Tipe-tipe Gel

Sephadex. Untuk protein dan sebagian besar molekul besar dalam bidang biokimia, sephadex adalah
yang paling populer dari bahan gel. Sephadex dibuat dari dekstran polisakarida yang telah disintesis
oleh aksi dari bakteri dalam suksosa. Tiap residu glukosa mengandung 3 gugus hidroksil yang
memberikan dekstran karakter polar. Reaksi silang dicapai dengan epichlorhydrin, CH2OCHCH2Cl.
dengan menyesuaikan kondisi, jumlah reaksi silang silang, dan ukuran pori-pori, maka dapat
dikontrol dengan hati-hati. Gel sephadex tidak larut dalam air, dan stabil dalam basa, asam lemah,
dan ringan agen pereduksi dan pengoksidasi. Kontak yang terlalu lama pada 0,1 N HCL atau agen
pengoksidasi kuat akan menyebakan kerusakan pada butiran-butiran gel. Temperatur di atas 120oC
sebaiknya juga dihindari. Selain biasa digunakan dalam air, gel sephadex juga mengembang dalam
glikol, dimetil sulfoksida dan formamida, tetapi tidak dalam asam asetat glasial, metanol, atau
etanol. Gel-gel ini diklasifikasikan oleh jumlah dari “water regain”, yang merupakan fungsi dari
longgarnya atau sejauh dari reaksi silang. Beberapa tipe dan sifat dari sephadex gel tercantum dalam
tabel dibawah ini.

Tabel Tipe gel sephadex

Tipe Water regain, g/g dry Exclusion limit, Mol. Fractionation range,
sephadex Wt. Mol. Wt. Limits
G-10 1.0 700 Up to 700
G-25 2.5 5000 100-5000
G-50 5.0 10000 500-10000
G-75 7.5 50000 1000-50000
G-100 10.0 100000 5000-100000
G-200 20.0 200000 5000-200000

Bio-gel. Rangkaian atau seri dari gel inert, disebut bio-gel P, disiapkan oleh kopolimerisasi akrilamida
dan N, N'-methylene-bis-akrilamida. Polimer tidak larut dalam air dan pelarut organik umum dan
berguna dalam pH dengan rentang 2 sampai 11. Basa kuat dapat menghidrolisis gugus amida.
matriks Poliakrilamida inert meminimalkan kemungkinan adsorpsi dari bahan/materi polar. 10 tipe
dari bio-gel P tersedia secara komersial dengan batas pengecualian yang bervariasi dari berat
molekular 1800 sampai 400000.

Agarose. Untuk berat molekul lebih dari 500.000, gel agarosa (Sepharose dan Bio-Gel A) merupakan
gel yang efektif. gel ini disusun atau disiapkan dari poligalactopyranose dalam bentuk manik-manik
agak lunak yang tidak dapat menahan tekanan tinggi.

porous Kaca (Porous glass). Untuk tekanan tinggi, kekakuan dari manik-manik kaca berpori
menguntungkan. manik-manik kaca berpori dari ukuran pori dikontrol secara akurat yang tersedia
secara komersial, misalnya, Porasil dan Bio-Glas.

Styragel. Untuk pemisahan tak berair, diperlukan gel yang akan mengembang dalam pelarut organik.
Styragel adalah reaksi silang polystyrene gel yang kaku yang dapat dibuat dalam berbagai porositas
yang mirip dengan gel lainnya. Hal itu optimal pada suhu sampai 150 ° C dengan pelarut berikut:
tetrahidrofuran, benzena, triklorobenzena, perchloroethylene, kresol, dimetilsulfoksida, kloroform,
karbon tetraklorida, aromatik, dan lain-lain, tapi tidak dengan air, aseton, atau alkohol. batas
pengecualian bervariasi dari 1600 ke 40.000.000. Kekakuan Styragels memungkinkan penggunaan
mereka di bawah tekanan tinggi dalam performa tinggi kolom.

