PAPER JURNAL PEMULIAAN TANAMAN

IN VITRO PROPAGATION OF DENDROBIUM AND PHALAENOPSIS

THROUGH TISSUE CULTURE FOR CONSERVATION
oleh Lita Soetopo and Sri Lestari Purnamaningsih

Disusun oleh :

Kelompok 4

Dandi Abdul Ghani 1610631090040

Fransisca Natalia Mendrofa. E 1610631090068

Musahidin 161063090108

Rahadian Nandea Juliansyah 1610631090124

Risna Sumarna 1610631090131

Kelas 4D

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SINGAPERBANGSA KARAWANG
2018
I. PENDAHULUAN
Plasma Nutfah adalah aset yang sangat berharga sebagai bahan baku setiap
program pemuliaan anggrek misalnya anggrek seperti Dendrobium dan
Phalaenopsis yang mengandung beberapa spesies yang hampir punah, sangat
membutuhkan konservasi. Indonesia dengan iklim hutan hujan tropis merupakan
habitat yang ideal bagi banak spesies anggrek. Saat ini keberadaan plasma nutfah
anggrek di habitat alami mereka beresiko karena penjualan ilegal, penebangan,
dan bencana alam. Populasi mereka menurun drastis seiring eksploitasi
berlebihan.
Teknik kloning dengan kultur jaringan menghasilkan perbanyakan
vegetatif dalam jumlah besar dan keturunan yang secara genetis mirip dengan
tanaman induk. Beberapa spesies Dendrobium dan Phalaenopsis dipilih untuk
digunakan dalam penelitian ini untuk menyelidiki bahan eksplan yang cocok dan
baik untuk propaagasi in vitro. Dengan menggunakan metode ini, tanaman yang
berharga dapat dilestarikan.
Pengembangan protokol perbanyakan yang efisien dan efektif untuk
spesies anggrek dari gens Dendrobium dan Phalaenopsis melalui kultur jaringan,
kultur jaringan dapat diterapkan secara efektif dan efisien dengan menggunakan
eksplan dari ujung tunas adventive, kuncup tunas bunga dan benih yang berasal
dari protocorm-seperti tubuh eksplan untuk perbanyakan benih vegetatif.

II. Hasil dan Pembahasan

Hasil eksperimen in vitro tanaman regenerasi eksplan Dendrobium
menunjukkan bahwa persentase yang tinggi dari eksplan tunas dengan warna hijau
diperoleh dari D. racianum diikuti oleh D. lineale, D. pseudoconantum, D.
strebloceras, D. laxiflorum dan D. veratrifolium. Persentase kontaminasi pada
eksplan berkisar antara 0 hingga 100% (Tabel 1.) Dalam percobaan tersebut,
eksplan tunas dengan warna hijau untuk delapan spesies Dendrobium berkisar dari
0 hingga 100%. Dari pengamatan deskriptif, ditunjukkan bahwa setelah dikultur
pada medium, beberapa eksplan D. pseudoconantum berubah menjadi kuning dan
bagian terendah dari eksplan ujung tunas adventive D. veratrifolium berubah
menjadi putih. Bisa jadi karena eksplan ini mengandung jaringan yang lebih tua
yang membuat pertumbuhan dan perkembangan (regenerasi) menjadi lambat dan
menjadi kuning dan putih dalam warna. Sementara eksplan dari D. laxiflorum, D.
pseudoconantum dan D. strebloceras berubah menjadi coklat, dan eksplan dari D.
pseudoconantum dan D. strebloceras berubah menjadi hitam. Eksplan dengan
potongan permukaan yang lebar setelah beberapa hari dalam kultur menjadi
berwarna coklat atau hitam, dan tidak dapat berkembang lebih jauh. Browning
juga bisa menjadi hasil produksi senyawa fenolik.
Eksplan dengan warna hijau bisa berkembang lebih jauh meski tidak
semua bisa tumbuh menjadi tunas baru. Setelah 40 hari subkultur pertama,
eksplan ujung tunas adventif hijau dari kalus D. pseudoconantum terbentuk pada
media yang mengandung ½ MS + BA + NAA. Sedangkan D. streblo-ceras
membentuk tunas pada media yang mengandung ½ MS + BA + NAA, plb dan
callus + plb pada medium yang mengandung VW + BA + NAA. Dari delapan
spesies Dendrobium, hanya D. pseudoco-nantum dan D. strebloceras yang dapat
beregenerasi dan terus tumbuh menjadi planlet
 Hasil percobaan, dari bagian mana dari metode menunjukkan bahwa
jumlah planlet D. pseudoconantum yang diregenerasi pada VW dan VW + BA +
NAA yang bertahan dalam aklimatisasi adalah 75 dan 2, masing-masing. Semua
planlet diregenerasikan pada ½ MS dan pada ½ MS + BA + NAA mati.
Sementara pada D. strebloceras adalah 11 pada VW, 26 pada VW + BA + NAA,
11 pada ½ MS, dan 11 pada ½ MS + BA + NAA (Tabel 2).
Jumlah regenerasi eksplan dari biji yang berasal dari protocorm pada D.
spectabile adalah 22 calli dan 10 plb pada VW; 44 tembak di VW + BA; 44 plb
dan 44 shoot pada ½ MS; 10 calli dan 11 shoot pada ½ MS + BA (Tabel 3.).
 Meskipun keberadaan hormon pertumbuhan tanaman sangat penting untuk
induksi kalus, diferensiasi kalus terjadi pada medium ½ MS tanpa penambahan
hormon pertumbuhan tanaman. Proses regenerasi plb dari kalus dan
perkecambahannya tidak tergantung pada hormon pertumbuhan tanaman eksogen
(Ishii et al., 1998; Roy dan Banarjee, 2003; Zhao, et.al ,, 2008). Ini berbeda dari
kalus embrionik dari banyak spesies yang membutuhkan penambahan hormon
pertumbuhan tanaman spesifik untuk embrio somatik-genesis (Huan et al., 2004;
Luo et al., 1999; Chengalrayan et al., 2001). Dalam induksi kalus, sistem sintesa
hormon endogen dapat dipicu dan laju hormon meningkat yang memungkinkan
sel-sel untuk berproliferasi dan berdiferensiasi pada medium tanpa hormon
pertumbuhan tanaman eksogen (Smith dan Krikorian, 1990).

