Hasil Pengamatan dan Pembahasan

Presipitasi dengan media polielektrolit

Efek dari pH (Gambar 1) dapat dijelaskan oleh netralisasi muatan protein ketika pH meningkat
menuju titik isoelektrik (pI). Berdasarkan hasil (lihat Gambar 1), konsentrasi PVS 0,5% v / v dan
kisaran pH 2,5-3,5 ditemukan optimal untuk pemulihan protein dengan presipitasi. Pada
konsentrasi polielektrolit yang lebih tinggi, efek tolakan elektrostatik antara kelebihan
polielektrolit bebas dan polielektrolit terikat pada protein meningkatkan kelarutan prekursor
insulin.

Presipitasi dengan media Zinc fenol

Dalam kasus presipitasi menggunakan media zinc fenol (konsentrasi presipitat lebih banyak
fenol), pH medium dan konsentrasi protein sebelum penambahan presipitan memainkan peran
penting dalam pemulihan prekursor insulin. Berdasarkan hasil (lihat Tabel I), 0,5% v / v fenol
ditemukan optimal untuk pengendapan prekursor insulin. Jumlah fenol yang lebih tinggi dari
optimal telah menunjukkan kerugian produk yang lebih tinggi karena peningkatan kelarutan
prekursor insulin.
Kualitas Produk

Pengujian setelah presipitasi

Hasil SDS – PAGE (lihat Gambar 2) menunjukkan pola pita yang sebanding untuk rute
kromatografi dan teknik presipitasi polyelectrolyte. Kepadatan optik pada 600 nm, 450 nm, dan
652 nm dan kandungan protein spesifik dicatat untuk tiga strategi (dua strategi presipitasi dan
satu kromatografi tradisional, dibandingkan pada Tabel II). Pengurangan warna larutan pada
konsentrasi produk konstan menunjukkan penghapusan pigmen yang berbeda. Kerapatan optik
dan kandungan protein spesifik dari CFS pada berbagai tahap ditabulasikan pada Tabel II.
Pengurangan dalam densitas optik menunjukkan penghapusan pigmen sel induk oleh masing-
masing strategi. Protein spesifik adalah ukuran jumlah prekursor insulin relatif terhadap
kandungan protein total dalam sampel.
 Kemurnian produk dari tiga strategi yang diukur oleh HPLC sebanding (lihat Tabel II).
Mempertimbangkan kemurnian CFS yang diteliti, semua strategi memberikan peningkatan yang
signifikan dalam keseluruhan kemurnian. Hal ini bisa dihubungkan dengan peningkatan
kandungan protein spesifik juga setelah menggunakan berbagai strategi. Penambahan kandungan
protein spesifik dicapai dengan strategi presipitasi, meskipun kromatografi adalah teknik yang
unggul.

Menghilangkan pigmen sebelum langkah pemurnian selanjutnya membantu

meningkatkan upaya pemurnian. Apakah pigmen ini terkait dengan insul dalam prekursor masih
dipertanyakan, tetapi ada contoh di mana pigmen ini telah mempengaruhi pemurnian
kromatografi protein (Minyasab et al., 2010). Dalam sebuah studi terpisah yang terpisah,
pigmen-pigmen ini yang diketahui sebagai kristaloid oksidase-alkohol menunjukkan interaksi
dengan protein hidrofobik (seperti hormon pertumbuhan manusia), menghasilkan muatan yang
berubah dan karakteristik polaritas molekul (Damasceno et al., 2004). Pigmen-pigmen ini sangat
mempengaruhi keseluruhan proses ekonomi, yang mengarah ke kapasitas pengikatan protein
target yang lebih rendah, mengurangi masa hidup media kromatografi, mengurangi hasil, dan
kemurnian produk yang lebih rendah.

Pertimbangan Biata dari Proses Presipitasi

Penggunaan strategi presipitasi lebih bersifaat ekonomis dibandingkan dengan penggunaan
metode kromatografi ionexchange. Biaya bahan baku utama yang digunakan untuk memproses
10 g prekursor insulin menggunakan presipitasi yang diperantarai oleh PVS, presipitasi yang
diperantarai zinc fenol, dan kromatografi penukar ion dibandingkan pada Tabel III. Meskipun
resin pertukaran ion dapat digunakan kembali untuk 80-100 siklus, biaya pengolahan dengan
kromatografi pertukaran ion 3,5 kali lebih tinggi daripada dengan proses presipitasi berperantara
PVS dan 10 kali lebih tinggi daripada presipitasi berperantara fenol. Oleh karena itu, strategi
presipitasi memberikan keuntungan biaya yang signifikan dalam hal bahan baku.

Daftar Pustaka

S.A. Minyasab et al., “A method of purifying human growth hormone and purified growth
hormone thereof,” US Patent Application WO2010134084 A1, Nov. 2010.

L.M. Damasceno et al., Protein Expr. Purif. 37 (1), pp. 18–26 (2004).