prinsip-prinsip teoritis

proses yang ideal. dalam bentuk sederhana, kita akan membayangkan bahwa interior manik gel
terdiri dari lubang berbentuk kerucut yang semuanya memiliki bentuk dan ukuran yang identik.
molekul besar dipisahkan baik terlalu besar untuk masuk lubang, atau dapat menembus bagian
dalam kerucut bagian dalam ditentukan oleh ukuran molekul. jika molekul kecil atau ion sederhana,
mereka akan dapat bergerak bebas ke seluruh bagian interior gel. dengan model ini sangat mudah
untuk melihat bahwa fraksi volume interior yang tersedia untuk setiap molekul diberikan bervariasi
dari 0 ke 1 dan merupakan fungsi dari diameter relatif molekul dengan diameter pori-pori.

ada dua jenis pelarut dalam kolom gel: bahwa dalam gel yang memiliki volume Vi, dan bahwa di luar
manik-manik yang memiliki volume Vo, mari kita asumsikan bahwa hanya fitur yang membedakan
hasil kolom dari variasi dalam fraksi volume Vi yang tersedia untuk molekul ukuran yang berbeda.
Molekul yang terlalu besar untuk masuk ke lubang akan menyapu volume luar tanpa pernah
memasuki gel. pada kasus ini :

Ve = Vo

di mana Ve, adalah volume elusi. molekul yang lebih kecil harus menyapu Vo ditambah beberapa
tambahan volume yang merupakan sebagian kecil dari Vi, atau

Ve = Vo + KVi

di mana K adalah koefisien distribusi yang dapat didefinisikan dalam beberapa cara. itu adalah rasio
antara "rata-rata" konsentrasi zat terlarut dalam interior dan konsentrasi luar gel. Satu hal yang
harus diingat bahwa di bagian volume interior yang tersedia untuk zat terlarut, konsentrasi adalah
sama dengan luar itu, tapi dalam volume interior yang tersisa konsentrasi adalah nol. K juga dapat
didefinisikan sebagai fraksi volume pelarut interior yang tersedia untuk zat terlarut, atau dalam hal
jumlah eksperimen terukur:

K = (Ve-Vo)/Vi

Vi dapat diperoleh dari bobot gel kering, dan niai water regain, WR (Tabel tipe gel sephadex)

Vi = aWR

Jika tindakan penyaringan dijelaskan sebagai satu-satunya mekanisme, nilai K harus terletak antara 0
dan 1. Konsekuensi yang menarik dari mekanisme ini adalah bahwa dalam kromatografi gel volume
elusi biasanya kurang dari volume kosong dalam kolom, sedangkan dalam bentuk lain dari
kromatografi volume elusi selalu lebih besar dari volume kosong karena mekanisme retensi. Dalam
kromatografi gel, retensi diganti dengan pengecualian parsial. Sebuah ilustrasi sederhana dari apa
yang terjadi di kolom diberikan pada Gambar Di Bawah ini
Dua zat terlarut memiliki nilai K sama dengan KA dan KB akan memiliki volume elusi Vo + KAVi dan
akan dipisahkan oleh perbedaan (KB-KA)Vi. jika pita elusi tidak lebih luas dari volume sampel, Vs, yang
digunakan, maka volume sampel maksimum untuk pemisahan lengkap adalah:

Vs < (KB-KA)Vi

Proses pelebaran pita yang sama beroperasi di kromatografi gel seperti dalam semua bentuk
lainnya. Untuk efisiensi optimal (minimal H) salah satu harus menggunakan manik-manik kecil
dikemas dengan seragam, dan laju aliran lambat seperti yang ditunjukkan pada tabel di Bawah ini

Tabel feisiensi sephadex kolom G-200 (4x42 cm) dengan serum albumin

Particle size, Mesh Flow rate, ml/hr H, cm

100-200 75 0,62
100-200 50 0,48
100-200 25 0,23
200-270 25 0,08