Akademik Akhwat

Skill 8 – Pewarnaan BTA

2012

Bismillah

I. Persiapan Smear
1. Persiapan Alat dan Bahan
Alat : Object glass, bacteriological loop, Bunsen, spirtus, stick burner, pencil,
tissue, rak, pasir alcohol, trash bin, dan wadah untuk pewarnaan
Reagen : Carbol fuschin (primary stain), acid alcohol (3% HCL, 96% alcohol),
methylene blue (counter stain), water
2. Prinsip pewarnaan Acid fast bacilli yaitu bakteri AFB mempunyai wax yang akan
tetap bertahan dengan pewarnaan carbol fuschin. Pewarnaan AFB bertujuan untuk
mendiagnosis dan follow up terapi TB paru dan Leprosy
3. Nyalakan Bunsen dan cuci tangan serta memakai gloves dan masker
4. Bersihkan object glass daari lemak dengan meletakan object glass diatas api
dilewatkan sekitar 2-3x
5. Bakar bacteriological loop dipinggir api sampai loop membara, letakkan loop di
dalam rak dan biarkan sampai suhunya sesuai dengan temperature ruangan
6. Buatlah target circle di object glass dengan ukuran oval 2x3 cm dibagian bawah
dari object glass
7. Ambilah tabung yang berisi sputum dan ambil sampel yaitu sputum yang paling
kental dengan menggunakan loop. Ketika membuka tutup tabung harus dekat
dengan api.
8. Letakkan sputum sampel yang telah diambil ditengah-tengah dari object glass
9. Letakkan loop di pasir alcohol sampai loop bersih dari sputum dan bakar loop
sampai membara
10. Ambilah tusuk gigi yang bagian ujungnya telah dipotong dan sebarkan sputum
dengan coiling dari tengah ke kiri, kana, atas dan bawah sampai ke batas dari
target circle.
11. Bakar kembali object glass berfungsi untuk memfiksasi dan mematikan bakteri,
sehingga tidak hilang saat pewarnaan atau pembilasan. Letakkan object glass
sekitar 30-40 cm diatas api dan lewatkan 2-5 kali
12. Setelah kering dan object glass dingin lingkarkan kembali target circle yang telah
dibuat dengan menggunakan pencil, pada bagian bawah object glass.
 Akademik Akhwat
Skill 8 – Pewarnaan BTA
2012

II. Ziehl Nelssen Staining Procedure

1. Setelah fiksasi, tuangkan carbol fushcin samapi seluruh slide tertutupi. Pastikan
seluruh slide terwarnai carbol fuschin
2. Bakar slide dengan stick burner yang direndam spirtus, bakar jangan dengan api
membara tapi hanya didekatkan dengan api sampai slide beruap. Lakukan selama
5 menit dengan menggunakan api yang tidak membara, karena dengan api yang
membara bias membuat slide pecah.
3. Bersihkan slide dengan menggunakan air
4. Bilas slide dengan acid alcohol (3% HCL, 96% alcohol) untuk decolorisasi
selama 5 menit. Bilas sampai slide benar-benar bersih dari pewarnaan.
5. Bilas decolorisasi alcohol dengan menggunakan air
6. Basahi slide dengan menggunakan Methylene Blue sebagai counter stain.
Diamkan selama 1 menit.
7. Bilas dengan menggunakan air. Slide akan terwarnai biru karena AFB akan
terwarnai merah dan latar akan terwarnai biru
8. Blot dengan filter paper (tissue)

III. Pemeriksaan BTA

1. Nyalakn mikroskop, naikan kondensor dan buka diafragma
2. Letakkan object glas di pojok kiri atas dari cahaya mikroskop
3. Teteskan emersi dan langsung putar objective dengan perbesaran 100x
4. Putar micrometer untuk memperjelas pengelihatan pada object glass
5. Lihatlah bakteri dari pojok kiri atas lalu geser ke kanan dan kebawah. Samapi
seluruh lapang pandang pada object glass terlihat
6. Hitunglah bakteri yang terlihat, tidak usah dihitung bakteri dengan menggunakan
tally, namun langsung menulis angkanya. BTA akan terlihat warna merah dan
berbuntuk batang atau menyerupai garis pendek yang berwarna merah.
7. Catatlah pada kertas yang disediakan
8. Interpretasi BTA :
- AFB tidak ditemukan di 100 HPF : negative
 Akademik Akhwat
Skill 8 – Pewarnaan BTA
2012

- 1-9 AFB/ 100 HPF : laporkan bakteri yang terlihat.

Jika <4 lakukan perhitungan ulang denagn specimen yang baru, jika hasilnya
1-3 maka negative, jika 4-9 maka positif
- 10-99 AFB/100 HPF : + atau +1
- 1-10 AFB/1 HPF : ++ atau +2
- >10 AFB/1 HPF : +++ atau +3

Alhamdulilah