Protokorm Dendrobium Seed-Derived Seperti Tubuh Explant

Tabel 3 menunjukkan bahwa kontaminasi adalah pada plb explant D.
ascipilense (0-76.92%) dan D. lasianthera (20-100%).
Sementara itu, pada D.spectabile, conta-mination adalah 0-10%.
Regenerasi eksplan biji - benih turunan D. spectabile 40 hari setelah berbudaya
telah membentuk kalus, plb, dan tunas
 Jumlah eksplan yang diregenerasi setelah 40 hari inokulasi dari protokorm
yang berasal dari seed-derived seperti-tubuh D. spectabile adalah 22 calli dan 10
plbs pada medium VW; 44 tunas pada VW + BA; 44 plbs dan 44 tunas pada ½
MS dan 10 calli dan 11 pucuk pada medium 1 / 2MS + BA. Beberapa eksplan
plbs lainnya belum menunjukkan perkembangan lebih lanjut (Tabel 3). Seperti
pada D. lasianthera dan D. ascipilanense, tidak ada perkembangan yang signifikan
pada hari ke 40 setelah inokulasi. Jumlah per eksplan dari plbs dan tunas D.
spectabile setelah subkultur adalah: plbs 26 pada VW; 3 pada VW + BA, 40 pada
½ MS dan 47 pada ½ MS + BA; dan menembak 38 pada VW, 7 pada VW + BA,
11 pada ½ MS, 47 pada ½ MS + BA (Tabel 4). Namun, tidak ada yang selamat
dalam aklimatisasi.

