up-regulasi proliferasi sel hippocampal dewasa (Brezun dan Daszuta, 1999; Gould, 1999;. Jacobs
et al, 2000 ; Jacobs, 2002; Radley dan Jacobs, 2002). Selanjutnya, proliferasi sel hippocampal dewasa
meningkat setelah pemberian fenfluramine, yang menyebabkan pelepasan 5- HT, dan setelah 8-OH-dpat,
yang merangsang5-HT
1A

reseptor(Jacobs et al.,
110 Bab 5
1998). Selain itu, 5-HT
1A,

antagonis reseptor WAY-100.635, bisa memblokir peningkatan

fenfluramine-induced di neurogenesis (Jacobs et al., 1998). WAY-100.635 serta dua 5-HTlainnya
1A

reseptorantagonis(NAN-190, p-MPPI) bisa juga mengurangi basal tingkat

proliferasi sel (Radley dan Jacobs, 2002). Dalam hal ini, ada hal yang menarik yang SAL tikus memiliki
hippocampus lebih tinggi 5-HT
1A

ekspresi reseptordan kapasitas pengikatan

(Korte et al., 1996, Veenema et al., 2003b) serta tanggap yang lebih tinggi hipokampus 5-HT (Van Riel et
al., 2002) daripada tikus LAL. Meskipun penelitian lebih lanjut diperlukan, peran potensial dari
hipokampus 5-HT
1A reseptor dalam
mencegah penurunan stres-diinduksi dalam proliferasi sel di SAL tikus diasumsikan.
Kesimpulannya, proliferasi sel dalam dentate gyrus dewasa LAL tikus ditindas oleh rangsangan stres
mungkin melalui tindakan dimediasi oleh kortikosteron, sementara proliferasi sel di SAL adalah tahan
terhadap stres akibat down-regulasi. Kerentanan diferensial ini dalam proliferasi sel menunjukkan bahwa
plastisitas hippocampus mencerminkan perbedaan garis dalam menghadapi gaya selama stres.
Ucapan Terima Kasih Penulis mengucapkan terima kasih Gerardus Zuidema dan Auke Meinema untuk
perawatan hewan yang sangat baik, dan Vivi Heine, Suharti Maslam (IN, SILS, Amsterdam) dan Jan
Bruggink (AP, BCN, Groningen) untuk bantuan teknis.
Proliferasi sel hippocampal di LAL dan SAL tikus 111