Dalam banyak spesies tanaman, kalus memainkan bagian penting dalam

regenerasi tanaman in vitro. Dalam beberapa spesies anggrek, kalus juga telah
berhasil diinduksi. Meskipun pada mulanya kultur jaringan anggrek tidak fokus
pada induksi kalus karena laju pertumbuhannya rendah dan nekrotik dalam kultur
((Zhao et.al, 2008). Namun belakangan ini, banyak garis yang telah diproduksi
pada beberapa spesies anggrek berasal dari kalus ( Lee dan Lee, 2003; Lu, 2004)
Sebenarnya, untuk mendapatkan bahan tanaman yang sama, sebagian besar
waktu, kalus harus dihindari karena beberapa karakteristik mungkin telah
berubah. Dalam hal ini, akan lebih baik untuk mendapatkan protocorm -seperti
tubuh biasanya melalui tubuh seperti protocorm fase tengah.
 Calli tersebut berhasil tumbuh menjadi plantlet melalui protocorm tidak
langsung seperti badan untuk produksi massal. Induksi kalus dari segmen
protocorm ditingkatkan oleh hormon pertumbuhan seperti BA. Dilaporkan bahwa
BA berhasil menginduksi kalus pada D. fimbriatum (Roy dan Banarjee, 2003),
dan D. candidum (Zhao et.al, 2008). Regenerasi tanaman dari kultur kalus pada
anggrek
Dendrobium spectabile membutuhkan kondisi hangat di media terbuka.
Pertumbuhannya spesifik dan bunga hanya di bawah kondisi lingkungan tertentu.
Kondisi selama biasanya melalui tubuh protocorm seperti fase tengah.
Pada D. candidum, perkembangan yang berbeda dari granular globular
callus berasal dari dalam atau di luar kalus yang membentuk sel-sel dengan
sitoplasma padat dan vakuola kecil (Zhao, et al., 2008). Itu adalah karakteristik sel
embrio (Eady et al., 1998; Li et al., 2001; Nikam et al., 2003). Granula-granula itu
bisa berkembang menjadi plb dan plb dalam kondisi yang sesuai akan
berkembang menjadi planlet. Sementara plbs lainnya bisa berproliferasi lebih
lanjut dan membentuk plbs sekunder, ini adalah karakteristik umum dari banyak
spesies anggrek (Wimber, 1963; Arditti dan Ernst, 1993). Aklimatisasi mungkin
tidak memenuhi kebutuhannya, yang mungkin menjelaskan ddeath planlet pada
aklimatisasi.

Phalaenopsis Floral Stalk Buds Explant

Data menunjukkan bahwa P. amabilis memiliki persentase kelangsungan
hidup eksplan yang tinggi dari tunas tangkai bunga (Gambar 4). Tabel 5
menunjukkan bahwa pada budaya pertama, persentase kontaminasi berkisar antara
0 hingga 100%, sementara persentase hidup eksplan berkisar antara 0 hingga
75%.
 Data aklimatisasi menunjukkan bahwa jumlah planlet yang beregenerasi
pada VW, VW + BA + NAA, ½ MS, dan ½ MS + BA + NAA yang bertahan
selama aklimatisasi adalah 5, 25, 7, dan 10, masing-masing (Gambar. 5).
Mean persentase kelangsungan hidup eksplan P. amboinensis dan P. tetraspis
adalah sekitar 50%. Phalaenopsis tetraspis dan P. amboinensis adalah spesies
Phalaenopsis dengan tangkai pendek, sementara P. amabilisis memiliki tangkai
panjang.
Secara teknis, ada kesulitan yang berbeda dalam mempersiapkan eksplan
dari kedua jenis tunas tangkai bunga. Lebih sulit menyiapkan eksplan dari sejenis
tangkai bunga pendek. Selain itu, pertumbuhannya juga lambat pada kultur in
vitro dan tidak ada yang tumbuh lebih jauh.
Ada inisiasi tunas pada P. amabilis, P. amboinensis dan P. tetraspis pada
budaya pertama. Pada subkultur, inisiasi tunas hanya dilakukan pada P. amabilis.
Tiga puluh hari setelah subkultur, panjang tunas adalah 1,30 cm pada VW + BA +
NAA dan 0,54 cm pada ½ MS + BA + NAA. Tidak ada pertumbuhan lebih lanjut
pada P. amboinensis dan P. tetraspis

Phalaenopsis Seed - Berasal Protocorms seperti Tubuh Explant

Tabel 7 menunjukkan bahwa ada pertumbuhan dan perkembangan eksplan
yang baik dari protokorm yang berasal dari biji, 40 hari setelah inokulasi.
Persentase eksplan kehidupan P. hieroglypha adalah 100% dan eksplan regene-
rating ke dalam plbs adalah 12,22% pada 1 / 2MS + BA dan 7,78% pada VW +
BA.
Telah dilaporkan bahwa kalus dapat dibentuk dari protokorm yang berasal
dari biji dengan frekuensi 50% (Lu, 2004), dari segmen plbs 53% (Huan et.al,
2004), menembak tip 66,70% (Roy dan Banarjee, 2003). ), dan ujung akar 25%
(Chen dan Chang, 2000). Setelah beberapa subkultur, jumlah kalus akan
mereplikasi tiga sampai lima kali dalam sebulan dan jumlah rata-rata protocorm-
like bodies adalah 90,7 per kalus budaya (Lu, 2004), 134 per 0,01 g berat baru
kalus 134 per 0,01 g (Huan et al., 2004), 32,5 per kalus massa (Roy dan Banarjee,
2003), dan 29,1 per kalus massa 9 mm2 (Chen dan Chang, 2000).
 Dalam percobaan ini, persentase pembentukan plb dari eksplan P.
hieroglypha adalah 8,89% pada VW, 1,11% pada VW + BA, 6,67% pada ½ MS
dan 3,33% pada ½ MS + BA (Gambar 6). Setelah subkultur, persentase formasi
plbs adalah 5% plbs dan 0,56% untuk pembentukan tunas (Gambar 7).

Persentase pembentukan plb adalah 8,89% pada VW, 1,11% pada VW +

BA, 6,67% pada ½ MS dan 3,33% pada ½ MS + BA. Pada subkultur, persentase
pembentukan plb adalah 5% dan persentase pembentukan tunas adalah 0,56%.
Tabel 8 menunjukkan bahwa setelah subkultur, eksplan tubuh mirip
protokorm Phalae-nopsis membentuk plb. Namun, tidak ada planlet P.hieroglypha
yang bertahan selama aklimatisasi. Pengembangan eksplan lambat dan ukurannya
terlalu kecil untuk dapat berkembang menjadi planlet normal.
Dalam percobaan ini hanya plb yang terbentuk dari tubuh protocorm yang
mirip biji dari P. hiero-glypha dan tidak ada plantlet yang bertahan selama
aklimatisasi. Proses regenerasi lambat dan ukuran planlet kecil. Bisa jadi karena
genotipe atau konsentrasi hormon pertumbuhan yang digunakan dalam percobaan
ini. Namun, penelitian lebih lanjut diperlukan.
III. Kesimpulan
Ada dua spesies Dendrobium yang terus beregenerasi dari eksplan ujung
tunas adventif. Jumlah planlet D. pseudoconantum regenerasi pada VW, VW +
BA yang bertahan selama aklimatisasi adalah 75 dan 2 masing-masing. Tidak ada
planlet yang beregenerasi pada ½ MS dan ½ MS + BA bertahan selama
aklimatisasi. Jumlah planlet D. strebloceras yang beregenerasi pada VW adalah
11.26 pada VW + BA, 11 pada ½ MS, dan 11 pada ½ MS + BA. Planlet ini
bertahan selama aklimatisasi. Regenerasi yang jelas dari badan protocorm yang
diturunkan dari biji hanya dilakukan oleh D. spectabile. Jumlah plbs per eksplan
dari D. spectabile setelah disubkultur pada VW; VW + BA; ½ MS; ½ MS + BA
adalah 26, 3, 40, dan 47. Formasi menembak pada VW, VW + BA, ½ MS dan ½
MS + BA adalah 38, 7, 11, dan 47 masing-masing.
Regenerasi yang jelas dari tunas tangkai bunga hanya P. amabilis.
Persentase kelangsungan hidup planlet P. amabilis dalam aklimatisasi adalah
62,5% pada VW, 83,33% pada VW + BA + NAA, 77,77% pada ½ MS dan
83,33% pada ½ MS + BA + NAA. Persentase kelangsungan hidup eksplan dari
protocorm-like bodies pada P. hieroglypha adalah 100%. Persentase pembentukan
plb pada VW; VW + BA, ½ MS, dan ½ MS + BA adalah 8,89% ,; 1,11%; 6,67%
dan 3,33%. Pembentukan plbs dan menembak adalah 5% dan 0,56% masing-
masing..
 DAFTAR PUSTAKA

Soetopo, L. & Purnamaningsih Sri Lestari. 2012. In Vitro Propagation Of

Dendrobium And Phalaenopsis Through Tissue Culture For
Conservation. Agrivita. 34(2): 115-125. Diambil dari :
(http://www.agrivita.ub.ac.id/index.php/agrivita/article/view/154/576
pada tanggal 17 april 2018)