Referensi
Benus RF, Bohus B, Koolhaas JM, Van Oortmerssen GA. Strategi perilaku mencit jantan agresif dan non-agresif
dalam menghindari kejutan aktif. Proses perilaku tahun 1989, 20: 1-12. Benus RF, Bohus B, Koolhaas JM, Van
Oortmerssen GA. Perbedaan perilaku antara tikus yang agresif dan non-agresif yang dipilih artifisial: Menanggapi
apomorphine. Behav Brain Res 1991a, 43: 203-208. Benus RF, Bohus B, Koolhaas JM, Van Oortmerssen GA.
Variasi diwariskan untuk agresi sebagai cerminan dari strategi coping individu. Experientia 1991b, 47: 1008- 1019.
Brezun JM, Daszuta A. Penipisan serotonin menurun neurogenesis di dentate gyrus
dan zona subventricular dari tikus dewasa. Neurosci 1999, 89: 999-1002. Cameron HA, Woolley CS, Gould E.
adrenal reseptor steroid immunoreactivity dalam sel
lahir di dentate gyrus tikus dewasa. Otak Res 1993, 611: 342-346. Cameron HA, Tanapat P, Gould E. adrenal
steroid dan aktivasi reseptor N-methyl-D-aspartat mengatur neurogenesis di dentate gyrus dari tikus dewasa melalui
jalur umum. Neuroscience 1998, 82: 349-354. De Boer SF, Koopman SJ, Slangen JL, Van der Gugten J. Plasma
katekolamin, corticosterone dan glukosa tanggapan terhadap stres berulang pada tikus: Pengaruh panjang selang
interstressor. Physiol Behav 1990, 47: 1117-1124. Dhabhar FS, McEwen BS, Spencer RL. Adaptasi yang lama atau
berulang-ulang perbandingan stres antara strain tikus menunjukkan perbedaan intrinsik reaktivitas stres akut.
Neuroendocrinology 1997, 65: 360-368. Endl E, Gerdes J. posttranslational modifikasi dari KI-67 protein bertepatan
dengan dua
pos pemeriksaan utama selama mitosis. J Sel Physiol 2000 182: 371-380. Gerdes J, Lemke H, Baisch H,
Wacker HH, Schwab U, Stein H. analisis siklus sel dari antigen nuklir manusia proliferasi sel-terkait didefinisikan
oleh antibodi monoklonal Ki-67. J Immunol 1984, 133: 1710-1715. Gould E, Cameron HA, Daniels DC, Wooley
CS, McEwen BS. Hormon adrenalin menekan
pembelahan sel pada tikus dewasa dentate gyrus. J Neurosci 1992, 12: 3642-3650. Gould E, McEwen BS,
Tanapat P, Galea LAM, Fuchs E. Neurogenesis dalam dentate gyrus dari tikus pohon dewasa diatur oleh stres
psikososial dan aktivasi reseptor NMDA. J Neurosci 1997, 17: 2492-2498. Gould E, Tanapat P, McEwen BS,
Flugge G, Fuchs E. Proliferasi prekursor sel granul dalam dentate gyrus monyet dewasa berkurang oleh stres. Proc
Natl Acad Sci USA 1998, 95: 3168-3171. Gould E. Serotonin dan neurogenesis hippocampal.
Neuropsychopharmacology 1999,
21: 46s-51S. Heine VM, Maslam S, Joel M, Lucassen PJ. Penurunan menonjol proliferasi sel baru lahir,
diferensiasi dan apoptosis pada dentate gyrus penuaan, dalam tidak adanya aktivasi aksis hipotalamus-hipofisis-
adrenal yang berkaitan dengan usia. Neurobiol Aging 2003, disampaikan. Jacobs B, Tanapat P, Reeves A, Gould E.
Serotonin stimulates the production of new hippocampal granule neurons via the 5-HT1A receptor in the adult rat.
1992, Soc Neurosci Abstr 24.
112 Chapter 5
Jacobs BL, Van Praag H, Gage FH. Adult brain neurogenesis and psychiatry: a novel
theory of depression. Mol Psychiatry 2000, 5:262-269. Jacobs BL. Adult neurogenesis and depression. Brain
Behav Immun 2002, 16:602-609. Kee N, Sivalingam S, Boonstra R, Wojtowicz JM. The utility of Ki-67 and BrdU
as proliferative markers of adult neurogenesis. J Neurosci Methods 2002, 115:97-105. Korte SM, Meijer OC, De
Kloet ER, Buwalda B, Keijser J, Sluyter F, Van Oortmerssen G, Bohus B. Enhanced 5-HT1a receptor expression in
forebrain regions of aggressive house mice. Brain Res 1996, 736:338-343. Kuhn HG, Winkler J, Kempermann G,
Thal LJ, Gage FH. Epidermal growth factor and fibroblast growth factor-2 have different effects on neural
progenitors in the adult rat brain. J Neurosci 1997, 17:5820-5829. Nowakowski RS, Lewin SB, Miller MW.
Bromodeoxyuridine immunohistochemical determination of the lengths of the cell cycle and the DNA-synthetic
phase for an anatomically defined population. J Neurocytol 1989, 18:311-318 Pitman DL, Ottenweller JE, Natelson
BH. Effect of stressor intensity on habituation and sensitization of glucocorticoid responses in rats. Behav Neurosci
1990, 194:28-36. Porsolt RD, Bertin A, Jalfre M. Behavioral despair in mice: a primary screening test for
antidepressants. Arch Intern Pharmacodyn Therap 1977, 229:327-336. Radley JJ, Jacobs BL. 5-HT(1A)
receptor agonist administration decreases cell
proliferation in the dentate gyrus. Brain Res 2002, 955:264-267. Ryabinin AE, Wang YM, Finn DA. Different
levels of Fos immunoreactivity after repeated handling and injection stress in two inbred strains of mice. Pharmacol
Biochem Behav 1999, 63:143-51. Scholtzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J
Cell Physiol
2000, 182:311-322. Sluyter F, Korte SM, Bohus B, Van Oortmerssen GA. Behavioral stress response of
genetically selected aggressive and nonaggressive wild house mice in the shock- probe/defensive burying test.
Pharmacol Biochem Behav 1996, 54:113-116. Tanapat P, Galea LA, Gould E. Stress inhibits the proliferation of
granule cell precursors in
the developing dentate gyrus. Int J Dev Neurosci 1998, 16:235-239. Tanapat P, Hastings NB, Rydel TA, Galea
LA, Gould E. Exposure to fox odor inhibits cell proliferation in the hippocampus of adult rats via an adrenal
hormone-dependent mechanism. J Comp Neurol 2001, 437:496-504. Van Oortmerssen GA, Bakker TC. Artificial
selection for short and long attack latencies in
wild Mus musculus domesticus. Behav Genet 1981, 11:115-126. Van Riel E, Meijer OC, Veenema AH, Joëls
M. (2002) Hippocampal serotonin responses
in short and long attack latency mice. J Neuroendocrinol 2002, 14:234-240. Veenema AH, Meijer OC, De Kloet
ER, Koolhaas JM, Bohus BG. Differences in basal and stress-induced HPA regulation of wild house mice selected
for high and low aggression. Horm Behav 2003a, 54: 197-204. Veenema AH, Meijer OC, De Kloet ER, Koolhaas
JM. Genetic selection for coping style
predicts stressor susceptibility. J Neuroendocrinol 2003b, 15: 256-267. Veenema AH, Feldker DEM, Schmidt
M, Sijtsma B, Koolhaas JM, De Kloet ER. Stressor susceptibility in low and high aggressive mice: effects of time
and of type of opponent in sensory contact model. Psychoneuroendocrinology 2003c, submitted.